תודה שביקרת ב-Nature.com.לגרסת הדפדפן שבה אתה משתמש יש תמיכת CSS מוגבלת.לקבלת התוצאות הטובות ביותר, אנו ממליצים להשתמש בגרסה חדשה יותר של הדפדפן שלך (או לכבות את מצב התאימות ב-Internet Explorer).בינתיים, כדי להבטיח תמיכה שוטפת, אנו מציגים את האתר ללא סטיילינג או JavaScript.
ג'ינסנג אדום נמצא בשימוש ברפואה האסיאתית המסורתית במשך מאות שנים.במחקר זה, הערכנו את יכולתם של ארבעה סוגים של ג'ינסנג אדום (ג'ינסנג סיני אדום, ג'ינסנג קוריאני אדום A, ג'ינסנג קוריאני אדום B וג'ינסנג קוריאני אדום C) הגדלים באזורים שונים לעכב היווצרות וצמיחה של ריאות הנגרמות מסרטן. גידולים.בדיקת בנזו(א)פירן (B(a)P) נערכה על עכברי A/J, וג'ינסנג אדום קוריאני B נמצא כיעיל ביותר בהפחתת עומס הגידול מבין ארבעת זני הג'ינסנג האדום.בנוסף, ניתחנו את התוכן של ג'ינסנוזידים שונים (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ו-Rg5) בארבע תמציות ג'ינסנג אדומות ומצאנו שלג'ינסנג אדום קוריאני B יש הרמות הגבוהות ביותר של ג'ינסנוסיד Rg3 (G-Rg3), מה שמצביע על כך ש-G-Rg3 עשוי למלא תפקיד חשוב ביעילות הטיפולית שלו.עבודה זו מראה כי ל-G-Rg3 זמינות ביולוגית נמוכה יחסית.עם זאת, כאשר G-Rg3 ניתנה יחד עם מעכב P-gp verapamil, הפליטה של G-Rg3 לתאי Caco-2 פחתה, קצב הספיגה של G-Rg3 במעיים גדל במודל של חולדה, ו-G-Rg3 הוגדל.בתאי Caco-2, יציאת Rg3 פוחתת, ורמת ריכוז Rg3 יורדת.G-Rg3 מוגבר במעי ובפלזמה, ויכולתו למנוע גידולים משופרת גם במודל חולדה של גידול הנגרמת על ידי B(a)P.מצאנו גם ש-G-Rg3 הפחית ציטוטוקסיות הנגרמת על ידי B(a)P ויצירת אדדוקט DNA בתאי ריאה אנושיים, ושיחזר את הביטוי והפעילות של אנזימים שלב II דרך מסלול Nrf2, שעשוי להיות קשור למנגנון הפעולה הפוטנציאלי. של עיכוב G -Rg3..על התרחשות של גידולי ריאה.המחקר שלנו מדגים תפקיד חשוב פוטנציאלי עבור G-Rg3 במיקוד לגידולי ריאה במודלים של עכברים.הזמינות הביולוגית דרך הפה של ג'ינסנוסיד זה מוגברת על ידי מיקוד P-glycoprotein, מה שמאפשר למולקולה להפעיל השפעות אנטי סרטניות.
הסוג הנפוץ ביותר של סרטן ריאות הוא סרטן ריאות של תאים לא קטנים (NSCLC), שהוא אחד הגורמים המובילים למוות מסרטן בסין ובצפון אמריקה1,2.הגורם העיקרי המגביר את הסיכון לפתח סרטן ריאות תאים לא קטנים הוא עישון.עשן סיגריות מכיל יותר מ-60 חומרים מסרטנים, כולל בנזו(א)פירן (B(a)P), ניטרוסאמינים ואיזוטופים רדיואקטיביים מהתפרקות ראדון.3 פחמימנים ארומטיים פוליציקליים B(a)P הם הגורם העיקרי לרעילות בסיגריה עָשָׁן.בחשיפה ל-B(a)P, ציטוכרום P450 הופך אותו ל-B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), המגיב עם DNA ליצירת BPDE-DNA addduct 4. בנוסף, אלה אדדוקטים מעוררים גידול ריאות בעכברים עם שלב הגידול והיסטופתולוגיה דומים לגידולי ריאות אנושיים5.תכונה זו הופכת את מודל סרטן הריאות המושרה על ידי B(a)P למערכת מתאימה להערכת תרכובות בעלות תכונות אנטי-סרטניות אפשריות.
אסטרטגיה אפשרית אחת למניעת התפתחות של סרטן ריאות בקבוצות בסיכון גבוה, במיוחד מעשנים, היא שימוש בחומרים מונעים כימיים כדי לדכא התפתחות של נגעים ניאופליאליים תוך אפיתל ובכך למנוע את התקדמותם לאחר מכן לממאירות.מחקרים בבעלי חיים מראים כי חומרים מונעים כימיים שונים יעילים6.הדו"ח הקודם שלנו7 הדגיש את ההשפעות המניעתיות הטובות של ג'ינסנג אדום על סרטן הריאות.עשב זה שימש במשך מאות שנים ברפואה האסיאתית המסורתית להארכת חיים ובריאות, ותועד כבעל השפעות אנטי-גידוליות8.
