Mèsi paske w vizite Nature.com.Vèsyon navigatè w ap itilize a gen sipò CSS limite.Pou pi bon rezilta, nou rekòmande pou itilize yon nouvo vèsyon navigatè ou a (oswa fèmen mòd konpatibilite nan Internet Explorer).Antretan, pou asire sipò kontinyèl, nou ap montre sit la san style oswa JavaScript.
Ginseng wouj yo te itilize nan medikaman tradisyonèl Azyatik pou dè santèn de ane.Nan etid sa a, nou evalye kapasite kat kalite jinsang wouj (jinsang wouj Chinwa, jinsang wouj Koreyen A, jinsang wouj Koreyen B, ak jinsang wouj Koreyen C) ki grandi nan diferan rejyon pou anpeche fòmasyon ak kwasans nan poumon kanserojèn pwovoke. timè.Yon tès benzo(a)pyrene (B(a)P) te fèt sou sourit A/J, epi yo te jwenn ginseng wouj Koreyen B ki pi efikas nan diminye fado timè nan mitan kat varyete ginseng wouj yo.Anplis de sa, nou analize sa ki nan divès kalite ginsenosides (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ak Rg5) nan kat ekstrè ginseng wouj epi nou jwenn ke ginseng wouj Koreyen B te gen. nivo ki pi wo nan ginsenoside Rg3 (G-Rg3), sijere ke G-Rg3 ka jwe yon wòl enpòtan nan efikasite terapetik li yo.Travay sa a montre ke G-Rg3 gen relativman ba byodisponibilite.Sepandan, lè G-Rg3 te koadministre ak verapamil inhibitor P-gp, eflu G-Rg3 nan selil Caco-2 te diminye, pousantaj absòpsyon entesten G-Rg3 te ogmante nan yon modèl rat, ak G-Rg3. te ogmante.Nan selil Caco-2, ekoulman pwodiksyon an nan Rg3 diminye, ak nivo nan konsantrasyon Rg3 diminye.G-Rg3 ogmante nan trip la ak plasma, epi kapasite li pou anpeche timè amelyore tou nan yon modèl rat nan tumorigenesis B(a)P-induit.Nou te jwenn tou ke G-Rg3 redwi sitotoksisite B(a)P-induit ak fòmasyon adduct ADN nan selil nan poumon imen, epi retabli ekspresyon ak aktivite faz II anzim atravè chemen Nrf2 a, ki ka gen rapò ak mekanis potansyèl aksyon an. nan G anpèchman -Rg3..Konsènan ensidan an nan timè nan poumon.Etid nou an demontre yon wòl potansyèlman enpòtan pou G-Rg3 nan vize timè nan poumon nan modèl sourit.Byodisponibilite nan bouch nan ginsenoside sa a ogmante pa vize P-glycoprotein, ki pèmèt molekil la fè egzèsis efè antikansè.
Kalite ki pi komen nan kansè nan poumon se kansè nan poumon ki pa ti selil (NSCLC), ki se youn nan kòz prensipal lanmò kansè nan Lachin ak Amerik di Nò1,2.Faktè prensipal ki ogmante risk pou yo devlope kansè nan poumon ki pa ti selil se fimen.Lafimen sigarèt gen plis pase 60 kanserojèn, ki gen ladan benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrozamin, ak izotòp radyo-aktif ki soti nan pouri radon an.3 Idwokarbur aromat polisiklik B(a)P se kòz prensipal toksisite nan sigarèt. lafimen.Lè yo ekspoze a B(a)P, cytochrome P450 konvèti li nan B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), ki reyaji ak ADN pou fòme BPDE-DNA addukt 4. Anplis de sa, sa yo. adducts pwovoke tumorigenesis nan poumon nan sourit ak etap timè ak istopatoloji ki sanble ak timè nan poumon moun5.Karakteristik sa a fè modèl kansè nan poumon B(a)P-induced yon sistèm apwopriye pou evalye konpoze ak pwopriyete antikansè posib.
Youn nan estrateji posib pou anpeche devlopman kansè nan poumon nan gwoup ki gen gwo risk, espesyalman fimè, se itilizasyon ajan chemopreventive pou siprime devlopman nan blesi neoplasik entraepitelial epi kidonk anpeche pwogresyon ki vin apre yo nan malign.Etid sou bèt yo montre ke plizyè ajan chemopreventive efikas6.Rapò anvan nou an7 te mete aksan sou bon efè prevantif ginseng wouj sou kansè nan poumon.Zèb sa a te itilize pandan plizyè syèk nan medikaman tradisyonèl Azyatik pou pwolonje lavi ak sante, e li te dokimante li gen efè antitumoral8.
Faktè aktif nan jinsang se ginsenoside, ki itilize kòm yon makè konpoze pou evalye kalite ekstrè jinsang.Analiz quantitative de brut ginseng extraits généralement enplike itilizasyon plizyè ginsenosides, tankou RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, ak Rc9,10.Ginsenosides gen ti itilizasyon klinik akòz byodisponibilite oral trè pòv yo11.Malgre ke mekanis pou byodisponibilite pòv sa a pa klè, ekoulman ginsenosides ki te koze pa P-glycoprotein (P-gp)12 ka lakòz.P-gp se youn nan transpòtè ekoulman ki pi enpòtan nan superfamiy transpòtè kasèt ATP-obligatwa, ki sèvi ak enèji idroliz ATP pou lage sibstans entraselilè nan anviwònman ekstèn lan.P-gp transpòtè yo anjeneral lajman distribye nan trip la, ren, fwa ak baryè san-sèvo13.P-gp jwe yon wòl kritik nan absòpsyon entesten, ak anpèchman P-gp ogmante absòpsyon oral la ak disponiblite kèk dwòg antikansè12,14.Men kèk egzanp inibitè ki te deja itilize nan literati a se verapamil ak siklosporin A15.Travay sa a enplike nan etabli yon sistèm sourit pou etidye kansè nan poumon B(a)P-induit pou evalye kapasite diferan ekstrè ginseng wouj ki soti nan Lachin ak Kore di afekte maladi malfezan.Ekstrè yo te analize endividyèlman pou idantifye ginsenosides espesifik ki ka afekte kanserojèn.Lè sa a, Verapamil te itilize pou vize P-gp ak amelyore byodisponibilite oral la ak efikasite terapetik ginsenosides ki vize kansè.
