Kiitos vierailustasi Nature.comissa.Käyttämäsi selainversiolla on rajoitettu CSS-tuki.Parhaan tuloksen saavuttamiseksi suosittelemme selaimen uudemman version käyttöä (tai yhteensopivuustilan poistamista Internet Explorerissa).Sillä välin, jotta voimme varmistaa jatkuvan tuen, näytämme sivuston ilman tyyliä tai JavaScriptiä.
Punaista ginsengiä on käytetty perinteisessä aasialaisessa lääketieteessä satoja vuosia.Tässä tutkimuksessa arvioimme neljän eri alueilla kasvatetun punaisen ginsengin (Kiinan punainen ginseng, Korean punainen ginseng A, Korean punainen ginseng B ja Korean punainen ginseng C) kykyä estää syöpää aiheuttavien keuhkojen muodostumista ja kasvua. kasvaimia.Bentso(a)pyreeni (B(a)P) -testi suoritettiin A/J-hiirillä, ja Korean punainen ginseng B:n havaittiin olevan tehokkain vähentämään kasvaintaakkaa neljän punaisen ginseng-lajikkeen joukossa.Lisäksi analysoimme eri ginsenosidien (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ja Rg5) pitoisuudet neljässä punaisen ginseng-uutteessa ja havaitsimme, että Korean punaisella ginseng B:llä oli korkeimmat ginsenosidi Rg3 (G-Rg3) tasot, mikä viittaa siihen, että G-Rg3:lla voi olla tärkeä rooli sen terapeuttisessa tehokkuudessa.Tämä työ osoittaa, että G-Rg3:lla on suhteellisen alhainen hyötyosuus.Kuitenkin, kun G-Rg3:a annettiin yhdessä P-gp-estäjän verapamiilin kanssa, G-Rg3:n ulosvirtaus Caco-2-soluihin väheni, G-Rg3:n imeytymisnopeus suolistosta lisääntyi rottamallissa ja G-Rg3:a. nostettiin.Caco-2-soluissa Rg3:n ulosvirtaus vähenee ja Rg3-pitoisuuden taso laskee.G-Rg3 lisääntyy suolistossa ja plasmassa, ja sen kyky estää kasvaimia paranee myös B(a)P-indusoidun tuumorigeneesin rottamallissa.Huomasimme myös, että G-Rg3 vähensi B(a)P:n aiheuttamaa sytotoksisuutta ja DNA-adduktien muodostumista ihmisen keuhkosoluissa ja palautti faasin II entsyymien ilmentymisen ja aktiivisuuden Nrf2-reitin kautta, mikä saattaa liittyä mahdolliseen vaikutusmekanismiin. G-estämisen -Rg3..Tietoja keuhkokasvainten esiintymisestä.Tutkimuksemme osoittaa G-Rg3:n potentiaalisesti tärkeän roolin keuhkokasvainten kohdistamisessa hiirimalleissa.Tämän ginsenosidin oraalinen hyötyosuus paranee kohdentamalla P-glykoproteiinia, jolloin molekyyli voi vaikuttaa syöpää vastaan.
Yleisin keuhkosyöpätyyppi on ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), joka on yksi johtavista syöpäkuolemien syistä Kiinassa ja Pohjois-Amerikassa1,2.Tärkein tekijä, joka lisää riskiä sairastua ei-pienisoluiseen keuhkosyöpään, on tupakointi.Tupakansavu sisältää yli 60 syöpää aiheuttavaa ainetta, mukaan lukien bentso(a)pyreeni (B(a)P), nitrosamiinit ja radonin hajoamisen aiheuttamat radioaktiiviset isotoopit.3 Polysykliset aromaattiset hiilivedyt B(a)P ovat pääasiallinen myrkyllisyyden aiheuttaja savukkeissa savu.Altistuessaan B(a)P:lle sytokromi P450 muuttaa sen B(a)P-7,8-dihydrodioli-9,10-epoksidiksi (BPDE), joka reagoi DNA:n kanssa muodostaen BPDE-DNA-adduktin 4. Lisäksi nämä adduktit indusoivat keuhkojen tuumorigeneesiä hiirillä, joilla on kasvainvaihe ja histopatologia samanlainen kuin ihmisen keuhkokasvaimet5.Tämä ominaisuus tekee B(a)P-indusoidusta keuhkosyövän mallista sopivan järjestelmän sellaisten yhdisteiden arvioimiseen, joilla on mahdollisia syöpää ehkäiseviä ominaisuuksia.
Eräs mahdollinen strategia keuhkosyövän kehittymisen estämiseksi korkean riskin ryhmissä, erityisesti tupakoitsijoissa, on kemopreventiivisten aineiden käyttö epiteelinsisäisten neoplastisten leesioiden kehittymisen estämiseksi ja siten niiden myöhemmän etenemisen pahanlaatuiseksi estämiseksi.Eläintutkimukset osoittavat, että erilaiset kemopreventiiviset aineet ovat tehokkaita6.Edellisessä raportissamme7 korostettiin punaisen ginsengin hyviä ehkäiseviä vaikutuksia keuhkosyöpään.Tätä yrttiä on käytetty vuosisatojen ajan perinteisessä aasialaisessa lääketieteessä eliniän ja terveyden pidentämiseen, ja sillä on dokumentoitu olevan kasvaimia estäviä vaikutuksia8.
Ginsengin aktiivinen tekijä on ginsenosidi, jota käytetään yhdistelmämarkkerina arvioimaan ginsenguutteiden laatua.Raakaen ginsenguutteiden kvantitatiivinen analyysi sisältää tyypillisesti useiden ginsenosidien käytön, mukaan lukien RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 ja Rc9,10.Ginsenosideilla on vain vähän kliinistä käyttöä, koska niiden oraalinen hyötyosuus on erittäin huono11.Vaikka tämän huonon biologisen hyötyosuuden mekanismi ei ole selvä, syynä voi olla P-glykoproteiinin (P-gp)12 aiheuttama ginsenosidien ulosvirtaus.P-gp on yksi tärkeimmistä effluksikuljettajista ATP:tä sitovan kasettikuljettajien superperheessä, joka käyttää ATP:n hydrolyysin energiaa vapauttaakseen solunsisäisiä aineita ulkoiseen ympäristöön.P-gp-kuljettajat ovat tyypillisesti laajalti jakautuneita suolistossa, munuaisissa, maksassa ja veri-aivoesteessä13.P-gp:llä on kriittinen rooli suoliston imeytymisessä, ja P-gp:n estäminen lisää joidenkin syöpälääkkeiden oraalista imeytymistä ja saatavuutta12,14.Esimerkkejä aiemmin kirjallisuudessa käytetyistä inhibiittoreista ovat verapamiili ja syklosporiini A15.Tämä työ sisältää hiirijärjestelmän perustamisen B(a)P-indusoidun keuhkosyövän tutkimiseksi, jotta voidaan arvioida erilaisten Kiinasta ja Koreasta peräisin olevien punaisten ginsenguutteiden kykyä vaikuttaa pahanlaatuisiin kasvaimiin.Uutteet analysoitiin yksitellen erityisten ginsenosidien tunnistamiseksi, jotka voivat vaikuttaa karsinogeneesiin.Verapamiilia käytettiin sitten kohdentamaan P-gp:tä ja parantamaan syöpään kohdistavien ginsenosidien oraalista biologista hyötyosuutta ja terapeuttista tehoa.
