Diolch am ymweld â Nature.com.Mae gan y fersiwn o'r porwr rydych chi'n ei ddefnyddio gefnogaeth CSS gyfyngedig.I gael y canlyniadau gorau, rydym yn argymell defnyddio fersiwn mwy diweddar o'ch porwr (neu ddiffodd modd cydweddoldeb yn Internet Explorer).Yn y cyfamser, er mwyn sicrhau cefnogaeth barhaus, rydym yn arddangos y wefan heb steilio na JavaScript.
Mae ginseng coch wedi'i ddefnyddio mewn meddygaeth Asiaidd draddodiadol ers cannoedd o flynyddoedd.Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom werthuso gallu pedwar math o ginseng coch (ginseng coch Tsieineaidd, ginseng coch Corea A, ginseng coch Corea B, a ginseng coch Corea C) a dyfwyd mewn gwahanol ranbarthau i atal ffurfio a thwf ysgyfaint a achosir gan garsinogen. tiwmorau.Cynhaliwyd prawf benso(a)pyrene (B(a)P) ar lygod A/J, a chanfuwyd mai ginseng B coch Corea oedd y mwyaf effeithiol o ran lleihau baich tiwmor ymhlith y pedwar math ginseng coch.Yn ogystal, dadansoddwyd cynnwys ginsenosides amrywiol (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 a Rg5) mewn pedwar dyfyniad ginseng coch a chanfuwyd bod gan ginseng coch Corea B. y lefelau uchaf o ginsenoside Rg3 (G-Rg3), sy'n awgrymu y gallai G-Rg3 chwarae rhan bwysig yn ei effeithiolrwydd therapiwtig.Mae'r gwaith hwn yn dangos bod gan G-Rg3 fio-argaeledd cymharol isel.Fodd bynnag, pan gafodd G-Rg3 ei gydweinyddu â'r atalydd P-gp verapamil, gostyngwyd efflux G-Rg3 i gelloedd Caco-2, cynyddwyd cyfradd amsugno coluddol G-Rg3 mewn model llygod mawr, a G-Rg3 cynyddwyd.Mewn celloedd Caco-2, mae all-lif Rg3 yn lleihau, ac mae lefel y crynodiad Rg3 yn gostwng.Cynyddir G-Rg3 yn y coluddyn a phlasma, ac mae ei allu i atal tiwmorau hefyd yn cael ei wella mewn model llygod mawr o tumorigenesis a achosir gan B(a) P.Canfuom hefyd fod G-Rg3 wedi lleihau cytotoxicity a achosir gan B(a) P a ffurfiant adduct DNA mewn celloedd yr ysgyfaint dynol, ac wedi adfer mynegiant a gweithgaredd ensymau cam II trwy'r llwybr Nrf2, a allai fod yn gysylltiedig â'r mecanwaith gweithredu posibl. o ataliad G -Rg3..Ynglŷn ag achosion o diwmorau ysgyfaint.Mae ein hastudiaeth yn dangos rôl bwysig bosibl i G-Rg3 wrth dargedu tiwmorau ysgyfaint mewn modelau llygoden.Mae bio-argaeledd llafar y ginsenoside hwn yn cael ei wella trwy dargedu P-glycoprotein, gan ganiatáu i'r moleciwl gael effeithiau gwrthganser.
Y math mwyaf cyffredin o ganser yr ysgyfaint yw canser yr ysgyfaint celloedd nad ydynt yn fach (NSCLC), sef un o brif achosion marwolaethau canser yn Tsieina a Gogledd America1,2.Y prif ffactor sy'n cynyddu'r risg o ddatblygu canser yr ysgyfaint celloedd nad ydynt yn fach yw ysmygu.Mae mwg sigaréts yn cynnwys mwy na 60 o garsinogenau, gan gynnwys benso(a)pyren (B(a)P), nitrosaminau, ac isotopau ymbelydrol oherwydd dadfeiliad radon.3 Hydrocarbonau aromatig polysyclig B(a)P yw prif achos gwenwyndra mewn sigarennau mwg.Wrth ddod i gysylltiad â B(a)P, mae cytochrome P450 yn ei drawsnewid yn B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epocsid (BPDE), sy'n adweithio â DNA i ffurfio adwythiad BPDE-DNA 4. Yn ogystal, mae'r rhain mae adducts yn achosi tiwmoredd yr ysgyfaint mewn llygod â chyfnod tiwmor a histopatholeg tebyg i diwmorau ysgyfaint dynol5.Mae'r nodwedd hon yn gwneud y model canser yr ysgyfaint a achosir gan B(a)P yn system addas ar gyfer gwerthuso cyfansoddion sydd â phriodweddau gwrthganser posibl.
Un strategaeth bosibl i atal datblygiad canser yr ysgyfaint mewn grwpiau risg uchel, yn enwedig ysmygwyr, yw defnyddio cyfryngau cemo-ataliol i atal datblygiad briwiau neoplastig mewnepithelaidd a thrwy hynny atal eu datblygiad dilynol i falaenedd.Mae astudiaethau anifeiliaid yn dangos bod amrywiol gyfryngau cemo-ataliol yn effeithiol6.Amlygodd ein hadroddiad blaenorol7 effeithiau ataliol da ginseng coch ar ganser yr ysgyfaint.Mae'r llysieuyn hwn wedi'i ddefnyddio ers canrifoedd mewn meddygaeth Asiaidd draddodiadol i ymestyn bywyd ac iechyd, ac mae wedi'i ddogfennu i gael effeithiau gwrth-tiwmor8.