Mekanis nan ki saponin ginseng fè egzèsis efè ki ka geri sou kanserojèn rete klè.Rechèch yo montre ke divès ginsenosides ka diminye domaj ADN ki te koze pa kanserojèn lè yo diminye estrès oksidatif ak aktive faz II anzim dezentoksikasyon, kidonk anpeche domaj selil yo.Glutathione S-transferase (GST) se yon anzim tipik faz II ki oblije diminye domaj ADN ki te koze pa kanserojèn17.Nikleyè erythroid 2 ki gen rapò ak faktè 2 (Nrf2) se yon faktè transkripsyon enpòtan ki kontwole omeyostazi redox ak aktive ekspresyon faz II anzim ak repons antioksidan cytoprotective18.Etid nou an te egzamine tou efè ginsenosides idantifye sou diminye sitotoksisite B(a)P-induit ak fòmasyon adduct BPDE-DNA, osi byen ke pwovoke faz II anzim pa modulation chemen Nrf2 nan selil nòmal nan poumon.
Etablisman an nan yon modèl sourit nan B(a)P-pwovoke kansè se ki konsistan avèk travay anvan yo5.Figi 1A montre konsepsyon eksperimantal yon tretman 20 semèn nan yon modèl kansè sourit pwovoke pa B (a) P, dlo (kontwòl), Chinwa wouj ginseng ekstrè (CRG), Koreyen wouj ginseng ekstrè A (KRGA), ak Koreyen wouj. jinsang.Ekstrè B (KRGB) ak Koreyen wouj Ginseng ekstrè C (KRGC).Apre 20 semèn nan tretman ginseng wouj, sourit yo te sakrifye pa asfiksi CO2.Figi 1B montre timè nan poumon makwoskopik nan bèt trete ak diferan kalite jinsang wouj, ak Figi 1C montre yon mikrografi limyè reprezantan yon echantiyon timè.Fado timè bèt ki trete KRGB (1.5 ± 0.35) te pi ba pase bèt kontwòl (0.82 ± 0.2, P <0.05), jan yo montre nan Figi 1D.Degre an mwayèn nan anpèchman chaj timè te 45%.Lòt ekstrè ginseng wouj yo teste pa t 'montre chanjman enpòtan sa yo nan fado timè (P> 0.05).Pa gen okenn efè segondè evidan yo te obsève nan modèl la sourit pandan 20 semèn nan tretman jinsang wouj, ki gen ladan pa gen okenn chanjman nan pwa kò (done yo pa montre) ak pa gen okenn fwa oswa ren toksisite (Figi 1E, F).
Ekstrè ginseng wouj trete devlopman timè nan poumon nan sourit A/J.(A) Konsepsyon eksperimantal.(B) Gwo timè nan poumon nan yon modèl sourit.Timè yo endike pa flèch.a: Chinwa wouj ginseng gwoup.b: gwoup A nan ginseng wouj Koreyen.c: Kore di wouj ginseng gwoup B. d: Kore di wouj ginseng gwoup C. d: Gwoup kontwòl.(C) Mikrografi limyè ki montre yon timè nan poumon.Agrandisman: 100. b: 400. (D) Chaj timè nan gwoup la ekstrè wouj ginseng.(E) Nivo plasma nan anzim fwa ALT la.(F) Nivo plasma nan anzim ren Cr.Done yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda.*P <0.05.
Ekstrè ginseng wouj yo idantifye nan etid sa a te analize pa espektrometri mas tandem chromatografi likid ultra-pèfòmans (UPLC-MS/MS) pou quantifier ginsenosides sa yo: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ak Rg5.Kondisyon UPLC ak MS yo itilize pou mezire analit yo te dekri nan yon rapò anvan19.UPLC-MS/MS chromatogram nan kat ekstrè jinsang wouj yo montre nan Figi 2A.Te gen diferans enpòtan nan kontni total ginsenoside, ak pi wo kontni total ginsenoside nan CRG (590.27 ± 41.28 μmol / L) (Figi 2B).Lè evalye ginsenosides endividyèl (Figi 2C), KRGB te montre nivo ki pi wo nan G-Rg3 konpare ak lòt ginsenosides (58.33 ± 3.81 μmol / L pou G-Rg3s ak 41.56 ± 2.88 μmol / L pou G -Rg3r).L).kalite jinsang wouj (P <0.001).G-Rg3 rive kòm yon pè estereyoizomer G-Rg3r ak G-Rg3s, ki diferan nan pozisyon gwoup hydroxyl nan kabòn 20 (Fig. 2D).Rezilta yo endike ke G-Rg3r oswa G-Rg3 ka gen potansyèl antikanse enpòtan nan yon modèl sourit kansè B(a)P-induit.
