Дзякуй за наведванне Nature.com.Версія браўзера, якой вы карыстаецеся, мае абмежаваную падтрымку CSS.Для дасягнення найлепшых вынікаў мы рэкамендуем выкарыстоўваць больш новую версію вашага браўзера (або адключыць рэжым сумяшчальнасці ў Internet Explorer).Тым часам, каб забяспечыць пастаянную падтрымку, мы паказваем сайт без стылізацыі і JavaScript.
Чырвоны жэньшэнь выкарыстоўваецца ў традыцыйнай азіяцкай медыцыне на працягу сотняў гадоў.У гэтым даследаванні мы ацанілі здольнасць чатырох відаў чырвонага жэньшэня (кітайскага чырвонага жэньшэня, карэйскага чырвонага жэньшэня A, карэйскага чырвонага жэньшэня B і карэйскага чырвонага жэньшэня C), якія вырошчваюцца ў розных рэгіёнах, стрымліваць адукацыю і рост канцэрагенных лёгкіх. пухліны.Тэст на бенза (а) пірэн (B (a) P) быў праведзены на мышах A/J, і карэйскі чырвоны жэньшэнь B быў прызнаны найбольш эфектыўным у зніжэнні нагрузкі на пухліны сярод чатырох гатункаў чырвонага жэньшэня.Акрамя таго, мы прааналізавалі ўтрыманне розных гинзенозидов (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 і Rg5) у чатырох экстрактах чырвонага жэньшэня і выявілі, што карэйскі чырвоны жэньшэнь B меў самыя высокія ўзроўні гинзенозида Rg3 (G-Rg3), мяркуючы, што G-Rg3 можа гуляць важную ролю ў яго тэрапеўтычнай эфектыўнасці.Гэтая праца паказвае, што G-Rg3 мае адносна нізкую біодоступность.Аднак, калі G-Rg3 уводзілі разам з інгібітарам P-gp верапамілам, адток G-Rg3 у клеткі Сасо-2 зніжаўся, хуткасць кішачнага ўсмоктвання G-Rg3 павялічвалася ў мадэлі пацукоў, і G-Rg3 быў павялічаны.У клетках Caco-2 зніжаецца адток Rg3, зніжаецца ўзровень канцэнтрацыі Rg3.G-Rg3 павялічваецца ў кішачніку і плазме, і яго здольнасць прадухіляць пухліны таксама ўзмацняецца ў пацучынай мадэлі B(a)P-індукаванага опухолеобразования.Мы таксама выявілі, што G-Rg3 зніжае цытатаксічнасць, выкліканую B(a)P, і адукацыю аддукта ДНК у клетках лёгкіх чалавека, а таксама аднаўляе экспрэсію і актыўнасць ферментаў фазы II праз шлях Nrf2, што можа быць звязана з магчымым механізмам дзеяння інгібіравання G -Rg3..Пра ўзнікненне пухлін лёгкіх.Наша даследаванне дэманструе патэнцыйна важную ролю G-Rg3 у нацэльванні на пухліны лёгкіх у мышыных мадэлях.Пероральная біодоступность гэтага гинзенозида павышаецца за кошт нацэльвання на Р-глікапратэін, што дазваляе малекуле аказваць супрацьракавы эфект.
Самым распаўсюджаным тыпам рака лёгкага з'яўляецца немелкоклеточный рак лёгкага (НМРЛ), які з'яўляецца адной з асноўных прычын смерці ад раку ў Кітаі і Паўночнай Амерыцы1,2.Асноўным фактарам, які павялічвае рызыку развіцця немелкоклеточного рака лёгкага, з'яўляецца курэнне.Цыгарэтны дым змяшчае больш за 60 канцэрагенаў, у тым ліку бенза(а)пірэн (B(a)P), нітразаміны і радыеактыўныя ізатопы, атрыманыя ў выніку распаду радону.3 Поліцыклічныя араматычныя вуглевадароды B(a)P з'яўляюцца асноўнай прычынай таксічнасці цыгарэт дым.Пры ўздзеянні B(a)P цытахром P450 ператварае яго ў B(a)P-7,8-дыгідрадыёл-9,10-эпаксід (BPDE), які ўступае ў рэакцыю з ДНК, утвараючы аддукт BPDE-ДНК 4. Акрамя таго, гэтыя адукты індукуюць опухолеобразование лёгкіх у мышэй са стадыяй пухліны і гістапаталогіі, падобнай на пухліны лёгкіх чалавека5.Гэтая асаблівасць робіць мадэль B(a)P-індукаванага рака лёгкіх прыдатнай сістэмай для ацэнкі злучэнняў з магчымымі супрацьракавымі ўласцівасцямі.
Адной з магчымых стратэгій прадухілення развіцця рака лёгкага ў групах высокай рызыкі, асабліва ў курцоў, з'яўляецца выкарыстанне химиопревентивных сродкаў для падаўлення развіцця интраэпителиальных неопластических паражэнняў і тым самым прадухілення іх наступнага пераходу ў злаякасныя.Даследаванні на жывёл паказваюць, што розныя хіміяпрэпараты эфектыўныя6.У нашай папярэдняй справаздачы7 падкрэслівалася добрае прафілактычнае ўздзеянне чырвонага жэньшэня на рак лёгкіх.Гэтая трава на працягу многіх стагоддзяў выкарыстоўвалася ў традыцыйнай азіяцкай медыцыне для падаўжэння жыцця і здароўя, а таксама дакументальна пацверджана яе проціпухлінны эфект8.