Ffactor gweithredol ginseng yw ginsenoside, a ddefnyddir fel marciwr cyfansawdd i werthuso ansawdd darnau ginseng.Mae dadansoddiad meintiol o ddarnau ginseng crai fel arfer yn cynnwys defnyddio sawl ginsenosides, gan gynnwys RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, a Rc9,10.Ychydig iawn o ddefnydd clinigol sydd gan ginsenosides oherwydd eu bio-argaeledd geneuol gwael iawn11.Er nad yw'r mecanwaith ar gyfer y bioargaeledd gwael hwn yn glir, efallai mai'r alllif o ginsenosides a achosir gan P-glycoprotein (P-gp)12 yw'r achos.P-gp yw un o'r cludwyr efflux pwysicaf yn yr uwchdeulu cludwr casét sy'n rhwymo ATP, sy'n defnyddio ynni hydrolysis ATP i ryddhau sylweddau mewngellol i'r amgylchedd allanol.Mae cludwyr P-gp fel arfer wedi'u dosbarthu'n eang yn rhwystr y coluddyn, yr arennau, yr afu a gwaed-ymennydd13.Mae P-gp yn chwarae rhan hanfodol mewn amsugno coluddol, ac mae ataliad P-gp yn cynyddu amsugniad llafar ac argaeledd rhai cyffuriau gwrth-ganser12,14.Enghreifftiau o atalyddion a ddefnyddiwyd yn flaenorol yn y llenyddiaeth yw verapamil a cyclosporine A15.Mae'r gwaith hwn yn cynnwys sefydlu system llygoden ar gyfer astudio canser yr ysgyfaint a achosir gan B(a)P i werthuso gallu gwahanol echdynion ginseng coch o Tsieina a Korea i effeithio ar falaeneddau.Dadansoddwyd y darnau yn unigol i nodi ginsenosides penodol a allai effeithio ar garcinogenesis.Yna defnyddiwyd Verapamil i dargedu P-gp a gwella bio-argaeledd geneuol ac effeithiolrwydd therapiwtig ginsenosides sy'n targedu canser.
Mae'r mecanwaith y mae saponins ginseng yn cael effeithiau therapiwtig ar garcinogenesis yn parhau i fod yn aneglur.Mae ymchwil wedi dangos y gall ginsenosides amrywiol leihau difrod DNA a achosir gan garsinogenau trwy leihau straen ocsideiddiol ac actifadu ensymau dadwenwyno cam II, a thrwy hynny atal difrod celloedd.Mae Glutathione S-transferase (GST) yn ensym cam II nodweddiadol sy'n ofynnol i leihau difrod DNA a achosir gan garsinogenau17.Mae ffactor trawsgrifio 2 sy'n gysylltiedig ag erythroid niwclear 2 (Nrf2) yn ffactor trawsgrifio pwysig sy'n rheoleiddio homeostasis rhydocs ac yn actifadu mynegiant ensymau cam II ac ymatebion gwrthocsidiol cytoprotective18.Archwiliodd ein hastudiaeth hefyd effeithiau ginsenosides a nodwyd ar leihau sytowenwyndra a achosir gan B(a) P a ffurfiant adwythiad BPDE-DNA, yn ogystal â chymell ensymau cam II trwy fodiwleiddio llwybr Nrf2 mewn celloedd ysgyfaint arferol.
Mae sefydlu model llygoden o ganser a achosir gan B(a)P yn gyson â gwaith blaenorol5.Mae Ffigur 1A yn dangos dyluniad arbrofol triniaeth 20 wythnos o fodel canser y llygoden a achosir gan B(a)P, dŵr (rheolaeth), dyfyniad ginseng coch Tsieineaidd (CRG), dyfyniad ginseng coch Corea A (KRGA), a choch Corea ginseng.Detholiad B (KRGB) a Detholiad Ginseng Coch Corea C (KRGC).Ar ôl 20 wythnos o driniaeth ginseng coch, cafodd llygod eu haberthu gan fygu CO2.Mae Ffigur 1B yn dangos tiwmorau ysgyfaint macrosgopig mewn anifeiliaid sy'n cael eu trin â gwahanol fathau o ginseng coch, ac mae Ffigur 1C yn dangos micrograff ysgafn cynrychioliadol o sampl tiwmor.Roedd baich tiwmor anifeiliaid wedi'u trin â KRGB (1.5 ± 0.35) yn is na baich anifeiliaid rheoli (0.82 ± 0.2, P < 0.05), fel y dangosir yn Ffigur 1D.Gradd gyffredinol ataliad llwyth tiwmor oedd 45%.Nid oedd darnau ginseng coch eraill a brofwyd yn dangos newidiadau mor sylweddol yn y baich tiwmor (P> 0.05).Ni welwyd unrhyw sgîl-effeithiau amlwg ym model y llygoden yn ystod 20 wythnos o driniaeth ginseng coch, gan gynnwys dim newid ym mhwysau'r corff (data heb ei ddangos) a dim gwenwyndra afu neu arennau (Ffigur 1E, F).
Mae detholiad ginseng coch yn trin datblygiad tiwmor yr ysgyfaint mewn llygod A/J.(A) Dyluniad arbrofol.(B) Tiwmorau ysgyfaint mawr mewn model llygoden.Mae tiwmorau'n cael eu nodi gan saethau.a: grŵp ginseng coch Tsieineaidd.b: grŵp A o ginseng coch Corea.c: grŵp ginseng coch Corea B. d: grŵp ginseng coch Corea C. d: Grŵp rheoli.(C) Micrograff ysgafn yn dangos tiwmor yr ysgyfaint.Chwyddiad: 100. b: 400. (D) llwyth tiwmor yn y grŵp echdynnu ginseng coch.(E) Lefelau plasma'r ensym afu ALT.(F) Lefelau plasma'r ensym arennol Cr.Mynegir data fel cymedrig ± gwyriad safonol.*P <0.05.
Dadansoddwyd y darnau ginseng coch a nodwyd yn yr astudiaeth hon gan sbectrometreg màs tandem cromatograffaeth hylif uwch-berfformiad (UPLC-MS/MS) i feintioli'r ginsenosides canlynol: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3 , Rh2, F1, Rk1 a Rg5.Disgrifiwyd yr amodau UPLC ac MS a ddefnyddiwyd i fesur y dadansoddiadau mewn adroddiad blaenorol19.Dangosir cromatogramau UPLC-MS/MS o bedwar echdyniad ginseng coch yn Ffigur 2A.Roedd gwahaniaethau sylweddol yng nghyfanswm y cynnwys ginsenoside, gyda chyfanswm y cynnwys ginsenoside uchaf yn CRG (590.27 ± 41.28 μmol/L) (Ffigur 2B).Wrth werthuso ginsenosides unigol (Ffigur 2C), dangosodd KRGB y lefel uchaf o G-Rg3 o'i gymharu â ginsenosides eraill (58.33 ± 3.81 μmol/L ar gyfer G-Rg3s a 41.56 ± 2.88 μmol/L ar gyfer G -Rg3r).math ginseng coch (P < 0.001).Mae G-Rg3 yn digwydd fel pâr o stereoisomers G-Rg3r a G-Rg3s, sy'n wahanol yn sefyllfa'r grŵp hydrocsyl ar garbon 20 (Ffig. 2 D).Mae'r canlyniadau'n dangos y gallai fod gan G-Rg3r neu G-Rg3 botensial gwrthganser pwysig mewn model llygoden canser a achosir gan B(a) P.