Kontni nan ginsenosides nan divès kalite ekstrè ginseng wouj.(A) UPLC-MS/MS chromatograms nan kat ekstrè ginseng wouj.(B) Estimasyon kontni total ginsenoside nan ekstrè ki endike yo.(C) Deteksyon ginsenosides endividyèl nan ekstrè ki make.(D) Estrikti ginsenoside stereoizomers G-Rg3r ak G-Rg3s.Done yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda detèminasyon triple.***P <0.001.
Etid UPLC-MS/MS te egzije quantification ginsenosides nan echantiyon entesten ak san apre 20 semèn tretman.Tretman ak KRGB te montre prezans sèlman 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 nan san an.Pa gen okenn ginsenoside ki rete yo te detekte, ki endike pòv byodisponibilite oral ak Se poutèt sa redwi ekspoze a ginsenoside sa yo.
Liy selil adenokarcinom nan kolon Caco-2 se mòfolojik ak byochimik ki sanble ak selil epitelyal entesten imen, ki demontre itilite li nan evalye transpò enterosit atravè baryè epitelyal entesten an.Analiz sa a te baze sou yon etid pi bonè 20 .Figi 3A,B,C,D,E,F montre imaj reprezantan transpò transselilè G-Rg3r ak G-Rg3 lè l sèvi avèk yon modèl monokouch Caco-2.Transselilè transpò G-Rg3r oswa G-Rg3 atravè monokouch Caco-2 soti nan basolateral nan bò apik (Pb-a) te siyifikativman pi wo pase soti nan bò apical a basolateral (Pa-b).Pou G-Rg3r, valè Pa-b vle di te 0.38 ± 0.06, ki te ogmante a 0.73 ± 0.06 apre tretman ak 50 μmol / L verapamil ak 1.14 ± 0.09 apre tretman ak 100 μmol / L verapamil (p < 0.001, 0.001, respektivman; Figi 2).3A).Obsèvasyon pou G-Rg3 te swiv yon modèl menm jan an (Fig. 3B), ak rezilta yo te montre ke tretman verapamil amelyore transpò G-Rg3r ak G-Rg3.Tretman Verapamil te lakòz tou yon diminisyon enpòtan nan rapò mwayèn Pb-a ak G-Rg3r ak G-Rg3s (Figi 3C, D, E, F), ki endike ke tretman verapamil diminye kontni ginsenoside nan selil Caco-2..
Transselilè transpò G-Rg3 nan monocouches Caco-2 ak absòpsyon entesten nan yon tès perfusion rat.(A) Pa-b valè gwoup G-Rg3r nan monocouche Caco-2.(B) Valè Pa-b nan gwoup G-Rg3s nan monolayer Caco-2.(C) Valè Pb nan gwoup G-Rg3r nan monolayer Caco-2.(D) Valè Pb nan gwoup G-Rg3s nan monolayer Caco-2.(E) Rapò rannman nan gwoup G-Rg3r nan yon monokouch Caco-2.(F) Rapò rannman nan gwoup G-Rg3 nan yon monokouch Caco-2.(G) Pousantaj absòpsyon entesten nan G-Rg3r nan yon tès perfusion nan rat.(H) Pousantaj absòpsyon entesten nan G-Rg3 nan yon tès perfusion nan rat.Pèmeyabilite ak absòpsyon yo te konpare san adisyon nan verapamil.Done yo eksprime kòm mwayèn ± devyasyon estanda senk eksperyans endepandan.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Konfòm ak travay pi bonè20, yo te fè perfusion orthotopic entesten nan rat pou detèmine si absòpsyon G-Rg3 nan trip la ogmante apre tretman verapamil.Figi 3G, H montre tès perfusion reprezantan pou evalye pousantaj absòpsyon entesten G-Rg3r ak G-Rg3 nan rat modèl kansè yo pandan peryòd tan ki anwo yo.Pousantaj inisyal nan absòpsyon fèb G-Rg3r nan apeprè 10% ogmante a plis pase 20% apre tretman ak 50 μM verapamil ak plis pase 25% apre tretman ak 100 μM verapamil.Menm jan an tou, G-Rg3, ki te gen yon premye absorption de 10%, tou te montre yon pik ki gen plis pase 20% apre tretman ak 50 μM verapamil ak prèske 30% apre tretman ak 100 μM verapamil, sijere ke anpèchman P-gp pa verapamil amelyore. entesten G-absòpsyon Rg3 nan yon modèl sourit nan kansè nan poumon.
Dapre metòd ki pi wo a, sourit modèl kansè B(a)P-induced yo te owaza divize an sis gwoup, jan yo montre nan Figi 4A.Pa gen okenn pèt pwa enpòtan oswa siy klinik toksisite yo te obsève nan gwoup tretman G-Rg3 konpare ak gwoup kontwòl la (done yo pa montre).Apre 20 semèn nan tretman, yo te kolekte poumon yo nan chak sourit.Figi 4B montre timè nan poumon makwoskopik nan sourit nan gwoup tretman ki anwo yo, ak Figi 4C montre yon mikrografi limyè reprezantan yon timè reprezantan.Konsènan fado timè a nan chak gwoup (figi 4D), valè yo pou sourit trete ak G-Rg3r ak G-Rg3s yo te 0.75 ± 0.29 mm3 ak 0.81 ± 0.30 mm3, respektivman, pandan y ap valè yo pou sourit G trete. ak -Rg3s yo te 1.63 respektivman ± 0.40 mm3.kontwòl sourit (p <0.001), ki endike ke tretman G-Rg3 redwi fado timè nan sourit yo.Administrasyon verapamil plis amelyore rediksyon sa a: valè nan verapamil + G-Rg3r sourit diminye soti nan 0.75 ± 0.29 mm3 a 0.33 ± 0.25 mm3 (p < 0.01), ak valè pou verapamil + soti nan 0.81 ± 0.30 mm3 ± 0.30 ± 0.291 ± 0.25 mm3 diminye. mm3 nan G. -Rg3s-trete sourit (p <0.05), ki endike ke verapamil ka amelyore efè a inhibition nan G-Rg3 sou tumorigenesis.Fado timè pa te montre okenn diferans enpòtan ant gwoup kontwòl la ak gwoup verapamil, gwoup G-Rg3r ak gwoup G-Rg3s, ak gwoup verapamil + G-Rg3r ak gwoup verapamil + G-Rg3s.Anplis, pa te gen okenn toksisite enpòtan nan fwa oswa ren ki asosye ak tretman yo evalye (Figi 4E, F).