Mekanismi, jolla ginseng-saponiinit vaikuttavat karsinogeneesiin, on edelleen epäselvä.Tutkimukset ovat osoittaneet, että erilaiset ginsenosidit voivat vähentää karsinogeenien aiheuttamia DNA-vaurioita vähentämällä oksidatiivista stressiä ja aktivoimalla vaiheen II detoksifikaatioentsyymejä, mikä estää soluvaurioita.Glutationi-S-transferaasi (GST) on tyypillinen vaiheen II entsyymi, jota tarvitaan karsinogeenien aiheuttamien DNA-vaurioiden vähentämiseen17.Nukleaarinen erytroidi 2:een liittyvä tekijä 2 (Nrf2) on tärkeä transkriptiotekijä, joka säätelee redox-homeostaasia ja aktivoi faasin II entsyymien ilmentymistä ja sytoprotektiivisia antioksidanttivasteita18.Tutkimuksemme tutki myös tunnistettujen ginsenosidien vaikutuksia B(a)P:n aiheuttaman sytotoksisuuden ja BPDE-DNA-adduktien muodostumisen vähentämiseen sekä faasin II entsyymien indusoimiseen moduloimalla Nrf2-reittiä normaaleissa keuhkosoluissa.
B(a)P-indusoidun syövän hiirimallin perustaminen on yhdenmukainen aiemman työn kanssa5.Kuva 1A esittää kokeellisen suunnitelman B(a)P:n, veden (kontrolli), kiinan punaisen ginseng-uutteen (CRG), korealaisen punaisen ginseng-uutteen A (KRGA) ja korealaisen punaisen indusoiman hiiren syöpämallin 20 viikon hoidosta. ginseng.Uute B (KRGB) ja Korean punainen ginseng uute C (KRGC).20 viikon punaisen ginseng-hoidon jälkeen hiiret tapettiin CO2-tukkeuttamalla.Kuva 1B esittää makroskooppisia keuhkokasvaimia eläimissä, joita on käsitelty erityyppisillä punaisella ginsengillä, ja kuvio 1C esittää edustavan valomikrokuvan kasvainnäytteestä.KRGB:llä käsiteltyjen eläinten kasvainkuorma (1,5 ± 0,35) oli pienempi kuin kontrollieläinten (0,82 ± 0,2, P < 0,05), kuten kuvassa 1D esitetään.Keskimääräinen kasvainkuormituksen eston aste oli 45 %.Muut testatut punaiset ginsenguutteet eivät osoittaneet tällaisia merkittäviä muutoksia kasvainkuormituksessa (P > 0,05).Mitään ilmeisiä sivuvaikutuksia ei havaittu hiirimallissa 20 viikon punaisen ginseng-hoidon aikana, mukaan lukien ei ruumiinpainon muutosta (tietoja ei esitetty) eikä maksa- tai munuaistoksisuutta (kuvio 1E, F).
Punainen ginseng-uute hoitaa keuhkokasvainkehitystä A/J-hiirillä.(A) Kokeellinen suunnittelu.(B) Suuret keuhkokasvaimet hiirimallissa.Kasvaimet on merkitty nuolilla.a: Kiinan punainen ginseng ryhmä.b: Korean punaisen ginsengin ryhmä A.c: Korean punainen ginseng ryhmä B. d: Korean punainen ginseng ryhmä C. d: Kontrolliryhmä.(C) Valomikrokuva, jossa näkyy keuhkokasvain.Suurennus: 100. b: 400. (D) Kasvainkuorma punaisen ginsenguutteen ryhmässä.(E) Maksaentsyymin ALT-tasot plasmassa.(F) Munuaisentsyymin Cr tasot plasmassa.Tiedot ilmaistaan keskiarvona ± standardipoikkeama.*P <0,05.
Tässä tutkimuksessa tunnistetut punaiset ginsenguutteet analysoitiin ultra-suorituskykyisellä nestekromatografialla tandem-massaspektrometrialla (UPLC-MS/MS) seuraavien ginsenosidien kvantifioimiseksi: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ja Rg5.Analyyttien mittaamiseen käytetyt UPLC- ja MS-olosuhteet kuvattiin edellisessä raportissa19.Neljän punaisen ginsenguutteen UPLC-MS/MS-kromatogrammit on esitetty kuvassa 2A.Ginsenosidin kokonaispitoisuudessa oli merkittäviä eroja, ja ginsenosidin kokonaispitoisuus oli korkein CRG:ssä (590,27 ± 41,28 μmol/L) (kuva 2B).Yksittäisiä ginsenosideja arvioitaessa (kuva 2C) KRGB osoitti korkeimman G-Rg3-tason verrattuna muihin ginsenosideihin (58,33 ± 3,81 μmol/L G-Rg3:ille ja 41,56 ± 2,88 μmol/L G -Rg3r:lle).punainen ginseng tyyppi (P < 0,001).G-Rg3 esiintyy stereoisomeerien G-Rg3r ja G-Rg3s parina, jotka eroavat hydroksyyliryhmän asemasta hiilessä 20 (kuvio 2D).Tulokset osoittavat, että G-Rg3r:llä tai G-Rg3:lla voi olla tärkeä syövänvastainen potentiaali B(a)P-indusoidussa syöpähiirimallissa.
Ginsenosidien pitoisuus erilaisissa punaisen ginsenguutteissa.(A) Neljän punaisen ginsenguutteen UPLC-MS/MS-kromatogrammit.(B) Ilmoitettujen uutteiden ginsenosidin kokonaispitoisuuden arvio.(C) Yksittäisten ginsenosidien havaitseminen leimatuista uutteista.(D) Ginsenosid-stereoisomeerien G-Rg3r ja G-Rg3s rakenteet.Tiedot ilmaistaan kolmen rinnakkaismääritysten keskiarvona ± keskihajonnana.***P <0,001.