Cynnwys ginsenosides mewn amrywiol ddarnau ginseng coch.(A) cromatogramau UPLC-MS/MS o bedwar detholiad ginseng coch.(B) Amcangyfrif o gyfanswm cynnwys ginsenoside yn y darnau a nodir.(C) Canfod ginsenosides unigol mewn darnau wedi'u labelu.(D) Strwythurau stereoisomers ginsenoside G-Rg3r a G-Rg3s.Mynegir data fel y cymedrig ± gwyriad safonol o ddyfarniadau triphlyg.***P <0.001.
Roedd astudiaeth UPLC-MS/MS yn gofyn am feintioli ginsenosides mewn samplau berfeddol a gwaed ar ôl 20 wythnos o driniaeth.Dangosodd triniaeth gyda KRGB bresenoldeb dim ond 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 yn y gwaed.Ni chanfuwyd unrhyw ginsenosides sy'n weddill, sy'n nodi bio-argaeledd llafar gwael ac felly llai o amlygiad i'r ginsenosides hyn.
Mae llinell gell adenocarcinoma y colon Caco-2 yn debyg yn forffolegol ac yn biocemegol i gelloedd epithelial berfeddol dynol, gan ddangos ei ddefnyddioldeb wrth asesu cludiant enterocyte ar draws y rhwystr epithelial berfeddol.Seiliwyd y dadansoddiad hwn ar astudiaeth gynharach 20 .Mae Ffigurau 3A, B, C, D, E,F yn dangos delweddau cynrychioliadol o gludiant trawsgellog o G-Rg3r a G-Rg3 gan ddefnyddio model monolayer Caco-2.Roedd cludiant trawsgellog o G-Rg3r neu G-Rg3 ar draws monolayers Caco-2 o'r ochr basolateral i apical (Pb-a) yn sylweddol uwch nag o'r apigol i ochr basolateral (Pa-b).Ar gyfer G-Rg3r, y gwerth Pa-b cymedrig oedd 0.38 ± 0.06, a gynyddodd i 0.73 ± 0.06 ar ôl triniaeth gyda 50 μmol/L verapamil ac i 1.14 ± 0.09 ar ôl triniaeth gyda 100 μmol/L verapamil (1 ± 0.00) a <1. Ffigur 2).3A).Roedd arsylwadau ar gyfer G-Rg3 yn dilyn patrwm tebyg (Ffig. 3B), a dangosodd y canlyniadau fod triniaeth verapamil yn gwella cludiant G-Rg3r a G-Rg3.Arweiniodd triniaeth verapamil hefyd at ostyngiad sylweddol mewn cymarebau efflux Pb-a a G-Rg3r a G-Rg3s (Ffigur 3C, D, E, F), sy'n nodi bod triniaeth verapamil yn lleihau cynnwys ginsenoside mewn celloedd efflux Caco-2..
Cludo G-Rg3 yn drawsgellol mewn monohaenau Caco-2 ac amsugniad coluddol mewn assay darlifiad llygod mawr.(A) Pa-b gwerth grŵp G-Rg3r yn Caco-2 monolayer.(B) Pa-b gwerth grwpiau G-Rg3s yn Caco-2 monolayer.(C) Pb gwerth grŵp G-Rg3r yn Caco-2 monolayer.(D) Pb gwerth grwpiau G-Rg3s yn Caco-2 monolayer.(E) Cymhareb cynnyrch o grwpiau G-Rg3r mewn monolayer Caco-2.(F) Cymhareb cynnyrch o grwpiau G-Rg3 mewn monolayer Caco-2.(G) Canran yr amsugniad berfeddol o G-Rg3r mewn assay darlifiad mewn llygod mawr.(H) Canran yr amsugniad berfeddol o G-Rg3 mewn assay darlifiad mewn llygod mawr.Cymharwyd athreiddedd ac amsugno heb ychwanegu verapamil.Mynegir data fel gwyriad safonol cymedrig ± pum arbrawf annibynnol.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Yn gyson â gwaith cynharach20, perfformiwyd darlifiad coluddol orthotopig llygod mawr i benderfynu a yw amsugniad G-Rg3 yn y coluddyn yn cynyddu ar ôl triniaeth ferapamil.Mae Ffigurau 3G,H yn dangos profion darlifiad cynrychioliadol i werthuso canran yr amsugniad berfeddol o G-Rg3r a G-Rg3 mewn llygod mawr model canser yn ystod y cyfnodau amser uchod.Cynyddodd canran gychwynnol y defnydd G-Rg3r gwan o tua 10% i fwy nag 20% ar ôl triniaeth gyda verapamil 50 μM ac i fwy na 25% ar ôl triniaeth â 100 μM verapamil.Yn yr un modd, roedd G-Rg3, a gafodd gyfradd gychwynnol o 10%, hefyd yn dangos uchafbwynt o dros 20% ar ôl triniaeth gyda 50 μM verapamil a bron i 30% ar ôl triniaeth gyda 100 μM verapamil, gan awgrymu bod ataliad o P-gp gan verapamil yn gwella. amsugno G-berfeddol Rg3 mewn model llygoden o ganser yr ysgyfaint.
Yn ôl y dull uchod, rhannwyd llygod model canser a achosir gan B(a)P ar hap yn chwe grŵp, fel y dangosir yn Ffigur 4A.Ni welwyd unrhyw golled pwysau sylweddol nac arwyddion clinigol o wenwyndra yn y grŵp triniaeth G-Rg3 o'i gymharu â'r grŵp rheoli (data heb ei ddangos).Ar ôl 20 wythnos o driniaeth, casglwyd ysgyfaint pob llygoden.Mae Ffigur 4B yn dangos tiwmorau ysgyfaint macrosgopig mewn llygod yn y grwpiau triniaeth uchod, ac mae Ffigur 4C yn dangos micrograff ysgafn cynrychioliadol o diwmor cynrychioliadol.O ran y baich tiwmor ym mhob grŵp (Ffig. 4D), y gwerthoedd ar gyfer llygod a gafodd eu trin â G-Rg3r a G-Rg3s oedd 0.75 ± 0.29 mm3 a 0.81 ± 0.30 mm3, yn y drefn honno, tra bod y gwerthoedd ar gyfer Llygod G wedi'u trin gyda -Rg3s yn 1.63 yn y drefn honno ±0.40 mm3.llygod rheoli (p < 0.001), sy'n dangos bod triniaeth G-Rg3 yn lleihau baich tiwmor mewn llygod.Fe wnaeth gweinyddu verapamil wella'r gostyngiad hwn ymhellach: gostyngodd gwerthoedd mewn llygod verapamil + G-Rg3r o 0.75 ± 0.29 mm3 i 0.33 ± 0.25 mm3 (p < 0.01), a gostyngodd gwerthoedd ar gyfer verapamil + o 0.81 ± 0.30 mm.2 i 0.81 ± 0.30 mm. mm3 mewn llygod wedi'u trin â G. -Rg3s (p < 0.05), sy'n nodi y gall verapamil wella effaith ataliol G-Rg3 ar tumorigenesis.Nid oedd baich tiwmor yn dangos unrhyw wahaniaethau sylweddol rhwng y grŵp rheoli a'r grŵp verapamil, y grŵp G-Rg3r a'r grŵp G-Rg3s, a'r grŵp verapamil + G-Rg3r a'r grŵp verapamil + G-Rg3s.Ar ben hynny, nid oedd unrhyw wenwyndra sylweddol ar yr afu neu'r arennau yn gysylltiedig â'r triniaethau a werthuswyd (Ffigur 4E, F).