Дзеючым фактарам жэньшэня з'яўляецца гинзенозид, які выкарыстоўваецца ў якасці кампазітнага маркера для ацэнкі якасці экстрактаў жэньшэня.Колькасны аналіз сырых экстрактаў жэньшэня звычайна ўключае ў сябе выкарыстанне некалькіх гинзенозидов, у тым ліку RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 і Rc9,10.Гинзенозиды маюць мала клінічнага прымянення з-за іх вельмі нізкай біялагічнай даступнасці пры пероральном прыёме11.Хоць механізм такой нізкай біодоступность не ясны, прычынай можа быць адток гинзенозидов, выкліканы P-глікапратэінам (P-gp)12.P-gp - адзін з найважнейшых эфлюксных транспарцёраў у суперсямействе касетных транспарцёраў, якія звязваюць АТФ, які выкарыстоўвае энергію гідролізу АТФ для вызвалення ўнутрыклеткавых рэчываў у знешняе асяроддзе.Транспарцёры P-gp звычайна шырока распаўсюджаны ў кішачніку, нырках, печані і гематоэнцефаліческій бар'еры13.P-gp гуляе важную ролю ў кішачным ўсмоктванні, і інгібіраванне P-gp павялічвае пероральное ўсмоктванне і даступнасць некаторых супрацьпухлінных прэпаратаў 12,14.Прыкладамі інгібітараў, якія раней выкарыстоўваліся ў літаратуры, з'яўляюцца верапаміл і цыкласпарын А15.Гэтая праца прадугледжвае стварэнне мышынай сістэмы для вывучэння B(a)P-індукаванага рака лёгкіх для ацэнкі здольнасці розных экстрактаў чырвонага жэньшэня з Кітая і Карэі ўплываць на злаякасныя пухліны.Экстракты былі індывідуальна прааналізаваны для вызначэння спецыфічных гинзенозидов, якія могуць уплываць на канцерогенез.Затым верапаміл быў выкарыстаны для нацэльвання на P-gp і паляпшэння пероральной біялагічнай даступнасці і тэрапеўтычнай эфектыўнасці гинзенозидов, нацэленых на рак.
Механізм, з дапамогай якога сапоніны жэньшэня аказваюць тэрапеўтычны эфект на канцерогенез, застаецца незразумелым.Даследаванні паказалі, што розныя гинзенозиды могуць паменшыць пашкоджанне ДНК, выкліканае канцэрагенамі, за кошт зніжэння акісляльнага стрэсу і актывацыі ферментаў детоксікаціі II фазы, тым самым прадухіляючы пашкоджанне клетак.Глутатион-S-трансфераза (GST) - гэта тыповы фермент фазы II, які неабходны для памяншэння пашкоджання ДНК, выкліканага канцерогенами17.Ядзерны эритроидный 2-звязаны фактар 2 (Nrf2) з'яўляецца важным фактарам транскрыпцыі, які рэгулюе акісляльна-аднаўленчы гамеастаз і актывізуе экспрэсію ферментаў II фазы і цитопротекторные антыаксідантныя responses18.У нашым даследаванні таксама вывучалася ўздзеянне ідэнтыфікаваных гинзенозидов на зніжэнне B(a)P-індукаванай цытатаксічнасці і адукацыю аддукта BPDE-ДНК, а таксама індукцыю ферментаў фазы II шляхам мадуляцыі шляху Nrf2 у нармальных клетках лёгкіх.
Стварэнне мышынай мадэлі B(a)P-індукаванага рака адпавядае папярэдняй працы5.На малюнку 1А паказаны эксперыментальны план 20-тыднёвага лячэння мышынай мадэлі рака, індукаванага B(a)P, вадой (кантроль), экстрактам кітайскага чырвонага жэньшэня (CRG), экстрактам карэйскага чырвонага жэньшэня A (KRGA) і карэйскага чырвонага жэньшэнь.Экстракт B (KRGB) і экстракт карэйскага чырвонага жэньшэня C (KRGC).Пасля 20 тыдняў лячэння чырвоным жэньшэнем мышэй забівалі ўдушшам CO2.На малюнку 1B паказаны макраскапічныя пухліны лёгкіх у жывёл, якія атрымлівалі розныя тыпы чырвонага жэньшэня, а на малюнку 1C паказаны рэпрэзентатыўны светлавы мікрафатаграфію ўзору пухліны.Як паказана на малюнку 1D, цяжар пухлін у жывёл, якія атрымлівалі KRGB (1,5 ± 0,35), быў ніжэй, чым у кантрольных жывёл (0,82 ± 0,2, P <0,05).Сярэдняя ступень тармажэння пухліннай нагрузкі склала 45%.Іншыя пратэставаныя экстракты чырвонага жэньшэня не паказалі такіх значных змяненняў у пухліннай нагрузцы (P> 0,05).Ніякіх відавочных пабочных эфектаў у мышынай мадэлі на працягу 20 тыдняў лячэння чырвоным жэньшэнем не назіралася, уключаючы адсутнасць змены масы цела (дадзеныя не паказаны) і адсутнасць таксічнасці печані або нырак (малюнак 1E,F).
Экстракт чырвонага жэньшэня лечыць развіццё пухліны лёгкіх у A/J мышэй.(A) Эксперыментальны дызайн.(B) Вялікія пухліны лёгкіх у мышынай мадэлі.Пухліны пазначаны стрэлкамі.a: Група кітайскага чырвонага жэньшэня.б: група А карэйскага чырвонага жэньшэня.c: група карэйскага чырвонага жэньшэня B. d: група карэйскага чырвонага жэньшэня C. d: група кантролю.(C) Светлавая мікрафатаграфія, якая паказвае пухліну лёгкага.Павелічэнне: 100. B: 400. (D) Нагрузка пухліны ў групе экстракта чырвонага жэньшэня.(E) Узровень пячоначнага фермента АЛТ у плазме.(F) Узровень нырачнага фермента Cr у плазме.Дадзеныя выяўляюцца як сярэдняе ± стандартнае адхіленне.*P <0,05.
Экстракты чырвонага жэньшэня, выяўленыя ў гэтым даследаванні, былі прааналізаваны з дапамогай тандэмнай мас-спектраметрыі звышпрадукцыйнай вадкаснай храматаграфіі (UPLC-MS/MS) для колькаснай ацэнкі наступных гінзензідаў: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 і Rg5.Умовы UPLC і MS, якія выкарыстоўваюцца для вымярэння аналізаваных рэчываў, былі апісаны ў папярэднім дакладзе19.UPLC-MS/MS храматаграмы чатырох экстрактаў чырвонага жэньшэня паказаны на малюнку 2A.Былі істотныя адрозненні ў агульным змесце гинзенозидов, з самым высокім агульным утрыманнем гинзенозидов ў CRG (590,27 ± 41,28 мкмоль/л) (малюнак 2B).Пры ацэнцы асобных гинзенозидов (малюнак 2C) KRGB паказаў самы высокі ўзровень G-Rg3 у параўнанні з іншымі гинзенозидами (58,33 ± 3,81 мкмоль/л для G-Rg3s і 41,56 ± 2,88 мкмоль/л для G -Rg3r).L).тып чырвонага жэньшэня (Р <0,001).G-Rg3 сустракаецца ў выглядзе пары стэрэаізамераў G-Rg3r і G-Rg3s, якія адрозніваюцца становішчам гідраксільнай групы пры вугляроды 20 (мал. 2D).Вынікі паказваюць, што G-Rg3r або G-Rg3 могуць мець важны супрацьракавы патэнцыял у мышынай мадэлі рака, выкліканага B(a)P.