UPLC-MS/MS-tutkimuksessa vaadittiin ginsenosidien kvantifiointia suolisto- ja verinäytteissä 20 viikon hoidon jälkeen.KRGB-käsittely osoitti, että veressä oli vain 0,0063 ± 0,0005 μg/ml Rg5:tä.Jäljellä olevia ginsenosideja ei havaittu, mikä viittaa huonoon oraaliseen biologiseen hyötyosuuteen ja siten vähentyneeseen altistumiseen näille ginsenosideille.
Paksusuolen adenokarsinoomasolulinja Caco-2 on morfologisesti ja biokemiallisesti samanlainen kuin ihmisen suoliston epiteelisolut, mikä osoittaa sen käyttökelpoisuuden arvioitaessa enterosyyttien kuljetusta suoliston epiteelin esteen läpi.Tämä analyysi perustui aikaisempaan tutkimukseen 20 .Kuviot 3A, B, C, D, E, F esittävät edustavia kuvia G-Rg3r:n ja G-Rg3:n solunvälisestä kuljetuksesta käyttämällä Caco-2-yksikerrosmallia.G-Rg3r:n tai G-Rg3:n solunsisäinen kuljetus Caco-2-monokerrosten läpi basolateraalisesta apikaaliselle puolelle (Pb-a) oli merkittävästi suurempi kuin apikaalisesta basolateraalipuolelle (Pa-b).G-Rg3r:n keskimääräinen Pa-b-arvo oli 0,38 ± 0,06, joka nousi arvoon 0,73 ± 0,06 50 µmol/l verapamiilikäsittelyn jälkeen ja 1,14 ± 0,09:aan 100 µmol/l verapamiilikäsittelyn jälkeen (p < 0,001 ja 0,01 vastaavasti kuva 2).3A).G-Rg3:n havainnot noudattivat samanlaista mallia (kuvio 3B), ja tulokset osoittivat, että verapamiilihoito tehosti G-Rg3r:n ja G-Rg3:n kuljetusta.Verapamiilikäsittely johti myös Pb-a:n ja G-Rg3r:n ja G-Rg3s:n keskimääräisten ulosvirtaussuhteiden merkittävään laskuun (kuvio 3C, D, E, F), mikä osoittaa, että verapamiilikäsittely vähentää ginsenosidipitoisuutta Caco-2-effluksisoluissa..
G-Rg3:n solunsisäinen kuljetus Caco-2-yksikerroksissa ja suoliston imeytyminen rotan perfuusiomäärityksessä.(A) G-Rg3r-ryhmän Pa-b-arvo Caco-2-yksikerroksessa.(B) G-Rg3s-ryhmien Pa-b-arvo Caco-2-yksikerroksessa.(C) G-Rg3r-ryhmän Pb-arvo Caco-2-yksikerroksessa.(D) G-Rg3s-ryhmien Pb-arvo Caco-2-yksikerroksessa.(E) G-Rg3r-ryhmien saantosuhde Caco-2-yksikerroksessa.(F) G-Rg3-ryhmien saantosuhde Caco-2-yksikerroksessa.(G) G-Rg3r:n suolistosta imeytymisen prosenttiosuus perfuusiokokeessa rotilla.(H) G-Rg3:n suolistosta imeytymisen prosenttiosuus perfuusiokokeessa rotilla.Läpäisevyyttä ja absorptiota verrattiin ilman verapamiilin lisäystä.Tiedot ilmaistaan viiden riippumattoman kokeen keskiarvona ± standardipoikkeama.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Aiemman työn20 mukaisesti suoritettiin rottien ortotooppinen suoliston perfuusio sen määrittämiseksi, lisääntyykö G-Rg3:n imeytyminen suolistossa verapamiilihoidon jälkeen.Kuviot 3G, H esittävät edustavia perfuusiomäärityksiä G-Rg3r:n ja G-Rg3:n suolistosta imeytymisen prosenttiosuuden arvioimiseksi syöpämallirotilla edellä mainittujen ajanjaksojen aikana.Alkuperäinen noin 10 %:n heikon G-Rg3r-oton prosenttiosuus nousi yli 20 %:iin 50 µM verapamiilihoidon jälkeen ja yli 25 %:iin 100 µM verapamiilihoidon jälkeen.Samoin G-Rg3, jonka alkuperäinen otto oli 10 %, osoitti myös yli 20 %:n huippua 50 µM verapamiilihoidon jälkeen ja lähes 30 % 100 µM verapamiilihoidon jälkeen, mikä viittaa siihen, että verapamiilin aiheuttama P-gp:n esto tehostaa. suoliston G-absorptio Rg3 keuhkosyövän hiirimallissa.
Yllä olevan menetelmän mukaisesti B(a)P-indusoidut syöpämallihiiret jaettiin satunnaisesti kuuteen ryhmään, kuten kuviossa 4A esitetään.G-Rg3-hoitoryhmässä ei havaittu merkittävää painonpudotusta tai kliinisiä toksisuuden merkkejä verrattuna kontrolliryhmään (tietoja ei esitetty).20 viikon hoidon jälkeen kunkin hiiren keuhkot kerättiin.Kuvio 4B esittää makroskooppisia keuhkokasvaimia hiirissä yllä olevissa hoitoryhmissä, ja kuvio 4C esittää edustavan valomikrokuvan edustavasta kasvaimesta.Mitä tulee kasvainkuormitukseen kussakin ryhmässä (kuvio 4D), G-Rg3r:llä ja G-Rg3:lla käsiteltyjen hiirten arvot olivat vastaavasti 0,75 ± 0,29 mm3 ja 0,81 ± 0,30 mm3, kun taas G-hiirten arvot, joita hoidettiin. -Rg3:n kanssa olivat vastaavasti 1,63 ±0,40 mm3.kontrollihiirillä (p < 0,001), mikä osoittaa, että G-Rg3-hoito vähensi kasvaintaakkaa hiirissä.Verapamiilin antaminen tehosti tätä vähennystä entisestään: verapamiili+ G-Rg3r-hiirten arvot laskivat 0,75 ± 0,29 mm3:sta 0,33 ± 0,25 mm3:iin (p < 0,01) ja verapamiilin + arvot 0,81 ± 0,30 mm2:stä 0,9:ään ± 0,30 mm2:een mm3 G.-Rg3s-käsitellyissä hiirissä (p < 0,05), mikä osoittaa, että verapamiili saattaa tehostaa G-Rg3:n estävää vaikutusta tuumorigeneesiin.Kasvaintaakka ei osoittanut merkittäviä eroja kontrolliryhmän ja verapamiiliryhmän, G-Rg3r- ja G-Rg3s-ryhmän sekä verapamiili+G-Rg3r-ryhmän ja verapamiili+G-Rg3s-ryhmän välillä.Lisäksi arvioituihin hoitoihin ei liittynyt merkittäviä maksa- tai munuaistoksisia vaikutuksia (kuvio 4E, F).
