شكرا لكم لزيارة Nature.com.إصدار المتصفح الذي تستخدمه لديه دعم محدود لـ CSS.للحصول على أفضل النتائج، نوصي باستخدام إصدار أحدث من متصفحك (أو إيقاف تشغيل وضع التوافق في Internet Explorer).في هذه الأثناء، ولضمان الدعم المستمر، فإننا نعرض الموقع بدون تصميم أو جافا سكريبت.
تم استخدام الجينسنغ الأحمر في الطب الآسيوي التقليدي منذ مئات السنين.في هذه الدراسة، قمنا بتقييم قدرة أربعة أنواع من الجينسنغ الأحمر (الجينسنغ الأحمر الصيني، والجينسنغ الأحمر الكوري أ، والجينسنغ الأحمر الكوري ب، والجينسنغ الأحمر الكوري ج) المزروعة في مناطق مختلفة على تثبيط تكوين ونمو الرئة المسرطنة. الأورام.تم إجراء اختبار البنزو(أ)بيرين (B(a)P) على الفئران A/J، وتبين أن الجينسنغ الأحمر الكوري B هو الأكثر فعالية في تقليل عبء الورم بين أصناف الجينسنغ الأحمر الأربعة.بالإضافة إلى ذلك، قمنا بتحليل محتويات الجينسينوسيدات المختلفة (Rg1 وRe وRc وRb2 وRb3 وRb1 وRh1 وRd وRg3 وRh2 وF1 وRk1 وRg5) في أربعة مستخلصات من الجينسنغ الأحمر ووجدنا أن الجينسنغ الأحمر الكوري يحتوي على أعلى مستويات الجينسينوسيد Rg3 (G-Rg3)، مما يشير إلى أن G-Rg3 قد يلعب دورًا مهمًا في فعاليته العلاجية.يوضح هذا العمل أن G-Rg3 يتمتع بتوافر حيوي منخفض نسبيًا.ومع ذلك، عندما تم تناول G-Rg3 مع مثبط P-gp فيراباميل، انخفض تدفق G-Rg3 إلى خلايا Caco-2، وزاد معدل الامتصاص المعوي لـ G-Rg3 في نموذج الفئران، وG-Rg3 تم زيادة.في خلايا Caco-2، ينخفض تدفق Rg3 إلى الخارج، وينخفض مستوى تركيز Rg3.يتم زيادة G-Rg3 في الأمعاء والبلازما، كما يتم تعزيز قدرته على الوقاية من الأورام في نموذج الفئران لتكوين الأورام الناجم عن B(a)P.لقد وجدنا أيضًا أن G-Rg3 قلل من السمية الخلوية الناجمة عن B(a)P وتكوين مقارب الحمض النووي في خلايا الرئة البشرية، واستعاد تعبير ونشاط إنزيمات المرحلة الثانية من خلال مسار Nrf2، والذي قد يكون مرتبطًا بآلية العمل المحتملة من تثبيط G-Rg3..حول حدوث أورام الرئة.توضح دراستنا الدور المهم المحتمل لـ G-Rg3 في استهداف أورام الرئة في نماذج الفئران.يتم تعزيز التوافر الحيوي عن طريق الفم لهذا الجينسنوسيد من خلال استهداف البروتين السكري P، مما يسمح للجزيء بممارسة تأثيرات مضادة للسرطان.
النوع الأكثر شيوعًا من سرطان الرئة هو سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة (NSCLC)، وهو أحد الأسباب الرئيسية لوفيات السرطان في الصين وأمريكا الشمالية.العامل الرئيسي الذي يزيد من خطر الإصابة بسرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة هو التدخين.يحتوي دخان السجائر على أكثر من 60 مادة مسرطنة، بما في ذلك البنزو(أ)بيرين (B(a)P)، والنيتروزامينات، والنظائر المشعة الناتجة عن تحلل غاز الرادون.3 الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات B(a)P هي السبب الرئيسي للتسمم في السجائر دخان.عند التعرض لـ B(a)P، يحوله السيتوكروم P450 إلى B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxyde (BPDE)، الذي يتفاعل مع الحمض النووي لتكوين BPDE-DNA adduct 4. بالإضافة إلى ذلك، هذه تحفز المقاربات تكوين الأورام في الرئة لدى الفئران في مرحلة الورم والتشريح المرضي المماثل لأورام الرئة البشرية .هذه الميزة تجعل نموذج سرطان الرئة الناجم عن B(a)P نظامًا مناسبًا لتقييم المركبات ذات الخصائص المحتملة المضادة للسرطان.
إحدى الإستراتيجيات الممكنة لمنع تطور سرطان الرئة لدى المجموعات المعرضة للخطر، وخاصة المدخنين، هي استخدام عوامل الوقاية الكيميائية لقمع تطور الآفات الورمية داخل الظهارة وبالتالي منع تطورها لاحقًا إلى ورم خبيث.تظهر الدراسات التي أجريت على الحيوانات أن عوامل الوقاية الكيميائية المختلفة فعالة.سلط تقريرنا السابق الضوء على التأثيرات الوقائية الجيدة للجينسنغ الأحمر على سرطان الرئة.وقد استخدمت هذه العشبة لعدة قرون في الطب الآسيوي التقليدي لإطالة العمر والصحة، وقد تم توثيق أن لها تأثيرات مضادة للأورام8.
العامل النشط للجينسنغ هو الجينسنوسيد، والذي يستخدم كعلامة مركبة لتقييم جودة مستخلصات الجينسنغ.يتضمن التحليل الكمي لمستخلصات الجينسنغ الخام عادةً استخدام العديد من الجينسينوسيدات، بما في ذلك RK1 وRg1 وF1 وRe وRb1 وRb2 وRb3 وRd وRh1 وRh2 وRg3 وRg5 وRc9,10.الجينسينوسيدات لها استخدام سريري قليل بسبب توافرها الحيوي عن طريق الفم ضعيف جدًا.على الرغم من أن آلية هذا التوافر الحيوي الضعيف ليست واضحة، إلا أن تدفق الجينسينوسيدات الناجم عن البروتين السكري P (P-gp)12 قد يكون هو السبب.يعد P-gp واحدًا من أهم ناقلات التدفق في فصيلة ناقلات الكاسيت المرتبطة بـ ATP، والتي تستخدم طاقة التحلل المائي ATP لإطلاق المواد داخل الخلايا في البيئة الخارجية.عادةً ما يتم توزيع ناقلات P-gp على نطاق واسع في الأمعاء والكلى والكبد والحاجز الدموي الدماغي.يلعب P-gp دورًا حاسمًا في الامتصاص المعوي، كما يؤدي تثبيط P-gp إلى زيادة الامتصاص عن طريق الفم وتوافر بعض الأدوية المضادة للسرطان.من أمثلة المثبطات المستخدمة سابقًا في الأدبيات فيراباميل وسيكلوسبورين A15.يتضمن هذا العمل إنشاء نظام فأر لدراسة سرطان الرئة الناجم عن B(a)P لتقييم قدرة مستخلصات الجينسنغ الأحمر المختلفة من الصين وكوريا على التأثير على الأورام الخبيثة.تم تحليل المستخلصات بشكل فردي لتحديد الجينسينوسيدات المحددة التي قد تؤثر على التسرطن.ثم تم استخدام فيراباميل لاستهداف P-gp وتحسين التوافر البيولوجي عن طريق الفم والفعالية العلاجية للجينسينوسيدات التي تستهدف السرطان.
