Nature.com saytına daxil olduğunuz üçün təşəkkür edirik.İstifadə etdiyiniz brauzer versiyasında məhdud CSS dəstəyi var.Ən yaxşı nəticələr üçün brauzerinizin daha yeni versiyasından istifadə etməyi (və ya Internet Explorer-də uyğunluq rejimini söndürməyi) tövsiyə edirik.Bu arada, davamlı dəstəyi təmin etmək üçün saytı üslub və ya JavaScript olmadan göstəririk.
Qırmızı jenşen ənənəvi Asiya təbabətində yüz illərdir istifadə olunur.Bu işdə müxtəlif bölgələrdə yetişdirilən dörd növ qırmızı jenşen (Çin qırmızı jenşen, Koreya qırmızı jenşen A, Koreya qırmızı jenşen B və Koreya qırmızı jenşen C) kanserogenlə induksiya olunan ağciyərin əmələ gəlməsini və böyüməsini maneə törətmək qabiliyyətini qiymətləndirdik. şişlər.A/J siçanları üzərində benzo(a)piren (B(a)P) testi aparılıb və dörd qırmızı jenşen çeşidi arasında şiş yükünün azaldılmasında ən təsirli olan Koreya qırmızı jenşen B olduğu müəyyən edilib.Bundan əlavə, dörd qırmızı jenşen ekstraktında müxtəlif jensenozidlərin (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 və Rg5) tərkibini təhlil etdik və Koreya qırmızı jenşen B-nin ginsenoside Rg3 (G-Rg3) ən yüksək səviyyələri, G-Rg3-ün terapevtik effektivliyində mühüm rol oynaya biləcəyini göstərir.Bu iş G-Rg3-ün nisbətən aşağı bioavailability olduğunu göstərir.Bununla belə, G-Rg3 P-gp inhibitoru verapamil ilə birlikdə tətbiq edildikdə, G-Rg3-ün Caco-2 hüceyrələrinə axını azaldı, siçovul modelində G-Rg3-ün bağırsaqdan udulma sürəti artdı və G-Rg3 artırıldı.Caco-2 hüceyrələrində Rg3-ün axını azalır və Rg3 konsentrasiyasının səviyyəsi azalır.G-Rg3 bağırsaqda və plazmada artır və onun şişlərin qarşısını almaq qabiliyyəti də B(a)P-nin induksiya etdiyi şiş genezinin siçovul modelində artır.Biz həmçinin G-Rg3-ün insan ağciyər hüceyrələrində B(a)P-induksiya etdiyi sitotoksikliyi və DNT əlavəsi əmələ gəlməsini azaltdığını və Nrf2 yolu vasitəsilə II faza fermentlərinin ifadəsini və fəaliyyətini bərpa etdiyini aşkar etdik ki, bu da potensial fəaliyyət mexanizmi ilə əlaqəli ola bilər. G inhibisyonunun -Rg3..Ağciyər şişlərinin baş verməsi haqqında.Tədqiqatımız G-Rg3-ün siçan modellərində ağciyər şişlərinin hədəf alınmasında potensial əhəmiyyətli rolunu nümayiş etdirir.Bu ginsenozidin oral bioavailability P-qlikoproteini hədəf alaraq gücləndirilir və bu molekulun xərçəng əleyhinə təsir göstərməsinə imkan verir.
Ağciyər xərçənginin ən çox yayılmış növü kiçik hüceyrəli olmayan ağciyər xərçəngidir (KHDAK), Çin və Şimali Amerikada xərçəng ölümlərinin əsas səbəblərindən biridir1,2.Kiçik hüceyrəli olmayan ağciyər xərçənginin inkişaf riskini artıran əsas amil siqaretdir.Siqaret tüstüsünün tərkibində 60-dan çox kanserogen, o cümlədən benzo(a)piren (B(a)P), nitrozaminlər və radonun parçalanması nəticəsində yaranan radioaktiv izotoplar var.3 Polisiklik aromatik karbohidrogenlər B(a)P siqaretdə toksikliyin əsas səbəbidir. tüstü.B(a)P-yə məruz qaldıqda, sitoxrom P450 onu B(a)P-7,8-dihidrodiol-9,10-epoksidə (BPDE) çevirir, bu da BPDE-DNT əlavəsi 4 yaratmaq üçün DNT ilə reaksiya verir. əlavələr şiş mərhələsi və insan ağciyər şişlərinə bənzər histopatologiyası olan siçanlarda ağciyər şişinin yaranmasına səbəb olur5.Bu xüsusiyyət B(a)P-nin səbəb olduğu ağciyər xərçəngi modelini mümkün antikanser xüsusiyyətləri olan birləşmələrin qiymətləndirilməsi üçün uyğun sistem edir.
Yüksək riskli qruplarda, xüsusən də siqaret çəkənlərdə ağciyər xərçənginin inkişafının qarşısını almaq üçün mümkün strategiyalardan biri, intraepitelial neoplastik lezyonların inkişafının qarşısını almaq və bununla da onların sonrakı bədxassəli şişə keçməsinin qarşısını almaq üçün kimyəvi profilaktik vasitələrin istifadəsidir.Heyvanlar üzərində aparılan tədqiqatlar göstərir ki, müxtəlif kimyəvi-profilaktik vasitələr təsirli olur6.Əvvəlki hesabatımız7 qırmızı jenşenin ağciyər xərçənginə yaxşı profilaktik təsirini vurğuladı.Bu ot ənənəvi Asiya təbabətində əsrlər boyu ömrü və sağlamlığı uzatmaq üçün istifadə edilmişdir və antitümör təsirləri olduğu sənədləşdirilmişdir8.