Baich tiwmor ar ôl triniaeth G-Rg3 a lefelau plasma neu berfeddol G-Rg3r a G-Rg3 yn y grwpiau a nodir.(A) Dyluniad arbrofol.(B) Tiwmorau macrosgopig mewn model llygoden.Mae tiwmorau'n cael eu nodi gan saethau.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r mewn cyfuniad â verapamil.d: G-Rg3 mewn cyfuniad â verapamil.d: Verapamil.e: rheoli.(C) Micrograff optegol o'r tiwmor wrth ei chwyddo.Ateb: 100x.b: 400X.(D) Effaith triniaeth G-Rg3 + verapamil ar faich tiwmor mewn llygod A / J.(E) Lefelau plasma'r ensym afu ALT.(F) Lefelau plasma'r ensym arennol Cr.(G) Lefelau plasma G-Rg3r neu G-Rg3 o'r grwpiau a nodir.(H) Lefelau G-Rg3r neu G-Rg3s yng ngholuddion y grwpiau a nodir.Mynegir data fel y cymedrig ± gwyriad safonol o ddyfarniadau triphlyg.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Aseswyd lefelau G-Rg3 yn y llygod model canser a achosir gan B(a)P gan UPLC-MS/MS ar ôl cyfnod triniaeth o 20 wythnos yn ôl y dull a ddisgrifir yn yr adran Dulliau.Mae ffigurau 4G a H yn dangos lefelau plasma a berfeddol G-Rg3, yn y drefn honno.Roedd lefelau plasma G-Rg3r yn 0.44 ± 0.32 μmol/L ac yn cynyddu i 1.17 ± 0.47 μmol/L gyda gweinyddu verapamil ar yr un pryd (p <0.001), tra bod lefelau G-Rg3r berfeddol yn 0.53 ± 0.08.O'i gyfuno â verapamil, cynyddodd g i 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001).Ar gyfer G-Rg3, dilynodd y canlyniadau batrwm tebyg, gan ddangos bod triniaeth verapamil wedi cynyddu bio-argaeledd llafar G-Rg3 mewn llygod A/J.
Defnyddiwyd assay hyfywedd celloedd i werthuso sytowenwyndra B(a)P a G-Rg3 ar gelloedd hEL.Dangosir y sytotocsigedd a achosir gan B(a)P mewn celloedd hEL yn Ffigur 5A, tra dangosir priodweddau anwenwynig G-Rg3r a G-Rg3 yn Ffigurau 5A a 5B.5B, C. Er mwyn gwerthuso effaith cytoprotective G-Rg3, cafodd B(a)P ei gyd-weinyddu â chrynodiadau amrywiol o G-Rg3r neu G-Rg3 i mewn i gelloedd hEL.Fel y dangosir yn Ffigur 5D, adferodd G-Rg3r mewn crynodiadau o 5 μM, 10 μM, a 20 μM hyfywedd celloedd i 58.3%, 79.3%, a 77.3%, yn y drefn honno.Gellir gweld canlyniadau tebyg hefyd yn y grŵp G-Rg3s.Pan oedd y crynodiadau o G-Rg3s yn 5 µM, 10 µM a 20 µM, adferwyd hyfywedd celloedd i 58.3%, 72.7% a 76.7%, yn y drefn honno (Ffigur 5E).).Mesurwyd presenoldeb BPDE-DNA adducts gan ddefnyddio pecyn ELISA.Dangosodd ein canlyniadau fod lefelau caethiwed BPDE-DNA wedi cynyddu yn y grŵp a driniwyd gan B(a) P o'i gymharu â'r grŵp rheoli, ond o'i gymharu â chyd-driniaeth G-Rg3, lefelau adduct BPDE-DNA yn y grŵp B(a)P B yn y grŵp a gafodd ei drin, gostyngwyd lefelau caethiwed DNA yn sylweddol.Dangosir canlyniadau triniaeth gyda B(a)P yn unig yn Ffigur 5F (1.87 ± 0.33 vs. 3.77 ± 0.42 ar gyfer G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 ar gyfer G -Rg3s, p < 0.001).
Hyfywedd celloedd a ffurfiant adduct BPDE-DNA mewn celloedd hEL sy'n cael eu trin â G-Rg3 a B(a)P.(A) Hyfywedd celloedd HEL sy'n cael eu trin â B(a)P.(B) Hyfywedd celloedd HEL wedi'u trin â G-Rg3r.(C) Hyfywedd celloedd HEL wedi'u trin â G-Rg3.(D) Hyfywedd celloedd HEL wedi'u trin â B(a)P a G-Rg3r.(H) Hyfywedd celloedd HEL sy'n cael eu trin â B(a)P a G-Rg3.(F) Lefelau adwythiad BPDE-DNA mewn celloedd hEL sy'n cael eu trin â B(a)P a G-Rg3.Mynegir data fel y cymedrig ± gwyriad safonol o ddyfarniadau triphlyg.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Canfuwyd mynegiant ensym GST ar ôl cyd-driniaeth â 10 μM B(a)P a 10 μM G-Rg3r neu G-Rg3s.Dangosodd ein canlyniadau fod B(a)P wedi atal mynegiant GST (59.7 ± 8.2% yn y grŵp G-Rg3r a 39 ± 4.5% yn y grŵp G-Rg3s), ac roedd B(a)P yn gysylltiedig â'r naill neu'r llall â G-Rg3r , neu gyda G-Rg3r, neu gyda G-Rg3r.Cyd-driniaeth gyda G-Rg3s adfer mynegiant GST.Mynegiant GST (103.7 ± 15.5% yn y grŵp G-Rg3r a 110 ± 11.1% yn y grŵp G-Rg3s, p < 0.05 a p < 0.001, yn y drefn honno, Ffig. 6A, B, ac C).Aseswyd gweithgaredd GST gan ddefnyddio pecyn profi gweithgaredd.Dangosodd ein canlyniadau fod gan y grŵp triniaeth gyfunol weithgaredd GST uwch o'i gymharu â'r grŵp B(a)P yn unig (96.3 ± 6.6% o'i gymharu â 35.7 ± 7.8% yn y grŵp G-Rg3r yn erbyn 92.3 ± 6.5 yn y grŵp G-Rg3r ).% yn erbyn 35.7 ± 7.8% yn y grŵp G-Rg3s, p < 0.001, Ffigur 6D).