הגורם הפעיל של הג'ינסנג הוא ג'ינסנוסיד, המשמש כסמן מורכב להערכת איכות תמציות הג'ינסנג.ניתוח כמותי של תמציות ג'ינסנג גולמיות כולל בדרך כלל שימוש במספר ג'ינסנוזידים, כולל RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 ו-Rc9,10.לג'ינסנוזידים יש שימוש קליני מועט בגלל הזמינות הביולוגית הפומית ירודה מאוד11.למרות שהמנגנון לזמינות ביולוגית ירודה זו אינו ברור, שטף הג'ינסנוזידים הנגרמת על ידי P-glycoprotein (P-gp)12 עשוי להיות הגורם.P-gp הוא אחד ממעבירי הזרימה החשובים ביותר במשפחת טרנספורטרי הקלטת קושרת ה-ATP, המשתמשת באנרגיה של הידרוליזה של ATP כדי לשחרר חומרים תוך-תאיים לסביבה החיצונית.מעבירי P-gp מופצים בדרך כלל במחסום המעי, הכליות, הכבד ומחסום הדם-מוח13.P-gp ממלא תפקיד קריטי בספיגת המעיים, ועיכוב של P-gp מגביר את הספיגה דרך הפה ואת הזמינות של כמה תרופות אנטי סרטניות12,14.דוגמאות למעכבים ששימשו בעבר בספרות הם verapamil ו-cyclosporine A15.עבודה זו כוללת הקמת מערכת עכברים לחקר סרטן ריאות המושרה על ידי B(a)P כדי להעריך את היכולת של תמציות ג'ינסנג אדום שונות מסין וקוריאה להשפיע על ממאירות.התמציות נותחו בנפרד כדי לזהות ג'ינסנוזידים ספציפיים שעלולים להשפיע על סרטן.לאחר מכן נעשה שימוש ב-Verapamil כדי למקד ל-P-gp ולשפר את הזמינות הביולוגית דרך הפה ואת היעילות הטיפולית של ג'ינסנוזידים המכוונים לסרטן.
המנגנון שבאמצעותו ספונינים של ג'ינסנג מפעילים השפעות טיפוליות על קרצינוגנזה עדיין לא ברור.מחקרים הראו שג'ינסנוזידים שונים יכולים להפחית נזק ל-DNA הנגרם על ידי חומרים מסרטנים על ידי הפחתת מתח חמצוני והפעלת אנזימי ניקוי רעלים שלב II, ובכך למנוע נזק לתאים.Glutathione S-transferase (GST) הוא אנזים שלב II טיפוסי שנדרש כדי להפחית נזק ל-DNA הנגרם על ידי חומרים מסרטנים17.גורם 2 הקשור לאריתרואיד 2 (Nrf2) הוא גורם שעתוק חשוב המווסת הומאוסטזיס חיזור ומפעיל את הביטוי של אנזימים שלב II ותגובות נוגדות חמצון ציטו-פרוקטטיביות18.המחקר שלנו בדק גם את ההשפעות של ג'ינסנוזידים מזוהים על הפחתת ציטוטוקסיות הנגרמת על ידי B(a)P ויצירת אדדוקט BPDE-DNA, כמו גם השראת אנזימים שלב II על ידי אפנון מסלול Nrf2 בתאי ריאה נורמליים.
הקמת מודל עכבר של סרטן המושרה על ידי B(a)P עולה בקנה אחד עם עבודה קודמת5.איור 1A מציג את התכנון הניסיוני של טיפול בן 20 שבועות במודל סרטן עכבר המושרה על ידי B(a)P, מים (בקרה), תמצית ג'ינסנג סיני אדום (CRG), תמצית ג'ינסנג קוריאני אדום A (KRGA) ואדום קוריאני ג'ינסנג.תמצית B (KRGB) ותמצית ג'ינסנג קוריאני אדום C (KRGC).לאחר 20 שבועות של טיפול בג'ינסנג אדום, עכברים הוקרבו על ידי חנק CO2.איור 1B מציג גידולי ריאה מאקרוסקופיים בבעלי חיים שטופלו בסוגים שונים של ג'ינסנג אדום, ואיור 1C מציג מיקרוסקופ אור מייצג של דגימת גידול.עומס הגידולים של בעלי חיים שטופלו ב-KRGB (1.5 ± 0.35) היה נמוך מזה של חיות ביקורת (0.82 ± 0.2, P <0.05), כפי שמוצג באיור 1D.הדרגה הממוצעת של עיכוב עומס הגידול הייתה 45%.תמציות ג'ינסנג אדום אחרות שנבדקו לא הראו שינויים כה משמעותיים בנטל הגידול (P > 0.05).לא נצפו תופעות לוואי ברורות במודל העכבר במהלך 20 שבועות של טיפול בג'ינסנג אדום, כולל ללא שינוי במשקל הגוף (לא מוצגים נתונים) וללא רעילות לכבד או לכליות (איור 1E,F).
תמצית ג'ינסנג אדום מטפלת בהתפתחות גידולי ריאה בעכברי A/J.(א) עיצוב ניסוי.(ב) גידולי ריאה גדולים במודל עכבר.גידולים מסומנים בחצים.ת: קבוצת ג'ינסנג סיני אדום.ב: קבוצה A של ג'ינסנג אדום קוריאני.ג: קבוצת ג'ינסנג קוריאני אדום ב'. ד: קבוצת ג'ינסנג קוריאני אדום ג'. ד: קבוצת ביקורת.(ג) מיקרוסקופ קל המראה גידול ריאות.הגדלה: 100. ב: 400. (ד) עומס גידולים בקבוצת תמצית הג'ינסנג האדומה.(ה) רמות פלזמה של אנזים הכבד ALT.(ו) רמות פלזמה של האנזים הכלייתי Cr.הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית תקן.*P <0.05.
תמציות הג'ינסנג האדומות שזוהו במחקר זה נותחו על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בטנדם ספקטרומטריית מסה (UPLC-MS/MS) כדי לכמת את הג'ינסנוזידים הבאים: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ו-Rg5.תנאי ה-UPLC וה-MS המשמשים למדידת האנליטים תוארו בדוח קודם19.כרומטוגרמות UPLC-MS/MS של ארבע תמציות ג'ינסנג אדומות מוצגות באיור 2A.היו הבדלים משמעותיים בתכולת הג'ינסנוסיד הכוללת, עם תכולת הג'ינסנוסיד הכוללת הגבוהה ביותר ב-CRG (590.27 ± 41.28 מיקרומול/ליטר) (איור 2B).בעת הערכת ג'ינסנוזידים בודדים (איור 2C), KRGB הראה את הרמה הגבוהה ביותר של G-Rg3 בהשוואה לג'ינסנוזידים אחרים (58.33 ± 3.81 מיקרומול/ליטר עבור G-Rg3s ו-41.56 ± 2.88 מיקרומול/ליטר עבור G-Rg3r).L).סוג ג'ינסנג אדום (P < 0.001).G-Rg3 מתרחש כזוג סטריאואיזומרים G-Rg3r ו-G-Rg3s, הנבדלים זה מזה במיקום קבוצת ההידרוקסיל בפחמן 20 (איור 2D).התוצאות מצביעות על כך ש-G-Rg3r או G-Rg3 עשויים להיות בעלי פוטנציאל אנטי-סרטני חשוב במודל עכבר סרטן המושרה על ידי B(a)P.