Змест гинзенозидов ў розных экстрактах чырвонага жэньшэня.(A) UPLC-MS/MS храматаграмы чатырох экстрактаў чырвонага жэньшэня.(B) Ацэнка агульнага ўтрымання гинзенозидов ў названых экстрактах.(C) Выяўленне асобных гинзенозидов ў пазначаных экстрактах.(D) Структуры стереоизомеров гинзенозида G-Rg3r і G-Rg3s.Дадзеныя выяўляюцца як сярэдняе ± стандартнае адхіленне трохразовых вызначэнняў.***P <0,001.
Даследаванне UPLC-MS / MS патрабавала колькаснага вызначэння гинзенозидов ў кішачніку і пробах крыві пасля 20 тыдняў лячэння.Лячэнне КРГБ паказала наяўнасць у крыві толькі 0,0063 ± 0,0005 мкг/мл Rg5.Ніякіх астатніх гинзенозидов не выяўлена, што паказвае на дрэнную біодоступность пры пероральном прыёме і, такім чынам, на зніжэнне ўздзеяння гэтых гинзенозидов.
Лінія клетак аденокарциномы тоўстай кішкі Caco-2 марфалагічна і біяхімічна падобная на эпітэліяльныя клеткі кішачніка чалавека, дэманструючы яе карыснасць для ацэнкі транспарціроўкі энтэрацытаў праз кішачны эпітэліяльны бар'ер.Гэты аналіз быў заснаваны на больш раннім даследаванні 20 .На малюнках 3A, B, C, D, E, F паказаны рэпрэзентатыўныя выявы міжклеткавага транспарту G-Rg3r і G-Rg3 з выкарыстаннем аднаслаёвай мадэлі Caco-2.Міжклеткавы транспарт G-Rg3r або G-Rg3 праз монослои Caco-2 ад базолатерального да апікальнага боку (Pb-a) быў значна вышэй, чым ад апікальнага да базолатерального боку (Pa-b).Для G-Rg3r сярэдняе значэнне Pa-b было 0,38 ± 0,06, якое павялічылася да 0,73 ± 0,06 пасля лячэння 50 мкмоль / л верапаміл і да 1,14 ± 0,09 пасля лячэння 100 мкмоль / л верапаміл (р <0,01 і 0,001, адпаведна; малюнак 2).3A).Назіранні за G-Rg3 адбываліся па аналагічнай схеме (мал. 3B), і вынікі паказалі, што лячэнне верапамілам спрыяла транспарціроўцы G-Rg3r і G-Rg3.Лячэнне верапамілам таксама прывяло да значнага зніжэння сярэдніх каэфіцыентаў выцякання Pb-a і G-Rg3r і G-Rg3s (малюнак 3C, D, E, F), што паказвае на тое, што лячэнне верапамілам зніжае ўтрыманне гинзенозида ў клетках выцякання Caco-2..
Трансцеллюлярный транспарт G-Rg3 ў Caco-2 аднаслойных і кішачнай абсорбцыі ў аналізе перфузии пацукоў.(A) Значэнне Pa-b групы G-Rg3r у монослое Caco-2.(B) Pa-b значэнне G-Rg3s груп у монослое Caco-2.(C) Значэнне Pb групы G-Rg3r у монослое Caco-2.(D) Значэнне Pb груп G-Rg3s у монослое Caco-2.(E) Каэфіцыент выхаду G-Rg3r груп у монослое Caco-2.(F) Каэфіцыент выхаду груп G-Rg3 у монослое Caco-2.(G) Працэнт кішачнага паглынання G-Rg3r у аналізе перфузии ў пацукоў.(H) Працэнт кішачнага паглынання G-Rg3 у аналізе перфузии ў пацукоў.Пранікальнасць і ўсмоктванне параўноўвалі без дадання верапаміл.Дадзеныя выяўляюцца як сярэдняе ± стандартнае адхіленне пяці незалежных эксперыментаў.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
У адпаведнасці з больш ранняй працай20, артатопічнай кішачнай перфузіі пацукоў праводзілі, каб вызначыць, ці павялічваецца ўсмоктванне G-Rg3 у кішачніку пасля лячэння верапамілам.Малюнкі 3G, H паказваюць рэпрэзентатыўныя аналізы перфузіі для ацэнкі працэнта кішэчнага ўсмоктвання G-Rg3r і G-Rg3 у пацукоў на мадэлі рака на працягу вышэйзгаданых перыядаў часу.Першапачатковы адсотак слабага паглынання G-Rg3r прыкладна на 10% павялічыўся да больш чым 20% пасля лячэння 50 мкМ верапаміл і да больш чым 25% пасля лячэння 100 мкМ верапаміл.Сапраўды гэтак жа, G-Rg3, які меў пачатковае паглынанне 10%, таксама паказаў пік больш за 20% пасля лячэння 50 мкМ верапаміл і амаль 30% пасля лячэння 100 мкМ верапаміл, што сведчыць аб тым, што інгібіраванне P-gp верапамілам ўзмацняе G-паглынанне Rg3 у кішачніку ў мышынай мадэлі рака лёгкіх.