Mynegiad o GST a Nrf2 mewn celloedd hEL wedi'u trin â B(a)P a G-Rg3.(A) Canfod mynegiant GST trwy blotio'r Gorllewin.(B) Mynegiant meintiol o GST mewn celloedd hEL wedi'u trin â B(a)P a G-Rg3r.(C) Mynegiant meintiol o GST mewn celloedd hEL wedi'u trin â B(a)P a G-Rg3s.(D) gweithgaredd GST mewn celloedd hEL wedi'u trin â B(a)P a G-Rg3.(E) Canfod mynegiant Nrf2 trwy blotio Gorllewinol.(F) Mynegiant meintiol o Nrf2 mewn celloedd hEL wedi'u trin â B(a)P a G-Rg3r.(G) Mynegiant meintiol o Nrf2 mewn celloedd hEL wedi'u trin â B(a)P a G-Rg3s.Mynegir data fel y cymedrig ± gwyriad safonol o ddyfarniadau triphlyg.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Er mwyn egluro'r llwybrau sy'n gysylltiedig ag atal tiwmorigenesis a achosir gan B(a) P-gyfryngol G-Rg3, aseswyd mynegiant Nrf2 gan blotio Gorllewinol.Fel y dangosir yn Ffigurau 6E, F,G, o'i gymharu â'r grŵp rheoli, dim ond lefel Nrf2 yn y grŵp triniaeth B(a)P a leihawyd;fodd bynnag, o gymharu â grŵp triniaeth B(a)P, cynyddwyd lefelau B(a) Nrf2 yn y grŵp PG-Rg3 (106 ± 9.5% ar gyfer G-Rg3r yn erbyn 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% ar gyfer G-Rg3r yn erbyn 41 ± 9.8% ar gyfer G-Rg3s, p < 0.01).
Gwnaethom gadarnhau rôl ataliol Nrf2 trwy atal mynegiant Nrf2 gan ddefnyddio RNA ymyriadol bach penodol (siRNA).Cadarnhawyd dymchwel Nrf2 gan blotio'r Gorllewin (Ffig. 7A,B).Fel y dangosir yn Ffigurau 7C, D, arweiniodd cyd-drin celloedd hEL â B(a)P a G-Rg3 at ostyngiad yn nifer y adducts BPDE-DNA (1.47 ± 0.21) o gymharu â thriniaeth gyda B(a)P ei ben ei hun yn y grŵp siRNA rheoli.) G-Rg3r oedd 4.13 ± 0.49, G-Rg3s oedd 1.8 ± 0.32 a 4.1 ± 0.57, p <0.01).Fodd bynnag, diddymwyd effaith ataliol G-Rg3 ar ffurfiad BPDE-DNA gan fwrw Nrf2.Yn y grŵp siNrf2, nid oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol mewn ffurfiant adduct BPDE-DNA rhwng cyd-driniaeth B(a)P a G-Rg3 a thriniaeth B(a)P yn unig (3.0 ± 0.21 ar gyfer G-Rg3r vs. 3.56 ± 0.32 ).ar gyfer G-Rg3r yn erbyn 3.6 ar gyfer G-Rg3s yn erbyn ±0.45 yn erbyn 4.0±0.37, p > 0.05).
Effaith dymchwel Nrf2 ar ffurfiant aduct BPDE-DNA mewn celloedd hEL.(A) Cadarnhawyd dymchwel Nrf2 gan blotio'r Gorllewin.(B) Meintioli dwyster band Nrf2.(C) Effaith dymchwel Nrf2 ar lefelau aduct BPDE-DNA mewn celloedd hEL sy'n cael eu trin â B(a)P a G-Rg3r.(D) Effaith dymchwel Nrf2 ar lefelau adduct BPDE-DNA mewn celloedd hEL sy'n cael eu trin â B(a)P a G-Rg3.Mynegir data fel y cymedrig ± gwyriad safonol o ddyfarniadau triphlyg.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Gwerthusodd yr astudiaeth hon effeithiau ataliol amrywiol ddarnau ginseng coch ar fodel llygoden o ganser yr ysgyfaint a achosir gan B(a) P, a gostyngodd triniaeth KRGB faich tiwmor yn sylweddol.O ystyried bod gan G-Rg3 y cynnwys uchaf yn y darn ginseng hwn, astudiwyd rôl bwysig y ginsenoside hwn wrth atal tumorigenesis.Fe wnaeth G-Rg3r a G-Rg3 (dau epimer o G-Rg3) leihau baich tiwmor yn sylweddol mewn model llygoden o ganser a achosir gan B(a) P.Mae G-Rg3r a G-Rg3 yn cael effeithiau gwrthganser trwy ysgogi apoptosis o gelloedd tiwmor21, gan atal tyfiant tiwmor22, atal y cylch celloedd23 ac effeithio ar angiogenesis24.Dangoswyd hefyd bod G-Rg3 yn atal metastasis cellog25, ac mae gallu G-Rg3 i wella effeithiau cemotherapi a radiotherapi wedi'i ddogfennu26,27.Dangosodd Poon et al y gallai triniaeth G-Rg3 leihau effeithiau genotocsig B(a)P28.Mae'r astudiaeth hon yn dangos potensial therapiwtig G-Rg3 wrth dargedu moleciwlau carcinogenig amgylcheddol ac atal canser.