Ginsengin aktiv faktoru jenşen ekstraktlarının keyfiyyətini qiymətləndirmək üçün kompozit marker kimi istifadə olunan ginsenoziddir.Xam jenşen ekstraktlarının kəmiyyət təhlili adətən RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 və Rc9,10 daxil olmaqla bir neçə ginsenosidlərin istifadəsini nəzərdə tutur.Ginsenosidlərin çox zəif ağızdan bioavailability11 səbəbiylə klinik istifadəsi azdır.Bu zəif bioavailability mexanizmi aydın olmasa da, səbəb P-qlikoproteinin (P-gp)12 səbəb olduğu ginsenosidlərin axması ola bilər.P-gp, hüceyrədaxili maddələri xarici mühitə buraxmaq üçün ATP hidrolizinin enerjisindən istifadə edən ATP bağlayan kaset daşıyıcı super ailəsində ən vacib axıdıcı daşıyıcılardan biridir.P-gp daşıyıcıları adətən bağırsaq, böyrək, qaraciyər və qan-beyin baryerində geniş yayılmışdır13.P-gp bağırsaqda sorulmada kritik rol oynayır və P-gp-nin inhibəsi bəzi xərçəng əleyhinə dərmanların ağızdan sorulmasını və mövcudluğunu artırır12,14.Daha əvvəl ədəbiyyatda istifadə edilən inhibitorlara misal olaraq verapamil və siklosporin A15 daxildir.Bu iş Çin və Koreyadan gələn müxtəlif qırmızı jenşen ekstraktlarının bədxassəli şişlərə təsir qabiliyyətini qiymətləndirmək üçün B(a)P ilə bağlı ağciyər xərçəngini öyrənmək üçün siçan sisteminin yaradılmasını nəzərdə tutur.Ekstraktlar, kanserogenezə təsir göstərə bilən spesifik ginsenosidləri müəyyən etmək üçün fərdi olaraq təhlil edilmişdir.Verapamil daha sonra P-gp-ni hədəfləmək və xərçəngə qarşı mübarizə aparan ginsenosidlərin oral bioavailability və terapevtik effektivliyini artırmaq üçün istifadə edilmişdir.
Ginseng saponinlərinin kanserogenezdə terapevtik təsir göstərdiyi mexanizm aydın deyil.Tədqiqatlar göstərdi ki, müxtəlif ginsenosidlər oksidləşdirici stressi azaltmaqla və II faza detoksifikasiya fermentlərini aktivləşdirməklə kanserogenlərin yaratdığı DNT zədəsini azalda bilər və bununla da hüceyrə zədələnməsinin qarşısını alır.Qlutatyon S-transferaza (GST) kanserogenlərin səbəb olduğu DNT zədəsini azaltmaq üçün tələb olunan tipik bir faza II fermentdir17.Nüvə eritroid 2 ilə əlaqəli faktor 2 (Nrf2) redoks homeostazını tənzimləyən və II faza fermentlərinin və sitoprotektiv antioksidan reaksiyaların ifadəsini aktivləşdirən mühüm transkripsiya faktorudur18.Tədqiqatımız həmçinin müəyyən edilmiş ginsenosidlərin B(a)P-induksiya etdiyi sitotoksikliyin və BPDE-DNT əlavələrinin əmələ gəlməsinin azaldılmasına, eləcə də normal ağciyər hüceyrələrində Nrf2 yolunu modulyasiya edərək II faza fermentlərinin induksiyasına təsirini araşdırdı.
B(a)P-induksiya etdiyi xərçəngin siçan modelinin yaradılması əvvəlki işlərə uyğundur5.Şəkil 1A B(a)P, su (nəzarət), Çin qırmızı jenşen ekstraktı (CRG), Koreya qırmızı jenşen ekstraktı A (KRGA) və Koreya qırmızısı ilə induksiya edilən siçan xərçəngi modelinin 20 həftəlik müalicəsinin eksperimental dizaynını göstərir. jenşen.B ekstraktı (KRGB) və Koreya Qırmızı Ginseng Ekstraktı C (KRGC).20 həftəlik qırmızı jenşen müalicəsindən sonra siçanlar CO2 asfiksiyası ilə qurban edildi.Şəkil 1B müxtəlif növ qırmızı jenşen ilə müalicə olunan heyvanlarda makroskopik ağciyər şişlərini, Şəkil 1C isə şiş nümunəsinin təmsilçi işıq mikroqrafını göstərir.KRGB ilə müalicə olunan heyvanların şiş yükü (1,5 ± 0,35) Şəkil 1D-də göstərildiyi kimi, nəzarət heyvanlarından (0,82 ± 0,2, P <0,05) aşağı idi.Şiş yükünün inhibəsinin orta dərəcəsi 45% idi.Test edilmiş digər qırmızı jenşen ekstraktları şiş yükündə belə əhəmiyyətli dəyişikliklər göstərməmişdir (P > 0.05).20 həftəlik qırmızı jenşen müalicəsi zamanı siçan modelində aşkar yan təsirlər, o cümlədən bədən çəkisində dəyişiklik (məlumatlar göstərilmir) və qaraciyər və ya böyrəklərdə toksiklik müşahidə olunmayıb (Şəkil 1E,F).
Qırmızı jenşen ekstraktı A/J siçanlarında ağciyər şişinin inkişafını müalicə edir.(A) Eksperimental dizayn.(B) Siçan modelində böyük ağciyər şişləri.Şişlər oxlarla göstərilir.a: Çin qırmızı jenşen qrupu.b: Koreya qırmızı jenşeninin A qrupu.c: Koreya qırmızı jenşen qrupu B. d: Koreya qırmızı jenşen qrupu C. d: Nəzarət qrupu.(C) Ağciyər şişini göstərən işıq mikroqrafı.Böyütmə: 100. b: 400. (D) Qırmızı jenşen ekstraktı qrupunda şiş yükü.(E) Qaraciyər fermentinin ALT-nin plazma səviyyəsi.(F) Böyrək fermentinin plazma səviyyələri Cr.Məlumatlar orta ± standart sapma kimi ifadə edilir.*P <0,05.
Bu tədqiqatda müəyyən edilmiş qırmızı jenşen ekstraktları aşağıdakı jensenozidlərin miqdarını təyin etmək üçün ultra-performanslı maye xromatoqrafiya tandem kütlə spektrometriyası (UPLC-MS/MS) ilə təhlil edilmişdir: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 və Rg5.Analitləri ölçmək üçün istifadə edilən UPLC və MS şərtləri əvvəlki hesabatda təsvir edilmişdir19.Dörd qırmızı jenşen ekstraktının UPLC-MS/MS xromatoqramları Şəkil 2A-da göstərilmişdir.CRG-də ən yüksək ümumi ginsenoside məzmunu (590.27 ± 41.28 μmol/L) ilə ümumi ginsenosid tərkibində əhəmiyyətli fərqlər var idi (Şəkil 2B).Fərdi ginsenosidləri qiymətləndirərkən (Şəkil 2C), KRGB digər ginsenosidlərlə müqayisədə ən yüksək G-Rg3 səviyyəsini göstərdi (G-Rg3s üçün 58,33 ± 3,81 μmol/L və G -Rg3r üçün 41,56 ± 2,88 μmol/L).qırmızı jenşen növü (P <0.001).G-Rg3 karbon 20-də hidroksil qrupunun mövqeyində fərqlənən G-Rg3r və G-Rg3s cüt stereoizomerləri kimi baş verir (şəkil 2D).Nəticələr göstərir ki, G-Rg3r və ya G-Rg3 B(a)P-induksiya etdiyi xərçəng siçan modelində mühüm antikanser potensialına malik ola bilər.