У адпаведнасці з вышэйапісаным метадам мышэй мадэлі рака, выкліканага B(a)P, выпадковым чынам падзялілі на шэсць груп, як паказана на малюнку 4A.У групе лячэння G-Rg3 не назіралася значнай страты вагі або клінічных прыкмет таксічнасці ў параўнанні з кантрольнай групай (дадзеныя не паказаны).Пасля 20 тыдняў лячэння былі сабраны лёгкія кожнай мышы.На малюнку 4B паказаны макраскапічныя пухліны лёгкіх у мышэй у вышэйзгаданых групах лячэння, а на малюнку 4C паказвае рэпрэзентатыўная светлавая мікрафатаграфія рэпрэзентатыўнай пухліны.Што тычыцца пухліннай нагрузкі ў кожнай групе (мал. 4D), значэнні для мышэй, якія атрымлівалі G-Rg3r і G-Rg3s, складалі 0,75 ± 0,29 мм3 і 0,81 ± 0,30 мм3 адпаведна, у той час як значэнні для мышэй G, якія атрымлівалі з -Rg3s былі 1,63 адпаведна ±0,40 мм3.кантрольных мышэй (p <0,001), што паказвае на тое, што лячэнне G-Rg3 зніжае нагрузку пухліны ў мышэй.Увядзенне верапаміла яшчэ больш узмацніла гэта зніжэнне: значэнні верапаміл+ G-Rg3r мышэй знізіліся з 0,75 ± 0,29 мм3 да 0,33 ± 0,25 мм3 (р <0,01), а значэнні верапаміл+ з 0,81 ± 0,30 мм3 знізіліся да 0,29 ± 0,21 мм3 у мышэй, якія атрымлівалі G. -Rg3s (р <0,05), што паказвае на тое, што верапаміл можа ўзмацняць інгібіруючы эфект G-Rg3 на опухолеобразование.Цяжар пухліны не паказала істотных адрозненняў паміж кантрольнай групай і групай верапаміл, групай G-Rg3r і групай G-Rg3s, групай верапаміл+G-Rg3r і групай верапаміл+G-Rg3s.Больш за тое, не было значнай таксічнасці печані або нырак, звязанай з ацэненымі метадамі лячэння (малюнак 4E, F).
Цяжар пухліны пасля лячэння G-Rg3 і ўзроўні G-Rg3r і G-Rg3 у плазме або кішачніку ў пазначаных групах.(A) Эксперыментальны дызайн.(B) Макраскапічныя пухліны ў мышынай мадэлі.Пухліны пазначаны стрэлкамі.а: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r ў спалучэнні з верапаміл.d: G-Rg3 ў спалучэнні з верапаміл.d: Верапаміл.е: кантроль.(C) Аптычная мікрафатаграфія пухліны пры павелічэнні.Адказ: 100x.б: 400Х.(D) Уплыў лячэння G-Rg3 + верапаміл на нагрузку пухлінай у A/J мышэй.(E) Узровень пячоначнага фермента АЛТ у плазме.(F) Узровень нырачнага фермента Cr у плазме.(G) Узроўні ў плазме G-Rg3r або G-Rg3 названых груп.(H) Узроўні G-Rg3r або G-Rg3s у кішачніку названых груп.Дадзеныя выяўляюцца як сярэдняе ± стандартнае адхіленне трохразовых вызначэнняў.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Узроўні G-Rg3 у B(a)P-індукаваных мадэляў рака мышэй ацэньвалі з дапамогай UPLC-MS/MS пасля 20-тыднёвага перыяду лячэння ў адпаведнасці з метадам, апісаным у раздзеле "Метады".На малюнках 4G і H паказаны ўзроўні G-Rg3 у плазме і кішачніку адпаведна.Ўзроўні G-Rg3r ў плазме крыві складалі 0,44 ± 0,32 мкмоль / л і павялічваліся да 1,17 ± 0,47 мкмоль / л пры адначасовым прыёме верапаміл (р <0,001), а ў кішачніку ўзроўні G-Rg3r складалі 0,53 ± 0,08 мкг / л.Пры спалучэнні з верапаміл g павялічваецца да 1,35 ± 0,13 мкг / г (р <0,001).Для G-Rg3 вынікі ішлі па аналагічнай схеме, паказваючы, што лячэнне верапамілам павялічыла пероральную біялагічную даступнасць G-Rg3 у A/J мышэй.
Аналіз жыццяздольнасці клетак выкарыстоўваўся для ацэнкі цітатоксічнасці B(a)P і G-Rg3 на клетках hEL.Цітатаксічнасць, выкліканая B(a)P у клетках hEL, паказана на малюнку 5A, у той час як нетоксичные ўласцівасці G-Rg3r і G-Rg3 паказаны на малюнках 5A і 5B.5B, C. Для ацэнкі цитопротективного эфекту G-Rg3 B(a)P ўводзілі разам з рознымі канцэнтрацыямі G-Rg3r або G-Rg3 у клеткі hEL.Як паказана на малюнку 5D, G-Rg3r у канцэнтрацыях 5 мкМ, 10 мкМ і 20 мкМ аднаўляў жыццяздольнасць клетак да 58,3%, 79,3% і 77,3% адпаведна.Падобныя вынікі таксама можна ўбачыць у групе G-Rg3s.Калі канцэнтрацыі G-Rg3s складалі 5 мкМ, 10 мкМ і 20 мкМ, жыццяздольнасць клетак аднаўлялася да 58,3%, 72,7% і 76,7% адпаведна (малюнак 5E).).Наяўнасць аддуктаў BPDE-ДНК вымяралася з дапамогай набору ELISA.Нашы вынікі паказалі, што ўзроўні аддукту BPDE-ДНК былі павышаны ў групе, якая атрымлівала B(a)P, у параўнанні з кантрольнай групай, але ў параўнанні з сумесным лячэннем G-Rg3, узровень аддукту BPDE-ДНК у групе B(a)P B у апрацаванай групе ўзровень аддукта ДНК быў значна зніжаны.Вынікі лячэння толькі B(a)P паказаны на малюнку 5F (1,87 ± 0,33 супраць 3,77 ± 0,42 для G-Rg3r, 1,93 ± 0,48 супраць 3,77 ± 0,42 для G -Rg3s, р <0,001).
Жыццяздольнасць клетак і адукацыя аддукта BPDE-ДНК у клетках hEL, апрацаваных G-Rg3 і B(a)P.(A) Жыццяздольнасць клетак hEL, апрацаваных B(a)P.(B) Жыццяздольнасць клетак hEL, апрацаваных G-Rg3r.(C) Жыццяздольнасць клетак hEL, апрацаваных G-Rg3.(D) Жыццяздольнасць клетак hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3r.(E) Жыццяздольнасць клетак hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3.(F) Узроўні аддукта BPDE-ДНК у клетках hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3.Дадзеныя выяўляюцца як сярэдняе ± стандартнае адхіленне трохразовых вызначэнняў.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Экспрэсія фермента GST была выяўлена пасля сумеснай апрацоўкі 10 мкМ B(a)P і 10 мкМ G-Rg3r або G-Rg3s.Нашы вынікі паказалі, што B(a)P душыў экспрэсію GST (59,7 ± 8,2% у групе G-Rg3r і 39 ± 4,5% у групе G-Rg3s), а B(a)P быў звязаны альбо з G-Rg3r. , або з G-Rg3r, або з G-Rg3r.Сумеснае лячэнне з G-Rg3s аднавіла экспрэсію GST.Экспрэсія GST (103,7 ± 15,5% у групе G-Rg3r і 110 ± 11,1% у групе G-Rg3s, p <0,05 і p <0,001 адпаведна, мал. 6A, B і C).Актыўнасць GST ацэньвалася з дапамогай набору для аналізу актыўнасці.Нашы вынікі паказалі, што група камбінаванага лячэння мела больш высокую актыўнасць GST у параўнанні з групай толькі B(a)P (96,3 ± 6,6% супраць 35,7 ± 7,8% у групе G-Rg3r супраць 92,3 ± 6,5% у групе G-Rg3r ).% супраць 35,7 ± 7,8 % у групе G-Rg3s, р <0,001, малюнак 6D).