الآلية التي تمارس بها سابونين الجينسنغ التأثيرات العلاجية على التسرطن لا تزال غير واضحة.أظهرت الأبحاث أن الجينسينوسيدات المختلفة يمكن أن تقلل من تلف الحمض النووي الناجم عن المواد المسرطنة عن طريق تقليل الإجهاد التأكسدي وتنشيط إنزيمات إزالة السموم من المرحلة الثانية، وبالتالي منع تلف الخلايا.الجلوتاثيون S-ترانسفيراز (GST) هو إنزيم المرحلة الثانية النموذجي المطلوب لتقليل تلف الحمض النووي الناجم عن المواد المسرطنة.يعد العامل 2 المرتبط بالكريات الحمراء النووية 2 (Nrf2) عامل نسخ مهمًا ينظم توازن الأكسدة والاختزال وينشط التعبير عن إنزيمات المرحلة الثانية واستجابات مضادات الأكسدة الوقائية للخلايا .درست دراستنا أيضًا تأثيرات الجينسينوسيدات المحددة على تقليل السمية الخلوية الناجمة عن B (a) P وتكوين مقارب BPDE-DNA، بالإضافة إلى تحفيز إنزيمات المرحلة الثانية عن طريق تعديل مسار Nrf2 في خلايا الرئة الطبيعية.
إن إنشاء نموذج فأر للسرطان الناجم عن B (a) P يتوافق مع العمل السابق 5 .يوضح الشكل 1A التصميم التجريبي لعلاج لمدة 20 أسبوعًا لنموذج سرطان الفأر الناجم عن B(a)P، والماء (التحكم)، ومستخلص الجينسنغ الأحمر الصيني (CRG)، ومستخلص الجينسنغ الأحمر الكوري A (KRGA)، والأحمر الكوري. الجينسنغ.مستخلص B (KRGB) ومستخلص الجينسنغ الأحمر الكوري C (KRGC).وبعد 20 أسبوعًا من علاج الجينسنغ الأحمر، تمت التضحية بالفئران عن طريق الاختناق بثاني أكسيد الكربون.ويبين الشكل 1B أورام الرئة العيانية في الحيوانات المعالجة بأنواع مختلفة من الجينسنغ الأحمر، ويبين الشكل 1C صورة مجهرية ضوئية تمثيلية لعينة الورم.كان عبء الورم لدى الحيوانات المعالجة بـ KRGB (1.5 ± 0.35) أقل من عبء الحيوانات الضابطة (0.82 ± 0.2، P <0.05)، كما هو مبين في الشكل 1D.وكان متوسط درجة تثبيط حمل الورم 45٪.ولم تظهر مستخلصات الجينسنغ الأحمر الأخرى التي تم اختبارها مثل هذه التغييرات المهمة في عبء الورم (P > 0.05).لم تلاحظ أي آثار جانبية واضحة في نموذج الفأر خلال 20 أسبوعًا من علاج الجينسنغ الأحمر، بما في ذلك عدم حدوث تغيير في وزن الجسم (البيانات غير معروضة) وعدم وجود سمية للكبد أو الكلى (الشكل 1E، F).
يعالج مستخلص الجينسنغ الأحمر تطور ورم الرئة لدى الفئران A/J.(أ) التصميم التجريبي.(ب) أورام الرئة الكبيرة في نموذج الفأر.تتم الإشارة إلى الأورام بواسطة السهام.ج: مجموعة الجينسنغ الأحمر الصيني.ب: المجموعة أ من الجينسنغ الأحمر الكوري.ج: مجموعة الجينسينج الأحمر الكوري ب. د: مجموعة الجينسينج الأحمر الكوري ج. د: مجموعة التحكم.(ج) صورة مجهرية خفيفة تظهر ورمًا في الرئة.التكبير: 100. ب: 400. (د) حمل الورم في مجموعة مستخلص الجينسنغ الأحمر.(هـ) مستويات إنزيم الكبد ALT في البلازما.(F) مستويات البلازما للانزيم الكلوي الكروم.يتم التعبير عن البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط.* ف <0.05.
تم تحليل مستخلصات الجينسنغ الأحمر المحددة في هذه الدراسة بواسطة تحليل طيف الكتلة الترادفي السائل فائق الأداء (UPLC-MS/MS) لتحديد كمية الجينسينوسيدات التالية: Rg1، Re، Rc، Rb2، Rb3، Rb1، Rh1، Rd، Rg3، Rh2، F1، Rk1 وRg5.تم وصف شروط UPLC وMS المستخدمة لقياس التحاليل في تقرير سابق.تظهر الرسوم البيانية اللونية UPLC-MS/MS لأربعة مقتطفات من الجينسنغ الأحمر في الشكل 2A.كانت هناك اختلافات كبيرة في إجمالي محتوى الجينسينوسيد، مع أعلى محتوى إجمالي للجينسينوسيد في CRG (590.27 ± 41.28 ميكرومول/لتر) (الشكل 2ب).عند تقييم الجينسينوسيدات الفردية (الشكل 2C)، أظهر KRGB أعلى مستوى من G-Rg3 مقارنة بالجينسينوسيدات الأخرى (58.33 ± 3.81 ميكرومول/لتر لـ G-Rg3s و41.56 ± 2.88 ميكرومول/لتر لـ G-Rg3r).L).نوع الجينسنغ الأحمر (P <0.001).يحدث G-Rg3 كزوج من الأيزومرات الفراغية G-Rg3r وG-Rg3s، والتي تختلف في موضع مجموعة الهيدروكسيل عند الكربون 20 (الشكل 2D).تشير النتائج إلى أن G-Rg3r أو G-Rg3 قد يكون لهما إمكانات مهمة مضادة للسرطان في نموذج الفأر السرطاني الناجم عن B(a)P.