Fado timè apre tretman G-Rg3 ak plasma oswa nivo entesten G-Rg3r ak G-Rg3 nan gwoup ki endike yo.(A) Konsepsyon eksperimantal.(B) timè makroskopik nan yon modèl sourit.Timè yo endike pa flèch.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r an konbinezon ak verapamil.d: G-Rg3 an konbinezon ak verapamil.d: Verapamil.e: kontwòl.(C) Mikrografi optik timè a nan agrandisman.Repons: 100x.b: 400X.(D) Efè tretman G-Rg3 + verapamil sou chay timè nan sourit A/J.(E) Nivo plasma nan anzim fwa ALT la.(F) Nivo plasma nan anzim ren Cr.(G) Nivo plasma nan G-Rg3r oswa G-Rg3 nan gwoup ki endike yo.(H) Nivo G-Rg3r oswa G-Rg3s nan trip gwoup ki endike yo.Done yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda detèminasyon triple.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Nivo G-Rg3 nan sourit modèl kansè B(a)P-induced yo te evalye pa UPLC-MS/MS apre yon peryòd tretman 20-semèn dapre metòd ki dekri nan seksyon an Metòd.Figi 4G ak H montre nivo plasma ak entesten G-Rg3, respektivman.Nivo Plasma G-Rg3r yo te 0.44 ± 0.32 μmol / L ak ogmante a 1.17 ± 0.47 μmol / L ak administrasyon koncomitan nan verapamil (p <0.001), pandan y ap entesten nivo G-Rg3r yo te 0.53 ± 0.08 μg / l.Lè yo konbine avèk verapamil, g ogmante a 1.35 ± 0.13 μg / g (p <0.001).Pou G-Rg3, rezilta yo te swiv yon modèl menm jan an, ki endike ke tretman verapamil ogmante byodisponibilite oral nan G-Rg3 nan sourit A / J.
Yo te itilize tès viabilite selilè pou evalye sitotoksisite B (a) P ak G-Rg3 sou selil hEL yo.Sitotoksisite ki pwovoke pa B (a) P nan selil hEL yo montre nan Figi 5A, pandan y ap montre pwopriyete ki pa toksik nan G-Rg3r ak G-Rg3 nan Figi 5A ak 5B.5B, C. Pou evalye efè cytoprotective G-Rg3, B (a) P te ko-administre ak divès kalite konsantrasyon nan G-Rg3r oswa G-Rg3 nan selil hEL.Jan yo montre nan Figi 5D, G-Rg3r nan konsantrasyon 5 μM, 10 μM, ak 20 μM retabli viabilite selil a 58.3%, 79.3%, ak 77.3%, respektivman.Rezilta menm jan an ka wè tou nan gwoup G-Rg3s.Lè konsantrasyon G-Rg3s yo te 5 µM, 10 µM ak 20 µM, viabilite selil yo te retabli nan 58.3%, 72.7% ak 76.7%, respektivman (Figi 5E).).Yo te mezire prezans BPDE-DNA adducts lè l sèvi avèk yon twous ELISA.Rezilta nou yo te montre ke nivo adduct BPDE-DNA yo te ogmante nan gwoup B(a)P-trete a konpare ak gwoup kontwòl la, men konpare ak ko-tretman G-Rg3, nivo adduct BPDE-DNA nan gwoup B(a)P. B nan gwoup trete a, nivo adduct ADN yo te siyifikativman redwi.Rezilta tretman ak B (a) P pou kont yo montre nan Figi 5F (1.87 ± 0.33 vs 3.77 ± 0.42 pou G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 vs 3.77 ± 0.42 pou G -Rg3s, p <0.001).
Viabilite selilè ak fòmasyon adduct BPDE-ADN nan selil hEL trete ak G-Rg3 ak B(a)P.(A) Viabilite nan selil hEL trete ak B (a) P.(B) Viabilite nan selil hEL trete ak G-Rg3r.(C) Viabilite nan selil hEL trete ak G-Rg3.(D) Viabilite nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3r.(E) Viabilite nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3.(F) Nivo BPDE-ADN adduct nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3.Done yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda detèminasyon triple.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Ekspresyon anzim GST te detekte apre ko-tretman ak 10 μM B (a) P ak 10 μM G-Rg3r oswa G-Rg3s.Rezilta nou yo te montre ke B (a) P siprime ekspresyon GST (59.7 ± 8.2% nan gwoup G-Rg3r ak 39 ± 4.5% nan gwoup G-Rg3s), ak B (a) P te asosye ak swa ak G-Rg3r. , oswa avèk G-Rg3r, oswa ak G-Rg3r.Ko-tretman ak G-Rg3s retabli ekspresyon GST.Ekspresyon GST (103.7 ± 15.5% nan gwoup G-Rg3r ak 110 ± 11.1% nan gwoup G-Rg3s, p <0.05 ak p <0.001, respektivman, Fig. 6A, B, ak C).Aktivite GST te evalye lè l sèvi avèk yon twous tès aktivite.Rezilta nou yo te montre ke gwoup tretman konbinezon an te gen pi gwo aktivite GST konpare ak gwoup B(a)P sèlman (96.3 ± 6.6% kont 35.7 ± 7.8% nan gwoup G-Rg3r kont 92.3 ± 6.5 nan gwoup G-Rg3r). ).% vs 35.7 ± 7.8% nan gwoup G-Rg3s, p <0.001, Figi 6D).