תכולת ג'ינסנוזידים בתמציות ג'ינסנג אדומות שונות.(א) כרומטוגרמות UPLC-MS/MS של ארבע תמציות ג'ינסנג אדומות.(ב) אומדן של תכולת הג'ינסנוסיד הכוללת בתמציות המצוינות.(ג) זיהוי של ג'ינסנוזידים בודדים בתמציות מסומנות.(ד) מבנים של סטריאואיזומרים של ג'ינסנוסיד G-Rg3r ו-G-Rg3s.הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית התקן של קביעות משולשות.***P <0.001.
מחקר UPLC-MS/MS דרש כימות של ג'ינסנוזידים בדגימות מעיים ודם לאחר 20 שבועות של טיפול.טיפול ב-KRGB הראה נוכחות של רק 0.0063 ± 0.0005 מיקרוגרם/מ"ל Rg5 בדם.לא זוהו ג'ינסנוזידים שנותרו, מה שמעיד על זמינות ביולוגית דרך הפה ירודה ולכן חשיפה מופחתת לג'ינסנוזידים אלה.
קו תאי אדנוקרצינומה של המעי הגס Caco-2 דומה מבחינה מורפולוגית וביוכימית לתאי אפיתל מעיים אנושיים, מה שמוכיח את התועלת שלו בהערכת הובלת אנטרוציטים על פני מחסום האפיתל של המעי.ניתוח זה התבסס על מחקר קודם 20 .איורים 3A,B,C,D,E,F מציגים תמונות מייצגות של הובלה בין-תאית של G-Rg3r ו-G-Rg3 באמצעות מודל חד-שכבתי של Caco-2.הובלה טרנס-תאית של G-Rg3r או G-Rg3 על פני שכבות Caco-2 מונו-שכבות מהצד הבזולטרלי אל הצד האפיקלי (Pb-a) הייתה גבוהה משמעותית מאשר מהצד האפיקלי אל הצד הבסיסי (Pa-b).עבור G-Rg3r, ערך ה-Pa-b הממוצע היה 0.38 ± 0.06, שעלה ל-0.73 ± 0.06 לאחר טיפול ב-50 μmol/L verapamil ול-1.14 ± 0.09 לאחר טיפול ב-100 μmol/L verapamil (p < 0.01, ו-p < 0.01 בהתאמה; איור 2).3א).תצפיות עבור G-Rg3 עקבו אחר דפוס דומה (איור 3B), והתוצאות הראו שטיפול ב-verapamil הגביר את ההובלה של G-Rg3r ו-G-Rg3.טיפול ב-Verapamil הביא גם לירידה משמעותית ביחסי הפליחה הממוצעים של Pb-a ו-G-Rg3r ו-G-Rg3s (איור 3C,D,E,F), מה שמעיד על כך שטיפול ב-Verapamil מפחית את תכולת הג'ינסנוזיד בתאי הפלה של Caco-2..
הובלה טרנס-תאית של G-Rg3 ב-Caco-2 חד-שכבות וספיגת מעיים במבחן זלוף של חולדות.(א) ערך Pa-b של קבוצת G-Rg3r ב-Caco-2 monolayer.(ב) ערך Pa-b של קבוצות G-Rg3s ב-Caco-2 monolayer.(ג) ערך Pb של קבוצת G-Rg3r ב-Caco-2 monolayer.(ד) ערך Pb של קבוצות G-Rg3s ב-Caco-2 monolayer.(ה) יחס תשואה של קבוצות G-Rg3r בשכבת Caco-2.(ו) יחס תשואה של קבוצות G-Rg3 ב-Caco-2 monolayer.(ז) אחוז הספיגה במעיים של G-Rg3r במבחן זלוף בחולדות.(ח) אחוז הספיגה במעיים של G-Rg3 במבחן זלוף בחולדות.הושוו חדירות וספיגה ללא תוספת של ורפמיל.הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית התקן של חמישה ניסויים עצמאיים.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
בהתאם לעבודה קודמת20, בוצע זלוף מעי אורתוטופי של חולדות כדי לקבוע אם ספיגת G-Rg3 במעי עולה לאחר טיפול בוורפמיל.איורים 3G,H מציגים מבחני זלוף מייצגים כדי להעריך את אחוז הספיגה במעיים של G-Rg3r ו-G-Rg3 בחולדות מודל סרטן במהלך פרקי הזמן לעיל.האחוז הראשוני של ספיגת G-Rg3r חלשה של כ-10% עלה ליותר מ-20% לאחר טיפול ב-50 מיקרומטר verapamil ולמעלה מ-25% לאחר טיפול ב-100 מיקרומטר verapamil.כמו כן, G-Rg3, שהיה לו ספיגה ראשונית של 10%, הראה גם שיא של למעלה מ-20% לאחר טיפול ב-50 מיקרומטר ורפמיל וכמעט 30% לאחר טיפול ב-100 מיקרומטר ורפמיל, מה שמצביע על כך שעיכוב P-gp על ידי ורפמיל מגביר ספיגה G-3 במעיים במודל עכבר של סרטן ריאות.
