Eskerrik asko Nature.com bisitatzeagatik.Erabiltzen ari zaren arakatzailearen bertsioak CSS laguntza mugatua du.Emaitza onenak lortzeko, zure arakatzailearen bertsio berriagoa erabiltzea gomendatzen dugu (edo Internet Explorer-en bateragarritasun modua desaktibatzea).Bitartean, etengabeko laguntza bermatzeko, gunea estilorik edo JavaScriptik gabe erakusten ari gara.
Ginseng gorria Asiako medikuntza tradizionalean erabili izan da ehunka urtez.Ikerketa honetan, eskualde ezberdinetan hazitako lau ginseng gorri motak (Txinako ginseng gorria, Koreako ginseng gorria A, Koreako ginseng gorria B eta Koreako ginseng gorria C) kartzinogenoek eragindako birikaren sorrera eta hazkuntza eragozteko duten gaitasuna ebaluatu dugu. tumoreak.Benzo(a)pirenoa (B(a)P) proba A/J saguei egin zitzaien, eta ginseng gorri korearra B lau ginseng gorrien artean tumoreen zama murrizteko eraginkorrena izan zen.Horrez gain, hainbat ginsenosidoren edukia aztertu dugu (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 eta Rg5) lau ginseng gorriaren laburpenetan eta Koreako ginseng gorri B-k zuela aurkitu genuen. ginsenoside Rg3 (G-Rg3) mailarik altuenak, G-Rg3-k bere eraginkortasun terapeutikoan paper garrantzitsua izan dezakeela iradokitzen du.Lan honek erakusten du G-Rg3 biodisponibilitate nahiko baxua duela.Hala ere, G-Rg3 P-gp inhibitzaile verapamilarekin batera administratu zenean, G-Rg3-ren isurketa Caco-2 zeluletara gutxitu zen, G-Rg3-ren hesteetako xurgapen-tasa handitu zen arratoi eredu batean eta G-Rg3. handitu zen.Caco-2 zeluletan, Rg3-ren irteera gutxitzen da, eta Rg3-ren kontzentrazio-maila.G-Rg3 hesteetan eta plasman handitzen da, eta tumoreak prebenitzeko duen gaitasuna ere hobetzen da B(a)P-k eragindako tumorigenesiaren arratoi-eredu batean.Era berean, G-Rg3-k giza biriketako zeluletan B(a)P-k eragindako zitotoxikotasuna eta DNA aduktuen eraketa murrizten zituela eta II faseko entzimen adierazpena eta jarduera berreskuratu zituen Nrf2 bidearen bidez, ekintza-mekanismo potentzialarekin erlazionatuta egon daitekeela. G inhibizioaren -Rg3..Biriketako tumoreen agerpenari buruz.Gure ikerketak G-Rg3-ren paper garrantzitsua frogatzen du biriketako tumoreak sagu ereduetan bideratzeko.Ginsenoside honen ahozko biodisponibilitatea hobetzen da P-glikoproteina bideratuz, molekula minbiziaren aurkako efektuak izan ditzan.
Biriketako minbizi mota ohikoena zelula ez-txikietako biriketako minbizia (NSCLC) da, hau da, Txinan eta Ipar Amerikan minbiziaren heriotza-kausa nagusietako bat1,2.Biriketako zelula ez-txikietako minbizia izateko arriskua areagotzen duen faktore nagusia erretzea da.Zigarroen keak 60 kartzinogeno baino gehiago ditu, besteak beste, bentzo(a)pirenoa (B(a)P), nitrosamina eta radonaren desintegrazioko isotopo erradioaktiboak.3 B(a)P hidrokarburo aromatiko poliziklikoak dira zigarroaren toxikotasunaren kausa nagusia. kea.B(a)P-rekin esposizioan, P450 zitokromoak B(a)P-7,8-dihidrodiol-9,10-epoxido (BPDE) bihurtzen du, eta DNArekin erreakzionatzen du BPDE-DNA aduktua sortzeko 4. Gainera, hauek aduktuek biriketako tumorigenesia eragiten dute tumore-fasea eta giza biriketako tumoreen antzeko histopatologia duten saguetan5.Ezaugarri honek B(a)P-k eragindako biriketako minbiziaren eredua sistema egokia bihurtzen du minbiziaren aurkako propietate posibleak dituzten konposatuak ebaluatzeko.
Arrisku handiko taldeetan, batez ere erretzaileetan, biriketako minbizia garatzea prebenitzeko estrategia posible bat kimioprebentzio-agenteak erabiltzea da epitelio barneko lesio neoplasikoen garapena ezabatzeko eta, ondorioz, haien ondorengo gaiztotasunera ekiditeko.Animalien ikerketek erakusten dute kimioprebentzioko hainbat agente eraginkorrak direla6.Gure aurreko txostenak7 nabarmendu zituen ginseng gorriak biriketako minbizian dituen prebentzio-efektu onak.Belar hau mendeetan zehar erabili izan da Asiako medikuntza tradizionalean bizitza eta osasuna luzatzeko, eta frogatu da tumoreen aurkako efektuak dituela8.
Ginseng-aren faktore aktiboa ginsenoside da, markatzaile konposatu gisa erabiltzen dena ginsengaren laburpenen kalitatea ebaluatzeko.Ginseng gordinaren laburpenen analisi kuantitatiboak normalean ginsenosido batzuk erabiltzen ditu, RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 eta Rc9,10 barne.Ginsenosidoek erabilera kliniko gutxi dute ahozko biodisponibilitate oso eskasa dela eta11.Bioeskuragarritasun eskas horren mekanismoa argi ez dagoen arren, P-glikoproteinak (P-gp)12 eragindako ginsenosiden isurketa izan daiteke kausa.P-gp ATP lotzeko kasete garraiatzaileen superfamiliako isurketa-garraiatzaile garrantzitsuenetako bat da, eta ATP hidrolisiaren energia erabiltzen du zelula barneko substantziak kanpoko ingurunera askatzeko.P-gp garraiatzaileak normalean hesteetan, giltzurrunetan, gibelean eta heste-entzefaloan hesteetan banatuta daude13.P-gp-k paper garrantzitsua du hesteetako xurgapenean, eta P-gp-aren inhibizioak minbiziaren aurkako sendagai batzuen ahozko xurgapena eta erabilgarritasuna areagotzen ditu12,14.Literaturan lehenago erabilitako inhibitzaileen adibideak verapamila eta A15 ziklosporina dira.Lan honek B(a)P-k biriketako minbizia ikertzeko sagu-sistema bat ezartzea dakar, Txinako eta Koreako ginseng gorri-estraktu ezberdinek gaixotasun gaiztoak eragiteko duten gaitasuna ebaluatzeko.Estraktuak banan-banan aztertu ziren kartzinogenian eragina izan dezaketen ginsenosido espezifikoak identifikatzeko.Verapamila P-gp bideratzeko eta minbiziaren aurkako ginsenosidoen ahozko bioerabilgarritasuna eta eraginkortasun terapeutikoa hobetzeko erabili zen.