Müxtəlif qırmızı jenşen ekstraktlarında ginsenosidlərin tərkibi.(A) Dörd qırmızı jenşen ekstraktının UPLC-MS/MS xromatoqramları.(B) Göstərilən ekstraktlarda ümumi ginsenosid tərkibinin qiymətləndirilməsi.(C) Etiketli ekstraktlarda fərdi ginsenosidlərin aşkarlanması.(D) G-Rg3r və G-Rg3s ginsenozid stereoizomerlərinin strukturları.Məlumatlar üçqat təsbitlərin orta ± standart sapması kimi ifadə edilir.***P <0,001.
UPLC-MS/MS tədqiqatı 20 həftəlik müalicədən sonra bağırsaq və qan nümunələrində ginsenosidlərin miqdarının müəyyən edilməsini tələb etdi.KRGB ilə müalicə qanda yalnız 0,0063 ± 0,0005 μg/ml Rg5 olduğunu göstərdi.Qalan ginsenosidlər aşkar edilmədi, bu, oral qəbulun zəif bioavailability olduğunu və buna görə də bu ginsenosidlərə məruz qalmanın azaldığını göstərir.
Kolon adenokarsinoma hüceyrə xətti Caco-2 morfoloji və biokimyəvi cəhətdən insan bağırsaq epitel hüceyrələrinə bənzəyir və bağırsaq epiteliya baryeri vasitəsilə enterositlərin daşınmasını qiymətləndirmək üçün faydalı olduğunu nümayiş etdirir.Bu təhlil daha əvvəlki araşdırmaya əsaslanırdı 20 .Şəkillər 3A,B,C,D,E,F Caco-2 monolayer modelindən istifadə edərək G-Rg3r və G-Rg3-ün hüceyrələrarası daşınmasının təmsilçi şəkillərini göstərir.G-Rg3r və ya G-Rg3-ün Caco-2 monolayları arasında bazolateral tərəfdən apikal tərəfə (Pb-a) hüceyrələrarası daşınması apikal tərəfdən bazolateral tərəfə (Pa-b) nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə yüksək idi.G-Rg3r üçün orta Pa-b dəyəri 0,38 ± 0,06 idi ki, bu da 50 μmol/L verapamillə müalicədən sonra 0,73 ± 0,06-ya və 100 μmol/L verapamillə müalicədən sonra 1,14 ± 0,09-a yüksəldi (p < 0,001 və müvafiq olaraq Şəkil 2).3A).G-Rg3 üçün müşahidələr oxşar nümunəni izlədi (Şəkil 3B) və nəticələr verapamillə müalicənin G-Rg3r və G-Rg3-ün daşınmasını gücləndirdiyini göstərdi.Verapamillə müalicə də orta Pb-a və G-Rg3r və G-Rg3s axma nisbətlərinin əhəmiyyətli dərəcədə azalması ilə nəticələndi (Şəkil 3C,D,E,F), verapamillə müalicənin Caco-2 effluks hüceyrələrində ginsenosid tərkibini azaldığını göstərir..
Caco-2 monolaylarında G-Rg3-ün hüceyrələrarası daşınması və siçovulların perfuziya analizində bağırsaqdan udulması.(A) Caco-2 monolayerində G-Rg3r qrupunun Pa-b dəyəri.(B) Caco-2 monolayerində G-Rg3s qruplarının Pa-b dəyəri.(C) Caco-2 monolayerində G-Rg3r qrupunun Pb dəyəri.(D) Caco-2 monolayerində G-Rg3s qruplarının Pb dəyəri.(E) Caco-2 monolayerində G-Rg3r qruplarının məhsuldarlıq nisbəti.(F) Caco-2 monolayerində G-Rg3 qruplarının məhsuldarlıq nisbəti.(G) Siçovullarda perfuziya analizində G-Rg3r-nin bağırsaqdan udulma faizi.(H) Siçovullarda perfuziya analizində G-Rg3-ün bağırsaqdan udulma faizi.Verapamil əlavə edilmədən keçiricilik və udma müqayisə edildi.Məlumatlar beş müstəqil təcrübənin orta ± standart sapması kimi ifadə edilir.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Əvvəlki işlərə20 uyğun olaraq, verapamillə müalicədən sonra bağırsaqda G-Rg3 udulmasının artıb-artmadığını müəyyən etmək üçün siçovulların ortotopik bağırsaq perfuziyası aparılmışdır.3G,H rəqəmləri yuxarıda qeyd olunan dövrlərdə xərçəng modeli siçovullarında G-Rg3r və G-Rg3-ün bağırsaqdan udulmasının faizini qiymətləndirmək üçün reprezentativ perfuziya analizlərini göstərir.Təxminən 10% olan zəif G-Rg3r qəbulunun ilkin faizi 50 μM verapamillə müalicədən sonra 20%-dən çox, 100 μM verapamil ilə müalicədən sonra isə 25%-dən çox artmışdır.Eyni şəkildə, ilkin qəbulu 10% olan G-Rg3 də 50 μM verapamillə müalicədən sonra 20%-dən çox və 100 μM verapamil ilə müalicədən sonra təxminən 30% pik göstərdi, bu da P-gp-nin verapamil tərəfindən inhibə edilməsini gücləndirdiyini göstərir. ağciyər xərçənginin siçan modelində bağırsaqdan G-udma Rg3.
Yuxarıdakı metoda görə, B(a)P-nin yaratdığı xərçəng modeli siçanları Şəkil 4A-da göstərildiyi kimi təsadüfi olaraq altı qrupa bölündü.Nəzarət qrupu ilə müqayisədə G-Rg3 müalicə qrupunda əhəmiyyətli çəki itkisi və ya klinik toksiklik əlamətləri müşahidə edilməmişdir (məlumatlar göstərilmir).20 həftəlik müalicədən sonra hər siçanın ağciyərləri toplanıb.Şəkil 4B yuxarıda göstərilən müalicə qruplarında siçanlarda makroskopik ağciyər şişlərini göstərir və Şəkil 4C nümayəndəli şişin təmsilçi işıq mikroqrafını göstərir.Hər qrupdakı şiş yükü ilə bağlı (Şəkil 4D), G-Rg3r və G-Rg3s ilə müalicə olunan siçanlar üçün dəyərlər müvafiq olaraq 0,75 ± 0,29 mm3 və 0,81 ± 0,30 mm3, G Siçanları üçün isə dəyərlər -Rg3s ilə müvafiq olaraq 1,63 ±0,40 mm3 olmuşdur.nəzarət siçanları (p <0.001), G-Rg3 müalicəsinin siçanlarda şiş yükünü azaltdığını göstərir.Verapamilin tətbiqi bu azalmanı daha da artırdı: verapamil+ G-Rg3r siçanlarında dəyərlər 0,75 ± 0,29 mm3-dən 0,33 ± 0,25 mm3-ə (p < 0,01), verapamil+ üçün isə 0,81 ± 0,30 mm3,29-a qədər azaldı. mm3-də G. -Rg3s ilə müalicə olunan siçanlarda (p <0.05), verapamilin G-Rg3-ün şişlərin əmələ gəlməsinə inhibitor təsirini gücləndirə biləcəyini göstərir.Şiş yükü nəzarət qrupu ilə verapamil qrupu, G-Rg3r qrupu və G-Rg3s qrupu, verapamil+G-Rg3r qrupu və verapamil+G-Rg3s qrupu arasında əhəmiyyətli fərqlər göstərməmişdir.Üstəlik, qiymətləndirilmiş müalicələrlə əlaqəli əhəmiyyətli qaraciyər və ya böyrək toksikliyi yox idi (Şəkil 4E, F).