Ekspresyon GST ak Nrf2 nan selil hEL trete ak B(a)P ak G-Rg3.(A) Deteksyon ekspresyon GST pa Western blotting.(B) Ekspresyon quantitative GST nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3r.(C) Ekspresyon quantitative GST nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3s.(D) Aktivite GST nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3.(E) Deteksyon ekspresyon Nrf2 pa Western blotting.(F) Ekspresyon quantitative Nrf2 nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3r.(G) Ekspresyon quantitative Nrf2 nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3s.Done yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda detèminasyon triple.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Pou elicide chemen ki enplike nan G-Rg3-medyatè repwesyon nan B (a) P-induit tumorigenesis, ekspresyon Nrf2 te evalye pa Western blotting.Jan yo montre nan Figi 6E, F, G, konpare ak gwoup kontwòl la, se sèlman nivo Nrf2 nan gwoup tretman B (a) P la diminye;sepandan, konpare ak gwoup tretman B (a) P, nivo B (a) Nrf2 nan gwoup PG-Rg3 yo te ogmante (106 ± 9.5% pou G-Rg3r vs 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6.2% pou G-Rg3r kont 41 ± 9.8% pou G-Rg3s, p <0.01).
Nou konfime wòl prevantif Nrf2 nan siprime ekspresyon Nrf2 lè l sèvi avèk espesifik ti entèferans RNA (siRNA).Nrf2 knockdown te konfime pa Western blotting (figi 7A, B).Jan yo montre nan Figi 7C, D, ko-tretman nan selil hEL ak B (a) P ak G-Rg3 te lakòz yon diminisyon nan kantite BPDE-ADN adducts (1.47 ± 0.21) konpare ak tretman ak B (a) P. pou kont li nan gwoup siRNA kontwòl la.) G-Rg3r te 4.13 ± 0.49, G-Rg3s te 1.8 ± 0.32 ak 4.1 ± 0.57, p <0.01).Sepandan, efè inhibition G-Rg3 sou fòmasyon BPDE-ADN te aboli pa knockdown Nrf2.Nan gwoup siNrf2 a, pa te gen okenn diferans enpòtan nan fòmasyon adduct BPDE-DNA ant B (a) P ak G-Rg3 ko-tretman ak B (a) P tretman pou kont li (3.0 ± 0.21 pou G-Rg3r vs 3.56 ± 0.32). ).pou G-Rg3r kont 3.6 pou G-Rg3s kont ± 0.45 kont 4.0±0.37, p > 0.05).
Efè knockdown Nrf2 sou fòmasyon adduct BPDE-DNA nan selil hEL.(A) Nrf2 knockdown te konfime pa Western blotting.(B) Quantification de Nrf2 bann entansite.(C) Efè knockdown Nrf2 sou nivo adduct BPDE-DNA nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3r.(D) Efè knockdown Nrf2 sou nivo adduct BPDE-DNA nan selil hEL trete ak B (a) P ak G-Rg3.Done yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda detèminasyon triple.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Etid sa a evalye efè prevantif divès kalite ekstrè ginseng wouj sou yon modèl sourit nan kansè nan poumon B(a)P-induit, ak tretman KRGB siyifikativman redwi fado timè.Lè ou konsidere ke G-Rg3 gen kontni ki pi wo nan ekstrè ginseng sa a, yo te etidye wòl enpòtan nan ginsenoside sa a nan anpeche tumorigenesis.Tou de G-Rg3r ak G-Rg3 (de epimè nan G-Rg3) siyifikativman redwi fado timè nan yon modèl sourit nan B (a) P-pwovoke kansè.G-Rg3r ak G-Rg3 fè egzèsis efè antikansè lè yo pwovoke apoptoz nan selil timè21, anpeche kwasans timè22, arete sik selil la23 ak afekte angiogenesis24.G-Rg3 yo te montre tou pou anpeche metastaz selilè25, epi yo te dokimante kapasite G-Rg3 pou amelyore efè chimyoterapi ak radyoterapi26,27.Poon et al te demontre ke tretman G-Rg3 ta ka diminye efè jenotoksik B (a) P28.Etid sa a demontre potansyèl terapetik G-Rg3 nan vize molekil kanserojèn nan anviwònman an ak anpeche kansè.
Malgre bon potansyèl pwofilaktik yo, pòv byodisponibilite oral ginsenosides poze yon defi pou itilizasyon klinik molekil sa yo.Analiz farmakokinetik nan administrasyon oral ginsenosides nan rat te montre ke byodisponibilite li se toujou mwens pase 5%29.Tès sa yo te montre ke apre peryòd tretman 20 semèn, sèlman nivo san Rg5 diminye.Malgre ke mekanis ki kache nan byodisponibilite pòv rete yo dwe klè, P-gp te panse yo dwe patisipe nan eflux nan ginsenosides.Travay sa a te demontre pou premye fwa ke administrasyon verapamil, yon bloke P-gp, ogmante byodisponibilite oral G-Rg3r ak G-Rg3s.Kidonk, konklizyon sa a sijere ke G-Rg3r ak G-Rg3s aji kòm substra nan P-gp kontwole eflu li yo.