Kasvaintaakka G-Rg3-hoidon jälkeen ja plasman tai suoliston G-Rg3r- ja G-Rg3-tasot osoitetuissa ryhmissä.(A) Kokeellinen suunnittelu.(B) Makroskooppiset kasvaimet hiirimallissa.Kasvaimet on merkitty nuolilla.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r yhdessä verapamiilin kanssa.d: G-Rg3 yhdessä verapamiilin kanssa.d: Verapamiili.e: ohjaus.(C) Optinen mikrokuva kasvaimesta suurennuksella.Vastaus: 100x.b: 400X.(D) G-Rg3 + verapamiilihoidon vaikutus kasvainkuormitukseen A/J-hiirillä.(E) Maksaentsyymin ALT-tasot plasmassa.(F) Munuaisentsyymin Cr tasot plasmassa.(G) Ilmoitettujen ryhmien G-Rg3r- tai G-Rg3-tasot plasmassa.(H) G-Rg3r- tai G-Rg3s-tasot ilmoitettujen ryhmien suolistossa.Tiedot ilmaistaan kolmen rinnakkaismääritysten keskiarvona ± keskihajonnana.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
G-Rg3-tasot B(a)P-indusoiduissa syöpämallihiirissä arvioitiin UPLC-MS/MS:llä 20 viikon hoitojakson jälkeen Menetelmät-osiossa kuvatun menetelmän mukaisesti.Kuviot 4G ja H esittävät plasman ja suoliston G-Rg3-tasoja, vastaavasti.Plasman G-Rg3r-tasot olivat 0,44 ± 0,32 µmol/L ja nousivat arvoon 1,17 ± 0,47 µmol/l, kun verapamiilia annettiin samanaikaisesti (p < 0,001), kun taas suoliston G-Rg3r-tasot olivat 0,53 ± 0,08 µg/l.Yhdistettynä verapamiilin kanssa g nousi arvoon 1,35 ± 0,13 μg/g (p < 0,001).G-Rg3:n osalta tulokset noudattivat samanlaista mallia, mikä osoitti, että verapamiilihoito lisäsi G-Rg3:n oraalista biologista hyötyosuutta A/J-hiirissä.
Solujen elinkelpoisuusmääritystä käytettiin B(a)P:n ja G-Rg3:n sytotoksisuuden arvioimiseksi hEL-soluilla.B(a)P:n hEL-soluissa indusoima sytotoksisuus on esitetty kuviossa 5A, kun taas G-Rg3r:n ja G-Rg3:n myrkyttömät ominaisuudet on esitetty kuvioissa 5A ja 5B.5B, C. G-Rg3:n sytoprotektiivisen vaikutuksen arvioimiseksi B(a)P:tä annettiin yhdessä erilaisten G-Rg3r- tai G-Rg3-pitoisuuksien kanssa hEL-soluihin.Kuten kuvasta 5D näkyy, G-Rg3r pitoisuuksilla 5 µM, 10 µM ja 20 µM palautti solujen elinkelpoisuuden vastaavasti 58,3 %:iin, 79,3 %:iin ja 77,3 %:iin.Samanlaisia tuloksia voidaan nähdä myös G-Rg3s-ryhmässä.Kun G-Rg3:n pitoisuudet olivat 5 uM, 10 uM ja 20 uM, solujen elinkelpoisuus palautui vastaavasti 58,3 %:iin, 72,7 %:iin ja 76,7 %:iin (kuvio 5E).).BPDE-DNA-adduktien läsnäolo mitattiin käyttämällä ELISA-pakkausta.Tuloksemme osoittivat, että BPDE-DNA-adduktiotasot nousivat B(a)P-käsitellyssä ryhmässä verrattuna kontrolliryhmään, mutta verrattuna G-Rg3-yhteishoitoon BPDE-DNA-adduktipitoisuudet B(a)P-ryhmässä. B käsitellyssä ryhmässä DNA-adduktipitoisuudet vähenivät merkittävästi.Pelkästään B(a)P:llä tehdyn hoidon tulokset esitetään kuviossa 5F (1,87 ± 0,33 vs. 3,77 ± 0,42 G-Rg3r:lle, 1,93 ± 0,48 vs. 3,77 ± 0,42 G-Rg3s:lle, p < 0,001).
Solujen elinkelpoisuus ja BPDE-DNA-adduktien muodostuminen G-Rg3:lla ja B(a)P:llä käsitellyissä hEL-soluissa.(A) B(a)P:llä käsiteltyjen hEL-solujen elinkelpoisuus.(B) G-Rg3r:llä käsiteltyjen hEL-solujen elinkelpoisuus.(C) G-Rg3:lla käsiteltyjen hEL-solujen elinkelpoisuus.(D) B(a)P:llä ja G-Rg3r:llä käsiteltyjen hEL-solujen elinkelpoisuus.(E) B(a)P:llä ja G-Rg3:lla käsiteltyjen hEL-solujen elinkelpoisuus.(F) BPDE-DNA-adduktin tasot B(a)P:llä ja G-Rg3:lla käsitellyissä hEL-soluissa.Tiedot ilmaistaan kolmen rinnakkaismääritysten keskiarvona ± keskihajonnana.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
GST-entsyymin ilmentyminen havaittiin 10 µM B(a)P:n ja 10 µM G-Rg3r:n tai G-Rg3s:n yhteiskäsittelyn jälkeen.Tuloksemme osoittivat, että B(a)P suppressoi GST:n ilmentymistä (59,7 ± 8,2 % G-Rg3r-ryhmässä ja 39 ± 4,5 % G-Rg3s-ryhmässä), ja B(a)P liittyi jompaankumpaan G-Rg3r:ään. tai G-Rg3r:n tai G-Rg3r:n kanssa.Yhteishoito G-Rg3:illa palautti GST-ekspression.GST-ekspressio (103,7 ± 15,5 % G-Rg3r-ryhmässä ja 110 ± 11,1 % G-Rg3s-ryhmässä, p < 0,05 ja p < 0,001, vastaavasti, kuviot 6A, B ja C).GST-aktiivisuus arvioitiin käyttämällä aktiivisuusmäärityspakkausta.Tuloksemme osoittivat, että yhdistelmähoitoryhmällä oli korkeampi GST-aktiivisuus verrattuna vain B(a)P-ryhmään (96,3 ± 6,6 % vs. 35,7 ± 7,8 % G-Rg3r-ryhmässä vs. 92,3 ± 6,5 G-Rg3r-ryhmässä ).% vs 35,7 ± 7,8 % G-Rg3s-ryhmässä, p < 0,001, kuvio 6D).