G-Rg3 müalicəsindən sonra şiş yükü və göstərilən qruplarda plazma və ya bağırsaq G-Rg3r və G-Rg3 səviyyələri.(A) Eksperimental dizayn.(B) Siçan modelində makroskopik şişlər.Şişlər oxlarla göstərilir.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r verapamil ilə birlikdə.d: G-Rg3 verapamil ilə birlikdə.d: Verapamil.e: nəzarət.(C) Böyütmə zamanı şişin optik mikroqrafiyası.Cavab: 100x.b: 400X.(D) A/J siçanlarında G-Rg3 + verapamil müalicəsinin şiş yükü üzərində təsiri.(E) Qaraciyər fermentinin ALT-nin plazma səviyyəsi.(F) Böyrək fermentinin plazma səviyyələri Cr.(G) Göstərilən qrupların G-Rg3r və ya G-Rg3-ün plazma səviyyələri.(H) Göstərilən qrupların bağırsaqlarında G-Rg3r və ya G-Rg3s səviyyələri.Məlumatlar üçqat təsbitlərin orta ± standart sapması kimi ifadə edilir.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
B(a)P-induksiya etdiyi xərçəng modeli siçanlarında G-Rg3 səviyyələri Metodlar bölməsində təsvir edilən metoda uyğun olaraq 20 həftəlik müalicə müddətindən sonra UPLC-MS/MS ilə qiymətləndirilmişdir.4G və H rəqəmləri müvafiq olaraq plazma və bağırsaq G-Rg3 səviyyələrini göstərir.Plazma G-Rg3r səviyyələri 0,44 ± 0,32 μmol/L idi və verapamilin eyni vaxtda qəbulu ilə 1,17 ± 0,47 μmol/L-ə qədər artdı (p < 0,001), bağırsaqda G-Rg3r səviyyələri isə 0,53 ± 0,08 µg/l idi.Verapamil ilə birləşdirildikdə, g 1,35 ± 0,13 μg / g (p <0,001) qədər artmışdır.G-Rg3 üçün nəticələr oxşar nümunəni izlədi, bu da verapamillə müalicənin A/J siçanlarında G-Rg3-ün oral bioavailability artdığını göstərir.
HEL hüceyrələrində B(a)P və G-Rg3-ün sitotoksikliyini qiymətləndirmək üçün hüceyrə canlılığının təhlilindən istifadə edilmişdir.HEL hüceyrələrində B(a)P-nin yaratdığı sitotoksiklik Şəkil 5A-da, G-Rg3r və G-Rg3-ün qeyri-toksik xüsusiyyətləri isə Şəkil 5A və 5B-də göstərilmişdir.5B, C. G-Rg3-ün sitoprotektiv təsirini qiymətləndirmək üçün B(a)P müxtəlif konsentrasiyalarda G-Rg3r və ya G-Rg3 ilə birlikdə hEL hüceyrələrinə yeridildi.Şəkil 5D-də göstərildiyi kimi, 5 μM, 10 μM və 20 μM konsentrasiyalarda G-Rg3r hüceyrə canlılığını müvafiq olaraq 58.3%, 79.3% və 77.3% bərpa etdi.Oxşar nəticələri G-Rg3s qrupunda da görmək olar.G-Rg3-lərin konsentrasiyası 5 µM, 10 µM və 20 µM olduqda, hüceyrə canlılığı müvafiq olaraq 58.3%, 72.7% və 76.7%-ə bərpa olundu (Şəkil 5E).).BPDE-DNT əlavələrinin mövcudluğu ELISA dəsti ilə ölçüldü.Nəticələrimiz göstərdi ki, B(a)P ilə müalicə olunan qrupda BPDE-DNT əlavə səviyyələri nəzarət qrupu ilə müqayisədə artmışdır, lakin G-Rg3 birgə müalicəsi ilə müqayisədə B(a)P qrupunda BPDE-DNT əlavə səviyyələri artmışdır. Müalicə olunan qrupda B, DNT əlavə səviyyələri əhəmiyyətli dərəcədə azaldı.Təkcə B(a)P ilə müalicənin nəticələri Şəkil 5F-də göstərilmişdir (G-Rg3r üçün 1,87 ± 0,33-ə qarşı 3,77 ± 0,42, G -Rg3s üçün 1,93 ± 0,48-ə qarşı 3,77 ± 0,42, p < 0,001).
G-Rg3 və B(a)P ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində hüceyrə canlılığı və BPDE-DNT əlavə əmələ gəlməsi.(A) B(a)P ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrinin canlılığı.(B) G-Rg3r ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrinin canlılığı.(C) G-Rg3 ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrinin canlılığı.(D) B(a)P və G-Rg3r ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrinin canlılığı.(E) B(a)P və G-Rg3 ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrinin canlılığı.(F) B(a)P və G-Rg3 ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində BPDE-DNT əlavəsinin səviyyələri.Məlumatlar üçqat təsbitlərin orta ± standart sapması kimi ifadə edilir.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
GST fermentinin ifadəsi 10 μM B(a)P və 10 μM G-Rg3r və ya G-Rg3s ilə birgə müalicədən sonra aşkar edilmişdir.Nəticələrimiz göstərdi ki, B(a)P GST ifadəsini (G-Rg3r qrupunda 59,7 ± 8,2% və G-Rg3s qrupunda 39 ± 4,5%) basdırdı və B(a)P G-Rg3r ilə əlaqəli idi. , və ya G-Rg3r və ya G-Rg3r ilə.G-Rg3s ilə birgə müalicə GST ifadəsini bərpa etdi.GST ifadəsi (G-Rg3r qrupunda 103,7 ± 15,5% və G-Rg3s qrupunda 110 ± 11,1%, müvafiq olaraq p <0,05 və p <0,001, Şəkil 6A, B və C).GST fəaliyyəti fəaliyyət analizi dəsti ilə qiymətləndirilib.Nəticələrimiz göstərdi ki, kombinasiyalı müalicə qrupunun yalnız B(a)P qrupu ilə müqayisədə daha yüksək GST aktivliyi var (G-Rg3r qrupunda 96,3 ± 6,6%-ə qarşı 35,7 ± 7,8%-ə qarşı G-Rg3r qrupunda 92,3 ± 6,5). ).G-Rg3s qrupunda % vs 35,7 ± 7,8%, p < 0,001, Şəkil 6D).