Travay sa a demontre ke tretman konbinezon ak verapamil ogmante byodisponibilite oral G-Rg3 nan yon modèl sourit kansè nan poumon.Konklizyon sa a sipòte pa ogmante transpò transselilè entesten nan G-Rg3 sou blokaj P-gp, kidonk ogmante absòpsyon li yo.Esay nan selil Caco2 te montre ke tretman verapamil redwi eflu G-Rg3r ak G-Rg3s pandan y ap amelyore pèmeyabilite manbràn.Yon etid pa Yang et al.Etid yo montre ke tretman ak cyclosporine A (yon lòt P-gp blocker) ogmante byodisponibilite ginsenoside Rh2 soti nan yon valè debaz nan 1% 20 a plis pase 30%.Konpoze Ginsenosides K ak Rg1 te montre tou rezilta ki sanble30,31.Lè verapamil ak cyclosporin A yo te ko-administre, eflux nan konpoze K nan selil Caco-2 te siyifikativman redwi soti nan 26.6 a mwens pase 3, pandan y ap nivo intraselilè li yo te ogmante 40-fold30.Nan prezans verapamil, nivo Rg1 ogmante nan selil epitelyal nan poumon rat, ki sijere yon wòl pou P-gp nan eflux ginsenoside, jan Meng et al.31 montre.Sepandan, verapamil pa t 'gen menm efè sou eflux nan kèk ginsenosides (tankou Rg1, F1, Rh1 ak Re), ki endike ke yo pa afekte pa substrats P-gp, jan yo montre pa Liang et al.32 .Obsèvasyon sa a ka gen rapò ak patisipasyon lòt transpòtè ak estrikti ginsenoside altènatif.
Mekanis efè prevantif G-Rg3 sou kansè a pa klè.Etid anvan yo te montre ke G-Rg3 anpeche domaj ADN ak apoptoz pa diminye estrès oksidatif ak enflamasyon16,33, ki ka mekanis ki kache pou anpeche B (a) P-induit tumorigenesis.Gen kèk rapò ki endike ke genotoksisite ki pwovoke pa B(a)P ka redwi pa modulation faz II anzim yo fòme BPDE-DNA34.GST se yon anzim tipik faz II ki anpeche fòmasyon adduct BPDE-DNA pa ankouraje lyezon GSH a BPDE, kidonk diminye domaj ADN pwovoke pa B(a)P35.Rezilta nou yo montre ke tretman G-Rg3 diminye sitotoksisite B(a)P-induit ak fòmasyon adduct BPDE-DNA nan selil hEL epi retabli ekspresyon GST ak aktivite nan vitro.Sepandan, efè sa yo te absan nan absans Nrf2, sijere ke G-Rg3 pwovoke efè cytoprotective atravè chemen Nrf2 la.Nrf2 se yon gwo faktè transcription pou faz II anzim dezentoksikasyon ki ankouraje clearance nan xenobiotics36.Aktivasyon nan chemen Nrf2 pwovoke cytoprotection ak diminye domaj tisi yo37.Anplis, plizyè rapò te sipòte wòl Nrf2 kòm yon suppresseur timè nan kanserojèn38.Etid nou an montre ke endiksyon nan chemen Nrf2 pa G-Rg3 jwe yon wòl regilasyon enpòtan nan genotoksisite B (a) P-pwovoke lè li lakòz B (a) P dezentoksikasyon pa aktive faz II anzim, kidonk anpeche pwosesis la tumorigenesis.
Travay nou an revele potansyèl ginseng wouj nan anpeche kansè nan poumon B(a)P-induit nan sourit atravè patisipasyon enpòtan nan ginsenoside G-Rg3.Byodisponibilite nan bouch pòv nan molekil sa a anpeche aplikasyon klinik li yo.Sepandan, etid sa a montre pou premye fwa ke G-Rg3 se yon substra nan P-gp, ak administrasyon nan yon inibitè P-gp ogmante byodisponibilite nan G-Rg3 nan vitro ak nan vivo.G-Rg3 diminye sitotoksisite B(a)P-induit pa reglemante chemen Nrf2 a, ki ka yon mekanis potansyèl pou fonksyon prevantif li yo.Etid nou an konfime potansyèl ginsenoside G-Rg3 pou prevansyon ak tretman kansè nan poumon.