Ginseng saponinek kartzinogenesian efektu terapeutikoak eragiten dituen mekanismoa ez dago argi.Ikerketek frogatu dute hainbat ginsenosidoek kartzinogenoek eragindako DNA kalteak murrizten dituztela estres oxidatiboa murriztuz eta II faseko detoxifikazio-entzimak aktibatuz, horrela zelulen kaltea saihestuz.Glutation S-transferasa (GST) kartzinogenoek eragindako DNAren kaltea murrizteko behar den II faseko entzima tipikoa da17.Eritroide nuklearra 2-rekin erlazionatutako 2 faktorea (Nrf2) transkripzio-faktore garrantzitsu bat da, redox homeostasia erregulatzen duena eta II faseko entzimen eta antioxidatzaile erantzun zitobabesleak aktibatzen dituena18.Gure ikerketak identifikatutako ginsenosidoek B(a)P-k eragindako zitotoxikotasuna murrizteko eta BPDE-DNA aduktuaren eraketa murrizteko ginsenosidoen ondorioak ere aztertu zituen, baita II faseko entzimak induzitzeko ere, biriketako zelula normaletan Nrf2 bidea modulatuz.
B(a)P-k eragindako minbiziaren saguaren eredua ezartzea bat dator aurreko lanarekin5.1A irudiak B(a)P, urak (kontrola), Txinako ginseng gorriaren (CRG), Koreako ginseng gorriaren A (KRGA) eta Koreako gorriaren ondorioz sortutako 20 asteko tratamenduaren diseinu esperimentala erakusten du. ginseng.Extract B (KRGB) eta Korean Red Ginseng Extract C (KRGC).20 astez ginseng gorriaren tratamenduaren ondoren, saguak CO2 asfixiaz sakrifikatu ziren.1B irudiak biriketako tumore makroskopikoak erakusten ditu ginseng gorri mota ezberdinekin tratatutako animalietan, eta 1C irudiak tumore lagin baten argi mikrografia adierazgarria erakusten du.KRGB tratatutako animalien tumore-zama (1,5 ± 0,35) kontroleko animaliena baino txikiagoa izan zen (0,82 ± 0,2, P <0,05), 1D irudian ikusten den moduan.Tumorearen karga inhibitzeko batez besteko maila %45ekoa izan zen.Probatutako beste ginseng gorrien laburpen batzuek ez zuten tumore-kargan halako aldaketa esanguratsurik erakutsi (P > 0,05).Ginseng gorriaren tratamenduaren 20 asteetan zehar ez zen albo-ondorio nabaririk ikusi saguaren ereduan, gorputz-pisuan aldaketarik ez (daturik agertzen ez) eta gibeleko edo giltzurruneko toxikotasunik (1E, F irudia).
Ginseng gorriak A/J saguetan biriketako tumorearen garapena tratatzen du.(A) Diseinu esperimentala.(B) Biriketako tumore handiak sagu eredu batean.Tumoreak gezien bidez adierazten dira.a: Txinako ginseng gorri taldea.b: Korean ginseng gorriaren A taldea.c: Korean ginseng gorri taldea B. d: Korean ginseng gorri taldea C. d: Kontrol taldea.(C) Biriketako tumore bat erakusten duen argi mikrografia.Handipena: 100. b: 400. (D) Tumore-karga ginseng gorriko extract taldean.(E) ALT gibeleko entzimaren maila plasmatikoak.(F) Cr giltzurrun-entzimaren maila plasmatikoak.Datuak batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazten dira.*P <0,05.
Ikerketa honetan identifikatutako ginseng gorriaren laburpenak ultra-errendimenduko kromatografia likidoaren tandem masa-espektrometriaren bidez (UPLC-MS/MS) aztertu ziren ginsenosido hauek kuantifikatzeko: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 eta Rg5.Analitoak neurtzeko erabilitako UPLC eta MS baldintzak aurreko txosten batean deskribatu ziren19.2A irudian lau ginseng gorrien laburpenen UPLC-MS/MS kromatogramak erakusten dira.Desberdintasun esanguratsuak zeuden ginsenosidoen eduki osoan, CRGn ginsenosidoen eduki handiena (590,27 ± 41,28 μmol/L) (2B irudia).Ginsenosido indibidualak ebaluatzean (2C irudia), KRGBk G-Rg3-ren maila altuena erakutsi zuen beste ginsenosidoekin alderatuta (58,33 ± 3,81 μmol/L G-Rg3s eta 41,56 ± 2,88 μmol/L G -Rg3r).L).ginseng gorri mota (P < 0,001).G-Rg3 G-Rg3r eta G-Rg3s estereoisomeroen parean gertatzen da, 20 karbonoan hidroxilo taldearen posizioan desberdinak direnak (2D. irudia).Emaitzek adierazten dute G-Rg3r edo G-Rg3 minbiziaren aurkako potentzial garrantzitsua izan dezaketela B(a)P-k eragindako minbizi-sagu eredu batean.
Ginsenosidoen edukia ginseng gorriko hainbat extractetan.(A) Lau ginseng gorriaren laburpenen UPLC-MS/MS kromatogramak.(B) Adierazitako laburpenetan ginsenoside eduki osoaren estimazioa.(C) Etiketatutako laburpenetan ginsenosido indibidualak hautematea.(D) G-Rg3r eta G-Rg3s ginsenosido estereoisomeroen egiturak.Datuak determinazio hirukoiztuen batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazten dira.***P <0,001.