محتوى الجينسينوسيدات في مستخلصات الجينسنغ الأحمر المختلفة.(أ) اللوني UPLC-MS/MS لأربعة مستخلصات الجينسنغ الأحمر.(ب) تقدير إجمالي محتوى الجينسنوسيد في المستخلصات المشار إليها.(ج) الكشف عن الجينوسيدات الفردية في المستخلصات المسماة.(د) هياكل أيزومرات الجينسنوسيد G-Rg3r وG-Rg3s.يتم التعبير عن البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط لقرارات ثلاث نسخ.*** ف <0.001.
تطلبت دراسة UPLC-MS/MS تحديد كمية الجينسينوسيدات في عينات الأمعاء والدم بعد 20 أسبوعًا من العلاج.أظهر العلاج باستخدام KRGB وجود 0.0063 ± 0.0005 ميكروغرام/مل Rg5 فقط في الدم.لم يتم اكتشاف أي جينسينوسيدات متبقية، مما يشير إلى ضعف التوافر البيولوجي عن طريق الفم وبالتالي انخفاض التعرض لهذه الجينسينوسيدات.
يشبه خط خلايا سرطان القولون الغدي Caco-2 من الناحية الشكلية والكيميائية الحيوية الخلايا الظهارية المعوية البشرية، مما يدل على فائدته في تقييم نقل الخلايا المعوية عبر الحاجز الظهاري المعوي.واستند هذا التحليل على دراسة سابقة 20 .تظهر الأشكال 3A، B، C، D، E، F صورًا تمثيلية للنقل عبر الخلوي لـ G-Rg3r وG-Rg3 باستخدام نموذج أحادي الطبقة Caco-2.كان النقل عبر الخلايا لـ G-Rg3r أو G-Rg3 عبر الطبقات الأحادية Caco-2 من الجانب القاعدي إلى الجانب القمي (Pb-a) أعلى بكثير من النقل من الجانب القمي إلى الجانب القاعدي (Pa-b).بالنسبة لـ G-Rg3r، كان متوسط قيمة Pa-b 0.38 ± 0.06، والذي زاد إلى 0.73 ± 0.06 بعد العلاج بـ 50 ميكرومول/لتر فيراباميل وإلى 1.14 ± 0.09 بعد العلاج بـ 100 ميكرومول/لتر فيراباميل (p <0.01 و0.001، على التوالي؛ الشكل 2).3 أ).اتبعت ملاحظات G-Rg3 نمطًا مشابهًا (الشكل 3B)، وأظهرت النتائج أن علاج الفيراباميل عزز نقل G-Rg3r وG-Rg3.أدى علاج فيراباميل أيضًا إلى انخفاض كبير في متوسط نسب تدفق Pb-a وG-Rg3r وG-Rg3s (الشكل 3C،D،E،F)، مما يشير إلى أن علاج فيراباميل يقلل من محتوى الجينسنوسيد في خلايا تدفق Caco-2..
النقل عبر الخلايا لـ G-Rg3 في أحادي الطبقة Caco-2 وامتصاص الأمعاء في اختبار نضح الفئران.(A) قيمة Pa-b لمجموعة G-Rg3r في الطبقة الأحادية Caco-2.(ب) قيمة Pa-b لمجموعات G-Rg3s في الطبقة الأحادية Caco-2.(C) قيمة Pb لمجموعة G-Rg3r في الطبقة الأحادية Caco-2.(D) قيمة Pb لمجموعات G-Rg3s في أحادي الطبقة Caco-2.( E ) نسبة العائد لمجموعات G-Rg3r في طبقة أحادية Caco-2.(F) نسبة العائد لمجموعات G-Rg3 في أحادي الطبقة Caco-2.(G) النسبة المئوية لامتصاص الأمعاء لـ G-Rg3r في اختبار التروية لدى الفئران.(ح) النسبة المئوية لامتصاص الأمعاء لـ G-Rg3 في اختبار التروية لدى الفئران.وتمت مقارنة النفاذية والامتصاص دون إضافة فيراباميل.يتم التعبير عن البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط لخمس تجارب مستقلة.* ف <0.05، ** ف <0.01، *** ف <0.001.
تماشيًا مع العمل السابق، تم إجراء التروية المعوية المثلية للفئران لتحديد ما إذا كان امتصاص G-Rg3 في الأمعاء يزداد بعد علاج فيراباميل.تُظهر الأشكال 3G وH فحوصات التروية التمثيلية لتقييم النسبة المئوية لامتصاص الأمعاء لـ G-Rg3r وG-Rg3 في الفئران النموذجية للسرطان خلال الفترات الزمنية المذكورة أعلاه.زادت النسبة المئوية الأولية لاستيعاب G-Rg3r الضعيف بحوالي 10٪ إلى أكثر من 20٪ بعد العلاج بـ 50 ميكرومتر فيراباميل وإلى أكثر من 25٪ بعد العلاج بـ 100 ميكرومتر فيراباميل.وبالمثل، أظهر G-Rg3، الذي كان له امتصاص أولي قدره 10٪، أيضًا ذروة تزيد عن 20٪ بعد العلاج بـ 50 ميكرومتر فيراباميل وما يقرب من 30٪ بعد العلاج بـ 100 ميكرومتر فيراباميل، مما يشير إلى أن تثبيط P-gp بواسطة فيراباميل يعزز امتصاص G- المعوي Rg3 في نموذج فأر لسرطان الرئة.
وفقا للطريقة المذكورة أعلاه، تم تقسيم الفئران النموذجية للسرطان الناجمة عن B (أ) P بشكل عشوائي إلى ست مجموعات، كما هو مبين في الشكل 4A.لم يلاحظ أي فقدان كبير في الوزن أو علامات سريرية للسمية في مجموعة العلاج G-Rg3 مقارنة بالمجموعة الضابطة (البيانات غير معروضة).وبعد 20 أسبوعًا من العلاج، تم جمع رئتي كل فأر.ويبين الشكل 4B أورام الرئة العيانية في الفئران في مجموعات العلاج المذكورة أعلاه، ويبين الشكل 4C صورة مجهرية ضوئية تمثيلية للورم التمثيلي.فيما يتعلق بعبء الورم في كل مجموعة (الشكل 4D)، كانت قيم الفئران المعالجة بـ G-Rg3r وG-Rg3s 0.75 ± 0.29 مم 3 و0.81 ± 0.30 مم 3، على التوالي، بينما كانت قيم الفئران G المعالجة مع -Rg3s كانت 1.63 على التوالي ± 0.40 مم 3.السيطرة على الفئران (P <0.001)، مما يشير إلى أن علاج G-Rg3 قلل من عبء الورم في الفئران.عززت إدارة فيراباميل هذا التخفيض بشكل أكبر: انخفضت القيم في الفئران فيراباميل + G-Rg3r من 0.75 ± 0.29 مم 3 إلى 0.33 ± 0.25 مم 3 (P <0.01) ، وانخفضت قيم فيراباميل + من 0.81 ± 0.30 مم 3 إلى 0.29 ± 0.21 mm3 في الفئران المعالجة بـ G.-Rg3s (P <0.05) ، مما يشير إلى أن فيراباميل قد يعزز التأثير المثبط لـ G-Rg3 على تكوين الأورام.أظهر عبء الورم عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعة الضابطة ومجموعة فيراباميل، ومجموعة G-Rg3r ومجموعة G-Rg3s، ومجموعة فيراباميل + G-Rg3r ومجموعة فيراباميل + G-Rg3s.وعلاوة على ذلك، لم تكن هناك سميات كبيرة في الكبد أو الكلى المرتبطة بالعلاجات التي تم تقييمها (الشكل 4E، F).