GST:n ja Nrf2:n ilmentyminen B(a)P:llä ja G-Rg3:lla käsitellyissä hEL-soluissa.(A) GST-ekspression havaitseminen Western blot -menetelmällä.(B) GST:n kvantitatiivinen ekspressio B(a)P:llä ja G-Rg3r:llä käsitellyissä hEL-soluissa.(C) GST:n kvantitatiivinen ekspressio B(a)P:llä ja G-Rg3:lla käsitellyissä hEL-soluissa.(D) GST-aktiivisuus B(a)P:llä ja G-Rg3:lla käsitellyissä hEL-soluissa.(E) Nrf2-ilmentymisen havaitseminen Western-blottauksella.(F) Nrf2:n kvantitatiivinen ekspressio B(a)P:llä ja G-Rg3r:llä käsitellyissä hEL-soluissa.(G) Nrf2:n kvantitatiivinen ekspressio B(a)P:llä ja G-Rg3:lla käsitellyissä hEL-soluissa.Tiedot ilmaistaan kolmen rinnakkaismääritysten keskiarvona ± keskihajonnana.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
G-Rg3-välitteiseen B(a)P-indusoidun tuumorigeneesin suppressioon liittyvien reittien selvittämiseksi Nrf2:n ilmentyminen arvioitiin Western blot -menetelmällä.Kuten kuvioissa 6E, F, G esitetään, vertailuryhmään verrattuna vain Nrf2:n taso B(a)P-käsittelyryhmässä laski;kuitenkin B(a)P-hoitoryhmään verrattuna B(a) Nrf2-tasot PG-Rg3-ryhmässä nousivat (106 ± 9,5 % G-Rg3r:lle vs. 51,3 ± 6,8 %, 117 ± 6,2 % ryhmälle G-Rg3r vs. 41 ± 9,8 % G-Rg3s:lle, p < 0,01).
Vahvistimme Nrf2:n ennaltaehkäisevän roolin estämällä Nrf2:n ilmentymistä käyttämällä spesifistä pientä häiritsevää RNA:ta (siRNA).Nrf2 knockdown varmistettiin Western blot -menetelmällä (kuvio 7A, B).Kuten kuvioista 7C, D esitetään, hEL-solujen yhteiskäsittely B(a)P:llä ja G-Rg3:lla johti BPDE-DNA-adduktien määrän laskuun (1,47 ± 0,21) verrattuna B(a)P-käsittelyyn. yksin siRNA-kontrolliryhmässä.) G-Rg3r oli 4,13 ± 0,49, G-Rg3s oli 1,8 ± 0,32 ja 4,1 ± 0,57, p < 0,01).G-Rg3:n estävä vaikutus BPDE-DNA:n muodostumiseen kuitenkin poistui Nrf2:n knockdownilla.siNrf2-ryhmässä ei ollut merkittävää eroa BPDE-DNA-adduktin muodostumisessa B(a)P- ja G-Rg3-yhteishoidon ja pelkän B(a)P-hoidon välillä (3,0 ± 0,21 G-Rg3r:lle vs. 3,56 ± 0,32). ).G-Rg3r vs. 3,6 G-Rg3s vs. ±0,45 vs. 4,0±0,37, p > 0,05).
Nrf2-knockdownin vaikutus BPDE-DNA-adduktin muodostumiseen hEL-soluissa.(A) Nrf2-knockdown vahvistettiin Western blot -menetelmällä.(B) Nrf2-kaistan intensiteetin kvantifiointi.(C) Nrf2-knockdownin vaikutus BPDE-DNA-adduktitasoihin B(a)P:llä ja G-Rg3r:llä käsitellyissä hEL-soluissa.(D) Nrf2-knockdownin vaikutus BPDE-DNA-adduktitasoihin B(a)P:llä ja G-Rg3:lla käsitellyissä hEL-soluissa.Tiedot ilmaistaan kolmen rinnakkaismääritysten keskiarvona ± keskihajonnana.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Tässä tutkimuksessa arvioitiin erilaisten punaisten ginseng-uutteiden ehkäiseviä vaikutuksia B(a)P-indusoidun keuhkosyövän hiirimallissa, ja KRGB-hoito vähensi merkittävästi kasvaintaakkaa.Ottaen huomioon, että G-Rg3:lla on korkein pitoisuus tässä ginseng-uutteessa, tämän ginsenosidin tärkeää roolia kasvaimen muodostumisen estämisessä on tutkittu.Sekä G-Rg3r että G-Rg3 (G-Rg3:n kaksi epimeeriä) vähensivät merkittävästi kasvainkuormitusta B(a)P-indusoidun syövän hiirimallissa.G-Rg3r ja G-Rg3 vaikuttavat syöpää vastaan indusoimalla kasvainsolujen apoptoosia21, estämällä kasvaimen kasvua22, pysäyttämällä solusyklin23 ja vaikuttamalla angiogeneesiin24.G-Rg3:n on myös osoitettu estävän solujen etäpesäkkeitä25, ja G-Rg3:n kyky tehostaa kemoterapian ja sädehoidon vaikutuksia on dokumentoitu26,27.Poon ym. osoittivat, että G-Rg3-käsittely voisi vähentää B(a)P28:n genotoksisia vaikutuksia.Tämä tutkimus osoittaa G-Rg3:n terapeuttisen potentiaalin ympäristön karsinogeenisten molekyylien kohdistamisessa ja syövän ehkäisyssä.