Er gwaethaf eu potensial proffylactig da, mae bioargaeledd llafar gwael ginsenosides yn her i ddefnydd clinigol y moleciwlau hyn.Dangosodd dadansoddiad ffarmacocinetig o weinyddu ginsenosides ar lafar mewn llygod mawr fod ei fio-argaeledd yn dal i fod yn llai na 5%29.Dangosodd y profion hyn, ar ôl y cyfnod triniaeth o 20 wythnos, mai dim ond lefelau gwaed Rg5 a leihaodd.Er bod mecanwaith sylfaenol bio-argaeledd gwael yn dal heb ei egluro, credir bod P-gp yn ymwneud ag alllif ginsenosides.Dangosodd y gwaith hwn am y tro cyntaf bod rhoi verapamil, atalydd P-gp, yn cynyddu bio-argaeledd llafar G-Rg3r a G-Rg3s.Felly, mae'r canfyddiad hwn yn awgrymu bod G-Rg3r a G-Rg3s yn gweithredu fel swbstradau o P-gp i reoleiddio ei alllif.
Mae'r gwaith hwn yn dangos bod triniaeth gyfunol â verapamil yn cynyddu bio-argaeledd geneuol G-Rg3 mewn model llygoden o ganser yr ysgyfaint.Ategir y canfyddiad hwn gan gynnydd mewn trafnidiaeth drawsgellog berfeddol o G-Rg3 ar rwystr P-gp, a thrwy hynny gynyddu ei amsugno.Dangosodd profion mewn celloedd Caco2 fod triniaeth verapamil yn lleihau alllif G-Rg3r a G-Rg3s tra'n gwella athreiddedd pilen.Mae astudiaeth gan Yang et al.Mae astudiaethau wedi dangos bod triniaeth â cyclosporine A (atalydd P-gp arall) yn cynyddu bio-argaeledd Ginsenoside Rh2 o werth sylfaenol o 1%20 i fwy na 30%.Dangosodd cyfansoddion Ginsenosides K a Rg1 hefyd ganlyniadau tebyg30,31.Pan gafodd verapamil a cyclosporin A eu cyd-weinyddu, gostyngwyd elifiad cyfansawdd K mewn celloedd Caco-2 yn sylweddol o 26.6 i lai na 3, tra bod ei lefelau mewngellol wedi cynyddu 40-plyg30.Ym mhresenoldeb verapamil, cynyddodd lefelau Rg1 mewn celloedd epithelial ysgyfaint llygod mawr, gan awgrymu rôl i P-gp mewn efflux ginsenoside, fel y dangosir gan Meng et al.31.Fodd bynnag, ni chafodd verapamil yr un effaith ar elifiad rhai ginsenosides (fel Rg1, F1, Rh1 a Re), gan nodi nad yw swbstradau P-gp yn effeithio arnynt, fel y dangosir gan Liang et al.32 .Gall yr arsylwad hwn fod yn gysylltiedig â chyfranogiad cludwyr eraill a strwythurau ginsenoside amgen.
Mae mecanwaith effaith ataliol G-Rg3 ar ganser yn aneglur.Mae astudiaethau blaenorol wedi dangos bod G-Rg3 yn atal difrod DNA ac apoptosis trwy leihau straen ocsideiddiol a llid16,33, a allai fod yn fecanwaith sylfaenol ar gyfer atal tiwmorau a achosir gan B(a) P.Mae rhai adroddiadau yn nodi y gellir lleihau genowenwyndra a achosir gan B(a)P trwy fodiwleiddio ensymau cam II i ffurfio BPDE-DNA34.Mae GST yn ensym cam II nodweddiadol sy'n atal BPDE-DNA rhag ffurfio adduct trwy hyrwyddo rhwymo GSH i BPDE, a thrwy hynny leihau'r difrod DNA a achosir gan B(a)P35.Mae ein canlyniadau'n dangos bod triniaeth G-Rg3 yn lleihau cytotoxicity a achosir gan B(a) P a ffurfiant adduct BPDE-DNA mewn celloedd hEL ac yn adfer mynegiant a gweithgaredd GST in vitro.Fodd bynnag, roedd yr effeithiau hyn yn absennol yn absenoldeb Nrf2, sy'n awgrymu bod G-Rg3 yn achosi effeithiau cytoprotective trwy'r llwybr Nrf2.Mae Nrf2 yn ffactor trawsgrifio mawr ar gyfer ensymau dadwenwyno cam II sy'n hyrwyddo clirio xenobiotig36.Mae actifadu llwybr Nrf2 yn achosi sytoprotection ac yn lleihau niwed i feinwe37.At hynny, mae sawl adroddiad wedi cefnogi rôl Nrf2 fel atalydd tiwmor mewn carcinogenesis38.Mae ein hastudiaeth yn dangos bod sefydlu llwybr Nrf2 gan G-Rg3 yn chwarae rhan reoleiddiol bwysig mewn genowenwyndra a achosir gan B(a) P trwy achosi dadwenwyno B(a)P trwy actifadu ensymau cam II, a thrwy hynny atal y broses tumorigenesis.
Mae ein gwaith yn datgelu potensial ginseng coch i atal canser yr ysgyfaint a achosir gan B(a)P mewn llygod trwy gyfraniad pwysig ginsenoside G-Rg3.Mae bio-argaeledd llafar gwael y moleciwl hwn yn rhwystro ei gymhwysiad clinigol.Fodd bynnag, mae'r astudiaeth hon yn dangos am y tro cyntaf bod G-Rg3 yn swbstrad o P-gp, ac mae rhoi atalydd P-gp yn cynyddu bio-argaeledd G-Rg3 in vitro ac in vivo.Mae G-Rg3 yn lleihau sytowenwyndra a achosir gan B(a) P trwy reoleiddio'r llwybr Nrf2, a all fod yn fecanwaith posibl ar gyfer ei swyddogaeth ataliol.Mae ein hastudiaeth yn cadarnhau potensial ginsenoside G-Rg3 ar gyfer atal a thrin canser yr ysgyfaint.