על פי השיטה לעיל, עכברי מודל סרטן המושרה על ידי B(a)P חולקו באופן אקראי לשש קבוצות, כפי שמוצג באיור 4A.לא נצפו ירידה משמעותית במשקל או סימנים קליניים של רעילות בקבוצת הטיפול ב-G-Rg3 בהשוואה לקבוצת הביקורת (לא מוצגים נתונים).לאחר 20 שבועות של טיפול נאספו הריאות של כל עכבר.איור 4B מציג גידולי ריאה מקרוסקופיים בעכברים בקבוצות הטיפול הנ"ל, ואיור 4C מציג מיקרוסקופ אור מייצג של גידול מייצג.לגבי עומס הגידול בכל קבוצה (איור 4D), הערכים עבור עכברים שטופלו ב-G-Rg3r ו-G-Rg3s היו 0.75 ± 0.29 מ"מ ו-0.81 ± 0.30 מ"מ, בהתאמה, בעוד הערכים עבור עכברי G שטופלו עם -Rg3s היו 1.63 ±0.40 מ"מ בהתאמה.עכברי בקרה (p < 0.001), המצביע על כך שטיפול G-Rg3 הפחית את עומס הגידול בעכברים.מתן ורפמיל הגביר עוד יותר את הפחתה זו: הערכים בעכברי verapamil+ G-Rg3r ירדו מ-0.75 ± 0.29 מ"מ ל-0.33 ± 0.25 מ"מ (p < 0.01), והערכים של ורפמיל+ מ-0.81 ± 0.30 מ"מ 21 ± 0.30 מ"מ 2 ירדו ל-0.30 מ"מ mm3 בעכברים שטופלו ב-G.-Rg3s (p < 0.05), מה שמצביע על כך ש-verpamil עשוי לשפר את ההשפעה המעכבת של G-Rg3 על היווצרות הגידול.עומס הגידול לא הראה הבדלים מובהקים בין קבוצת הביקורת לקבוצת ה-Verapamil, קבוצת G-Rg3r וקבוצת G-Rg3s, וקבוצת Verapamil+G-Rg3r וקבוצת Verapamil+G-Rg3s.יתר על כן, לא היו רעילות משמעותיות בכבד או בכליות הקשורות לטיפולים המוערכים (איור 4E,F).
עומס הגידולים לאחר טיפול ב-G-Rg3 ורמות G-Rg3r ו-G-Rg3 בפלזמה או במעיים בקבוצות המצוינות.(א) עיצוב ניסוי.(ב) גידולים מאקרוסקופיים במודל עכבר.גידולים מסומנים על ידי חיצים.a: G-Rg3r.ב: G-Rg3s.ג: G-Rg3r בשילוב עם verapamil.ד: G-Rg3 בשילוב עם ורפמיל.ד: וראפמיל.ה: שליטה.(ג) מיקרוסקופ אופטי של הגידול בהגדלה.תשובה: פי 100.ב: 400X.(ד) השפעת טיפול ב-G-Rg3 + verapamil על עומס הגידול בעכברי A/J.(ה) רמות פלזמה של אנזים הכבד ALT.(ו) רמות פלזמה של האנזים הכלייתי Cr.(G) רמות פלזמה של G-Rg3r או G-Rg3 של הקבוצות המצוינות.(ח) רמות של G-Rg3r או G-Rg3s במעיים של הקבוצות המצוינות.הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית התקן של קביעות משולשות.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
רמות G-Rg3 בעכברי מודל הסרטן המושרה על ידי B(a)P הוערכו על ידי UPLC-MS/MS לאחר תקופת טיפול של 20 שבועות לפי השיטה המתוארת בסעיף השיטות.איורים 4G ו-H מציגים רמות G-Rg3 בפלזמה ובמעיים, בהתאמה.רמות G-Rg3r בפלזמה היו 0.44 ± 0.32 מיקרומול/ליטר ועלו ל-1.17 ± 0.47 מיקרומול/ליטר עם מתן בו זמנית של ורפמיל (p < 0.001), בעוד שרמות G-Rg3r במעי היו 0.53 ± 0.08 µg.בשילוב עם verapamil, g עלה ל-1.35 ± 0.13 מיקרוגרם/גרם (p < 0.001).עבור G-Rg3, התוצאות עקבו אחר דפוס דומה, מה שמצביע על כך שטיפול ב-Verapamil הגביר את הזמינות הביולוגית של G-Rg3 בעכברי A/J.
בדיקת כדאיות התא שימשה להערכת הציטוטוקסיות של B(a)P ו-G-Rg3 על תאי hEL.הציטוטוקסיות המושרה על ידי B(a)P בתאי hEL מוצגת באיור 5A, בעוד שהתכונות הלא-רעילות של G-Rg3r ו-G-Rg3 מוצגות באיורים 5A ו-5B.5B, C. כדי להעריך את ההשפעה הציטו-פרוטקטיבית של G-Rg3, B(a)P ניתנה יחד עם ריכוזים שונים של G-Rg3r או G-Rg3 לתוך תאי hEL.כפי שמוצג באיור 5D, G-Rg3r בריכוזים של 5 מיקרומטר, 10 מיקרומטר ו-20 מיקרומטר החזירו את הכדאיות של התא ל-58.3%, 79.3% ו-77.3%, בהתאמה.תוצאות דומות ניתן לראות גם בקבוצת G-Rg3s.כאשר הריכוזים של G-Rg3s היו 5 µM, 10 µM ו-20 µM, כדאיות התא הוחזרה ל-58.3%, 72.7% ו-76.7%, בהתאמה (איור 5E).).נוכחותם של תוספות BPDE-DNA נמדדה באמצעות ערכת ELISA.התוצאות שלנו הראו שרמות התוספת של BPDE-DNA עלו בקבוצה שטופלה ב-B(a)P בהשוואה לקבוצת הביקורת, אך בהשוואה לטיפול משותף ב-G-Rg3, רמות ה-Adduct של BPDE-DNA בקבוצת B(a)P B בקבוצה המטופלת, רמות ה-Adduct של DNA הופחתו משמעותית.תוצאות הטיפול ב-B(a)P בלבד מוצגות באיור 5F (1.87 ± 0.33 לעומת 3.77 ± 0.42 עבור G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 לעומת 3.77 ± 0.42 עבור G-Rg3s, p < 0.001).