UPLC-MS/MS azterketak 20 astez tratamenduaren ondoren hesteetako eta odol laginetan ginsenosidoak kuantifikatu behar izan zituen.KRGB bidezko tratamenduak odolean 0,0063 ± 0,0005 μg/ml Rg5 baino ez zituela erakutsi zuen.Ez zen gainerako ginsenosidorik detektatu, ahozko biodisponibilitate eskasa eta, beraz, ginsenosido horien esposizioa murriztu zela adieraziz.
Caco-2 koloneko adenokartzinomaren zelula-lerroa morfologikoki eta biokimikoki giza hesteetako epitelio-zelulen antzekoa da, heste-hesi epitelialean zehar enterozitoen garraioa ebaluatzeko duen erabilgarritasuna erakutsiz.Azterketa hori lehenagoko ikerketa batean oinarritu zen 20 .3A,B,C,D,E,F irudietan G-Rg3r eta G-Rg3 transzelularraren garraioaren irudi adierazgarriak erakusten dira Caco-2 monogeruza eredua erabiliz.G-Rg3r edo G-Rg3 transzelularraren garraioa Caco-2 monogeruzetan zehar basolateraletik apikarako (Pb-a) alde apikaletik basolateralera (Pa-b) baino nabarmen handiagoa izan zen.G-Rg3rrentzat, batez besteko Pa-b balioa 0,38 ± 0,06 izan zen, 0,73 ± 0,06ra igo zen 50 μmol/L verapamilarekin tratatu ondoren eta 1,14 ± 0,09ra 100 μmol/L verapamilarekin (p < 0,001, 0,001 eta 0,09). hurrenez hurren; 2. irudia).3A).G-Rg3-ren behaketek antzeko eredua jarraitu zuten (3B. irudia), eta emaitzek erakutsi zuten verapamilaren tratamenduak G-Rg3r eta G-Rg3-ren garraioa hobetu zuela.Verapamil tratamenduak batez besteko Pb-a eta G-Rg3r eta G-Rg3s isurketa ratioak (3C, D, E, F irudia) gutxitzea eragin zuen, verapamilaren tratamenduak Caco-2 efluxu-zeluletan ginsenoside edukia murrizten duela adieraziz..
G-Rg3 transzelularraren garraioa Caco-2 monogeruzetan eta heste-xurgapena arratoi-perfusio-saiakuntza batean.(A) G-Rg3r taldearen Pa-b balioa Caco-2 monogeruzan.(B) Caco-2 monogeruzako G-Rg3s taldeen Pa-b balioa.(C) G-Rg3r taldearen Pb balioa Caco-2 monogeruzan.(D) Caco-2 monogeruzako G-Rg3s taldeen Pb balioa.(E) G-Rg3r taldeen etekin erlazioa Caco-2 monogeruza batean.(F) G-Rg3 taldeen etekin-erlazioa Caco-2 monogeruza batean.(G) G-Rg3r-ren hesteetako xurgapenaren ehunekoa arratoietan perfusio-saio batean.(H) G-Rg3-ren heste-xurgapenaren ehunekoa arratoietan perfusio-saiakuntza batean.Iragazkortasuna eta xurgapena verapamila gehitu gabe alderatu ziren.Datuak bost esperimentu independenteren batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazten dira.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Aurreko lanarekin bat etorriz20, arratoien heste-perfusio ortotopikoa egin zen verapamilaren tratamenduaren ondoren G-Rg3-ren xurgapena hesteetan handitzen den zehazteko.3G, H irudiek perfusio-saio adierazgarriak erakusten dituzte, aurreko denbora-tarteetan minbizi ereduko arratoietan G-Rg3r eta G-Rg3 hesteetako xurgapenaren ehunekoa ebaluatzeko.G-Rg3r ahularen hasierako portzentajea % 10 gutxi gorabehera % 20 baino gehiagora igo zen 50 μM verapamilarekin tratatu ondoren eta % 25 baino gehiagora 100 μM verapamilarekin tratatu ondoren.Era berean, G-Rg3-k, hasierako %10eko aprobetxamendua izan zuena, %20tik gorako gailurra ere erakutsi zuen 50 μM verapamilarekin tratatu ondoren eta ia % 30ekoa 100 μM verapamilarekin tratatu ondoren, iradokitzen du verapamilek P-gp-aren inhibizioak hobetzen duela. hesteetako G-xurgapena Rg3 biriketako minbiziaren sagu eredu batean.
Goiko metodoaren arabera, B(a)P-k eragindako minbiziaren ereduko saguak ausaz sei taldetan banatu ziren, 4A irudian ikusten den moduan.G-Rg3 tratamendu-taldean ez zen pisu galera esanguratsurik edo toxikotasun-seinale klinikorik ikusi kontrol-taldearekin alderatuta (datuak ez dira erakusten).20 asteko tratamenduaren ondoren, sagu bakoitzaren birikak bildu ziren.4B irudiak biriketako tumore makroskopikoak erakusten ditu goiko tratamendu taldeetako saguetan, eta 4C irudiak tumore adierazgarri baten argi mikrografia adierazgarria erakusten du.Talde bakoitzeko tumore-kargari dagokionez (4D. irudia), G-Rg3r eta G-Rg3s-ekin tratatutako saguen balioak 0,75 ± 0,29 mm3 eta 0,81 ± 0,30 mm3 izan ziren, hurrenez hurren, tratatutako G Saguentzako balioak, berriz. -Rg3-ekin 1,63 ±0,40 mm3 ziren hurrenez hurren.kontroleko saguak (p < 0,001), G-Rg3 tratamenduak saguetan tumore-zama murriztu zuela adieraziz.Verapamilaren administrazioak are gehiago hobetu zuen murrizketa hau: verapamil+ G-Rg3r saguen balioak 0,75 ± 0,29 mm3-tik 0,33 ± 0,25 mm3-ra (p < 0,01) jaitsi ziren, eta verapamil+-ren balioak 0,81 ± 0,30 mm3 ± 0,30 ± 0,291 ± 0,29 ± 0,29 mm3-ra. mm3 G. -Rg3s-ekin tratatutako saguetan (p < 0,05), verapamilak G-Rg3-ren efektu inhibitzailea tumorigenesian areagotu dezakeela adieraziz.Tumorearen zamak ez zuen desberdintasun esanguratsurik erakutsi kontrol taldearen eta verapamil taldearen, G-Rg3r taldearen eta G-Rg3s taldearen eta verapamil+G-Rg3r taldearen eta verapamil+G-Rg3s taldearen artean.Gainera, ez zen gibeleko edo giltzurruneko toxikotasun esanguratsurik egon ebaluatutako tratamenduekin lotutako (4E,F irudia).