Huolimatta niiden hyvästä profylaktisesta mahdollisuudesta, ginsenosidien huono oraalinen biologinen hyötyosuus asettaa haasteen näiden molekyylien kliiniselle käytölle.Ginsenosidien suun kautta antamisen farmakokineettinen analyysi rotille osoitti, että sen biologinen hyötyosuus on edelleen alle 5 %29.Nämä testit osoittivat, että 20 viikon hoitojakson jälkeen vain veren Rg5-tasot laskivat.Vaikka huonon biologisen hyötyosuuden taustalla oleva mekanismi on vielä selvittämättä, P-gp:n uskotaan osallistuvan ginsenosidien ulosvirtaukseen.Tämä työ osoitti ensimmäistä kertaa, että verapamiilin, P-gp-salpaajan, antaminen lisää G-Rg3r:n ja G-Rg3s:n oraalista biologista hyötyosuutta.Siten tämä havainto viittaa siihen, että G-Rg3r ja G-Rg3s toimivat P-gp:n substraatteina sen ulosvirtauksen säätelemiseksi.
Tämä työ osoittaa, että yhdistelmähoito verapamiililla lisää G-Rg3:n oraalista biologista hyötyosuutta keuhkosyövän hiirimallissa.Tätä havaintoa tukee G-Rg3:n lisääntynyt suoliston transsellulaarinen kuljetus P-gp:n salpauksen yhteydessä, mikä lisää sen imeytymistä.Caco2-soluissa tehdyt määritykset osoittivat, että verapamiilikäsittely vähensi G-Rg3r:n ja G-Rg3:n ulosvirtausta samalla kun paransi kalvon läpäisevyyttä.Yang et al.Tutkimukset ovat osoittaneet, että hoito syklosporiini A:lla (toinen P-gp:n salpaaja) lisää ginsenosidin Rh2:n biologista hyötyosuutta 1 %:n perusarvosta 20 yli 30 prosenttiin.Ginsenosidiyhdisteet K ja Rg1 osoittivat myös samanlaisia tuloksia30,31.Kun verapamiilia ja syklosporiini A:ta annettiin samanaikaisesti, yhdisteen K ulosvirtaus Caco-2-soluissa väheni merkittävästi 26,6:sta alle 3:een, kun taas sen solunsisäiset tasot nousivat 40-kertaisesti30.Verapamiilin läsnä ollessa Rg1-tasot nousivat rotan keuhkojen epiteelisoluissa, mikä viittaa P-gp:n rooliin ginsenosidin ulosvirtauksessa, kuten Meng et al.31 osoittavat.Verapamiililla ei kuitenkaan ollut samaa vaikutusta joidenkin ginsenosidien (kuten Rg1, F1, Rh1 ja Re) ulosvirtaukseen, mikä osoittaa, että P-gp-substraatit eivät vaikuta niihin, kuten Liang et al.32 .Tämä havainto voi liittyä muiden kuljettajien ja vaihtoehtoisten ginsenosidirakenteiden osallistumiseen.
G-Rg3:n syöpää ehkäisevän vaikutuksen mekanismi on epäselvä.Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että G-Rg3 ehkäisee DNA-vaurioita ja apoptoosia vähentämällä oksidatiivista stressiä ja tulehdusta16,33, jotka voivat olla B(a)P:n aiheuttaman tuumorigeneesin estämisen taustalla oleva mekanismi.Jotkut raportit osoittavat, että B(a)P:n indusoimaa genotoksisuutta voidaan vähentää moduloimalla vaiheen II entsyymejä muodostamaan BPDE-DNA34.GST on tyypillinen vaiheen II entsyymi, joka estää BPDE-DNA-adduktien muodostumista edistämällä GSH:n sitoutumista BPDE:hen, mikä vähentää B(a)P35:n aiheuttamaa DNA-vauriota.Tuloksemme osoittavat, että G-Rg3-käsittely vähentää B(a)P-indusoitua sytotoksisuutta ja BPDE-DNA-adduktien muodostumista hEL-soluissa ja palauttaa GST:n ilmentymisen ja aktiivisuuden in vitro.Nämä vaikutukset kuitenkin puuttuivat Nrf2:n puuttuessa, mikä viittaa siihen, että G-Rg3 indusoi sytoprotektiivisia vaikutuksia Nrf2-reitin kautta.Nrf2 on tärkeä transkriptiotekijä vaiheen II detoksifikaatioentsyymeille, joka edistää ksenobioottien puhdistumaa36.Nrf2-reitin aktivointi indusoi sytosuojaa ja vähentää kudosvaurioita37.Lisäksi useat raportit ovat tukeneet Nrf2:n roolia kasvaimen suppressorina karsinogeneesissä38.Tutkimuksemme osoittaa, että G-Rg3:n aiheuttamalla Nrf2-reitin induktiolla on tärkeä säätelyrooli B(a)P-indusoidussa genotoksisuudessa aiheuttamalla B(a)P-detoksifikaatiota aktivoimalla faasin II entsyymejä, mikä estää tuumorigeneesiprosessia.
Työmme paljastaa punaisen ginsengin potentiaalin B(a)P:n aiheuttaman keuhkosyövän ehkäisyssä hiirillä ginsenosidi G-Rg3:n tärkeän osallistumisen kautta.Tämän molekyylin huono oraalinen biologinen hyötyosuus vaikeuttaa sen kliinistä käyttöä.Tämä tutkimus osoittaa kuitenkin ensimmäistä kertaa, että G-Rg3 on P-gp:n substraatti, ja P-gp-inhibiittorin antaminen lisää G-Rg3:n biologista hyötyosuutta in vitro ja in vivo.G-Rg3 vähentää B(a)P:n aiheuttamaa sytotoksisuutta säätelemällä Nrf2-reittiä, joka voi olla mahdollinen mekanismi sen ennaltaehkäisevälle toiminnalle.Tutkimuksemme vahvistaa ginsenosidi G-Rg3:n potentiaalin keuhkosyövän ehkäisyssä ja hoidossa.