B(a)P və G-Rg3 ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində GST və Nrf2 ifadəsi.(A) Western blotting vasitəsilə GST ifadəsinin aşkarlanması.(B) B(a)P və G-Rg3r ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində GST-nin kəmiyyət ifadəsi.(C) B(a)P və G-Rg3s ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində GST-nin kəmiyyət ifadəsi.(D) B(a)P və G-Rg3 ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində GST fəaliyyəti.(E) Western blotting vasitəsilə Nrf2 ifadəsinin aşkarlanması.(F) B(a)P və G-Rg3r ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində Nrf2-nin kəmiyyət ifadəsi.(G) B(a)P və G-Rg3s ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində Nrf2-nin kəmiyyət ifadəsi.Məlumatlar üçqat təsbitlərin orta ± standart sapması kimi ifadə edilir.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B(a)P-induksiya etdiyi şişlərin G-Rg3 vasitəçiliyi ilə yatırılmasında iştirak edən yolları aydınlaşdırmaq üçün Nrf2 ifadəsi Western blotting ilə qiymətləndirildi.Şəkil 6E,F,G-də göstərildiyi kimi, nəzarət qrupu ilə müqayisədə, B(a)P müalicə qrupunda yalnız Nrf2 səviyyəsi azalmışdır;lakin B(a)P müalicə qrupu ilə müqayisədə PG-Rg3 qrupunda B(a) Nrf2 səviyyələri artmışdır (G-Rg3r üçün 106 ± 9.5% qarşı 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% üçün G-Rg3r qarşı G-Rg3s üçün 41 ± 9,8%, p <0,01).
Xüsusi kiçik müdaxilə edən RNT (siRNA) istifadə edərək Nrf2 ifadəsini sıxaraq Nrf2-nin profilaktik rolunu təsdiqlədik.Nrf2 yıxılması Western blotting ilə təsdiqləndi (Şəkil 7A,B).Şəkil 7C,D-də göstərildiyi kimi, hEL hüceyrələrinin B(a)P və G-Rg3 ilə birgə müalicəsi B(a)P ilə müalicə ilə müqayisədə BPDE-DNT əlavələrinin sayının (1,47 ± 0,21) azalması ilə nəticələndi. nəzarət siRNA qrupunda tək.) G-Rg3r 4.13 ± 0.49, G-Rg3s 1.8 ± 0.32 və 4.1 ± 0.57, p < 0.01).Bununla belə, G-Rg3-ün BPDE-DNT formalaşmasına inhibitor təsiri Nrf2-nin yıxılması ilə ləğv edildi.siNrf2 qrupunda B(a)P və G-Rg3 birgə müalicəsi və tək B(a)P müalicəsi (G-Rg3r üçün 3,0 ± 0,21 və 3,56 ± 0,32) arasında BPDE-DNT əlavələrinin formalaşmasında əhəmiyyətli fərq yox idi. ).G-Rg3r üçün 3.6-ya qarşı G-Rg3s üçün ±0.45-ə qarşı 4.0±0.37, p > 0.05).
Nrf2 yıxılmasının hEL hüceyrələrində BPDE-DNT əlavəsinin formalaşmasına təsiri.(A) Nrf2 yıxılması Western blotting tərəfindən təsdiqləndi.(B) Nrf2 zolaq intensivliyinin kəmiyyəti.(C) B(a)P və G-Rg3r ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində BPDE-DNT əlavə səviyyələrinə Nrf2 yıxılmasının təsiri.(D) B(a)P və G-Rg3 ilə müalicə olunan hEL hüceyrələrində BPDE-DNT əlavə səviyyələrinə Nrf2 yıxılmasının təsiri.Məlumatlar üçqat təsbitlərin orta ± standart sapması kimi ifadə edilir.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Bu tədqiqat müxtəlif qırmızı jenşen ekstraktlarının B(a)P-induksiya etdiyi ağciyər xərçənginin siçan modelinə profilaktik təsirini qiymətləndirdi və KRGB müalicəsi şiş yükünü əhəmiyyətli dərəcədə azaldıb.G-Rg3-ün bu jenşen ekstraktında ən yüksək tərkibə malik olduğunu nəzərə alaraq, bu ginsenosidin şişin yaranmasının qarşısını almaqda mühüm rolu öyrənilmişdir.Həm G-Rg3r, həm də G-Rg3 (G-Rg3-ün iki epimeri) B(a)P-induksiya etdiyi xərçəngin siçan modelində şiş yükünü əhəmiyyətli dərəcədə azaldıb.G-Rg3r və G-Rg3 şiş hüceyrələrinin apoptozunu təhrik etməklə21, şiş böyüməsini maneə törətməklə22, hüceyrə dövrünü23 dayandıraraq və angiogenezə24 təsir edərək antikanser təsir göstərir.G-Rg3-ün hüceyrə metastazını inhibə etdiyi25 göstərilmişdir və G-Rg3-ün kemoterapi və radioterapiyanın təsirini artırmaq qabiliyyəti sənədləşdirilmişdir26,27.Poon və digərləri göstərdilər ki, G-Rg3 müalicəsi B(a)P28-in genotoksik təsirlərini azalda bilər.Bu tədqiqat ətraf mühitin kanserogen molekullarını hədəfləmək və xərçəngin qarşısını almaqda G-Rg3-ün terapevtik potensialını nümayiş etdirir.