כדאיות תאים ויצירת אדדוקט BPDE-DNA בתאי hEL שטופלו ב-G-Rg3 ו-B(a)P.(א) כדאיות של תאי hEL שטופלו ב-B(a)P.(ב) כדאיות של תאי hEL שטופלו ב-G-Rg3r.(ג) כדאיות של תאי hEL שטופלו ב-G-Rg3.(ד) כדאיות של תאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3r.(ה) כדאיות של תאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3.(ו) רמות של אדדוקט BPDE-DNA בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3.הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית התקן של קביעות משולשות.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
ביטוי אנזים GST זוהה לאחר טיפול משותף עם 10 מיקרומטר B(a)P ו-10 מיקרומטר G-Rg3r או G-Rg3s.התוצאות שלנו הראו ש-B(a)P דיכא ביטוי GST (59.7 ± 8.2% בקבוצת G-Rg3r ו-39 ± 4.5% בקבוצת G-Rg3s), ו-B(a)P היה קשור לאחד מהם עם G-Rg3r , או עם G-Rg3r, או עם G-Rg3r.טיפול משותף עם G-Rg3s החזיר את ביטוי GST.ביטוי GST (103.7 ± 15.5% בקבוצת G-Rg3r ו-110 ± 11.1% בקבוצת G-Rg3s, p < 0.05 ו-p < 0.001, בהתאמה, איור 6A, B ו-C).פעילות GST הוערכה באמצעות ערכת בדיקת פעילות.התוצאות שלנו הראו שלקבוצת הטיפול המשולב הייתה פעילות GST גבוהה יותר בהשוואה לקבוצת B(a)P בלבד (96.3 ± 6.6% לעומת 35.7 ± 7.8% בקבוצת G-Rg3r לעומת 92.3 ± 6.5 בקבוצת G-Rg3r ).% לעומת 35.7 ± 7.8% בקבוצת G-Rg3s, p < 0.001, איור 6D).
ביטוי של GST ו-Nrf2 בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3.(א) זיהוי של ביטוי GST על ידי סופג מערבי.(ב) ביטוי כמותי של GST בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3r.(ג) ביטוי כמותי של GST בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3s.(ד) פעילות GST בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3.(ה) זיהוי של ביטוי Nrf2 על ידי סופג מערבי.(ו) ביטוי כמותי של Nrf2 בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3r.(ז) ביטוי כמותי של Nrf2 בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3s.הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית התקן של קביעות משולשות.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
כדי להבהיר את המסלולים המעורבים בדיכוי בתיווך G-Rg3 של גידול הנגרמת על ידי B(a)P, ביטוי Nrf2 הוערך על ידי Western blotting.כפי שמוצג באיורים 6E,F,G, בהשוואה לקבוצת הביקורת, רק רמת Nrf2 בקבוצת הטיפול ב-B(a)P ירדה;עם זאת, בהשוואה לקבוצת הטיפול ב-B(a)P, רמות B(a) Nrf2 בקבוצת PG-Rg3 עלו (106 ± 9.5% עבור G-Rg3r לעומת 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% עבור G-Rg3r לעומת 41 ± 9.8% עבור G-Rg3s, p < 0.01).
אישרנו את התפקיד המניעתי של Nrf2 על ידי דיכוי ביטוי Nrf2 באמצעות RNA קטן מפריע ספציפי (siRNA).נוק-דאון Nrf2 אושר על ידי סופג מערבי (איור 7A,B).כפי שמוצג באיורים 7C,D, טיפול משותף בתאי hEL עם B(a)P ו-G-Rg3 הביא לירידה במספר התוספות של BPDE-DNA (1.47 ± 0.21) בהשוואה לטיפול ב-B(a)P לבד בקבוצת siRNA הביקורת.) G-Rg3r היה 4.13 ± 0.49, G-Rg3s היה 1.8 ± 0.32 ו-4.1 ± 0.57, p < 0.01).עם זאת, ההשפעה המעכבת של G-Rg3 על היווצרות BPDE-DNA בוטלה על ידי נוק-דאון Nrf2.בקבוצת siNrf2, לא היה הבדל מובהק ביצירת אדדוקט BPDE-DNA בין טיפול משותף ב-B(a)P ו-G-Rg3 לבין טיפול ב-B(a)P בלבד (3.0 ± 0.21 עבור G-Rg3r לעומת 3.56 ± 0.32 ).עבור G-Rg3r לעומת 3.6 עבור G-Rg3s לעומת ±0.45 לעומת 4.0±0.37, p > 0.05).
השפעת נוק-דאון Nrf2 על היווצרות תוספות BPDE-DNA בתאי hEL.(א) נוק-דאון Nrf2 אושר על ידי סופג מערבי.(ב) כימות של עוצמת הלהקה Nrf2.(ג) השפעת נוק-דאון Nrf2 על רמות התוספת של BPDE-DNA בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3r.(ד) השפעת נוק-דאון Nrf2 על רמות התוספת של BPDE-DNA בתאי hEL שטופלו ב-B(a)P ו-G-Rg3.הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית התקן של קביעות משולשות.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
מחקר זה העריך את ההשפעות המניעתיות של תמציות ג'ינסנג אדומות שונות על מודל עכבר של סרטן ריאות המושרה על ידי B(a)P, וטיפול ב-KRGB הפחית משמעותית את עומס הגידול.בהתחשב בכך של-G-Rg3 יש את התכולה הגבוהה ביותר בתמצית ג'ינסנג זו, נחקר התפקיד החשוב של הג'ינסנוסיד הזה בבלימת גידול הגידול.גם G-Rg3r וגם G-Rg3 (שני אפימרים של G-Rg3) הפחיתו משמעותית את עומס הגידול במודל עכבר של סרטן המושרה על ידי B(a)P.G-Rg3r ו-G-Rg3 מפעילים השפעות אנטי סרטניות על ידי גרימת אפופטוזיס של תאי גידול21, עיכוב צמיחת גידול22, עצירת מחזור התא23 והשפעה על אנגיוגנזה24.הוכח גם כי G-Rg3 מעכב גרורות תאיות25, והיכולת של G-Rg3 לשפר את ההשפעות של כימותרפיה והקרנות תועדה26,27.Poon וחב' הדגימו שטיפול ב-G-Rg3 יכול להפחית את ההשפעות הגנוטוקסיות של B(a)P28.מחקר זה מדגים את הפוטנציאל הטיפולי של G-Rg3 במיקוד מולקולות מסרטנות סביבתיות ומניעת סרטן.