Экспрэсія GST і Nrf2 у клетках hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3.(А) Выяўленне выразы GST з дапамогай Вестэрн-блоттинга.(B) Колькасная экспрэсія GST ў клетках hEL, апрацаваных B (a) P і G-Rg3r.(C) Колькасная экспрэсія GST ў клетках hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3s.(D) Актыўнасць GST ў клетках hEL, апрацаваных B (a) P і G-Rg3.(E) Выяўленне экспрэсіі Nrf2 шляхам Вестэрн-блоттинга.(F) Колькасная экспрэсія Nrf2 у клетках hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3r.(G) Колькасная экспрэсія Nrf2 у клетках hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3s.Дадзеныя выяўляюцца як сярэдняе ± стандартнае адхіленне трохразовых вызначэнняў.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Для высвятлення шляхоў, якія ўдзельнічаюць у апасродкаваным G-Rg3 падаўленні B(a)P-індукаванага опухолеобразования, экспрэсію Nrf2 ацэньвалі з дапамогай Вестэрн-блоттинга.Як паказана на малюнках 6E, F, G, у параўнанні з кантрольнай групай, толькі ўзровень Nrf2 у групе лячэння B(a)P быў зніжаны;аднак у параўнанні з групай лячэння B(a)P узровень B(a) Nrf2 у групе PG-Rg3 быў павышаны (106 ± 9,5% для G-Rg3r супраць 51,3 ± 6,8%, 117 ± 6,2% для G-Rg3r супраць 41 ± 9,8% для G-Rg3s, р <0,01).
Мы пацвердзілі прафілактычную ролю Nrf2, падаўляючы экспрэсію Nrf2 з дапамогай спецыфічнай малой інтэрферуючай РНК (siRNA).Накдаўн Nrf2 быў пацверджаны Вестэрн-блоттингом (мал. 7A, B).Як паказана на малюнках 7C,D, сумесная апрацоўка клетак hEL B(a)P і G-Rg3 прывяла да зніжэння колькасці адуктаў BPDE-ДНК (1,47 ± 0,21) у параўнанні з апрацоўкай B(a)P толькі ў кантрольнай групе siRNA.) G-Rg3r быў 4,13 ± 0,49, G-Rg3s быў 1,8 ± 0,32 і 4,1 ± 0,57, р <0,01).Аднак інгібіруючы эфект G-Rg3 на адукацыю BPDE-ДНК быў адменены накдаўнам Nrf2.У групе siNrf2 не было істотнай розніцы ў адукацыі аддукта BPDE-ДНК паміж сумесным лячэннем B(a)P і G-Rg3 і толькі лячэннем B(a)P (3,0 ± 0,21 для G-Rg3r супраць 3,56 ± 0,32). ).для G-Rg3r супраць 3,6 для G-Rg3s супраць ±0,45 супраць 4,0±0,37, р>0,05).
Уплыў накдаўну Nrf2 на адукацыю аддукта BPDE-ДНК у клетках hEL.(A) Накдаўн Nrf2 быў пацверджаны Вестэрн-блоттингом.(B) Колькасная ацэнка інтэнсіўнасці паласы Nrf2.(C) Уплыў накдаўну Nrf2 на ўзроўні аддукта BPDE-ДНК у клетках hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3r.(D) Уплыў накдаўну Nrf2 на ўзроўні аддукта BPDE-ДНК у клетках hEL, апрацаваных B(a)P і G-Rg3.Дадзеныя выяўляюцца як сярэдняе ± стандартнае адхіленне трохразовых вызначэнняў.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Гэта даследаванне ацэньвала прафілактычныя эфекты розных экстрактаў чырвонага жэньшэня на мышынай мадэлі B(a)P-індукаванага рака лёгкіх, і лячэнне KRGB значна знізіла цяжар пухліны.Улічваючы, што G-Rg3 мае самае высокае ўтрыманне ў гэтым экстракце жэньшэня, была вывучана важная роля гэтага гинзенозида ў інгібіраванні опухолеобразования.І G-Rg3r, і G-Rg3 (два эпімера G-Rg3) значна зніжаюць нагрузку на пухліну ў мышынай мадэлі B(a)P-індукаванага рака.G-Rg3r і G-Rg3 аказваюць супрацьракавы эфект, індукуючы апоптоз опухолевых клетак21, інгібіруючы рост пухліны22, прыпыняючы клеткавы цыкл23 і ўплываючы на ангіягенез24.Было таксама паказана, што G-Rg3 інгібіруе клеткавае метастазіраванне 25, і была задакументавана здольнасць G-Rg3 ўзмацняць эфекты хіміятэрапіі і прамянёвай тэрапіі 26,27.Пун і інш прадэманстравалі, што лячэнне G-Rg3 можа паменшыць генатаксічныя эфекты B(a)P28.Гэта даследаванне дэманструе тэрапеўтычны патэнцыял G-Rg3 у нацэльванні на канцэрагенныя малекулы навакольнага асяроддзя і прафілактыцы рака.
Нягледзячы на іх добры прафілактычны патэнцыял, нізкая біодоступность гинзенозидов пры пероральном прыёме ўяўляе праблему для клінічнага выкарыстання гэтых малекул.Фармакокинетический аналіз перорально ўвядзення гинзенозидов пацукам паказаў, што яго біодоступность ўсё яшчэ менш за 5%29.Гэтыя тэсты паказалі, што пасля 20-тыднёвага перыяду лячэння знізіўся толькі ўзровень Rg5 у крыві.Нягледзячы на тое, што асноўны механізм нізкай біодоступность яшчэ не высветлены, P-gp, як мяркуюць, удзельнічае ў адтоку гинзенозидов.Гэтая праца ўпершыню прадэманстравала, што ўвядзенне верапаміла, блокатора P-gp, павялічвае пероральную біодоступность G-Rg3r і G-Rg3s.Такім чынам, гэта адкрыццё сведчыць аб тым, што G-Rg3r і G-Rg3s дзейнічаюць як субстраты P-gp для рэгулявання яго адтоку.