Onların yaxşı profilaktik potensialına baxmayaraq, ginsenosidlərin zəif oral bioavailability bu molekulların klinik istifadəsi üçün problem yaradır.Siçovullarda ginsenosidlərin oral tətbiqinin farmakokinetik təhlili göstərdi ki, onun bioavailability hələ də 5%-dən azdır29.Bu testlər göstərdi ki, 20 həftəlik müalicə müddətindən sonra yalnız qanda Rg5 səviyyəsi azalıb.Zəif bioavailliyin əsas mexanizmi hələ də aydınlaşdırılmasa da, P-gp-nin ginsenosidlərin efluksunda iştirak etdiyi düşünülür.Bu iş ilk dəfə P-gp-bloker olan verapamilin qəbulunun G-Rg3r və G-Rg3-lərin oral bioavailability artırdığını nümayiş etdirdi.Beləliklə, bu tapıntı onu göstərir ki, G-Rg3r və G-Rg3s onun axmasını tənzimləmək üçün P-gp-nin substratı kimi çıxış edir.
Bu iş göstərir ki, verapamil ilə kombinasiya müalicəsi ağciyər xərçənginin siçan modelində G-Rg3-ün oral bioavailability artırır.Bu tapıntı P-gp blokadası zamanı G-Rg3-ün bağırsaq vasitəsilə transcellular daşınmasının artması ilə dəstəklənir və bununla da onun udulmasını artırır.Caco2 hüceyrələrində aparılan təhlillər göstərdi ki, verapamillə müalicə membran keçiriciliyini yaxşılaşdırarkən G-Rg3r və G-Rg3-lərin axmasını azaldır.Yang et al tərəfindən bir araşdırma.Tədqiqatlar göstərdi ki, siklosporin A (digər P-gp blokatoru) ilə müalicə ginsenosid Rh2-nin bioavailability 1%20-dən 30%-dən çox artır.Ginsenosides birləşmələri K və Rg1 də oxşar nəticələr göstərdi30,31.Verapamil və siklosporin A birlikdə tətbiq edildikdə, Caco-2 hüceyrələrində K birləşməsinin axması 26,6-dan 3-ə qədər əhəmiyyətli dərəcədə azaldı, onun hüceyrədaxili səviyyəsi isə 40 dəfə artdı30.Verapamilin iştirakı ilə siçovulların ağciyər epitel hüceyrələrində Rg1 səviyyələri artdı, bu da Meng et al.31 tərəfindən göstərildiyi kimi ginsenosid axınında P-gp-nin rolunu göstərir.Bununla belə, verapamil bəzi ginsenosidlərin (məsələn, Rg1, F1, Rh1 və Re kimi) axmasına eyni təsir göstərməmişdir ki, bu da onların Liang və digərlərinin göstərdiyi kimi P-gp substratlarından təsirlənmədiyini göstərir.32.Bu müşahidə digər daşıyıcıların və alternativ ginsenosid strukturlarının cəlb edilməsi ilə bağlı ola bilər.
G-Rg3-ün xərçəngə qarşı profilaktik təsir mexanizmi aydın deyil.Əvvəlki tədqiqatlar göstərdi ki, G-Rg3 oksidləşdirici stressi və iltihabı azaltmaqla DNT zədələnməsinin və apoptozun qarşısını alır16,33 ki, bu da B(a)P-nin induksiya etdiyi şişlərin yaranmasının qarşısının alınması üçün əsas mexanizm ola bilər.Bəzi hesabatlar göstərir ki, B(a)P tərəfindən törədilən genotoksiklik BPDE-DNA34 yaratmaq üçün II faza fermentlərini modulyasiya etməklə azalda bilər.GST, GSH-nin BPDE-yə bağlanmasını təşviq edərək, B(a)P35 tərəfindən törədilən DNT zədələnməsini azaldan BPDE-DNT əlavələrinin əmələ gəlməsini maneə törədən tipik bir II faza fermentidir.Nəticələrimiz göstərir ki, G-Rg3 müalicəsi B(a)P-nin səbəb olduğu sitotoksikliyi və hEL hüceyrələrində BPDE-DNT əlavələrinin əmələ gəlməsini azaldır və in vitro GST ifadəsini və fəaliyyətini bərpa edir.Bununla belə, bu təsirlər Nrf2 olmadıqda yox idi, bu da G-Rg3-ün Nrf2 yolu ilə sitoprotektiv təsirləri induksiya etdiyini göstərir.Nrf2 ksenobiotiklərin təmizlənməsini təşviq edən II faza detoksifikasiya fermentləri üçün əsas transkripsiya faktorudur36.Nrf2 yolunun aktivləşdirilməsi sitoproteksiyaya səbəb olur və toxuma zədələnməsini azaldır37.Bundan əlavə, bir neçə hesabat Nrf2-nin kanserogenezdə şiş bastırıcı rolunu dəstəkləmişdir38.Tədqiqatımız göstərir ki, Nrf2 yolunun G-Rg3 tərəfindən induksiyası, II faza fermentlərini aktivləşdirməklə B(a)P-nin detoksifikasiyasına səbəb olmaqla B(a)P-induksiya etdiyi genotoksisitedə mühüm tənzimləyici rol oynayır və bununla da şişin yaranması prosesini maneə törədir.
Bizim işimiz ginsenosid G-Rg3-ün mühüm iştirakı ilə siçanlarda B(a)P-induksiya etdiyi ağciyər xərçənginin qarşısının alınmasında qırmızı jenşen potensialını ortaya qoyur.Bu molekulun zəif oral bioavailability onun klinik tətbiqinə mane olur.Bununla belə, bu tədqiqat ilk dəfə olaraq göstərir ki, G-Rg3 P-gp-nin substratıdır və P-gp inhibitorunun tətbiqi G-Rg3-ün in vitro və in vivo bioavailability artırır.G-Rg3 Nrf2 yolunu tənzimləyərək B(a)P-nin yaratdığı sitotoksikliyi azaldır ki, bu da onun profilaktik funksiyası üçün potensial mexanizm ola bilər.Tədqiqatımız ağciyər xərçənginin qarşısının alınması və müalicəsi üçün ginsenoside G-Rg3 potensialını təsdiqləyir.