למרות הפוטנציאל המניעתי הטוב שלהם, הזמינות הביולוגית הפומית הירודה של ג'ינסנוזידים מהווה אתגר לשימוש הקליני של מולקולות אלו.ניתוח פרמקוקינטי של מתן פומי של ג'ינסנוזידים בחולדות הראה שהזמינות הביולוגית שלו עדיין נמוכה מ-5%29.בדיקות אלו הראו כי לאחר תקופת הטיפול בת 20 השבועות, רק רמות Rg5 בדם ירדו.למרות שהמנגנון הבסיסי של זמינות ביולוגית ירודה נותר להבהיר, P-gp נחשב כמעורב בשטף של ג'ינסנוזידים.עבודה זו הדגימה לראשונה כי מתן verapamil, חוסם P-gp, מגביר את הזמינות הביולוגית דרך הפה של G-Rg3r ו-G-Rg3s.לפיכך, ממצא זה מצביע על כך ש-G-Rg3r ו-G-Rg3s פועלים כמצעים של P-gp כדי לווסת את השטף שלו.
עבודה זו מוכיחה שטיפול משולב עם ורפמיל מגביר את הזמינות הביולוגית של G-Rg3 במודל עכבר של סרטן ריאות.ממצא זה נתמך בהובלה בין-תאית מוגברת של G-Rg3 במעיים עם חסימת P-gp, ובכך מגבירה את ספיגתו.מבחנים בתאי Caco2 הראו שטיפול ב-Verapamil הפחית את הפליטה של G-Rg3r ו-G-Rg3s תוך שיפור חדירות הממברנה.מחקר של Yang et al.מחקרים הראו שטיפול בציקלוספורין A (חוסם P-gp נוסף) מעלה את הזמינות הביולוגית של ג'ינסנוסיד Rh2 מערך בסיס של 1%20 ליותר מ-30%.גם תרכובות Ginsenosides K ו-Rg1 הראו תוצאות דומות30,31.כאשר וראפמיל וציקלוספורין A ניתנו יחד, זרימת התרכובת K בתאי Caco-2 פחתה באופן משמעותי מ-26.6 לפחות מ-3, בעוד שהרמות התוך-תאיות שלה עלו פי 40-30.בנוכחות verapamil, רמות Rg1 עלו בתאי אפיתל ריאת חולדה, מה שמצביע על תפקיד של P-gp בפלחת ג'ינסנוסיד, כפי שהוצג על ידי Meng et al.31.עם זאת, לוורפמיל לא הייתה אותה השפעה על זרימת ג'ינסנוזידים מסוימים (כגון Rg1, F1, Rh1 ו-Re), מה שמעיד על כך שהם אינם מושפעים ממצעי P-gp, כפי שהוצג על ידי Liang וחב'.32 .תצפית זו עשויה להיות קשורה למעורבות של מובילים אחרים ומבני ג'ינסנוסיד חלופיים.
מנגנון ההשפעה המניעתית של G-Rg3 על סרטן אינו ברור.מחקרים קודמים הראו כי G-Rg3 מונע נזק ל-DNA ואפופטוזיס על ידי הפחתת עקה חמצונית ודלקת16,33, שעשוי להיות המנגנון הבסיסי למניעת גידול הנגרמת על ידי B(a)P.כמה דיווחים מצביעים על כך שניתן להפחית גנוטוקסיות המושרה על ידי B(a)P על ידי אפנון אנזימים שלב II ליצירת BPDE-DNA34.GST הוא אנזים שלב II טיפוסי המעכב יצירת תוספת של BPDE-DNA על ידי קידום הקישור של GSH ל-BPDE, ובכך מפחית נזק ל-DNA הנגרם על ידי B(a)P35.התוצאות שלנו מראות שטיפול ב-G-Rg3 מפחית ציטוטוקסיות הנגרמת על ידי B(a)P ויצירת אדדוקט BPDE-DNA בתאי hEL ומשחזר את הביטוי והפעילות של GST במבחנה.עם זאת, השפעות אלה נעדרו בהיעדר Nrf2, מה שמרמז על כך ש-G-Rg3 משרה השפעות ציטו-פרוטקטיביות דרך מסלול Nrf2.Nrf2 הוא גורם שעתוק עיקרי לאנזימי ניקוי רעלים שלב II המקדם את פינוי הקסנוביוטיקה36.הפעלה של מסלול Nrf2 מעוררת הגנה על ציטומט ומפחיתה נזק לרקמות37.יתר על כן, מספר דיווחים תמכו בתפקידו של Nrf2 כמדכא גידולים בקרצינוגנזה38.המחקר שלנו מראה כי אינדוקציה של מסלול Nrf2 על ידי G-Rg3 ממלאת תפקיד רגולטורי חשוב בגנוטוקסיות הנגרמת על ידי B(a)P על ידי גרימת ניקוי רעלים של B(a)P על ידי הפעלת אנזימים שלב II, ובכך מעכבת את תהליך הגידול.
העבודה שלנו חושפת את הפוטנציאל של ג'ינסנג אדום במניעת סרטן ריאות המושרה על ידי B(a)P בעכברים באמצעות המעורבות החשובה של ג'ינסנוסיד G-Rg3.הזמינות הביולוגית הירודה של מולקולה זו פוגעת ביישום הקליני שלה.עם זאת, מחקר זה מראה לראשונה ש-G-Rg3 הוא מצע של P-gp, ומתן מעכב P-gp מגביר את הזמינות הביולוגית של G-Rg3 in vitro ו-in vivo.G-Rg3 מפחית ציטוטוקסיות הנגרמת על ידי B(a)P על ידי ויסות מסלול Nrf2, שעשוי להיות מנגנון פוטנציאלי לתפקוד המניעתי שלו.המחקר שלנו מאשר את הפוטנציאל של ginsenoside G-Rg3 למניעה וטיפול בסרטן ריאות.