Гэтая праца дэманструе, што камбінаванае лячэнне верапамілам павялічвае пероральную біодоступность G-Rg3 у мышынай мадэлі рака лёгкіх.Гэтая выснова пацвярджаецца павелічэннем кішачнага трансцеллюлярного транспарту G-Rg3 пры блакаванні P-gp, тым самым павялічваючы яго ўсмоктванне.Аналізы ў клетках Caco2 паказалі, што лячэнне верапамілам памяншае адток G-Rg3r і G-Rg3s, адначасова паляпшаючы пранікальнасць мембраны.Даследаванне Yang et al.Даследаванні паказалі, што лячэнне циклоспорином А (іншым блокатором P-gp) павялічвае біодоступность гинзенозида Rh2 ад зыходнага значэння 1%20 да больш чым 30%.Гинзенозиды злучэння K і Rg1 таксама паказалі падобныя вынікі30,31.Пры сумесным увядзенні верапаміл і цыкласпарыну А адток злучэння К у клетках Caco-2 значна зніжаўся з 26,6 да менш чым 3, у той час як яго ўнутрыклетачныя ўзроўні павялічваліся ў 40 разоў30.У прысутнасці верапаміла ўзровень Rg1 павышаўся ў эпітэліяльных клетках лёгкіх пацукоў, што сведчыць пра ролю P-gp у адтоку гинзенозида, як паказалі Meng et al.31.Аднак верапаміл не аказаў аднолькавага эфекту на адток некаторых гинзенозидов (такіх як Rg1, F1, Rh1 і Re), што паказвае на тое, што на іх не ўплываюць субстраты P-gp, як паказана Liang et al.32 .Гэта назіранне можа быць звязана з удзелам іншых пераносчыкаў і альтэрнатыўных структур гинзенозидов.
Механізм прафілактычнага ўздзеяння G-Rg3 на рак незразумелы.Папярэднія даследаванні паказалі, што G-Rg3 прадухіляе пашкоджанне ДНК і апоптоз шляхам памяншэння акісляльнага стрэсу і запалення16,33, што можа быць асноўным механізмам прадухілення B(a)P-індукаванага опухолеобразования.Некаторыя паведамленні паказваюць, што генатаксічнасць, выкліканая B(a)P, можа быць зніжана шляхам мадуляцыі ферментаў фазы II з адукацыяй BPDE-DNA34.GST з'яўляецца тыповым ферментам фазы II, які інгібіруе адукацыю аддукта BPDE-ДНК, спрыяючы звязванню GSH з BPDE, тым самым памяншаючы пашкоджанне ДНК, выкліканае B(a)P35.Нашы вынікі паказваюць, што лячэнне G-Rg3 зніжае B(a)P-індукаваную цытатаксічнасць і адукацыю аддукта BPDE-ДНК у клетках hEL і аднаўляе экспрэсію і актыўнасць GST in vitro.Аднак гэтыя эфекты адсутнічалі ў адсутнасць Nrf2, што сведчыць аб тым, што G-Rg3 выклікае цитопротекторное дзеянне праз шлях Nrf2.Nrf2 з'яўляецца асноўным фактарам транскрыпцыі для фазы II детоксікаціі ферментаў, які спрыяе кліранс ксенобиотиков36.Актывацыя шляху Nrf2 індукуе цитопротекцию і памяншае пашкоджанне тканіны37.Больш за тое, некалькі паведамленняў пацвярджаюць ролю Nrf2 як супрессора пухліны ў канцерогенезе38.Наша даследаванне паказвае, што індукцыя шляху Nrf2 з дапамогай G-Rg3 гуляе важную рэгуляторную ролю ў B(a)P-індукаванай генатаксічнасці, выклікаючы детоксікацію B(a)P шляхам актывацыі ферментаў фазы II, тым самым інгібіруючы працэс опухолеобразования.
Наша праца раскрывае патэнцыял чырвонага жэньшэня ў прафілактыцы B(a)P-індукаванага рака лёгкіх у мышэй дзякуючы важнаму ўдзелу гинзенозида G-Rg3.Дрэнная біялагічная даступнасць пры пероральном прыёме гэтай малекулы перашкаджае яе клінічнаму прымяненню.Аднак гэта даследаванне ўпершыню паказвае, што G-Rg3 з'яўляецца субстратам P-gp, і ўвядзенне інгібітару P-gp павялічвае біодоступность G-Rg3 in vitro і in vivo.G-Rg3 памяншае B(a)P-індукаваны цытатаксічнасць, рэгулюючы шлях Nrf2, які можа быць патэнцыйным механізмам яго прафілактычнай функцыі.Наша даследаванне пацвярджае патэнцыял гинзенозида G-Rg3 для прафілактыкі і лячэння рака лёгкіх.