G-Rg3 tratamenduaren ondoren tumorearen zama eta plasma edo hesteetako G-Rg3r eta G-Rg3 mailak adierazitako taldeetan.(A) Diseinu esperimentala.(B) Tumore makroskopikoak sagu eredu batean.Tumoreak gezien bidez adierazten dira.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r verapamilarekin konbinatuta.d: G-Rg3 verapamilarekin konbinatuta.d: Verapamil.e: kontrola.(C) Tumorearen mikrografia optikoa handitzean.Erantzuna: 100x.b: 400X.(D) G-Rg3 + verapamil tratamenduaren eragina A/J saguetan tumore-zaman.(E) ALT gibeleko entzimaren maila plasmatikoak.(F) Cr giltzurrun-entzimaren maila plasmatikoak.(G) Adierazitako taldeetako G-Rg3r edo G-Rg3 maila plasmatikoak.(H) Adierazitako taldeetako hesteetako G-Rg3r edo G-Rg3s mailak.Datuak determinazio hirukoiztuen batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazten dira.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B(a)P-k eragindako minbizi-ereduko saguetan G-Rg3 mailak UPLC-MS/MS bidez ebaluatu ziren 20 asteko tratamendu-epe baten ondoren, Metodoak atalean deskribatutako metodoaren arabera.4G eta H irudiek plasmako eta hesteetako G-Rg3 mailak erakusten dituzte, hurrenez hurren.Plasma G-Rg3r mailak 0,44 ± 0,32 μmol/L izan ziren eta 1,17 ± 0,47 μmol/L-ra igo ziren verapamilarekin batera (p < 0,001), hesteetako G-Rg3r mailak 0,53 ± 0,08 μg/l izan ziren bitartean.Verapamilarekin konbinatuta, g 1,35 ± 0,13 μg/g-ra igo da (p < 0,001).G-Rg3-rako, emaitzek antzeko eredua jarraitu zuten, verapamilaren tratamenduak A/J saguetan G-Rg3-ren ahozko biodisponibilitatea areagotu zuela adieraziz.
Zelulen bideragarritasun saiakuntza erabili zen B(a)P eta G-Rg3-ren zitotoxikotasuna ebaluatzeko hEL zeluletan.B(a)P-k hEL zeluletan eragindako zitotoxikotasuna 5A irudian ageri da, eta G-Rg3r eta G-Rg3-ren propietate ez-toxikoak, berriz, 5A eta 5B irudietan.5B, C. G-Rg3-ren efektu zitobabeslea ebaluatzeko, B(a)P G-Rg3r edo G-Rg3-ren hainbat kontzentraziorekin batera administratu zen hEL zeluletan.5D irudian erakusten den moduan, G-Rg3r-k 5 μM, 10 μM eta 20 μM-ko kontzentrazioetan zelulen bideragarritasuna % 58,3, % 79,3 eta % 77,3ra berreskuratu zuen, hurrenez hurren.G-Rg3s taldean ere antzeko emaitzak ikus daitezke.G-Rg3s-en kontzentrazioak 5 µM, 10 µM eta 20 µM zirenean, zelulen bideragarritasuna %58,3, %72,7 eta %76,7ra itzuli zen, hurrenez hurren (5E Irudia).).BPDE-DNA aduktuen presentzia ELISA kit baten bidez neurtu da.Gure emaitzek erakutsi zuten BPDE-DNA aduktuaren mailak B(a)P tratatutako taldean kontrol-taldearekin alderatuta handitu zirela, baina G-Rg3 kotratamenduarekin alderatuta, BPDE-DNA aduktuaren mailak B(a)P taldean. B tratatutako taldean, DNA aduktuaren mailak nabarmen murriztu ziren.B(a)P-rekin bakarrik tratamenduaren emaitzak 5F irudian ageri dira (1,87 ± 0,33 vs. 3,77 ± 0,42 G-Rg3r, 1,93 ± 0,48 vs. 3,77 ± 0,42 G -Rg3s, p <0,001).
Zelulen bideragarritasuna eta BPDE-DNA aduktuaren eraketa G-Rg3 eta B(a)P-rekin tratatutako hEL zeluletan.(A) B(a)P-rekin tratatutako hEL zelulen bideragarritasuna.(B) G-Rg3rrekin tratatutako hEL zelulen bideragarritasuna.(C) G-Rg3-rekin tratatutako hEL zelulen bideragarritasuna.(D) B(a)P eta G-Rg3r-ekin tratatutako hEL zelulen bideragarritasuna.(E) B(a)P eta G-Rg3-rekin tratatutako hEL zelulen bideragarritasuna.(F) B(a)P eta G-Rg3-rekin tratatutako hEL zeluletan BPDE-DNA aduktuaren mailak.Datuak determinazio hirukoiztuen batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazten dira.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
GST entzimaren adierazpena 10 μM B(a)P eta 10 μM G-Rg3r edo G-Rg3s-ekin batera tratamenduaren ondoren detektatu zen.Gure emaitzek erakutsi zuten B(a)P-k GST adierazpena kendu zuela (% 59,7 ± 8,2 G-Rg3r taldean eta % 39 ± 4,5 G-Rg3s taldean), eta B(a)P G-Rg3r-ekin erlazionatuta zegoen. , edo G-Rg3r-rekin, edo G-Rg3r-rekin.G-Rg3s-ekin batera egindako tratamenduak GST adierazpena berreskuratu zuen.GST adierazpena (% 103,7 ± 15,5 G-Rg3r taldean eta % 110 ± 11,1 G-Rg3s taldean, p < 0,05 eta p < 0,001, hurrenez hurren, 6A, B eta C irudiak).GST jarduera jarduera-saioen kit baten bidez ebaluatu zen.Gure emaitzek erakutsi zuten konbinazio-tratamendu-taldeak GST jarduera handiagoa izan zuela B(a)P talde bakarrarekin alderatuta (% 96,3 ± 6,6 vs. 35,7 ± 7,8 G-Rg3r taldean vs. 92,3 ± 6,5 G-Rg3r taldean). ).% vs 35,7 ± 7,8 G-Rg3s taldean, p < 0,001, 6D irudia).