عبء الورم بعد علاج G-Rg3 ومستويات G-Rg3r و G-Rg3 في البلازما أو الأمعاء في المجموعات المشار إليها.(أ) التصميم التجريبي.(ب) الأورام العيانية في نموذج الفأر.تتم الإشارة إلى الأورام بواسطة السهام.ج: G-Rg3r.ب: G-Rg3s.ج: G-Rg3r بالاشتراك مع فيراباميل.د: G-Rg3 بالاشتراك مع فيراباميل.د: فيراباميل.ه: السيطرة.(ج) صورة مجهرية بصرية للورم عند التكبير.الجواب: 100x.ب: 400X.(د) تأثير علاج G-Rg3 + فيراباميل على عبء الورم في الفئران A/J.(هـ) مستويات إنزيم الكبد ALT في البلازما.(F) مستويات البلازما للانزيم الكلوي الكروم.(G) مستويات البلازما لـ G-Rg3r أو G-Rg3 للمجموعات المشار إليها.(H) مستويات G-Rg3r أو G-Rg3s في أمعاء المجموعات المشار إليها.يتم التعبير عن البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط لقرارات ثلاث نسخ.* ف <0.05، ** ف <0.01، *** ف <0.001.
تم تقييم مستويات G-Rg3 في الفئران النموذجية للسرطان الناجم عن B (a) P بواسطة UPLC-MS / MS بعد فترة علاج مدتها 20 أسبوعًا وفقًا للطريقة الموضحة في قسم الطرق.تُظهر الأشكال 4G وH مستويات G-Rg3 في البلازما والأمعاء، على التوالي.كانت مستويات البلازما G-Rg3r 0.44 ± 0.32 ميكروليتر / لتر وزادت إلى 1.17 ± 0.47 ميكروليتر / لتر مع ما يصاحب ذلك من إعطاء فيراباميل (P <0.001)، في حين كانت مستويات G-Rg3r المعوية 0.53 ± 0.08 ميكروغرام / لتر.عند دمجه مع فيراباميل، زاد g إلى 1.35 ± 0.13 ميكروغرام/جم (P <0.001).بالنسبة لـ G-Rg3، اتبعت النتائج نمطًا مشابهًا، مما يشير إلى أن علاج فيراباميل زاد من التوافر الحيوي عن طريق الفم لـ G-Rg3 في الفئران A/J.
تم استخدام مقايسة صلاحية الخلية لتقييم السمية الخلوية لـ B (a) P و G-Rg3 على خلايا hEL.يظهر الشكل 5A السمية الخلوية الناجمة عن B(a)P في خلايا hEL، بينما تظهر الخصائص غير السامة لـ G-Rg3r وG-Rg3 في الشكلين 5A و5B.5B، C. لتقييم التأثير الوقائي للخلايا لـ G-Rg3، تمت إدارة B (a) P بشكل مشترك مع تركيزات مختلفة من G-Rg3r أو G-Rg3 في خلايا hEL.كما هو مبين في الشكل 5D، أعاد G-Rg3r بتركيزات 5 ميكرومتر و10 ميكرومتر و20 ميكرومتر قابلية الخلية للخلايا إلى 58.3% و79.3% و77.3% على التوالي.ويمكن أيضًا رؤية نتائج مماثلة في مجموعة G-Rg3s.عندما كانت تركيزات G-Rg3s 5 ميكرومتر، 10 ميكرومتر و 20 ميكرومتر، تمت استعادة بقاء الخلية إلى 58.3٪، 72.7٪ و 76.7٪، على التوالي (الشكل 5E).).تم قياس وجود مقاربات BPDE-DNA باستخدام مجموعة ELISA.أظهرت نتائجنا أن مستويات التقارب BPDE-DNA قد زادت في المجموعة المعالجة بـ B(a)P مقارنة بالمجموعة الضابطة، ولكن بالمقارنة مع المعالجة المشتركة G-Rg3، ومستويات التقارب BPDE-DNA في المجموعة B(a)P B في المجموعة المعالجة، انخفضت مستويات الحمض النووي بشكل ملحوظ.تظهر نتائج العلاج بـ B(a)P وحده في الشكل 5F (1.87 ± 0.33 مقابل 3.77 ± 0.42 لـ G-Rg3r، 1.93 ± 0.48 مقابل 3.77 ± 0.42 لـ G -Rg3s، p < 0.001).
قابلية الخلية للخلايا وتكوين مقاربة BPDE-DNA في خلايا hEL المعالجة بـ G-Rg3 و B (a) P.(أ) صلاحية خلايا HEL المعالجة بـ B(a)P.(ب) جدوى خلايا hEL المعالجة بـ G-Rg3r.(ج) جدوى خلايا hEL المعالجة بـ G-Rg3.(د) جدوى خلايا hEL المعالجة بـ B(a)P وG-Rg3r.(E) جدوى خلايا hEL المعالجة بـ B(a)P وG-Rg3.(F) مستويات مقاربة BPDE-DNA في خلايا hEL المعالجة بـ B(a)P وG-Rg3.يتم التعبير عن البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط لقرارات ثلاث نسخ.* ف <0.05، ** ف <0.01، *** ف <0.001.