עכברי נקבות A/J בנות שישה שבועות (20 ± 1 גרם) וחולדות Wistar זכרים בני 7 שבועות (250 ± 20 גרם) הושגו ממעבדת ג'קסון (Bar Harbor, ארה"ב) וממכון ווהאן לזואולוגיה.אוניברסיטה (ווהאן, סין).מרכז איסוף התרבות הסינית (Wuhan, סין) סיפק לנו תאי Caco-2 ו-hEL.Sigma-Aldrich (סנט לואיס, ארה"ב) היא מקור ל-B(a)P ו-tricaprine.ג'ינסנוזידים מטוהרים G-Rg3r ו-G-Rg3s, דימתיל סולפוקסיד (DMSO), ערכת מבחני התפשטות CellTiter-96 (MTS), וראפמיל, מדיום חיוני מינימלי (MEM), וסרום בקר עוברי (FBS) נרכשו מ-Chengdu Must Bio-Technology .בע"מ.(צ'נגדו, סין).ערכת המיני QIAamp DNA וערכת BPDE-DNA adduct ELISA נרכשו מ-Qiagen (סטנפורד, קליפורניה, ארה"ב) ומ-Cell Biolabs (סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב).ערכת בדיקת פעילות GST וערכת בדיקת חלבון כוללת (שיטת BCA סטנדרטית) נרכשו מ-Solarbio (בייג'ינג, סין).כל תמציות הג'ינסנג האדום מאוחסנות ב-Mingyu Laboratory 7. אוניברסיטת הבפטיסטים של הונג קונג (הונג קונג, סין) ומרכז הסרטן של קוריאה (סיאול, קוריאה) הם מקורות מסחריים לתמצית CRG ותמציות ג'ינסנג אדום שונות ממקורות קוריאניים שונים (כולל KRGA, KRGB ו-KRGC).ג'ינסנג אדום עשוי משורשי ג'ינסנג טרי בן 6 שנים.תמצית ג'ינסנג אדום מתקבלת על ידי שטיפת ג'ינסנג במים שלוש פעמים, לאחר מכן ריכוז התמצית המימית, ולבסוף ייבוש בטמפרטורה נמוכה לקבלת אבקת תמצית ג'ינסנג.נוגדנים (אנטי-Nrf2, אנטי-GST ו-β-אקטין), אימונוגלובולין G (IgG) מצומד חזרת פרוקסידאז, מגיב לטרנספקציה, סיRNA בקרה ו-Nrf2 siRNA נרכשו מ-Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) .), ארה"ב).
תאי Caco2 ו-hEL תורבו בכלי תרבית תאים בגודל 100 מ"מ עם MEM המכילה 10% FBS ב-37 מעלות צלזיוס באווירה לחה של 5% CO2.כדי לקבוע את ההשפעה של תנאי הטיפול, תאי hEL הודגרו עם ריכוזים שונים של B(a)P ו-G-Rg3 ב-MEM למשך 48 שעות.ניתן לנתח או לאסוף תאים נוספים כדי להכין תמציות ללא תאים.
כל הניסויים אושרו על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים ניסויים של Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology (אישור מס' 2019; רישום מס' 4587TH).כל הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות ולתקנות הרלוונטיות, והמחקר נערך בהתאם להנחיות מחקר בבעלי חיים: דיווח על ניסויים ב-Vivo (ARRIVE).עכברי A/J בני שמונה שבועות הוזרקו לראשונה תוך-צפקית עם B(a)P בתמיסת טריקפרין (100 מ"ג/ק"ג, 0.2 מ"ל).לאחר שבוע חולקו העכברים באופן אקראי לקבוצות ביקורת וקבוצות טיפול שונות, 15 עכברים בכל קבוצה, וחולקו מתן נפט פעם ביום.לאחר 20 שבועות של טיפול, בעלי חיים הוקרבו כתוצאה מחניקת CO2.ריאות נאספו ותוקנו למשך 24 שעות.מספר הגידולים השטחיים וגדלי הגידול הבודדים כמתו עבור כל ריאה תחת מיקרוסקופ לנתח.הערכות נפח הגידול (V) חושבו באמצעות הביטוי הבא: V (mm3) = 4/3πr3, כאשר r הוא קוטר הגידול.הסכום הנקי של כל נפחי הגידולים בריאות של עכברים ייצג את נפח הגידול הכולל, ונפח הגידול הכולל הממוצע בכל קבוצה ייצג את עומס הגידול.דגימות דם מלא ומעי נאספו ואוחסנו ב-80°C לקביעת UPLC-MS/MS.סרום נאסף והשתמש בנתח כימיה אוטומטי לניתוח רמות אלנין אמינוטרנספראז (ALT) ורמות קריאטינין בסרום (Cr) כדי להעריך את תפקוד הכבד והכליות.
דגימות שנאספו הוצאו מאחסון קר, הופשרו, נשקלו והונחו בצינורות כמתואר לעיל.לזה הוסיפו 0.5 מיקרומטר פלוריזין (תקן פנימי) בתמיסת מתנול של 0.8 מ"ל.לאחר מכן הומוגגו הרקמה באמצעות Tissue-Tearor וההומוגנט הועבר לאחר מכן לשפופרת מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מ"ל.התערובת עברה צנטריפוגה ב-15500 סל"ד למשך 15 דקות.לאחר הסרת 1.0 מ"ל של supernatant, יבש עם חנקן.מאתיים מיקרוליטר של מתנול שימשו להתאוששות.הדם נאסף ומעובד בקו אחד ומשמש כאסמכתא לכל המדידות.
צלחות Transwell 24-בארות זרעו 1.0 × 105 תאי Caco-2 לבאר כדי להעריך את השיפור הפוטנציאלי של תחבורה G-Rg3 על ידי הוספת verapamil.לאחר 3 שבועות של תרבית, התאים נשטפו עם HBSS והודגרו מראש ב-37 מעלות צלזיוס.400 μL של 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, או תערובת עם 50 או 100 μM verapamil) הוזרק לצד הבזולטרלי או האפיקלי של השכבה החד-שכבתית, ונוספו 600 μL של תמיסת HBSS לשנייה. צַד.אספו 100 μl של מדיום תרבות בזמנים המיועדים (0, 15, 30, 45, 60, 90 ו-120 דקות) והוסיפו 100 μl של HBSS כדי להרכיב נפח זה.דגימות אוחסנו ב-4 מעלות צלזיוס עד לזיהוי על ידי UPLC-MS/MS.הביטוי Papp = dQ/(dT × A × C0) משמש לכימות החדירות החד-כיוונית הקודקודית והבזולטרלית ולהיפך (Pa-b ו-Pb-a, בהתאמה);dQ/dT הוא השינוי בריכוז, A (0.6 cm2) הוא שטח הפנים של השכבה החד-שכבתית, ו- C0 הוא ריכוז התורם הראשוני.יחס הזרימה מחושב כ-Pb-a/Pa-b, המייצג את שיעור הפליחה של תרופת המחקר.