Altı həftəlik dişi A/J siçanları (20 ± 1 q) və 7 həftəlik erkək Wistar siçovulları (250 ± 20 q) Cekson Laboratoriyasından (Bar Harbor, ABŞ) və Uhan Zoologiya İnstitutundan əldə edilib.Universitet (Wuhan, Çin).Çin Tipi Mədəniyyət Toplama Mərkəzi (Wuhan, Çin) bizi Caco-2 və hEL hüceyrələri ilə təmin etdi.Sigma-Aldrich (Sent-Luis, ABŞ) B(a)P və trikaprin mənbəyidir.Təmizlənmiş ginsenosidlər G-Rg3r və G-Rg3s, dimetil sulfoksid (DMSO), CellTiter-96 proliferasiya testi dəsti (MTS), verapamil, minimal əsas mühit (MEM) və fetal sığır serumu (FBS) Chengdu Must Bio-Technology şirkətindən alınıb. .Co., Ltd.(Çenqdu, Çin).QIAamp DNT mini dəsti və BPDE-DNT əlavə ELISA dəsti Qiagen (Stanford, CA, ABŞ) və Cell Biolabs (San Dieqo, CA, ABŞ) şirkətlərindən alınıb.GST fəaliyyətinin təhlili dəsti və ümumi protein analiz dəsti (standart BCA üsulu) Solarbio-dan (Pekin, Çin) alınıb.Bütün qırmızı jenşen ekstraktları Mingyu Laboratoriyası 7-də saxlanılır. Honq-Konq Baptist Universiteti (Honq-Konq, Çin) və Koreya Xərçəng Mərkəzi (Seul, Koreya) CRG ekstraktı və müxtəlif Koreya mənşəli müxtəlif qırmızı jenşen ekstraktlarının (KRGA, KRGB daxil olmaqla) kommersiya mənbələridir. və KRGC).Qırmızı jenşen 6 yaşlı təzə jenşen kökündən hazırlanır.Qırmızı jenşen ekstraktı, jenşen üç dəfə su ilə yuyularaq, sonra sulu ekstraktın konsentrasiyası və nəhayət, aşağı temperaturda qurudularaq jenşen ekstraktı tozu əldə edilir.Antikorlar (anti-Nrf2, anti-GST və β-aktin), horseradish peroksidaza ilə konjugasiya edilmiş anti-dovşan immunoqlobulini G (IgG), transfeksiya reagenti, nəzarət siRNA və Nrf2 siRNA Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) şirkətindən alınıb. .), ABŞ).
Caco2 və hEL hüceyrələri 5% CO2 nəmləndirilmiş atmosferdə 37 °C-də 10% FBS olan MEM ilə 100 mm2 hüceyrə mədəniyyəti qablarında becərildi.Müalicə şərtlərinin təsirini müəyyən etmək üçün hEL hüceyrələri 48 saat ərzində MEM-də müxtəlif konsentrasiyalarda B(a)P və G-Rg3 ilə inkubasiya edilmişdir.Hüceyrəsiz ekstraktlar hazırlamaq üçün hüceyrələr əlavə təhlil edilə və ya toplana bilər.
Bütün təcrübələr Huazhong Elm və Texnologiya Universitetinin Tongji Tibb Kollecinin Eksperimental Heyvan Etikası Komitəsi tərəfindən təsdiq edilmişdir (Təsdiq No. 2019; Qeydiyyat No. 4587TH).Bütün eksperimentlər müvafiq təlimat və qaydalara uyğun aparılıb və tədqiqat Heyvanlar üzrə Tədqiqat: In Vivo Təcrübələrin Hesabatı (ARRIVE) təlimatlarına uyğun aparılıb.Səkkiz həftəlik A/J siçanlarına ilk olaraq trikaprin məhlulunda (100 mq/kq, 0,2 ml) B(a)P intraperitoneal yeridilmişdir.Bir həftə sonra siçanlar təsadüfi olaraq nəzarət qruplarına və müxtəlif müalicə qruplarına, hər qrupda 15 siçana bölündü və gündə bir dəfə gavaj edildi.20 həftəlik müalicədən sonra heyvanlar CO2 asfiksiyası ilə qurban edildi.Ağciyərlər toplandı və 24 saat sabitləndi.Səthi şişlərin sayı və fərdi şiş ölçüləri hər bir ağciyər üçün parçalayıcı mikroskop altında ölçüldü.Şiş həcminin təxminləri (V) aşağıdakı ifadədən istifadə edərək hesablanmışdır: V (mm3) = 4/3πr3, burada r şiş diametridir.Siçanların ağciyərlərindəki bütün şiş həcmlərinin xalis cəmi şişin ümumi həcmini, hər qrupda orta ümumi şiş həcmi isə şiş yükünü təmsil edirdi.Tam qan və bağırsaq nümunələri toplanmış və UPLC-MS/MS təyini üçün -80°C-də saxlanılmışdır.Serum toplandı və qaraciyər və böyrək funksiyasını qiymətləndirmək üçün alanin aminotransferaza (ALT) və serum kreatinin (Cr) səviyyələrini təhlil etmək üçün avtomatlaşdırılmış kimya analizatorundan istifadə edildi.
Toplanmış nümunələr yuxarıda göstərildiyi kimi soyuducu anbardan çıxarılır, əridilir, çəkilir və borulara yerləşdirilir.Buna 0,8 ml metanol məhlulunda 0,5 μM phlorizin (daxili standart) əlavə edildi.Sonra toxuma Tissue-Tearor istifadə edərək homojenləşdirildi və homogenat sonradan 1,5 ml mikrosentrifuqa borusuna köçürüldü.Qarışıq 15 dəqiqə 15500 rpm-də sentrifuqa edilmişdir.1,0 ml supernatant çıxarıldıqdan sonra azotla qurudulur.Bərpa üçün iki yüz mikrolitr metanol istifadə edilmişdir.Qan bir xətt üzrə toplanır və işlənir və bütün ölçmələr üçün istinad kimi istifadə olunur.
24 quyu Transwell plitələri verapamilin əlavə edilməsi ilə G-Rg3 nəqlinin potensial gücləndirilməsini qiymətləndirmək üçün quyu başına 1,0 × 105 Caco-2 hüceyrəsi ilə səpildi.3 həftəlik mədəniyyətdən sonra hüceyrələr HBSS ilə yuyuldu və 37 ° C-də əvvəlcədən inkubasiya edildi.400 μL 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s və ya 50 və ya 100 μM verapamil ilə qarışıq) monolayerin bazolateral və ya apikal tərəfinə yeridildi və digərinə 600 μL HBSS məhlulu əlavə edildi. yan.Təyin olunmuş vaxtlarda (0, 15, 30, 45, 60, 90 və 120 dəqiqə) 100 µl mədəniyyət mühiti toplayın və bu həcmi artırmaq üçün 100 µl HBSS əlavə edin.Nümunələr UPLC-MS/MS tərəfindən aşkarlanana qədər -4 °C-də saxlanıldı.Papp = dQ/(dT × A × C0) ifadəsi görünən bir istiqamətli apikal və bazolateral keçiriciliyin kəmiyyətini müəyyən etmək üçün istifadə olunur və əksinə (müvafiq olaraq Pa-b və Pb-a);dQ/dT konsentrasiyanın dəyişməsidir, A (0,6 sm2) monolayın səth sahəsi, C0 isə ilkin donor konsentrasiyasıdır.Efflux nisbəti Pb-a/Pa-b kimi hesablanır ki, bu da tədqiq olunan dərmanın axma sürətini əks etdirir.