Kuuden viikon ikäiset naaraspuoliset A/J-hiiret (20 ± 1 g) ja 7 viikon ikäiset urospuoliset Wistar-rotat (250 ± 20 g) saatiin Jackson Laboratorysta (Bar Harbor, USA) ja Wuhan Institute of Zoologysta.Yliopisto (Wuhan, Kiina).Chinese Type Culture Collection Center (Wuhan, Kiina) toimitti meille Caco-2- ja hEL-soluja.Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) on B(a)P:n ja trikapriinin lähde.Puhdistetut ginsenosidit G-Rg3r ja G-Rg3s, dimetyylisulfoksidi (DMSO), CellTiter-96 proliferaatiomäärityspakkaus (MTS), verapamiili, välttämätön vähimmäisväliaine (MEM) ja naudan sikiön seerumi (FBS) ostettiin Chengdu Must Bio-Technologylta .Co., Ltd.(Chengdu, Kiina).QIAamp DNA -minipakkaus ja BPDE-DNA-addukti-ELISA-pakkaus ostettiin Qiagenilta (Stanford, CA, USA) ja Cell Biolabsilta (San Diego, CA, USA).GST-aktiivisuusmäärityspakkaus ja kokonaisproteiinin määrityspakkaus (standardi BCA-menetelmä) ostettiin Solarbiolta (Peking, Kiina).Kaikki punaiset ginsenguutteet varastoidaan Mingyu Laboratory 7:ssä. Hongkongin baptistiyliopisto (Hongkong, Kiina) ja Korea Cancer Center (Soul, Korea) ovat CRG-uutteen ja erilaisten korealaista alkuperää olevien punaisten ginsenguutteiden kaupallisia lähteitä (mukaan lukien KRGA, KRGB ja KRGC).Punainen ginseng on valmistettu 6-vuotiaan tuoreen ginsengin juurista.Punainen ginseng-uute saadaan pesemällä ginseng vedellä kolme kertaa, konsentroimalla sitten vesipitoinen uute ja lopuksi kuivaamalla alhaisessa lämpötilassa ginseng-uutejauheen saamiseksi.Vasta-aineet (anti-Nrf2, anti-GST ja β-aktiini), piparjuuriperoksidaasilla konjugoitu anti-kanin immunoglobuliini G (IgG), transfektioreagenssi, kontrolli-siRNA ja Nrf2 siRNA ostettiin Santa Cruz Biotechnologylta (Santa Cruz, CA) .), USA).
Caco2- ja hEL-soluja viljeltiin 100 mm2:n soluviljelymaljoissa MEM:llä, joka sisälsi 10 % FBS:ää, 37 °C:ssa kostutetussa ilmakehässä, jossa oli 5 % C02:ta.Käsittelyolosuhteiden vaikutuksen määrittämiseksi hEL-soluja inkuboitiin eri B(a)P- ja G-Rg3-pitoisuuksien kanssa MEM:ssä 48 tuntia.Soluja voidaan analysoida edelleen tai kerätä soluttomien uutteiden valmistamiseksi.
Kaikki kokeet hyväksyi Huazhongin tiede- ja teknologiayliopiston Tongjin lääketieteellisen korkeakoulun Experimental Animal Ethics Committee (hyväksyntänumero 2019; rekisteröintinumero 4587TH).Kaikki kokeet suoritettiin asiaankuuluvien ohjeiden ja määräysten mukaisesti, ja tutkimus suoritettiin Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE) -ohjeiden mukaisesti.Kahdeksan viikon ikäisille A/J-hiirille injektoitiin ensin intraperitoneaalisesti B(a)P:tä trikapriiniliuoksessa (100 mg/kg, 0,2 ml).Viikon kuluttua hiiret jaettiin satunnaisesti kontrolliryhmiin ja eri hoitoryhmiin, 15 hiirtä kussakin ryhmässä, ja niille annettiin letku kerran päivässä.20 viikon hoidon jälkeen eläimet tapettiin CO2-tukkeutumisessa.Keuhkot kerättiin ja kiinnitettiin 24 tunnin ajan.Pinnallisten kasvainten lukumäärä ja yksittäisten kasvainten koot kvantifioitiin kullekin keuhkolle dissektoivalla mikroskoopilla.Kasvaintilavuusarviot (V) laskettiin käyttämällä seuraavaa lauseketta: V (mm3) = 4/3πr3, missä r on kasvaimen halkaisija.Hiirien keuhkoissa olevien kasvainten kokonaistilavuuksien nettosumma edusti kasvaimen kokonaistilavuutta ja keskimääräinen kasvaimen kokonaistilavuus kussakin ryhmässä edusti kasvaimen kuormitusta.Kokoveri- ja suolistonäytteet kerättiin ja säilytettiin -80 °C:ssa UPLC-MS/MS-määritystä varten.Seerumi kerättiin ja automaattista kemian analysaattoria käytettiin analysoimaan alaniiniaminotransferaasi (ALT) ja seerumin kreatiniini (Cr) tasot maksan ja munuaisten toiminnan arvioimiseksi.
Kerätyt näytteet poistettiin kylmävarastosta, sulatettiin, punnittiin ja asetettiin putkiin edellä kuvatulla tavalla.Tähän lisättiin 0,5 µM floritsiinia (sisäinen standardi) 0,8 ml:ssa metanoliliuosta.Sitten kudos homogenisoitiin käyttämällä Tissue-Tearoria ja homogenaatti siirrettiin tämän jälkeen 1,5 ml:n mikrosentrifugiputkeen.Seosta sentrifugoitiin nopeudella 15 500 rpm 15 minuuttia.Kun on poistettu 1,0 ml supernatanttia, kuivataan typellä.Talteenottoon käytettiin kaksisataa mikrolitraa metanolia.Veri kerätään ja käsitellään yhdellä linjalla, ja sitä käytetään vertailukohtana kaikissa mittauksissa.
24-kuoppaisille Transwell-levyille ympättiin 1,0 x 105 Caco-2-solua kuoppaa kohti G-Rg3-kuljetuksen mahdollisen tehostumisen arvioimiseksi lisäämällä verapamiilia.3 viikon viljelyn jälkeen solut pestiin HBSS:llä ja esi-inkuboitiin 37 °C:ssa.400 µl 10 µM G-Rg3:a (G-Rg3r, G-Rg3s tai seos, jossa oli 50 tai 100 µM verapamiilia) injektoitiin yksikerroksen basolateraaliselle tai apikaaliselle puolelle ja toiselle puolelle lisättiin 600 µl HBSS-liuosta. puolella.Kerää 100 µl elatusainetta määrättyinä aikoina (0, 15, 30, 45, 60, 90 ja 120 minuuttia) ja lisää 100 µl HBSS:ää tämän tilavuuden täyttämiseksi.Näytteitä säilytettiin -4 °C:ssa UPLC-MS/MS:llä havaitsemiseen asti.Ilmaisua Papp = dQ/(dT × A × C0) käytetään kvantifioimaan näennäinen yksisuuntainen apikaalinen ja basolateraalinen permeabiliteetti ja päinvastoin (Pa-b ja Pb-a, vastaavasti);dQ/dT on pitoisuuden muutos, A (0,6 cm2) on yksikerroksen pinta-ala ja C0 on luovuttajan alkuperäinen pitoisuus.Efflux-suhde lasketaan Pb-a/Pa-b:nä, joka edustaa tutkimuslääkkeen ulosvirtausnopeutta.