تم اكتشاف تعبير إنزيم GST بعد المعالجة المشتركة بـ 10 ميكرومتر B (a) P و 10 ميكرومتر G-Rg3r أو G-Rg3s.أظهرت نتائجنا أن B (a) P قمع تعبير GST (59.7 ± 8.2٪ في مجموعة G-Rg3r و 39 ± 4.5٪ في مجموعة G-Rg3s)، وكان B (a) P مرتبطًا بأي من G-Rg3r أو مع G-Rg3r أو مع G-Rg3r.العلاج المشترك مع G-Rg3s أعاد تعبير GST.تعبير GST (103.7 ± 15.5% في مجموعة G-Rg3r و110 ± 11.1% في مجموعة G-Rg3s، p <0.05 وp <0.001، على التوالي، الشكل 6A وB وC).تم تقييم نشاط GST باستخدام مجموعة فحص النشاط.أظهرت نتائجنا أن مجموعة العلاج المركب كان لها نشاط GST أعلى مقارنة بالمجموعة B (a) P فقط (96.3 ± 6.6٪ مقابل 35.7 ± 7.8٪ في مجموعة G-Rg3r مقابل 92.3 ± 6.5 في مجموعة G-Rg3r ).% مقابل 35.7 ± 7.8% في مجموعة G-Rg3s، p < 0.001، الشكل 6D).
التعبير عن GST وNrf2 في خلايا hEL المعالجة بـ B(a)P وG-Rg3.(أ) الكشف عن تعبير GST عن طريق النشاف الغربي.( ب ) التعبير الكمي لـ GST في خلايا hEL المعالجة بـ B (a) P و G-Rg3r.(C) التعبير الكمي لـ GST في خلايا hEL المعالجة بـ B (a) P و G-Rg3s.( D ) نشاط GST في خلايا hEL المعالجة بـ B (a) P و G-Rg3.(E) الكشف عن تعبير Nrf2 عن طريق النشاف الغربي.( F ) التعبير الكمي لـ Nrf2 في خلايا hEL المعالجة بـ B (a) P و G-Rg3r.( G ) التعبير الكمي لـ Nrf2 في خلايا hEL المعالجة بـ B (a) P و G-Rg3s.يتم التعبير عن البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط لقرارات ثلاث نسخ.* ف <0.05، ** ف <0.01، *** ف <0.001.
لتوضيح المسارات المشاركة في قمع G-Rg3 بوساطة الأورام الناجمة عن B (a) P ، تم تقييم تعبير Nrf2 بواسطة النشاف الغربي.كما هو مبين في الأشكال 6E، F، G، مقارنة مع مجموعة التحكم، انخفض مستوى Nrf2 فقط في مجموعة العلاج B (a) P؛ومع ذلك، بالمقارنة مع مجموعة العلاج B(a)P، تمت زيادة مستويات B(a) Nrf2 في مجموعة PG-Rg3 (106 ± 9.5% لـ G-Rg3r مقابل 51.3 ± 6.8%، 117 ± 6.2% لـ G-Rg3r). G-Rg3r مقابل 41 ± 9.8% لـ G-Rg3s، p < 0.01).
لقد أكدنا الدور الوقائي لـ Nrf2 عن طريق قمع تعبير Nrf2 باستخدام RNA صغير متداخل (siRNA).تم تأكيد ضربة قاضية Nrf2 بواسطة النشاف الغربي (الشكل 7A، B).كما هو مبين في الأشكال 7C، D، أدت المعالجة المشتركة لخلايا hEL مع B(a)P وG-Rg3 إلى انخفاض في عدد مقاربات BPDE-DNA (1.47 ± 0.21) مقارنة بالعلاج بـ B(a)P وحده في مجموعة التحكم siRNA.) كان G-Rg3r 4.13 ± 0.49، وكان G-Rg3s 1.8 ± 0.32 و4.1 ± 0.57، p <0.01).ومع ذلك، تم إلغاء التأثير المثبط لـ G-Rg3 على تكوين BPDE-DNA بواسطة ضربة قاضية Nrf2.في مجموعة siNrf2، لم يكن هناك اختلاف كبير في تكوين مقارب BPDE-DNA بين المعالجة المشتركة B(a)P وG-Rg3 والعلاج B(a)P وحده (3.0 ± 0.21 لـ G-Rg3r مقابل 3.56 ± 0.32 ).لـ G-Rg3r مقابل 3.6 لـ G-Rg3s مقابل ±0.45 مقابل 4.0±0.37، p > 0.05).
تأثير ضربة قاضية Nrf2 على تكوين مقارب BPDE-DNA في خلايا hEL.(أ) تم تأكيد ضربة قاضية Nrf2 بواسطة النشاف الغربي.(ب) القياس الكمي لكثافة النطاق Nrf2.(C) تأثير ضربة قاضية Nrf2 على مستويات التقريب BPDE-DNA في خلايا hEL المعالجة بـ B (a) P و G-Rg3r.( D ) تأثير ضربة قاضية Nrf2 على مستويات التقريب BPDE-DNA في خلايا hEL المعالجة بـ B (a) P و G-Rg3.يتم التعبير عن البيانات على أنها الانحراف المعياري المتوسط لقرارات ثلاث نسخ.* ف <0.05، ** ف <0.01، *** ف <0.001.
قيمت هذه الدراسة التأثيرات الوقائية لمستخلصات الجينسنغ الأحمر المختلفة على نموذج فأر مصاب بسرطان الرئة الناجم عن B(a)P، كما أدى علاج KRGB إلى تقليل عبء الورم بشكل كبير.وبالنظر إلى أن G-Rg3 يحتوي على أعلى محتوى في مستخلص الجينسنغ هذا، فقد تمت دراسة الدور الهام لهذا الجينسنوسيد في تثبيط تكوين الأورام.أدى كل من G-Rg3r وG-Rg3 (اثنين من ظاهرتي G-Rg3) إلى تقليل عبء الورم بشكل كبير في نموذج الفأر للسرطان الناجم عن B(a)P.يمارس G-Rg3r وG-Rg3 تأثيرات مضادة للسرطان عن طريق تحفيز موت الخلايا المبرمج للخلايا السرطانية، وتثبيط نمو الورم، وإيقاف دورة الخلية، والتأثير على تكوين الأوعية.ثبت أيضًا أن G-Rg3 يمنع ورم خبيث الخلوي، وقد تم توثيق قدرة G-Rg3 على تعزيز تأثيرات العلاج الكيميائي والعلاج الإشعاعي.أظهر Poon et al أن علاج G-Rg3 يمكن أن يقلل من التأثيرات السمية الجينية لـ B (a) P28.توضح هذه الدراسة الإمكانات العلاجية لـ G-Rg3 في استهداف الجزيئات البيئية المسببة للسرطان والوقاية من السرطان.