Erkək Wistar siçovulları 24 saat ac qaldılar, yalnız su içdilər və 3,5% pentobarbital məhlulunun venadaxili yeridilməsi ilə anesteziya etdilər.İntubasiya edilmiş silikon boruda onikibarmaq bağırsağın ucu giriş, ileumun ucu isə çıxışdır.0,1 ml/dəq axın sürətində izotonik HBSS-də 10 µM G-Rg3r və ya G-Rg3s ilə girişi vurmaq üçün peristaltik nasosdan istifadə edin.Verapamilin təsiri 10 μM G-Rg3r və ya G-Rg3-lərə 50 μM və ya 100 μM birləşmənin əlavə edilməsi ilə qiymətləndirildi.UPLC-MS/MS perfuziya başlandıqdan sonra 60, 90, 120 və 150 dəqiqə vaxt nöqtələrində toplanmış perfuziya ekstraktları üzərində aparılmışdır.Absorbsiya faizi düsturla müəyyən edilir % absorbsiya = (1 – Cout/Cin) × 100%;çıxışda və girişdə G-Rg3 konsentrasiyası müvafiq olaraq Cout və Cin ilə ifadə edilir.
hEL hüceyrələri quyu başına 1 × 104 hüceyrə sıxlığında 96 quyu boşqablarına əkilmiş və B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) və ya DMSO-da həll edilmiş G-Rg3 ilə müalicə edilmişdir. .Dərmanlar 48 saat ərzində müxtəlif konsentrasiyalarda (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) mədəniyyət mühiti ilə seyreltildi.Ticarətdə mövcud olan MTS analiz dəstindən istifadə edərək, hüceyrələr standart protokola məruz qaldı və sonra 490 nm-də mikroplata oxuyucusu ilə ölçüldü.B(a)P (10 μM) və G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) ilə birgə müalicə olunan qrupların hüceyrə canlılıq səviyyəsi yuxarıda göstərilən üsula uyğun olaraq qiymətləndirilmiş və müalicə olunmamış qrupla müqayisə edilmişdir.
hEL hüceyrələri 1 × 105 hüceyrə / quyu sıxlığında 6 quyu boşqablarına əkilmiş və 10 μM G-Rg3 varlığında və ya olmamasında 10 μMB(a)P ilə müalicə edilmişdir.48 saatlıq müalicədən sonra istehsalçının protokoluna uyğun olaraq QIAamp DNA Mini Kitindən istifadə edərək hEL hüceyrələrindən DNT çıxarıldı.BPDE-DNT əlavələrinin formalaşması BPDE-DNT əlavə ELISA dəsti istifadə edilməklə aşkar edilmişdir.BPDE-DNT əlavəsinin nisbi səviyyələri 450 nm-də absorbansın ölçülməsi ilə mikroplastinka oxuyucusu ilə ölçüldü.
hEL hüceyrələri quyu başına 1 × 104 hüceyrə sıxlığında 96 quyu boşqablarına əkilmiş və 48 saat ərzində 10 μM G-Rg3 olmadıqda və ya mövcud olduqda 10 μMB (a) P ilə müalicə edilmişdir.GST fəaliyyəti istehsalçının protokoluna uyğun olaraq kommersiya GST fəaliyyətinin təhlili dəsti ilə ölçüldü.Nisbi GST aktivasiyası mikroplata oxuyucusu istifadə edərək 450 nm-də absorbansla ölçüldü.
hEL hüceyrələri buz kimi soyuq PBS ilə yuyuldu və sonra proteaz inhibitorları və fosfataza inhibitorlarını ehtiva edən radioimmunopresipitasiya təhlili tamponundan istifadə edərək parçalandı.Ümumi zülal analiz dəstindən istifadə edərək zülalın miqdarının təyinindən sonra hər bir nümunədə 30 μg protein 12% SDS-PAGE ilə ayrıldı və elektroforez vasitəsilə PVDF membranına köçürüldü.Membranlar 5% yağsız südlə bağlandı və 4°C-də gecə ərzində ilkin antikorlarla inkubasiya edildi.Horseradish peroksidaza ilə birləşmiş ikincili antikorlarla inkubasiya edildikdən sonra, bağlayıcı siqnalı vizuallaşdırmaq üçün gücləndirilmiş kimilüminesans reagentləri əlavə edildi.Hər bir zülal zolağının intensivliyi ImageJ proqramı ilə ölçüldü.
Bütün məlumatları təhlil etmək üçün GraphPad Prism 7.0 proqram təminatından istifadə edilib, orta ± standart sapma kimi ifadə olunub.Müalicə qrupları arasında variasiya Student's t testindən və ya birtərəfli dispersiya təhlilindən istifadə edilməklə qiymətləndirilmişdir, P dəyəri <0,05 statistik əhəmiyyəti göstərir.
Bu araşdırma zamanı əldə edilən və ya təhlil edilən bütün məlumatlar dərc olunmuş məqaləyə və əlavə məlumat fayllarına daxil edilmişdir.
Torre, LA, Siegel, RL və Jemal, A. Ağciyər xərçəngi statistikası.zərf.İstifadə müddəti bitdi.dərman.biologiya.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Tütün kanserogenləri, onların biomarkerləri və tütünün səbəb olduğu xərçəng.Nat.Xərçəng kapellanı.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH və Venitt, S. Tütün tüstüsünə məruz qalma nəticəsində insan toxumalarında DNT və protein əlavələri.beynəlmiləllik.J. Xərçəng.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA və Yu M. Houttuynia cordata və silibinin A/J siçanlarında benzo(a)pirenlə induksiya olunan ağciyər şişinin yaranmasına təsiri.Xərçəng 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et al.Çin dərman materiallarından təcrid olunmuş xərçəng əleyhinə təbii məhsul.çənə.dərman.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Polifenon E, qırmızı jenşen və rapamisinin A / J siçanlarında benzo (a) piren səbəb olduğu ağciyər şişi üzərində effektivliyi.Xərçəng 8, 52-58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS və Yuan, KS Red, xərçəng müalicəsində iştirak edir.çənə.J. Nutt.dərman.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS və Gao, L. Amerika jenşeninin köklərində və yarpaqlarında Ginsenosides.J. Aqric.Qida kimyası.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA və Yuan KS jenşen farmakologiyası: bir çox komponent və bir çox təsir.biokimya.farmakologiya.58, 1685–1693 (1999).
Göndərmə vaxtı: 17 sentyabr 2023-cü il