Шасцітыднёвыя самкі мышэй A/J (20 ± 1 г) і 7-тыднёвыя самцы пацукоў Wistar (250 ± 20 г) былі атрыманы з The Jackson Laboratory (Бар-Харбар, ЗША) і Wuhan Institute of Zoology.ун-т (Ухань, Кітай).Кітайскі цэнтр збору тыпавых культур (Ухань, Кітай) прадаставіў нам клеткі Caco-2 і hEL.Sigma-Aldrich (Сэнт-Луіс, ЗША) — крыніца B(a)P і трыкапрыну.Вычышчаныя гинзенозиды G-Rg3r і G-Rg3s, дыметылсульфоксид (DMSO), набор для аналізу праліферацыі CellTiter-96 (MTS), верапаміл, мінімальная эфірная серада (MEM) і фетальная бычыная сыроватка (FBS) былі набыты ў Chengdu Must Bio-Technology. .Кампанія, ТАА(Чэнду, Кітай).Міні-набор QIAamp DNA і BPDE-DNA аддукт ELISA набор былі набыты ў Qiagen (Стэнфард, Каліфорнія, ЗША) і Cell Biolabs (Сан-Дыега, Каліфорнія, ЗША).Набор для аналізу актыўнасці GST і набор для аналізу агульнага бялку (стандартны метад BCA) былі набыты ў Solarbio (Пекін, Кітай).Усе экстракты чырвонага жэньшэня захоўваюцца ў Mingyu Laboratory 7. Ганконгскі баптысцкі універсітэт (Ганконг, Кітай) і Карэйскі анкалагічны цэнтр (Сеул, Карэя) з'яўляюцца камерцыйнымі крыніцамі экстракта CRG і розных экстрактаў чырвонага жэньшэня рознага карэйскага паходжання (уключаючы KRGA, KRGB і КРГК).Чырвоны жэньшэнь вырабляецца з каранёў 6-гадовага свежага жэньшэня.Экстракт чырвонага жэньшэня атрымліваюць шляхам трохразовага прамывання жэньшэня вадой, затым канцэнтравання воднага экстракта і, нарэшце, высушвання пры нізкай тэмпературы для атрымання парашка экстракта жэньшэня.Антыцелы (анты-Nrf2, анты-GST і β-акцін), кан'югаваны з пероксидазой хрэна антытрусіны імунаглабулін G (IgG), трансфекцыйны рэагент, кантрольная siRNA і Nrf2 siRNA былі набыты ў Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, Каліфорнія) .), ЗША).
Клеткі Caco2 і hEL культывавалі ў 100 мм2 культуральных чашках з MEM, якія змяшчаюць 10% FBS, пры 37 °C у увлажненной атмасферы з 5% CO2.Каб вызначыць уплыў умоў лячэння, клеткі hEL інкубавалі з рознымі канцэнтрацыямі B(a)P і G-Rg3 у MEM на працягу 48 гадзін.Клеткі можна дадаткова прааналізаваць або сабраць для падрыхтоўкі бясклетачных экстрактаў.
Усе эксперыменты былі зацверджаны Камітэтам па этыцы эксперыментальных жывёл Медыцынскага каледжа Тунцзі Універсітэта навукі і тэхналогій Хуачжун (зацвярджэнне № 2019; рэгістрацыйны № 4587TH).Усе эксперыменты праводзіліся ў адпаведнасці з адпаведнымі рэкамендацыямі і правіламі, а даследаванне праводзілася ў адпаведнасці з рэкамендацыямі "Даследаванні на жывёл: справаздачнасць аб эксперыментах in vivo" (ARRIVE).Васьмітыднёвым мышам A/J спачатку ўводзілі ўнутрыбрушна B(a)P у растворы трикаприна (100 мг/кг, 0,2 мл).Праз тыдзень мышэй выпадковым чынам падзялілі на кантрольныя групы і розныя групы лячэння, па 15 мышэй у кожнай групе, і ўводзілі праз зонд адзін раз у дзень.Пасля 20 тыдняў лячэння жывёл забівалі шляхам CO2-асфіксіі.Лёгкія збіралі і фіксавалі на 24 гадзіны.Колькасць паверхневых пухлін і асобныя памеры пухлін вызначалі колькасна для кожнага лёгкага пад рассякаючым мікраскопам.Ацэнкі аб'ёму пухліны (V) разлічвалі з дапамогай наступнага выразу: V (мм3) = 4/3πr3, дзе r - дыяметр пухліны.Чыстая сума ўсіх аб'ёмаў пухлін у лёгкіх мышэй прадстаўляла агульны аб'ём пухліны, а сярэдні агульны аб'ём пухліны ў кожнай групе прадстаўляў нагрузку пухлінай.Узоры суцэльнай крыві і кішачніка збіралі і захоўвалі пры -80°C для вызначэння UPLC-MS/MS.Была сабрана сыроватка крыві і выкарыстоўваўся аўтаматызаваны хімічны аналізатар для аналізу ўзроўню аланінамінатрансферазы (АЛТ) і сыроватачна крэатыніну (Cr) для ацэнкі функцыі печані і нырак.
Сабраныя ўзоры дасталі з халоднага сховішча, размарозілі, узважылі і змясцілі ў прабіркі, як апісана вышэй.Да гэтага дадаюць 0,5 мкМ флорызін (унутраны стандарт) у 0,8 мл раствора метанолу.Затым тканіна гамагенізавалі з дапамогай Tissue-Tearor, а гамагенат пасля пераносілі ў мікрацэнтрыфужную прабірку на 1,5 мл.Сумесь центрифугировали пры 15500 абаротаў у хвіліну на працягу 15 хвілін.Пасля выдалення 1,0 мл супернатанта высушыце азотам.Для аднаўлення было выкарыстана дзвесце мікралітраў метанолу.Кроў збіраецца і апрацоўваецца на адной лініі і выкарыстоўваецца ў якасці эталона для ўсіх вымярэнняў.
24-лункавыя пласціны Transwell высейвалі 1,0 × 105 клетак Caco-2 на лунку для ацэнкі патэнцыйнага ўзмацнення транспарту G-Rg3 шляхам дадання верапаміла.Праз 3 тыдні культывавання клеткі прамывалі HBSS і преинкубировали пры 37°C.400 мкл 10 мкМ G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s або сумесі з 50 або 100 мкМ верапаміл) уводзілі на базолатеральный або апікальны бок монослоя, а 600 мкл раствора HBSS дадавалі ў другі бок.Збярыце 100 мкл культуральнай асяроддзя ў прызначаны час (0, 15, 30, 45, 60, 90 і 120 хвілін) і дадайце 100 мкл HBSS, каб папоўніць гэты аб'ём.Узоры захоўвалі пры -4 °C да выяўлення з дапамогай UPLC-MS/MS.Выраз Papp = dQ/(dT × A × C0) выкарыстоўваецца для колькаснай ацэнкі ўяўнай аднанакіраванай апікальнай і базолатеральной пранікальнасці і наадварот (Pa-b і Pb-a адпаведна);dQ/dT - гэта змяненне канцэнтрацыі, A (0,6 см2) - плошча паверхні монослоя, C0 - пачатковая канцэнтрацыя донара.Каэфіцыент выцякання разлічваецца як Pb-a/Pa-b, які ўяўляе хуткасць выцякання доследнага прэпарата.