GST eta Nrf2 adierazpena B(a)P eta G-Rg3-rekin tratatutako hEL zeluletan.(A) GST adierazpenaren detekzioa Western blotting bidez.(B) B(a)P eta G-Rg3r-ekin tratatutako hEL zeluletan GSTren adierazpen kuantitatiboa.(C) GST-ren adierazpen kuantitatiboa B(a)P eta G-Rg3s-ekin tratatutako hEL zeluletan.(D) GST jarduera B(a)P eta G-Rg3-rekin tratatutako hEL zeluletan.(E) Nrf2 adierazpenaren detekzioa Western blotting bidez.(F) Nrf2-ren adierazpen kuantitatiboa B(a)P eta G-Rg3r-ekin tratatutako hEL zeluletan.(G) Nrf2-ren adierazpen kuantitatiboa B(a)P eta G-Rg3s-ekin tratatutako hEL zeluletan.Datuak determinazio hirukoiztuen batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazten dira.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B(a)P-k eragindako tumorigenesiaren G-Rg3-ren bidezko ezabapenean parte hartzen duten bideak argitzeko, Nrf2 adierazpena Western blotting bidez ebaluatu zen.6E,F,G irudietan erakusten den bezala, kontrol-taldearekin alderatuta, B(a)P tratamendu-taldeko Nrf2 maila bakarrik jaitsi zen;hala ere, B(a)P tratamendu-taldearekin alderatuta, PG-Rg3 taldeko B(a) Nrf2 mailak handitu egin ziren (% 106 ± 9,5 G-Rg3r-rako vs. 51,3 ± 6,8%, 117 ± 6,2% G-Rg3r vs. 41 ± % 9,8 G-Rg3s, p < 0,01).
Nrf2ren prebentzio-eginkizuna baieztatu dugu Nrf2 adierazpena RNA interferentzia txiki espezifikoa (siRNA) erabiliz.Nrf2 knockdown Western blotting bidez baieztatu zen (7A, B irudiak).7C,D irudietan erakusten den moduan, hEL zelulen B(a)P eta G-Rg3-ekin batera egindako tratamenduak BPDE-DNA aduktuen kopurua gutxitu zuen (1,47 ± 0,21) B(a)P tratamenduarekin alderatuta. kontroleko siRNA taldean bakarrik.) G-Rg3r 4,13 ± 0,49 zen, G-Rg3s 1,8 ± 0,32 eta 4,1 ± 0,57, p < 0,01).Hala ere, G-Rg3-ren efektu inhibitzailea BPDE-DNA eraketan deuseztatu zen Nrf2 knockdown-ek.SiNrf2 taldean, ez zen alde handirik egon BPDE-DNA aduktuaren eraketan B(a)P eta G-Rg3 kotratamenduaren eta B(a)P tratamenduaren artean bakarrik (3,0 ± 0,21 G-Rg3r-rako vs. 3,56 ± 0,32). ).G-Rg3r-rentzat 3,6 G-Rg3s-entzat ±0,45 versus 4,0±0,37, p > 0,05).
Nrf2 knockdown-aren eragina BPDE-DNA aduktuaren eraketan hEL zeluletan.(A) Nrf2 erorketa Western blotting bidez baieztatu zen.(B) Nrf2 bandaren intentsitatearen kuantifikazioa.(C) B (a) P eta G-Rg3r-ekin tratatutako hEL zeluletan BPDE-DNA aduktu mailetan Nrf2 knockdown-aren eragina.(D) Nrf2 knockdown-aren eragina B (a) P eta G-Rg3-rekin tratatutako hEL zeluletan BPDE-DNA aduktu mailetan.Datuak determinazio hirukoiztuen batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazten dira.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Azterketa honek ginseng gorriaren hainbat estraktuen prebentzio-efektuak B(a)P-k eragindako biriketako minbiziaren saguaren eredu batean ebaluatu zituen, eta KRGB tratamenduak tumore-zama nabarmen murriztu zuen.G-Rg3-k ginseng-estraktu honetan edukirik handiena duela kontuan hartuta, ginsenoside honek tumorigenesia inhibitzeko duen eginkizun garrantzitsua aztertu da.G-Rg3r eta G-Rg3 (G-Rg3-ren bi epimero) tumore-zama nabarmen murriztu zuten B(a)P-k eragindako minbiziaren sagu-eredu batean.G-Rg3r eta G-Rg3 minbiziaren aurkako efektuak eragiten dituzte tumore-zelulen apoptosia eraginez21, tumorearen hazkuntza inhibituz22, zelula-zikloa geldiaraziz23 eta angiogenesian eraginez24.G-Rg3-k metastasia zelularra inhibitzen duela ere frogatu da25, eta G-Rg3-k kimioterapiaren eta erradioterapiaren ondorioak hobetzeko duen gaitasuna dokumentatu da26,27.Poon et al-ek G-Rg3 tratamenduak B(a)P28-ren efektu genotoxikoak murriztu ditzakeela frogatu zuten.Ikerketa honek G-Rg3-ren potentzial terapeutikoa frogatzen du ingurumen-molekula kartzinogenoak bideratzeko eta minbizia prebenitzeko.