חולדות Wistar זכרים צמו במשך 24 שעות, שתו רק מים והורדמו בזריקה לווריד של תמיסת פנטוברביטל 3.5%.לצינור הסיליקון המצונן יש את קצה התריסריון ככניסה וקצה האיילאום כיציאה.השתמש במשאבה פריסטלטית כדי לשאוב את הכניסה עם 10 מיקרומטר G-Rg3r או G-Rg3s ב-HBSS איזוטוני בקצב זרימה של 0.1 מ"ל לדקה.ההשפעה של verapamil הוערכה על ידי הוספת 50 מיקרומטר או 100 מיקרומטר מהתרכובת ל-10 מיקרומטר G-Rg3r או G-Rg3s.UPLC-MS/MS בוצע על תמציות זילוף שנאספו בנקודות זמן 60, 90, 120 ו-150 דקות לאחר תחילת הזילוף.אחוז הספיגה נכמת על ידי הנוסחה % ספיגה = (1 – Cout/Cin) × 100%;הריכוז של G-Rg3 ביציאה ובכניסה מבוטא על ידי Cout ו-Cin, בהתאמה.
תאי hEL נזרעו בצלחות של 96 בארות בצפיפות של 1 × 104 תאים לבאר וטופלו ב-B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 מיקרומטר) או G-Rg3 מומס ב-DMSO .לאחר מכן, התרופות דוללו במצע תרבית לריכוזים שונים (0, 1, 2, 5, 10, 20 מיקרומטר) במשך 48 שעות.באמצעות ערכת בדיקת MTS זמינה מסחרית, התאים הועברו לפרוטוקול סטנדרטי ולאחר מכן נמדדו באמצעות קורא מיקרו-לוחיות ב-490 ננומטר.רמת הכדאיות התא של הקבוצות שטופלו בשיתוף עם B(a)P (10 מיקרומטר) ו-G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 מיקרומטר) הוערכה לפי השיטה לעיל והשוותה לקבוצה שלא טופלה.
תאי hEL נזרעו בצלחות 6-בארות בצפיפות של 1 × 105 תאים/באר וטופלו ב-10 μMB(a)P בנוכחות או היעדר 10 μM G-Rg3.לאחר 48 שעות של טיפול, ה-DNA הופץ מתאי hEL באמצעות ערכת המיני QIAamp DNA לפי פרוטוקול היצרן.היווצרות של BPDE-DNA adducts זוהתה באמצעות ערכת BPDE-DNA adduct ELISA.רמות יחסיות של אדדוקט BPDE-DNA נמדדו באמצעות קורא microplate על ידי מדידת ספיגה ב-450 ננומטר.
תאי hEL נזרעו בצלחות של 96 בארות בצפיפות של 1 × 104 תאים לבאר וטופלו ב-10 μMB(a)P בהיעדר או נוכחות של 10 μM G-Rg3 למשך 48 שעות.פעילות GST נמדדה באמצעות ערכת בדיקת פעילות GST מסחרית לפי פרוטוקול היצרן.הפעלת GST יחסית נמדדה על ידי ספיגה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-לוחות.
תאי hEL נשטפו עם PBS קר כקרח ולאחר מכן עברו ליטוש באמצעות חיץ בדיקת רדיואימוניות המכיל מעכבי פרוטאז ומעכבי פוספטאז.לאחר כימות חלבון באמצעות ערכת בדיקת חלבון כוללת, 30 מיקרוגרם חלבון בכל דגימה הופרדו על ידי 12% SDS-PAGE והועברו לממברנת PVDF על ידי אלקטרופורזה.הממברנות נחסמו עם 5% חלב רזה והודגרו עם נוגדנים ראשוניים למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס.לאחר דגירה עם נוגדנים משניים מצומדים חזרת פרוקסידאז, נוספו ריאגנטים כימילומינסנציית משופרים כדי להמחיש את אות הקישור.העוצמה של כל פס חלבון הוכמתה באמצעות תוכנת ImageJ.
תוכנת GraphPad Prism 7.0 שימשה לניתוח כל הנתונים, המבוטאים כממוצע ± סטיית תקן.השונות בין קבוצות הטיפול הוערכה באמצעות מבחן t של Student או ניתוח שונות של שונות, כאשר ערך P <0.05 מצביע על מובהקות סטטיסטית.
כל הנתונים שהושגו או נותחו במהלך מחקר זה כלולים במאמר שפורסם זה ובקבצי מידע משלימים.
Torre, LA, Siegel, RL וג'מאל, A. סטטיסטיקות של סרטן ריאות.תואר הפועל.לא בתוקף.תרופה.ביולוגיה.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. מסרטנים של טבק, הסמנים הביולוגיים שלהם וסרטן המושרה על ידי טבק.נאט.כומר סרטן.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH ו-Venitt, S. DNA ותוספת חלבון ברקמות אנושיות הנובעות מחשיפה לעשן טבק.בינלאומיות.ג'יי סרטן.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA ו- Yu M. Effect of Houttuynia cordata and silibinin על גידול ריאות הנגרמת על ידי בנזו(א) pyrene בעכברי A/J.סרטן 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et al.מוצר טבעי אנטי סרטני מבודד מחומרי רפואה סיניים.לֶסֶת.תרופה.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.יעילות של פוליפנון E, ג'ינסנג אדום ו-rapamycin על גידול ריאות הנגרמת על ידי בנזו(א) פירן בעכברי A/J.סרטן 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS ו-Yuan, KS Red, מעורבות בטיפול בסרטן.לֶסֶת.ג'יי נוט.תרופה.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS and Gao, L. Ginsenosides בשורשים ובעלים של הג'ינסנג האמריקאי.J. Agric.כימיה של מזון.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA ו- Yuan KS פרמקולוגיה של ג'ינסנג: רכיבים רבים והשפעות רבות.בִּיוֹכִימִיָה.פַרמָקוֹלוֹגִיָה.58, 1685–1693 (1999).
זמן פרסום: 17 בספטמבר 2023