على الرغم من إمكاناتها الوقائية الجيدة، فإن التوافر البيولوجي الضعيف للجينسينوسيدات عن طريق الفم يشكل تحديًا للاستخدام السريري لهذه الجزيئات.أظهر التحليل الحرائك الدوائية للإعطاء عن طريق الفم للجينسينوسيدات في الفئران أن التوافر البيولوجي لا يزال أقل من 5٪.وأظهرت هذه الاختبارات أنه بعد فترة العلاج التي استمرت 20 أسبوعًا، انخفضت مستويات Rg5 فقط في الدم.على الرغم من أن الآلية الأساسية لضعف التوافر الحيوي لا تزال بحاجة إلى توضيح، إلا أنه يُعتقد أن P-gp متورط في تدفق الجينسينوسيدات.أظهر هذا العمل لأول مرة أن إعطاء فيراباميل، وهو حاصر لـ P-gp، يزيد من التوافر البيولوجي عن طريق الفم لـ G-Rg3r وG-Rg3s.وبالتالي، تشير هذه النتيجة إلى أن G-Rg3r وG-Rg3s يعملان كركائز لـ P-gp لتنظيم تدفقه.
يوضح هذا العمل أن العلاج المركب مع فيراباميل يزيد من التوافر الحيوي عن طريق الفم لـ G-Rg3 في نموذج فأر لسرطان الرئة.يتم دعم هذا الاكتشاف من خلال زيادة النقل المعوي لـ G-Rg3 عند حصار P-gp، وبالتالي زيادة امتصاصه.أظهرت فحوصات خلايا Caco2 أن علاج فيراباميل قلل من تدفق G-Rg3r وG-Rg3s مع تحسين نفاذية الغشاء.دراسة أجراها يانغ وآخرون.أظهرت الدراسات أن العلاج باستخدام السيكلوسبورين A (أحد حاصرات P-gp) يزيد من التوافر الحيوي للجينسينوسيد Rh2 من قيمة أساسية قدرها 1%20 إلى أكثر من 30%.أظهرت مركبات Ginsenosides K و Rg1 أيضًا نتائج مماثلة .عندما تم تناول فيراباميل وسيكلوسبورين A بشكل مشترك، انخفض تدفق المركب K في خلايا Caco-2 بشكل ملحوظ من 26.6 إلى أقل من 3، بينما زادت مستوياته داخل الخلايا بمقدار 40 ضعفًا.في وجود فيراباميل، زادت مستويات Rg1 في الخلايا الظهارية لرئة الفئران، مما يشير إلى دور P-gp في تدفق الجينسينوسيد، كما هو موضح من قبل Meng et al.31.ومع ذلك، لم يكن للفيراباميل نفس التأثير على تدفق بعض الجينوسيدات (مثل Rg1 وF1 وRh1 وRe)، مما يشير إلى أنها لا تتأثر بالركائز P-gp، كما هو موضح بواسطة Liang et al.32 .قد تكون هذه الملاحظة مرتبطة بمشاركة الناقلات الأخرى وهياكل الجينسنوسيد البديلة.
آلية التأثير الوقائي لـ G-Rg3 على السرطان غير واضحة.أظهرت الدراسات السابقة أن G-Rg3 يمنع تلف الحمض النووي وموت الخلايا المبرمج عن طريق تقليل الإجهاد التأكسدي والالتهابات، والتي قد تكون الآلية الأساسية لمنع تكوين الأورام الناجم عن B (a) P.تشير بعض التقارير إلى أن السمية الجينية الناجمة عن B(a)P يمكن تقليلها عن طريق تعديل إنزيمات المرحلة الثانية لتكوين BPDE-DNA34.GST هو إنزيم نموذجي من المرحلة الثانية يمنع تكوين مقارب BPDE-DNA من خلال تعزيز ربط GSH بـ BPDE، وبالتالي تقليل تلف الحمض النووي الناجم عن B(a)P35.تظهر نتائجنا أن علاج G-Rg3 يقلل من السمية الخلوية الناجمة عن B (a) P وتكوين مقارب BPDE-DNA في خلايا hEL ويستعيد تعبير GST ونشاطه في المختبر.ومع ذلك، كانت هذه التأثيرات غائبة في غياب Nrf2، مما يشير إلى أن G-Rg3 يحفز تأثيرات وقائية للخلايا من خلال مسار Nrf2.يعد Nrf2 عامل نسخ رئيسيًا لإنزيمات إزالة السموم من المرحلة الثانية التي تعزز إزالة الكائنات الحية الغريبة .يؤدي تنشيط مسار Nrf2 إلى الحماية الخلوية ويقلل من تلف الأنسجة .علاوة على ذلك، فقد دعمت العديد من التقارير دور Nrf2 كمثبط للورم في التسرطن.توضح دراستنا أن تحريض مسار Nrf2 بواسطة G-Rg3 يلعب دورًا تنظيميًا مهمًا في السمية الجينية الناجمة عن B (a) P عن طريق التسبب في إزالة السموم من B (a) P عن طريق تنشيط إنزيمات المرحلة الثانية، وبالتالي تثبيط عملية تكوين الأورام.
يكشف عملنا عن إمكانات الجينسنغ الأحمر في الوقاية من سرطان الرئة الناجم عن B (a) P في الفئران من خلال المشاركة المهمة للجينسينوسيد G-Rg3.إن التوافر البيولوجي الضعيف لهذا الجزيء عن طريق الفم يعيق تطبيقه السريري.ومع ذلك، تظهر هذه الدراسة لأول مرة أن G-Rg3 هو ركيزة لـ P-gp، وأن إعطاء مثبط P-gp يزيد من التوافر البيولوجي لـ G-Rg3 في المختبر وفي الجسم الحي.يقلل G-Rg3 من السمية الخلوية الناجمة عن B (a) P عن طريق تنظيم مسار Nrf2، والذي قد يكون آلية محتملة لوظيفته الوقائية.تؤكد دراستنا إمكانات جينسينوسيد G-Rg3 للوقاية من سرطان الرئة وعلاجه.