Sourit fi A/J ki gen sis semèn (20 ± 1 g) ak rat gason Wistar 7 semèn (250 ± 20 g) yo te jwenn nan laboratwa Jackson (Bar Harbor, USA) ak Enstiti Zooloji Wuhan.Inivèsite (Wuhan, Lachin).Sant Koleksyon Kilti Kalite Chinwa a (Wuhan, Lachin) te bay nou selil Caco-2 ak HEL.Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) se yon sous B(a)P ak tricaprine.Pirifye ginsenosides G-Rg3r ak G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 pwopagasyon tès kit (MTS), verapamil, minimòm mwayen esansyèl (MEM), ak fetal serom bovine (FBS) te achte nan men Chengdu Must Bio-Technology. .Co, Ltd.(Chengdu, Lachin).QIAamp DNA mini kit ak BPDE-DNA adduct ELISA kit yo te achte nan men Qiagen (Stanford, CA, USA) ak Cell Biolabs (San Diego, CA, USA).Twous tès aktivite GST ak twous tès pwoteyin total (metòd BCA estanda) yo te achte nan men Solarbio (Beijing, Lachin).Tout ekstrè jinsang wouj yo estoke nan laboratwa Mingyu 7. Hong Kong Baptist University (Hong Kong, Lachin) ak Korea Cancer Center (Seoul, Kore di) se sous komèsyal nan ekstrè CRG ak divès kalite ekstrè jinsang wouj ki gen divès orijin Koreyen (ki gen ladan KRGA, KRGB). ak KRGC).Ginseng wouj fèt ak rasin ginseng fre ki gen 6 zan.Ekstrè ginseng wouj jwenn nan lave ginseng ak dlo twa fwa, Lè sa a, konsantre ekstrè akeuz la, epi finalman seche nan tanperati ki ba yo jwenn poud ekstrè ginseng.Antikò (anti-Nrf2, anti-GST, ak β-aktin), peroksidaz refor konjige anti-lapen imunoglobulin G (IgG), reyaktif transfeksyon, siRNA kontwòl, ak siRNA Nrf2 yo te achte nan men Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) .), USA).
Selil Caco2 ak HEL yo te kiltive nan asyèt kilti selil 100 mm2 ak MEM ki gen 10% FBS nan 37 °C nan yon atmosfè imidite 5% CO2.Pou detèmine efè kondisyon tretman yo, selil hEL yo te enkube ak diferan konsantrasyon B (a) P ak G-Rg3 nan MEM pou 48 èdtan.Selil yo ka analize plis oswa kolekte pou prepare ekstrè san selil yo.
Tout eksperyans yo te apwouve pa Komite Etik Animal eksperimantal nan Tongji Medical College, Huazhong University of Syans ak Teknoloji (Apwobasyon No 2019; Enskripsyon No 4587TH).Tout eksperyans yo te fèt an akò ak direktiv ak règleman ki enpòtan yo, epi etid la te fèt an akò ak direktiv Rechèch sou Animal: Rapò sou Eksperyans In Vivo (ARRIVE).Sourit A/J ki gen uit semèn yo te premye enjekte intraperitonealman ak B(a)P nan solisyon tricaprine (100 mg/kg, 0.2 ml).Apre yon semèn, sourit yo te owaza divize an gwoup kontwòl ak gwoup tretman diferan, 15 sourit nan chak gwoup, ak gavage yon fwa pa jou.Apre 20 semèn tretman, bèt yo te sakrifye pa asfiksi CO2.Poumon yo te kolekte epi fikse pou 24 èdtan.Kantite timè supèrfisyèl ak gwosè timè endividyèl yo te quantifye pou chak poumon anba yon mikwoskòp diseksyon.Estimasyon volim timè (V) yo te kalkile lè l sèvi avèk ekspresyon sa a: V (mm3) = 4/3πr3, kote r se dyamèt timè a.Sòm nèt la nan tout komèsan timè nan poumon yo nan sourit reprezante volim total timè a, ak volim total timè mwayèn nan chak gwoup reprezante chaj timè a.Echantiyon san antye ak entesten yo te kolekte epi estoke nan -80 ° C pou detèminasyon UPLC-MS/MS.Serom yo te kolekte epi yo te itilize yon analiz chimi otomatik pou analize nivo alanin aminotransferaz (ALT) ak kreyatinin serik (Cr) pou evalye fonksyon fwa ak ren.
Echantiyon yo kolekte yo te retire nan depo frèt, dekonjle, peze, epi mete yo nan tib jan sa dekri pi wo a.Pou sa a te ajoute 0.5 μM phlorizin (estanda entèn) nan 0.8 ml solisyon metanol.Lè sa a, tisi a te omojeneize lè l sèvi avèk Tissue-Tearor epi yo te omojèn nan imedyatman transfere nan yon tib mikrosantrifij 1.5 ml.Te melanj lan santrifuje nan 15500 rpm pou 15 minit.Apre w fin retire 1.0 ml supernatant, sèk ak nitwojèn.De san mikrolit metanol te itilize pou rekiperasyon.Yo kolekte san an epi trete sou yon sèl liy epi yo itilize kòm referans pou tout mezi.
Plak Transwell 24-byen yo te simen ak 1.0 × 105 selil Caco-2 pou chak pi pou evalye amelyorasyon potansyèl transpò G-Rg3 pa adisyon verapamil.Apre 3 semèn nan kilti, selil yo te lave ak HBSS ak preenkubasyon nan 37 ° C.400 μL nan 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, oswa yon melanj ak 50 oswa 100 μM verapamil) yo te sou fòm piki sou bò basolateral oswa apical nan monokouch la, epi yo te ajoute 600 μL nan solisyon HBSS nan lòt la. bò.Kolekte 100 µl mwayen kilti nan tan yo deziyen (0, 15, 30, 45, 60, 90 ak 120 minit) epi ajoute 100 µl HBSS pou fè volim sa a.Echantiyon yo te estoke nan -4 ° C jiskaske deteksyon pa UPLC-MS / MS.Ekspresyon Papp = dQ/(dT × A × C0) yo itilize pou quantifier aparan pèmeyabilite apik ak basolateral inidiresyonèl la ak vis vèrsa (Pa-b ak Pb-a, respektivman);dQ/dT se chanjman nan konsantrasyon, A (0.6 cm2) se sifas monokouch la, ak C0 se konsantrasyon donatè inisyal la.Pwopòsyon ekoulman an kalkile kòm Pb-a/Pa-b, ki reprezante pousantaj ekoulman dwòg etid la.