Potentzial profilaktiko ona izan arren, ginsenosidoen ahozko bioerabilgarritasun eskasak erronka bat dakar molekula horien erabilera klinikorako.Arratoietan ginsenosidoen ahozko administrazioaren azterketa farmakokinetikoak erakutsi zuen bere bioerabilgarritasuna %5 baino txikiagoa dela oraindik29.Proba hauek erakutsi zuten 20 asteko tratamendu-aldia igaro ondoren, Rg5 odol-maila baino ez zela jaitsi.Biodisponibilitate eskasaren azpian dagoen mekanismoa argitu gabe dagoen arren, P-gp ginsenosidoen isurketan parte hartzen duela uste da.Lan honek lehen aldiz frogatu zuen verapamilaren administrazioak, P-gp blokeatzaileak, G-Rg3r eta G-Rg3s-en ahozko biodisponibilitatea areagotzen duela.Beraz, aurkikuntza honek G-Rg3r eta G-Rg3-ek P-gp-aren substratu gisa jokatzen dutela iradokitzen du bere isurketa erregulatzeko.
Lan honek frogatzen du verapamilarekin egindako tratamenduak biriketako minbiziaren sagu-eredu batean G-Rg3-ren ahozko bioerabilgarritasuna areagotzen duela.Aurkikuntza hau G-Rg3-ren heste-transzelula-garraioaren areagotzeak onartzen du P-gp blokeoaren ondorioz, eta horrela bere xurgapena areagotuz.Caco2 zeluletan egindako entseguek erakutsi zuten verapamilaren tratamenduak G-Rg3r eta G-Rg3s-en isurketa murriztu zuela mintzaren iragazkortasuna hobetzen zuen bitartean.Yang et al-en ikerketa batek.Ikerketek frogatu dute ziklosporina A-rekin (beste P-gp blokeatzaile bat) tratamenduak ginsenoside Rh2-ren bioerabilgarritasuna areagotzen duela %20ko oinarrizko baliotik %30era baino gehiagora.K eta Rg1 ginsenosidoek ere antzeko emaitzak erakutsi zituzten30,31.Verapamila eta A ziklosporina batera administratu zirenean, Caco-2 zeluletan K konposatuaren isurketa nabarmen murriztu zen 26,6tik 3ra baino gutxiagora, eta zelula barneko mailak 40 aldiz handitu ziren30.Verapamilaren presentzian, Rg1 mailak arratoi biriketako epitelioko zeluletan gora egin zuen, P-gp-ek ginsenosidoen efluxuan duen rola iradokitzen du, Meng et al.Hala ere, verapamilak ez zuen eragin bera izan ginsenosido batzuen isurketan (adibidez, Rg1, F1, Rh1 eta Re), P-gp substratuek ez dutela eragiten adieraziz, Liang et al-ek erakusten duten moduan.32 .Behaketa hau beste garraiolari batzuen eta ginsenoside egitura alternatiboen inplikazioarekin erlazionatuta egon daiteke.
G-Rg3-k minbiziaren gainean duen prebentzio-efektuaren mekanismoa ez dago argi.Aurreko ikerketek frogatu dute G-Rg3-k DNAren kaltea eta apoptosia saihesten dituela estres oxidatiboa eta hantura murriztuz16,33, B(a)P-k eragindako tumorigenesia prebenitzeko azpiko mekanismoa izan daitekeela.Txosten batzuek adierazten dute B(a)P-k eragindako genotoxikotasuna murriztu daitekeela II faseko entzimak modulatuz BPDE-DNA34 sortzeko.GST II faseko entzima tipikoa da, BPDE-DNA aduktuaren eraketa inhibitzen duena, GSH BPDErekin lotzea sustatuz, eta horrela B(a)P35-ek eragindako DNA kaltea murrizten du.Gure emaitzek erakusten dute G-Rg3 tratamenduak B(a)P-k eragindako zitotoxikotasuna eta BPDE-DNA aduktuaren eraketa murrizten dituela hEL zeluletan eta GSTren adierazpena eta jarduera berreskuratzen in vitro.Hala ere, efektu hauek ez zeuden Nrf2-ren ezean, G-Rg3-k Nrf2 bidearen bidez efektu zitobabesleak eragiten dituela iradokitzen du.Nrf2 xenobiotikoen garbiketa sustatzen duen II faseko detoxifikazio-entzimen transkripzio-faktore nagusia da36.Nrf2 bidearen aktibazioa zitoprotekzioa eragiten du eta ehunen kaltea murrizten du37.Gainera, hainbat txostenek Nrf2-k tumore-zapaltzaile gisa duen eginkizuna onartzen dute kartzinogenesian38.Gure ikerketak erakusten du G-Rg3-k Nrf2 bidearen indukzioa rol erregulatzaile garrantzitsua duela B(a)P-k eragindako genotoxikotasunean B(a)P detoxifikazioa eraginez II faseko entzimak aktibatuz, eta, ondorioz, tumorigenesiaren prozesua inhibituz.
Gure lanak agerian uzten du ginseng gorriak saguetan B(a)P-k eragindako biriketako minbizia prebenitzeko duen potentziala, ginsenoside G-Rg3-ren parte-hartze garrantzitsuaren bidez.Molekula honen ahozko biodisponibilitate eskasak bere aplikazio klinikoa oztopatzen du.Hala ere, ikerketa honek G-Rg3 P-gp-aren substratua dela erakusten du lehen aldiz, eta P-gp inhibitzaile baten administrazioak G-Rg3-ren bioerabilgarritasuna areagotzen du in vitro eta in vivo.G-Rg3-k B(a)P-k eragindako zitotoxikotasuna murrizten du Nrf2 bidea erregulatuz, bere prebentzio-funtziorako mekanismo potentziala izan daitekeena.Gure azterketak ginsenoside G-Rg3 biriketako minbizia prebenitzeko eta tratatzeko duen potentziala berresten du.