تم الحصول على فئران A / J عمرها ستة أسابيع (20 ± 1 جم) وفئران ويستار الذكور البالغة من العمر 7 أسابيع (250 ± 20 جم) من مختبر جاكسون (بار هاربور، الولايات المتحدة الأمريكية) ومعهد ووهان لعلم الحيوان.الجامعة (ووهان، الصين).زودنا مركز تجميع ثقافة النوع الصيني (ووهان، الصين) بخلايا Caco-2 وhEL.يعتبر سيجما ألدريتش (سانت لويس، الولايات المتحدة الأمريكية) مصدرًا لـ B(a)P والتريكابرين.تم شراء الجينسينوسيدات المنقى G-Rg3r وG-Rg3s، وثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)، ومجموعة مقايسة الانتشار CellTiter-96 (MTS)، وفيراباميل، والحد الأدنى من الوسط الأساسي (MEM)، ومصل الأبقار الجنيني (FBS) من شركة Chengdu Must Bio-Technology. .المحدودة.(تشنغدو، الصين).تم شراء مجموعة QIAamp DNA المصغرة ومجموعة ELISA المقاربة BPDE-DNA من Qiagen (ستانفورد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) وCell Biolabs (سان دييغو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية).تم شراء مجموعة فحص نشاط GST ومجموعة فحص البروتين الكلي (طريقة BCA القياسية) من Solarbio (بكين، الصين).يتم تخزين جميع مستخلصات الجينسنغ الأحمر في مختبر مينجيو 7. تعد جامعة هونغ كونغ المعمدانية (هونج كونج، الصين) ومركز كوريا للسرطان (سيول، كوريا) مصادر تجارية لمستخلص CRG ومستخلصات الجينسنغ الأحمر المختلفة من أصول كورية مختلفة (بما في ذلك KRGA وKRGB). وحكومة إقليم كردستان).الجينسنغ الأحمر مصنوع من جذور الجينسنغ الطازج البالغ من العمر 6 سنوات.يتم الحصول على مستخلص الجنسنج الأحمر عن طريق غسل الجنسنج بالماء ثلاث مرات، ثم تركيز المستخلص المائي، وأخيراً تجفيفه على درجة حرارة منخفضة للحصول على مسحوق مستخلص الجنسنج.تم شراء الأجسام المضادة (المضادة لـ Nrf2 و anti-GST و β-actin) والجلوبيولين المناعي المضاد للأرنب G (IgG) المترافق مع بيروكسيداز الفجل وكاشف ترنسفكأيشن والتحكم siRNA و Nrf2 siRNA من Santa Cruz Biotechnology (سانتا كروز، كاليفورنيا) .)، الولايات المتحدة الأمريكية).
تم استزراع خلايا Caco2 وhEL في أطباق زراعة الخلايا بمساحة 100 مم2 مع MEM التي تحتوي على 10% FBS عند 37 درجة مئوية في جو مرطب بنسبة 5% من ثاني أكسيد الكربون.لتحديد تأثير ظروف العلاج، تم تحضين خلايا HEL بتركيزات مختلفة من B(a)P وG-Rg3 في MEM لمدة 48 ساعة.يمكن تحليل الخلايا بشكل أكبر أو جمعها لإعداد مقتطفات خالية من الخلايا.
تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان التجريبية بكلية تونغجى الطبية، جامعة هواتشونغ للعلوم والتكنولوجيا (رقم الموافقة 2019؛ رقم التسجيل 4587TH).تم إجراء جميع التجارب وفقًا للمبادئ التوجيهية واللوائح ذات الصلة، وتم إجراء الدراسة وفقًا للمبادئ التوجيهية للبحوث الحيوانية: الإبلاغ عن التجارب في الجسم الحي (ARRIVE).تم حقن فئران A/J البالغة من العمر ثمانية أسابيع لأول مرة داخل الصفاق باستخدام B(a)P في محلول ثلاثي الكابرين (100 مجم/كجم، 0.2 مل).بعد أسبوع، تم تقسيم الفئران عشوائيًا إلى مجموعات مراقبة ومجموعات علاجية مختلفة، 15 فأرًا في كل مجموعة، وتم تغذيتها مرة واحدة يوميًا.بعد 20 أسبوعا من العلاج، تم التضحية بالحيوانات عن طريق الاختناق بثاني أكسيد الكربون.تم جمع الرئتين وثابتة لمدة 24 ساعة.تم قياس عدد الأورام السطحية وأحجام الورم الفردية لكل رئة تحت مجهر تشريح.تم حساب تقديرات حجم الورم (V) باستخدام التعبير التالي: V (mm3) = 4/3πr3، حيث r هو قطر الورم.يمثل المجموع الصافي لجميع أحجام الورم في رئتي الفئران إجمالي حجم الورم، ويمثل متوسط حجم الورم الإجمالي في كل مجموعة حمل الورم.تم جمع عينات الدم الكاملة والأمعاء وتخزينها عند -80 درجة مئوية لتحديد UPLC-MS/MS.تم جمع المصل واستخدام محلل كيميائي آلي لتحليل مستويات ألانين أمينوترانسفيراز (ALT) وكرياتينين المصل (Cr) لتقييم وظائف الكبد والكلى.
تمت إزالة العينات المجمعة من التخزين البارد، وإذابتها، ووزنها، ووضعها في أنابيب كما هو موضح أعلاه.تمت إضافة 0.5 ميكرومتر من الفلوريزين إلى هذا (معيار داخلي) في محلول ميثانول سعة 0.8 مل.تم بعد ذلك تجانس الأنسجة باستخدام Tissue-Tearor وتم نقل المتجانس بعد ذلك إلى أنبوب طرد مركزي صغير سعة 1.5 مل.تم طرد الخليط عند 15500 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة.بعد إزالة 1.0 مل من المادة طافية، تجف بالنيتروجين.تم استخدام مائتي ميكروليتر من الميثانول للانتعاش.يتم جمع الدم ومعالجته في سطر واحد ويستخدم كمرجع لجميع القياسات.
تم زرع صفائح Transwell ذات 24 بئرًا بـ 1.0 × 105 خلايا Caco-2 لكل بئر لتقييم التعزيز المحتمل لنقل G-Rg3 عن طريق إضافة فيراباميل.بعد 3 أسابيع من الثقافة، تم غسل الخلايا باستخدام HBSS وتم حضنها مسبقًا عند 37 درجة مئوية.تم حقن 400 ميكرولتر من 10 ميكرومتر G-Rg3 (G-Rg3r أو G-Rg3s أو خليط يحتوي على 50 أو 100 ميكرومتر فيراباميل) على الجانب القاعدي أو القمي من الطبقة الأحادية، وأضيف 600 ميكرولتر من محلول HBSS إلى الجانب الآخر. جانب.جمع 100 ميكرولتر من مستنبت في الأوقات المحددة (0، 15، 30، 45، 60، 90 و 120 دقيقة) وإضافة 100 ميكرولتر من HBSS لتعويض هذا الحجم.تم تخزين العينات عند -4 درجة مئوية حتى يتم اكتشافها بواسطة UPLC-MS/MS.يتم استخدام التعبير Papp = dQ/(dT × A × C0) لتحديد النفاذية القمية والقاعدية الجانبية الظاهرة أحادية الاتجاه والعكس (Pa-b وPb-a، على التوالي)؛dQ/dT هو التغير في التركيز، A (0.6 سم2) هو مساحة سطح الطبقة الأحادية، وC0 هو التركيز الأولي للمانحين.يتم حساب نسبة التدفق على أنها Pb-a/Pa-b، وهو ما يمثل معدل التدفق لدواء الدراسة.