Gason rat Wistar yo te fè jèn pou 24 èdtan, bwè sèlman dlo, ak anestezi ak yon piki nan venn nan 3.5% solisyon pentobarbital.Tib silicone entube a gen fen duodenum kòm antre ak fen ileum kòm sòti.Sèvi ak yon ponp peristaltik pou ponpe inlet la ak 10 µM G-Rg3r oswa G-Rg3s nan izotonik HBSS nan yon vitès koule 0.1 ml/min.Efè verapamil te evalye lè w ajoute 50 μM oswa 100 μM nan konpoze an nan 10 μM G-Rg3r oswa G-Rg3s.UPLC-MS/MS te fèt sou ekstrè perfusion kolekte nan pwen tan 60, 90, 120, ak 150 minit apre kòmansman an nan perfusion.Pousantaj nan absòpsyon quantifier pa fòmil la % absòpsyon = (1 – Cout/Cin) × 100%;se konsantrasyon nan G-Rg3 nan priz la ak inlet eksprime pa Cout ak Cin, respektivman.
Selil hEL yo te simen nan plak 96-byen nan yon dansite 1 × 104 selil pou chak pi epi yo te trete ak B (a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) oswa G-Rg3 fonn nan DMSO. .Lè sa a, dwòg yo te dilye ak mwayen kilti nan konsantrasyon divès kalite (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) sou 48 èdtan.Sèvi ak yon twous tès MTS ki disponib nan komès, selil yo te sibi yon pwotokòl estanda ak Lè sa a, mezire lè l sèvi avèk yon lektè microplate nan 490 nm.Nivo viabilite selil gwoup yo ko-trete ak B (a) P (10 μM) ak G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) te evalye dapre metòd ki pi wo a epi konpare ak gwoup la ki pa trete.
Selil hEL yo te simen nan plak 6-byen nan yon dansite 1 × 105 selil / byen epi yo trete ak 10 μMB (a) P nan prezans oswa absans 10 μM G-Rg3.Apre 48 èdtan nan tretman, yo te ekstrè ADN nan selil hEL lè l sèvi avèk QIAamp DNA Mini Kit la dapre pwotokòl manifakti a.Yo te detekte fòmasyon BPDE-DNA adducts lè l sèvi avèk yon twous ELISA BPDE-DNA adduct.Nivo relatif nan BPDE-ADN adduct yo te mezire lè l sèvi avèk yon lektè microplate pa mezire absorpsyon nan 450 nm.
Selil hEL yo te simen nan plak 96-byen nan yon dansite 1 × 104 selil pou chak pi epi yo te trete ak 10 μMB (a) P nan absans oswa prezans 10 μM G-Rg3 pou 48 èdtan.Aktivite GST yo te mezire lè l sèvi avèk yon twous tès aktivite GST komèsyal dapre pwotokòl manifakti a.Aktivasyon GST relatif te mezire pa absòbe nan 450 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate.
Selil hEL yo te lave ak PBS ki frèt ak glas epi yo te lysed lè l sèvi avèk tanpon tès radyo-imunoprecipitation ki gen inibitè proteaz ak inhibiteur fosfataz.Apre kantite pwoteyin lè l sèvi avèk yon twous total pwoteyin, 30 μg pwoteyin nan chak echantiyon yo te separe pa 12% SDS-PAGE epi yo te transfere nan yon manbràn PVDF pa elektwoforèz.Manbràn yo te bloke ak 5% lèt ekreme ak enkubasyon ak antikò prensipal lannwit lan nan 4 ° C.Apre enkubasyon ak antikò segondè konjige peroksidaz refor, yo te ajoute reyaktif kimiluminesans amelyore pou visualiser siyal obligatwa a.Entansite chak gwoup pwoteyin te quantifye lè l sèvi avèk lojisyèl ImageJ.
Lojisyèl GraphPad Prism 7.0 te itilize pou analize tout done yo, ki eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda.Yo te evalye varyasyon ant gwoup tretman yo lè l sèvi avèk tès t Student oswa analiz yon sèl-fason nan divèjans, ak yon valè P <0.05 ki endike siyifikasyon estatistik.
Tout done yo jwenn oswa analize pandan etid sa a yo enkli nan atik sa a pibliye ak dosye enfòmasyon siplemantè.
Torre, LA, Siegel, RL ak Jemal, A. Statistik kansè nan poumon.advèb.Ekspire.remèd.byoloji.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Kanserojèn tabak, biomarqueurs yo ak kansè nan tabak.Nat.Chapelen kansè.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH ak Venitt, S. ADN ak adduit pwoteyin nan tisi imen ki soti nan ekspoze a lafimen tabak.entènasyonalite.J. Kansè.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA ak Yu M. Efè Houttuynia cordata ak silibinin sou benzo (a) pyrene-induit tumorigenesis nan poumon nan sourit A / J.Kansè 7, 1053-1057 (2005).
Tang, W. et al.Antikansè pwodwi natirèl izole nan materyèl Chinwa medsin.machwè.remèd.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Efikasite nan polifenon E, jinsang wouj, ak rapamicin sou benzo (a) pyrene-induit tumorigenesis nan poumon nan sourit A / J.Kansè 8, 52-58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., Li, TS ak Yuan, KS Wouj, patisipasyon nan terapi kansè.machwè.J. Nutt.remèd.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS ak Gao, L. Ginsenosides nan rasin yo ak fèy nan jinsang Ameriken.J. Agric.Chimi manje.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA ak Yuan KS Farmakoloji nan jinsang: anpil konpozan ak anpil efè.byochimik.famasi.58, 1685–1693 (1999).
Tan pòs: 17-Sep 2023