Sei asteko A/J sagu emeak (20 ± 1 g) eta 7 asteko Wistar arratoi arrak (250 ± 20 g) Jackson Laboratory (Bar Harbor, AEB) eta Wuhan Institute of Zoology-n lortu ziren.Unibertsitatea (Wuhan, Txina).Chinese Type Culture Collection Center-ek (Wuhan, Txina) Caco-2 eta hEL zelulak eskaini zizkigun.Sigma-Aldrich (St. Louis, AEB) B(a)P eta trikaprinaren iturria da.G-Rg3r eta G-Rg3s ginsenosido araztuak, dimetil sulfoxidoa (DMSO), CellTiter-96 ugalketa-saiakuntza kit (MTS), verapamila, ezinbesteko gutxieneko medioa (MEM) eta fetuaren behi-seruma (FBS) erosi ziren Chengdu Must Bio-Technology-tik. .Co., Ltd.(Chengdu, Txina).QIAamp DNA mini kit eta BPDE-DNA adduct ELISA kit Qiagen (Stanford, CA, AEB) eta Cell Biolabs (San Diego, CA, AEB) erosi ziren.GST jardueraren saiakuntza kit eta proteina totalaren azterketa kit (BCA metodo estandarra) Solarbio-n (Beijing, Txina) erosi ziren.Ginseng gorriaren laburpen guztiak Mingyu laborategian gordetzen dira 7. Hong Kong Baptist University (Hong Kong, Txina) eta Korea Cancer Center (Seul, Korea) CRG extract eta hainbat jatorri Koreako ginseng gorri extract iturri komertzialak dira (KRGA, KRGB barne). eta KRGC).Ginseng gorria 6 urteko ginseng freskoaren sustraiekin egiten da.Ginseng gorriaren extract ginseng urarekin hiru aldiz garbituz lortzen da, ondoren ur-estraktua kontzentratuz eta, azkenik, tenperatura baxuan lehortuz ginseng extract hautsa lortzeko.Antigorputzak (Nrf2, anti-GST eta β-aktina), untxiaren aurkako G immunoglobulina (IgG), transfekzio erreaktiboa, kontrol siRNA eta Nrf2 siRNA erosi ziren Santa Cruz Biotechnology-tik (Santa Cruz, CA) .), AEB).
Caco2 eta hEL zelulak 100 mm2-ko zelula-hazkuntzako plateretan hazi ziren 37 °C-tan % 10 FBS zuten MEMrekin, % 5eko CO2-ko atmosfera heze batean.Tratamendu-baldintzen eragina zehazteko, hEL zelulak B(a)P eta G-Rg3-ren kontzentrazio ezberdinekin inkubatu ziren MEM-n 48 orduz.Zelulak gehiago aztertu edo bildu daitezke zelularik gabeko laburpenak prestatzeko.
Esperimentu guztiak Tongji Medical College-ko Animalien Etika Esperimentaleko Batzordeak onartu zituen, Huazhong Zientzia eta Teknologia Unibertsitateko (Onarpen zk. 2019; Erregistro zk. 4587TH).Esperimentu guztiak dagozkien jarraibide eta araudien arabera egin ziren, eta ikerketa Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE) jarraibideen arabera egin zen.Zortzi asteko A/J saguei lehen aldiz intraperitonealki injektatu zitzaien B(a)P trikaprina-disoluzioan (100 mg/kg, 0,2 ml).Astebete igaro ondoren, saguak ausaz banatu ziren kontrol taldeetan eta tratamendu talde ezberdinetan, 15 sagu talde bakoitzean, eta egunean behin gavage egin zuten.20 asteko tratamenduaren ondoren, animaliak CO2 asfixiagatik sakrifikatu ziren.Birikak bildu eta finkatu ziren 24 orduz.Azaleko tumoreen kopurua eta banakako tumoreen tamaina biriki bakoitzeko kuantifikatu ziren disekzio-mikroskopio baten bidez.Tumorearen bolumenaren estimazioak (V) honako adierazpen hau erabiliz kalkulatu dira: V (mm3) = 4/3πr3, non r tumorearen diametroa den.Saguen biriketako tumore-bolumen guztien batura garbiak tumore-bolumen osoa adierazten zuen, eta talde bakoitzeko tumore-bolumen osoaren batez bestekoa tumore-karga.Odol osoko eta hesteetako laginak bildu eta -80 °C-tan gorde ziren UPLC-MS/MS determinatzeko.Seruma bildu eta analizatzaile kimiko automatizatu bat erabili zen alanina aminotransferasa (ALT) eta serum kreatinina (Cr) mailak aztertzeko, gibelaren eta giltzurrunaren funtzioa ebaluatzeko.
Bildutako laginak hotzetan atera, desizoztu, pisatu eta hodietan sartu ziren goian deskribatu bezala.Horri 0,5 μM phlorizina (barne estandarra) gehitu zitzaion 0,8 ml metanol disoluzioan.Ondoren, ehuna Tissue-Tearor erabiliz homogeneizatu zen eta homogeneizatua 1,5 ml-ko mikrozentrifuga-hodi batera transferitu zen.Nahasketa zentrifugatu zen 15500 rpm-ra 15 minutuz.1,0 ml gainditzailea kendu ondoren, lehortu nitrogenoarekin.Berrehun mikrolitro metanol erabili ziren berreskuratzeko.Odola lerro batean bildu eta prozesatzen da eta neurketa guztietarako erreferentzia gisa erabiltzen da.
24 putzuko Transwell plakak 1,0 × 105 Caco-2 zelulekin hazi ziren putzu bakoitzeko G-Rg3 garraioaren hobekuntza potentziala ebaluatzeko, verapamila gehituta.3 asteko hazkuntzaren ondoren, zelulak HBSSarekin garbitu eta 37 °C-tan aurrez inkubatu ziren.10 μM G-Rg3-ko 400 μL (G-Rg3r, G-Rg3s edo 50 edo 100 μM verapamilarekin nahasketa bat) monogeruzaren alde basolateral edo apikalean injektatu ziren eta besteari 600 μL HBSS disoluzioa gehitu zitzaion. alde.Bildu 100 µl kultura-euskarri adierazitako denboran (0, 15, 30, 45, 60, 90 eta 120 minutu) eta gehitu 100 µl HBSS bolumen hori osatzeko.Laginak -4 °C-tan gorde ziren UPLC-MS/MS detektatu arte.Papp = dQ/(dT × A × C0) adierazpena erabiltzen da norabide bakarreko itxurazko iragazkortasun apikala eta basolaterala kuantifikatzeko eta alderantziz (Pa-b eta Pb-a, hurrenez hurren);dQ/dT kontzentrazio aldaketa da, A (0,6 cm2) monogeruzaren azalera eta C0 hasierako emailearen kontzentrazioa.Isurketa-erlazioa Pb-a/Pa-b gisa kalkulatzen da, eta horrek azterketako sendagaiaren isurketa-tasa adierazten du.