تم صيام ذكور فئران ويستار لمدة 24 ساعة، وشربوا الماء فقط، وتم تخديرهم عن طريق الحقن في الوريد بمحلول بنتوباربيتال 3.5٪.يحتوي أنبوب السيليكون المنبّب على نهاية الاثني عشر كمدخل ونهاية اللفائفي كمخرج.استخدام مضخة تمعجية لضخ المدخل مع 10 ميكرومتر G-Rg3r أو G-Rg3s في HBSS متساوي التوتر بمعدل تدفق 0.1 مل / دقيقة.تم تقييم تأثير فيراباميل بإضافة 50 ميكرومتر أو 100 ميكرومتر من المركب إلى 10 ميكرومتر G-Rg3r أو G-Rg3s.تم إجراء UPLC-MS/MS على مقتطفات التروية التي تم جمعها في نقاط زمنية 60 و90 و120 و150 دقيقة بعد بدء التروية.يتم تحديد نسبة الامتصاص بواسطة الصيغة % الامتصاص = (1 – Cout/Cin) × 100%؛يتم التعبير عن تركيز G-Rg3 عند المخرج والمدخل بواسطة Cout وCin، على التوالي.
تم زرع خلايا hEL في 96 طبقًا جيدًا بكثافة 1 × 104 خلية لكل بئر وتم معالجتها بـ B (a) P (0، 1، 5، 10، 20، 30، 40 ميكرومتر) أو G-Rg3 المذاب في DMSO .تم بعد ذلك تخفيف الأدوية باستخدام وسط الثقافة إلى تركيزات مختلفة (0، 1، 2، 5، 10، 20 ميكرومتر) على مدار 48 ساعة.باستخدام مجموعة أدوات فحص MTS المتوفرة تجاريًا، تم إخضاع الخلايا لبروتوكول قياسي ثم تم قياسها باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية عند 490 نانومتر.تم تقييم مستوى صلاحية الخلية للمجموعات التي تمت معالجتها بشكل مشترك مع B (a) P (10 ميكرومتر) وG-Rg3 (0، 1، 5، 10، 20 ميكرومتر) وفقًا للطريقة المذكورة أعلاه ومقارنتها بالمجموعة غير المعالجة.
تم زرع خلايا hEL في 6 لوحات جيدة بكثافة 1 × 10 خلايا / بئر وتم علاجها بـ 10 ميكرومتر (أ) P في وجود أو عدم وجود 10 ميكرومتر G-Rg3.بعد 48 ساعة من العلاج، تم استخراج الحمض النووي من خلايا HEL باستخدام QIAamp DNA Mini Kit وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة.تم الكشف عن تكوين مقاربات BPDE-DNA باستخدام مجموعة ELISA لمقاربات BPDE-DNA.تم قياس المستويات النسبية لمقاربة BPDE-DNA باستخدام قارئ صفيحة ميكروية عن طريق قياس الامتصاصية عند 450 نانومتر.
تم زرع خلايا hEL في 96 طبقًا جيدًا بكثافة 1 × 104 خلية لكل بئر وتم علاجها بـ 10 ميكرومتر (أ) P في غياب أو وجود 10 ميكرومتر G-Rg3 لمدة 48 ساعة.تم قياس نشاط GST باستخدام مجموعة فحص نشاط GST التجارية وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة.تم قياس التنشيط النسبي لـ GST عن طريق الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروية.
تم غسل خلايا HEL باستخدام PBS بالثلج البارد ثم تم التخلص منها باستخدام عازلة مقايسة الهطول المناعي الإشعاعي التي تحتوي على مثبطات الأنزيم البروتيني ومثبطات الفوسفاتيز.بعد تقدير كمية البروتين باستخدام مجموعة فحص البروتين الكلي، تم فصل 30 ميكروغرام من البروتين في كل عينة بنسبة 12% SDS-PAGE ونقلها إلى غشاء PVDF بواسطة الرحلان الكهربائي.تم حظر الأغشية بحليب خالي الدسم بنسبة 5٪ واحتضانها بالأجسام المضادة الأولية طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.بعد الحضانة مع الأجسام المضادة الثانوية المرتبطة ببيروكسيديز الفجل، تمت إضافة كواشف التألق الكيميائي المحسنة لتصور إشارة الربط.تم قياس شدة كل نطاق بروتين باستخدام برنامج ImageJ.
تم استخدام برنامج GraphPad Prism 7.0 لتحليل جميع البيانات، معبرًا عنها بالانحراف المعياري المتوسط.تم تقييم التباين بين مجموعات العلاج باستخدام اختبار الطالب أو تحليل التباين أحادي الاتجاه، مع قيمة P <0.05 تشير إلى أهمية إحصائية.
يتم تضمين جميع البيانات التي تم الحصول عليها أو تحليلها خلال هذه الدراسة في هذه المقالة المنشورة وملفات المعلومات التكميلية.
Torre، LA، Siegel، RL and Jemal، A. إحصائيات سرطان الرئة.ظرف.منتهي الصلاحية.الدواء.مادة الاحياء.893، 1–19 (2016).
هيشت، S. المواد المسرطنة للتبغ، ومؤشراتها الحيوية والسرطان الناجم عن التبغ.نات.قسيس السرطان.3، 733-744 (2003).
Phillips، DH and Venitt، S. DNA والبروتين يتقاربان في الأنسجة البشرية الناتجة عن التعرض لدخان التبغ.الدولية.جي السرطان.131، 2733-2753 (2012).
Yang Y.، Wang Y.، Tang K.، Lubet RA و Yu M. تأثير Houttuynia cordata و silibinin على ورم الرئة الناتج عن البنزو (أ) البيرين في الفئران A / J.السرطان 7، 1053-1057 (2005).
تانغ، دبليو وآخرون.منتج طبيعي مضاد للسرطان معزول من مواد طبية صينية.فك.الدواء.6، 27 (2011).
يانغ، Y. وآخرون.فعالية البوليفينون E، والجينسنغ الأحمر، والراباميسين على ورم الرئة الناجم عن البنزو (أ) البيرين في الفئران A / J.السرطان 8، 52-58 (2006).
Wang، CZ، Anderson، S.، Du، W.، He، TS and Yuan، KS Red، المشاركة في علاج السرطان.فك.جي نوت.الدواء.14، 7-16 (2016).
Lee، TS، Mazza، G.، Cottrell، AS and Gao، L. Ginsenosides في جذور وأوراق الجينسنغ الأمريكي.جيه أجريك.كيمياء الغذاء.44، 717-720 (1996).
Attele AS، Wu JA و Yuan KS علم عقاقير الجينسنغ: العديد من المكونات والعديد من التأثيرات.الكيمياء الحيوية.علم العقاقير.58، 1685-1693 (1999).
وقت النشر: 17 سبتمبر 2023