Cafwyd llygod A/J benywaidd chwe wythnos oed (20 ± 1 g) a llygod mawr Wistar gwrywaidd 7 wythnos oed (250 ± 20 g) o Labordy Jackson (Bar Harbour, UDA) a Sefydliad Sŵoleg Wuhan.Prifysgol (Wuhan, Tsieina).Darparodd y Ganolfan Casgliad Diwylliant Math Tsieineaidd (Wuhan, Tsieina) gelloedd Caco-2 a hEL i ni.Mae Sigma-Aldrich (St. Louis, UDA) yn ffynhonnell B(a)P a tricaprine.Prynwyd ginsenosides wedi'u puro G-Rg3r a G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), pecyn profi amlhau CellTiter-96 (MTS), verapamil, cyfrwng hanfodol lleiaf (MEM), a serwm buchol ffetws (FBS) gan Chengdu Must Bio-Technology .Co., Ltd.(Chengdu, Tsieina).Prynwyd pecyn mini DNA QIAamp a phecyn ELISA aduct BPDE-DNA gan Qiagen (Stanford, CA, UDA) a Cell Biolabs (San Diego, CA, UDA).Prynwyd pecyn profi gweithgaredd GST a phecyn profi cyfanswm protein (dull BCA safonol) gan Solarbio (Beijing, Tsieina).Mae'r holl echdynion ginseng coch yn cael eu storio yn Labordy Mingyu 7. Mae Prifysgol Bedyddwyr Hong Kong (Hong Kong, Tsieina) a Chanolfan Ganser Korea (Seoul, Korea) yn ffynonellau masnachol o echdynnu CRG a detholiadau ginseng coch amrywiol o darddiad Corea amrywiol (gan gynnwys KRGA, KRGB a KRGC).Gwneir ginseng coch o wreiddiau ginseng ffres 6 oed.Mae detholiad ginseng coch yn cael ei sicrhau trwy olchi ginseng â dŵr dair gwaith, yna canolbwyntio'r dyfyniad dyfrllyd, ac yn olaf sychu ar dymheredd isel i gael powdr echdynnu ginseng.Prynwyd gwrthgyrff (gwrth-Nrf2, gwrth-GST, a β-actin), imiwnoglobwlin gwrth-gwningen G (IgG) marchruddygl-cyfunedig, adweithydd trawslifiad, siRNA rheoli, a siRNA Nrf2 gan Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). .), UDA).
Cafodd celloedd Caco2 a hEL eu meithrin mewn dysglau meithrin celloedd 100 mm2 gyda MEM yn cynnwys 10% FBS ar 37 ° C mewn awyrgylch llaith o 5% CO2.Er mwyn pennu effaith amodau triniaeth, cafodd celloedd hEL eu deor â chrynodiadau gwahanol o B(a)P a G-Rg3 yn MEM am 48 h.Gellir dadansoddi neu gasglu celloedd ymhellach i baratoi darnau di-gell.
Cymeradwywyd yr holl arbrofion gan Bwyllgor Moeseg Anifeiliaid Arbrofol Coleg Meddygol Tongji, Prifysgol Gwyddoniaeth a Thechnoleg Huazhong (Cymeradwyaeth Rhif 2019; Rhif Cofrestru 4587TH).Perfformiwyd yr holl arbrofion yn unol â chanllawiau a rheoliadau perthnasol, a chynhaliwyd yr astudiaeth yn unol â chanllawiau Ymchwil Anifeiliaid: Adrodd ar Arbrofion In Vivo (ARRIVE).Cafodd llygod A/J wyth wythnos oed eu chwistrellu'n fewnperitoneol gyntaf â B(a)P mewn hydoddiant tricaprine (100 mg/kg, 0.2 ml).Ar ôl wythnos, rhannwyd y llygod ar hap yn grwpiau rheoli a gwahanol grwpiau triniaeth, 15 o lygod ym mhob grŵp, a'u gosod unwaith y dydd.Ar ôl 20 wythnos o driniaeth, aberthwyd anifeiliaid gan asffycsia CO2.Casglwyd a gosodwyd yr ysgyfaint am 24 awr.Cafodd nifer y tiwmorau arwynebol a meintiau tiwmor unigol eu mesur ar gyfer pob ysgyfaint o dan ficrosgop dyrannu.Cyfrifwyd amcangyfrifon cyfaint tiwmor (V) gan ddefnyddio'r mynegiant canlynol: V (mm3) = 4/3πr3, lle r yw'r diamedr tiwmor.Roedd swm net yr holl gyfeintiau tiwmor yn ysgyfaint llygod yn cynrychioli cyfanswm cyfaint y tiwmor, ac roedd cyfanswm cyfaint cyfartalog y tiwmor ym mhob grŵp yn cynrychioli llwyth y tiwmor.Casglwyd samplau gwaed cyfan a choluddol a'u storio ar −80°C i'w pennu gan UPLC-MS/MS.Casglwyd serwm a defnyddiwyd dadansoddwr cemeg awtomataidd i ddadansoddi lefelau alanine aminotransferase (ALT) a creatinin serwm (Cr) i asesu gweithrediad yr afu a'r arennau.
Tynnwyd samplau a gasglwyd o storfa oer, eu dadmer, eu pwyso a'u rhoi mewn tiwbiau fel y disgrifir uchod.At hyn ychwanegwyd 0.5 μM phlorizin (safon fewnol) mewn hydoddiant methanol 0.8 ml.Yna cafodd y meinwe ei homogeneiddio gan ddefnyddio Tissue-Tearor ac yna trosglwyddwyd y homogenad i diwb microcentrifuge 1.5 ml.Cafodd y gymysgedd ei centrifugio ar 15500 rpm am 15 munud.Ar ôl tynnu 1.0 ml o supernatant, sychwch â nitrogen.Defnyddiwyd dau gant o ficrolitrau o fethanol ar gyfer adferiad.Mae'r gwaed yn cael ei gasglu a'i brosesu ar un llinell ac fe'i defnyddir fel cyfeirnod ar gyfer pob mesuriad.
Cafodd platiau Transwell 24-ffynnon eu hadu â chelloedd 1.0 × 105 Caco-2 fesul ffynnon i werthuso gwelliant posibl trafnidiaeth G-Rg3 trwy ychwanegu verapamil.Ar ôl 3 wythnos o feithriniad, golchwyd celloedd â HBSS a'u deori ymlaen llaw ar 37 ° C.Chwistrellwyd 400 μL o 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, neu gymysgedd â 50 neu 100 μM verapamil) ar ochr basolateral neu apical y monolayer, ac ychwanegwyd 600 μL o hydoddiant HBSS at y llall ochr.Casglwch 100 µl o gyfrwng diwylliant ar yr amseroedd penodedig (0, 15, 30, 45, 60, 90 a 120 munud) ac adiwch 100 µl o HBSS i greu'r gyfrol hon.Roedd samplau'n cael eu storio ar −4 °C nes iddynt gael eu canfod gan UPLC-MS/MS.Defnyddir y mynegiad Papp = dQ/(dT × A × C0) i feintioli athreiddedd apigol a basoochrol ymddangosiadol ac i'r gwrthwyneb (Pa-b a Pb-a, yn y drefn honno);dQ/dT yw'r newid mewn crynodiad, A (0.6 cm2) yw arwynebedd arwyneb y monolayer, a C0 yw'r crynodiad rhoddwr cychwynnol.Cyfrifir y gymhareb efflux fel Pb-a/Pa-b, sy'n cynrychioli cyfradd efflux y cyffur astudio.