Wistar arratoi arrak 24 orduz barau egin zituzten, ura bakarrik edan zuten eta % 3,5eko pentobarbital soluzioko zain barneko injekzio batekin anestesiatu zuten.Intubatutako silikonazko hodiak duodenoaren amaiera du sarrera gisa eta ileonaren amaiera irteera gisa.Erabili ponpa peristaltiko bat sarrera ponpatzeko 10 µM G-Rg3r edo G-Rg3s HBSS isotonikoan 0,1 ml/min-ko emariarekin.Verapamilaren eragina 50 μM edo 100 μM konposatuaren 10 μM G-Rg3r edo G-Rg3s-i gehituz ebaluatu zen.UPLC-MS/MS perfusioa hasi eta 60, 90, 120 eta 150 minutuetan bildutako perfusio-estraktuetan egin zen.Xurgapenaren ehunekoa % xurgapena = (1 – Cout/Cin) × % 100 formularen bidez kuantifikatzen da;irteeran eta sarreran G-Rg3-ren kontzentrazioa Cout eta Cin-ek adierazten dute, hurrenez hurren.
hEL zelulak 96 putzuko plaketan hazi ziren putzu bakoitzeko 1 × 104 zelulen dentsitatean eta B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) edo G-Rg3 DMSOn disolbatuta tratatu ziren. .Ondoren, sendagaiak kultura-euskarriarekin diluitu ziren hainbat kontzentraziotan (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) 48 ordutan zehar.Komertzialki eskuragarri dagoen MTS entsegu-kit bat erabiliz, zelulak protokolo estandar baten mende jarri ziren eta, ondoren, 490 nm-ko mikroplaken irakurgailu bat erabiliz neurtu ziren.B(a)P (10 μM) eta G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) batera tratatutako taldeen zelula-bideragarritasun maila goiko metodoaren arabera ebaluatu zen eta tratatu gabeko taldearekin alderatu zen.
hEL zelulak 6 putzuko plaketan hazi ziren 1 × 105 zelula/putzuko dentsitatean eta 10 μMB(a)P-rekin tratatu ziren 10 μM G-Rg3-ren presentzian edo ezean.48 orduko tratamenduaren ondoren, DNA atera zen hEL zeluletatik QIAamp DNA Mini Kit-a erabiliz fabrikatzailearen protokoloaren arabera.BPDE-DNA aduktuen eraketa BPDE-DNA aduktuaren ELISA kit baten bidez detektatu zen.BPDE-DNA aduktuaren maila erlatiboak mikroplaken irakurgailu baten bidez neurtu ziren absorbantzia 450 nm-tan neurtuz.
hEL zelulak 96 putzuko plaketan hazi ziren putzu bakoitzeko 1 × 104 zelulen dentsitatean eta 10 μMB(a)P-rekin tratatu ziren 10 μM G-Rg3 ezean edo 48 orduz.GST jarduera GST jardueraren saiakuntza-kit komertzial baten bidez neurtu zen fabrikatzailearen protokoloaren arabera.GST aktibazio erlatiboa 450 nm-ko absorbantziaz neurtu zen mikroplaken irakurgailu bat erabiliz.
hEL zelulak PBS izoztuarekin garbitu ziren eta, ondoren, proteasa inhibitzaileak eta fosfatasa inhibitzaileak zituen erradioimmunoprecipitation test buffer erabiliz lisatu ziren.Proteinen kuantifikazioaren ondoren, proteina osoko saiakuntza-kit bat erabiliz, lagin bakoitzeko 30 μg proteina SDS-PAGE % 12rekin bereizi eta PVDF mintz batera transferitu ziren elektroforesiaren bidez.Mintzak % 5eko esne gaingabetuarekin blokeatu ziren eta antigorputz primarioekin inkubatu ziren gauean 4 ° C-tan.Horradish peroxidasa-rekin konjugatutako bigarren mailako antigorputzekin inkubatu ondoren, kimiluminiszentzia hobetutako erreaktiboak gehitu ziren lotura seinalea ikusteko.Proteina-banda bakoitzaren intentsitatea ImageJ softwarearen bidez kuantifikatu zen.
GraphPad Prism 7.0 softwarea erabili zen datu guztiak aztertzeko, batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazita.Tratamendu-taldeen arteko aldakuntza Student-en t-testaren bidez edo aldakuntzaren norabide bakarreko analisiaren bidez ebaluatu zen, P balioa <0,05 esangura estatistikoa adieraziz.
Ikerketa honetan lortutako edo aztertutako datu guztiak argitaratutako artikulu honetan eta informazio osagarrien fitxategietan sartzen dira.
Torre, LA, Siegel, RL eta Jemal, A. Biriketako minbiziaren estatistikak.aditzondoa.Iraungi egin da.medikuntza.biologia.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Tabako kartzinogenoak, haien biomarkatzaileak eta tabakoak eragindako minbizia.Nat.Minbiziaren kapilaua.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH eta Venitt, S. DNA eta proteina aduktuak giza ehunetan tabako kearen eraginpean egotearen ondorioz.nazioartekotasuna.J. Minbizia.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA eta Yu M. Houttuynia cordata eta silibinin-en eragina benzo(a)pirenoek eragindako biriketako tumorigenesian A/J saguetan.Cancer 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et al.Minbiziaren aurkako produktu naturala Txinako material sendagarrietatik isolatua.masailezurra.medikuntza.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.E polifenoiaren, ginseng gorriaren eta rapamizinaren eraginkortasuna benzo(a)pirenoek eragindako biriketako tumorigenesian A/J saguetan.Cancer 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS eta Yuan, KS Red, minbiziaren terapian parte hartzea.masailezurra.J. Nutt.medikuntza.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS eta Gao, L. Ginsenosides ginseng amerikarraren sustrai eta hostoetan.J. Agrik.Elikagaien kimika.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA eta Yuan KS Ginseng-aren farmakologia: osagai asko eta efektu asko.biokimika.farmakologia.58, 1685–1693 (1999).
Argitalpenaren ordua: 2023-09-17