Самцоў пацукоў Wistar галадалі 24 гадзіны, пілі толькі ваду і анестэзавалі нутравеннымі ін'екцыямі 3,5% раствора пентобарбитала.Інтубаваная сіліконавая трубка мае канец дванаццаціперснай кішкі ў якасці ўваходу і канец падуздышнай кішкі ў якасці выхаду.Выкарыстоўвайце перистальтический помпа, каб запампаваць уваходнае адтуліну 10 мкМ G-Rg3r або G-Rg3s у ізатанічным HBSS з хуткасцю патоку 0,1 мл/мін.Эфект верапаміл ацэньвалі шляхам дадання 50 мкМ або 100 мкМ злучэння да 10 мкМ G-Rg3r або G-Rg3s.UPLC-MS/MS праводзілі на перфузионных экстрактах, сабраных у моманты часу 60, 90, 120 і 150 хвілін пасля пачатку перфузии.Працэнт абсорбцыі вызначаецца колькасна па формуле % абсорбцыі = (1 – Cout/Cin) × 100%;канцэнтрацыя G-Rg3 на выхадзе і ўваходзе выяўляецца адпаведна Cout і Cin.
Клеткі hEL высейвалі ў 96-лункавыя пласціны з шчыльнасцю 1 × 104 клетак на лунку і апрацоўвалі B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 мкМ) або G-Rg3, раствораным у ДМСО. .Затым прэпараты разбаўлялі культуральной асяроддзем да розных канцэнтрацый (0, 1, 2, 5, 10, 20 мкМ) на працягу 48 гадзін.Выкарыстоўваючы даступны ў продажы набор для аналізу MTS, клеткі падвяргалі стандартнаму пратаколу, а затым вымяралі з дапамогай прылады для чытання мікрапланшэтаў пры 490 нм.Узровень жыццяздольнасці клетак груп, якія атрымлівалі B(a)P (10 мкМ) і G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 мкМ), ацэньвалі ў адпаведнасці з апісаным вышэй метадам і параўноўвалі з групай без лячэння.
Клеткі hEL высейвалі ў 6-лункавыя пласціны пры шчыльнасці 1 × 105 клетак/лунку і апрацоўвалі 10 мкМБ(а)Р у прысутнасці або адсутнасці 10 мкМ G-Rg3.Пасля 48 гадзін апрацоўкі ДНК была вынятая з клетак hEL з дапамогай QIAamp DNA Mini Kit у адпаведнасці з пратаколам вытворцы.Утварэнне аддуктаў BPDE-ДНК было выяўлена з дапамогай набору ELISA для аддуктаў BPDE-ДНК.Адносныя ўзроўні аддукту BPDE-ДНК вымяралі з дапамогай прылады для чытання мікрапланшэтаў шляхам вымярэння паглынання пры 450 нм.
Клеткі hEL высейвалі ў 96-лункавыя пласціны пры шчыльнасці 1 × 104 клетак на лунку і апрацоўвалі 10 мкМ (а) Р у адсутнасць або ў прысутнасці 10 мкМ G-Rg3 на працягу 48 гадзін.Актыўнасць GST вымяралася з выкарыстаннем камерцыйнага набору для аналізу актыўнасці GST у адпаведнасці з пратаколам вытворцы.Адносную актывацыю GST вымяралі па абсорбцыі пры 450 нм з дапамогай рыдэра для мікрапланшэтаў.
Клеткі hEL прамывалі астуджаным PBS, а затым лізіравалі з выкарыстаннем буфера для аналізу радыёімунапрэцыпітацыі, які змяшчае інгібітары пратэазы і інгібітары фасфатазы.Пасля колькаснага вызначэння бялку з выкарыстаннем набору для аналізу агульнага бялку 30 мкг бялку ў кожным узоры аддзялялі 12% SDS-PAGE і пераносілі на мембрану PVDF з дапамогай электрафарэзу.Мембраны блакавалі 5% абястлушчаным малаком і інкубавалі з першаснымі антыцеламі на працягу ночы пры 4°C.Пасля інкубацыі з другаснымі антыцеламі, кан'югаванымі з пероксидазой хрэна, для візуалізацыі сігналу звязвання дадаваліся рэагенты з узмоцненай хемилюминесценцией.Інтэнсіўнасць кожнай бялковай паласы вызначалася колькасна з дапамогай праграмнага забеспячэння ImageJ.
Праграмнае забеспячэнне GraphPad Prism 7.0 выкарыстоўвалася для аналізу ўсіх дадзеных, выражаных як сярэдняе ± стандартнае адхіленне.Варыяцыю паміж групамі лячэння ацэньвалі з дапамогай t-крытэрыю Ст'юдэнта або аднабаковага дысперсійнага аналізу са значэннем P <0,05, якое сведчыць аб статыстычнай значнасці.
Усе дадзеныя, атрыманыя або прааналізаваныя падчас гэтага даследавання, уключаны ў гэты апублікаваны артыкул і файлы дадатковай інфармацыі.
Torre, LA, Siegel, RL і Jemal, A. Статыстыка рака лёгкіх.прысл.Пратэрмінаваны.лекі.біялогіі.893, 1–19 (2016).
Хехт, С. Канцерогены тытуню, іх биомаркеры і рак, выкліканы тытунём.Нац.Ракавы капелан.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH і Venitt, S. ДНК і бялковыя аддукты ў тканінах чалавека ў выніку ўздзеяння тытунёвага дыму.інтэрнацыянальнасць.Ж. Рак.131, 2733–2753 (2012).
Ян Ю., Ван Ю., Тан К., Любэт Р.А. і Ю.М. Уплыў Houttuynia cordata і силибинина на бенза(а)пірэн-індукаваны пухліна лёгкіх у A/J мышэй.Рак 7, 1053–1057 (2005).
Тан В. і інш.Проціракавы натуральны прадукт, вылучаны з кітайскіх лекавых матэрыялаў.сківіцу.лекі.6, 27 (2011).
Ян, Ю. і інш.Эфектыўнасць поліфенон Е, чырвонага жэньшэня і рапамицина на бенза(а)пірэн-індукаваны опухолеобразование лёгкіх у A/J мышэй.Рак 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS і Yuan, KS Red, удзел у тэрапіі рака.сківіцу.Дж. Натт.лекі.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS і Gao, L. Ginsenosides ў каранях і лісці амерыканскага жэньшэня.Ж. Агрык.Харчовая хімія.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA і Yuan KS Фармакалогія жэньшэня: шмат кампанентаў і шмат эфектаў.біяхіміі.фармакалогія.58, 1685–1693 (1999).
Час публікацыі: 17 верасня 2023 г