Roedd llygod mawr Wistar gwrywaidd yn ymprydio am 24 awr, yn yfed dŵr yn unig, ac yn cael eu hanestheteiddio â chwistrelliad mewnwythiennol o hydoddiant pentobarbital 3.5%.Mae gan y tiwb silicon mewndiwb ddiwedd y dwodenwm fel y fynedfa a diwedd yr ilewm fel yr allanfa.Defnyddiwch bwmp peristaltig i bwmpio'r fewnfa gyda 10 µM G-Rg3r neu G-Rg3s mewn HBSS isotonig ar gyfradd llif o 0.1 ml/munud.Aseswyd effaith verapamil trwy ychwanegu 50 μM neu 100 μM o'r cyfansawdd i 10 μM G-Rg3r neu G-Rg3s.Perfformiwyd UPLC-MS/MS ar echdynion darlifiad a gasglwyd ar bwyntiau amser 60, 90, 120, a 150 munud ar ôl dechrau darlifiad.Mae canran yr amsugniad yn cael ei feintioli gan y fformiwla % amsugniad = (1 – Cout/Cin) × 100%;mynegir crynodiad G-Rg3 yn yr allfa a'r fewnfa gan Cout a Cin, yn y drefn honno.
Cafodd celloedd hEL eu hadu mewn platiau 96-ffynnon ar ddwysedd o gelloedd 1 × 104 fesul ffynnon a'u trin â B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) neu G-Rg3 wedi'i hydoddi mewn DMSO .Yna cafodd y cyffuriau eu gwanhau â chyfrwng diwylliant i grynodiadau amrywiol (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) dros 48 awr.Gan ddefnyddio pecyn assay MTS oedd ar gael yn fasnachol, roedd celloedd yn destun protocol safonol ac yna'n cael eu mesur gan ddefnyddio darllenydd microplate ar 490 nm.Aseswyd lefel hyfywedd celloedd y grwpiau a gafodd eu trin ar y cyd â B(a)P (10 μM) a G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) yn ôl y dull uchod a'i gymharu â'r grŵp heb ei drin.
Cafodd celloedd hEL eu hadu mewn platiau 6-ffynnon ar ddwysedd o 1 × 105 o gelloedd/ffynnon a'u trin â 10 μMB(a)P ym mhresenoldeb neu absenoldeb 10 μM G-Rg3.Ar ôl 48 awr o driniaeth, echdynnwyd DNA o gelloedd hEL gan ddefnyddio Pecyn Mini DNA QIAamp yn unol â phrotocol y gwneuthurwr.Canfuwyd ffurfio aducts BPDE-DNA gan ddefnyddio pecyn BPDE-DNA aduct ELISA.Mesurwyd lefelau cymharol o aduct BPDE-DNA gan ddefnyddio darllenydd microplate trwy fesur amsugnedd ar 450 nm.
Cafodd celloedd hEL eu hadu mewn platiau 96-ffynnon ar ddwysedd o gelloedd 1 × 104 fesul ffynnon a'u trin â 10 μMB (a) P yn absenoldeb neu bresenoldeb 10 μM G-Rg3 am 48 h.Mesurwyd gweithgaredd GST gan ddefnyddio pecyn assay gweithgaredd GST masnachol yn unol â phrotocol y gwneuthurwr.Mesurwyd gweithrediad GST cymharol trwy amsugnedd ar 450 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate.
Roedd celloedd hEL yn cael eu golchi â PBS oer iâ ac yna'n cael eu gorchuddio gan ddefnyddio byffer assay radioimmunoprecipitation sy'n cynnwys atalyddion proteas ac atalyddion ffosffatas.Ar ôl meintioli protein gan ddefnyddio pecyn profi cyfanswm protein, gwahanwyd 30 μg o brotein ym mhob sampl gan 12% SDS-PAGE a'i drosglwyddo i bilen PVDF trwy electrofforesis.Cafodd pilenni eu rhwystro â 5% o laeth sgim a'u deor â gwrthgyrff cynradd dros nos ar 4°C.Ar ôl deori gyda gwrthgyrff eilaidd wedi'u cyfuno â marchruddygl peroxidase, ychwanegwyd adweithyddion cemiluminescence gwell i ddelweddu'r signal rhwymo.Mesurwyd dwyster pob band protein gan ddefnyddio meddalwedd ImageJ.
Defnyddiwyd meddalwedd GraphPad Prism 7.0 i ddadansoddi'r holl ddata, wedi'i fynegi fel cymedrig ± gwyriad safonol.Aseswyd amrywiad rhwng grwpiau triniaeth gan ddefnyddio prawf t Myfyriwr neu ddadansoddiad un ffordd o amrywiant, gyda gwerth P <0.05 yn nodi arwyddocâd ystadegol.
Mae'r holl ddata a gafwyd neu a ddadansoddwyd yn ystod yr astudiaeth hon wedi'u cynnwys yn yr erthygl gyhoeddedig hon a'r ffeiliau gwybodaeth atodol.
Torre, LA, Siegel, RL a Jemal, A. Ystadegau canser yr ysgyfaint.adferf.Wedi dod i ben.meddygaeth.bioleg.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Carsinogenau tybaco, eu biomarcwyr a chanser a achosir gan dybaco.Nat.Caplan canser.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH a Venitt, S. Mae DNA a phrotein yn dod i mewn i feinweoedd dynol o ganlyniad i ddod i gysylltiad â mwg tybaco.rhyngwladoldeb.J. Cancr.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA ac Yu M. Effaith Houttuynia cordata a silibinin ar diwmorigenesis ysgyfaint a achosir gan benso(a) pyrene mewn llygod A/J.Canser 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et al.Cynnyrch naturiol gwrthganser wedi'i ynysu o ddeunyddiau meddyginiaethol Tsieineaidd.gên.meddygaeth.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Effeithlonrwydd polyphenon E, ginseng coch, a rapamycin ar diwmorigenesis ysgyfaint a achosir gan benzo(a) pyrene mewn llygod A/J.Canser 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS a Yuan, KS Red, cymryd rhan mewn therapi canser.gên.J. Nutt.meddygaeth.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS a Gao, L. Ginsenosides yn y gwreiddiau a dail o ginseng Americanaidd.J. Amaeth.Cemeg bwyd.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA a Yuan KS Ffarmacoleg ginseng: llawer o gydrannau a llawer o effeithiau.biocemeg.ffarmacoleg.58, 1685–1693 (1999).
Amser post: Medi-17-2023