Urospuoliset Wistar-rotat paastottiin 24 tuntia, joivat vain vettä ja nukutettiin suonensisäisellä 3,5-prosenttisella pentobarbitaaliliuoksella.Intuboidun silikoniputken sisääntulona on pohjukaissuolen pää ja ulostulona sykkyräsuolen pää.Käytä peristalttista pumppua pumppaamaan tuloaukko 10 µM G-Rg3r:llä tai G-Rg3s:lla isotonisessa HBSS:ssä virtausnopeudella 0,1 ml/min.Verapamiilin vaikutus arvioitiin lisäämällä 50 µM tai 100 µM yhdistettä 10 µM G-Rg3r- tai G-Rg3s:iin.UPLC-MS/MS suoritettiin perfuusiouutteille, jotka oli kerätty ajankohtina 60, 90, 120 ja 150 minuuttia perfuusion alkamisen jälkeen.Absorption prosenttiosuus kvantifioidaan kaavalla % absorptio = (1 – Cout/Cin) × 100 %;G-Rg3:n pitoisuus ulostulossa ja sisääntulossa ilmaistaan Coutilla ja Cinillä, vastaavasti.
hEL-solut kylvettiin 96-kuoppaisille levyille tiheydellä 1 × 104 solua kuoppaa kohti ja käsiteltiin B(a)P:llä (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) tai G-Rg3:lla liuotettuna DMSO:hon. .Sitten lääkkeet laimennettiin viljelyväliaineella eri pitoisuuksiin (0, 1, 2, 5, 10, 20 µM) 48 tunnin aikana.Käyttämällä kaupallisesti saatavaa MTS-määrityspakkausta, solut alistettiin standardiprotokollalle ja mitattiin sitten käyttämällä mikrolevylukijaa 490 nm:ssä.B(a)P:llä (10 µM) ja G-Rg3:lla (0, 1, 5, 10, 20 µM) samanaikaisesti käsiteltyjen ryhmien solujen elinkelpoisuus arvioitiin yllä olevan menetelmän mukaisesti ja sitä verrattiin käsittelemättömään ryhmään.
hEL-solut kylvettiin 6-kuoppaisille levyille tiheydellä 1 x 105 solua/kuoppa ja käsiteltiin 10 µMB(a)P:llä 10 µM G-Rg3:n läsnä ollessa tai poissa ollessa.48 tunnin käsittelyn jälkeen DNA uutettiin hEL-soluista käyttämällä QIAamp DNA Mini Kit -sarjaa valmistajan protokollan mukaisesti.BPDE-DNA-adduktien muodostuminen havaittiin käyttämällä BPDE-DNA-addukti-ELISA-sarjaa.BPDE-DNA-adduktin suhteelliset tasot mitattiin käyttämällä mikrolevylukijaa mittaamalla absorbanssi 450 nm:ssä.
hEL-solut kylvettiin 96-kuoppaisille levyille tiheydellä 1 × 104 solua kuoppaa kohti ja niitä käsiteltiin 10 µMB(a)P:llä 10 µM G-Rg3:n puuttuessa tai läsnä ollessa 48 tunnin ajan.GST-aktiivisuus mitattiin käyttämällä kaupallista GST-aktiivisuusmäärityspakkausta valmistajan protokollan mukaisesti.Suhteellinen GST-aktivaatio mitattiin absorbanssilla 450 nm:ssä käyttäen mikrolevylukijaa.
hEL-solut pestiin jääkylmällä PBS:llä ja lyysattiin sitten käyttämällä radioimmunosaostusmäärityspuskuria, joka sisälsi proteaasi-inhibiittoreita ja fosfataasin estäjiä.Proteiinin kvantifioinnin jälkeen käyttämällä kokonaisproteiinimäärityspakkausta, 30 μg proteiinia kussakin näytteessä erotettiin 12 % SDS-PAGE:lla ja siirrettiin PVDF-kalvolle elektroforeesilla.Kalvot estettiin 5-prosenttisella rasvattomalla maidolla ja niitä inkuboitiin primääristen vasta-aineiden kanssa yön yli 4 °C:ssa.Piparjuuriperoksidaasilla konjugoitujen sekundaaristen vasta-aineiden kanssa inkuboinnin jälkeen lisättiin tehostettuja kemiluminesenssireagensseja sitoutumissignaalin visualisoimiseksi.Kunkin proteiinivyöhykkeen intensiteetti määritettiin käyttämällä ImageJ-ohjelmistoa.
GraphPad Prism 7.0 -ohjelmistoa käytettiin analysoimaan kaikki tiedot ilmaistuna keskiarvona ± standardipoikkeama.Hoitoryhmien välinen vaihtelu arvioitiin Studentin t-testillä tai yksisuuntaisella varianssianalyysillä, jolloin P-arvo <0,05 osoittaa tilastollista merkitsevyyttä.
Kaikki tämän tutkimuksen aikana saadut tai analysoidut tiedot sisältyvät tähän julkaistuun artikkeliin ja lisätietotiedostoihin.
Torre, LA, Siegel, RL ja Jemal, A. Keuhkosyöpätilastot.adverbi.Vanhentunut.lääke.biologia.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Tupakan karsinogeenit, niiden biomarkkerit ja tupakan aiheuttama syöpä.Nat.Syöpäpappi.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH ja Venitt, S. DNA- ja proteiiniadduktit ihmisen kudoksissa, jotka johtuvat altistumisesta tupakansavulle.kansainvälisyyttä.J. Cancer.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA ja Yu M. Houttuynia cordatan ja silibiniinin vaikutus bentso(a)pyreenin aiheuttamaan keuhkotuumorigeneesiin A/J-hiirillä.Cancer 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et ai.Syövän vastainen luonnontuote, joka on eristetty kiinalaisista lääkeaineista.leuka.lääke.6, 27 (2011).
Yang, Y. et ai.Polyfenoni E:n, punaisen ginsengin ja rapamysiinin teho bentso(a)pyreenin aiheuttamaan keuhkokasvaimen muodostukseen A/J-hiirillä.Cancer 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS ja Yuan, KS Red, osallistuminen syövän hoitoon.leuka.J. Nutt.lääke.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS ja Gao, L. Ginsenosides juuret ja lehdet American ginseng.J. Agric.Ruoka kemia.44, 717-720 (1996).
Attele AS, Wu JA ja Yuan KS Ginsengin farmakologia: monia komponentteja ja monia vaikutuksia.biokemia.farmakologia.58, 1685-1693 (1999).
Postitusaika: 17.9.2023