Matur nuwun kanggo ngunjungi Nature.com.Versi browser sing sampeyan gunakake nduweni dhukungan CSS sing winates.Kanggo asil sing paling apik, disaranake nggunakake versi browser sing luwih anyar (utawa mateni mode kompatibilitas ing Internet Explorer).Ing sawetoro wektu, kanggo njamin dhukungan sing terus-terusan, kita nampilake situs kasebut tanpa gaya utawa JavaScript.
Ginseng abang wis digunakake ing obat tradisional Asia kanggo atusan taun.Ing panliten iki, kita ngevaluasi kemampuan papat jinis ginseng abang (ginseng abang Cina, ginseng abang Korea A, ginseng abang Korea B, lan ginseng abang Korea C) sing ditanam ing macem-macem wilayah kanggo nyegah pembentukan lan pertumbuhan paru-paru sing diakibatake karsinogen. tumor.Tes benzo(a)pyrene (B(a)P) ditindakake marang tikus A/J, lan ginseng abang Korea B ditemokake minangka sing paling efektif kanggo ngurangi beban tumor ing antarane papat varietas ginseng abang.Kajaba iku, kita nganalisa isi macem-macem ginsenosides (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 lan Rg5) ing papat ekstrak ginseng abang lan nemokake yen ginseng abang Korea B wis tingkat paling dhuwur saka ginsenoside Rg3 (G-Rg3), suggest sing G-Rg3 bisa muter peran penting ing khasiat terapeutik.Karya iki nuduhake yen G-Rg3 nduweni bioavailabilitas sing relatif kurang.Nanging, nalika G-Rg3 digabungake karo verapamil inhibitor P-gp, efflux G-Rg3 menyang sel Caco-2 dikurangi, tingkat penyerapan usus G-Rg3 tambah ing model tikus, lan G-Rg3 iki tambah.Ing sel Caco-2, aliran metu Rg3 mudhun, lan tingkat konsentrasi Rg3 mudhun.G-Rg3 tambah ing usus lan plasma, lan kemampuan kanggo nyegah tumor uga ditingkatake ing model tikus B (a) P-induced tumorigenesis.Kita uga nemokake yen G-Rg3 nyuda sitotoksisitas B (a) P-induced lan pembentukan adduct DNA ing sel paru-paru manungsa, lan mulihake ekspresi lan aktivitas enzim fase II liwat jalur Nrf2, sing bisa uga ana hubungane karo mekanisme potensial aksi. saka G inhibisi -Rg3..Babagan kedadeyan tumor paru-paru.Panaliten kita nuduhake peran penting kanggo G-Rg3 kanggo nargetake tumor paru-paru ing model tikus.Ketersediaan hayati oral ginsenoside iki ditingkatake kanthi nargetake P-glikoprotein, saéngga molekul kasebut menehi efek antikanker.
Jenis kanker paru-paru sing paling umum yaiku kanker paru-paru non-sel cilik (NSCLC), sing minangka salah sawijining panyebab utama kematian kanker ing China lan Amerika Utara1,2.Faktor utama sing nambah risiko ngembangake kanker paru-paru non-sel cilik yaiku ngrokok.Asap rokok ngandhut luwih saka 60 karsinogen, kalebu benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrosamin, lan isotop radioaktif saka bosok radon.3 Hidrokarbon aromatik polisiklik B(a)P minangka panyebab utama keracunan ing rokok. ngrokok.Nalika paparan B(a)P, sitokrom P450 ngowahi dadi B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), sing bereaksi karo DNA kanggo mbentuk BPDE-DNA adduct 4. adducts nyebabake tumorigenesis paru-paru ing tikus kanthi tahap tumor lan histopatologi sing padha karo tumor paru-paru manungsa5.Fitur iki ndadekake model kanker paru-paru sing diakibatake B(a)P dadi sistem sing cocog kanggo ngevaluasi senyawa sing nduweni sifat antikanker.
Salah sawijining strategi sing bisa ditindakake kanggo nyegah pangembangan kanker paru-paru ing kelompok berisiko tinggi, utamane para perokok, yaiku nggunakake agen kemopreventif kanggo nyegah pangembangan lesi neoplastik intraepithelial lan kanthi mangkono nyegah perkembangan kanker.Pasinaon kewan nuduhake manawa macem-macem agen kemopreventif efektif6.Laporan sadurunge 7 nyorot efek pencegahan sing apik saka ginseng abang ing kanker paru-paru.Jamu iki wis digunakake pirang-pirang abad ing obat tradisional Asia kanggo ndawakake umur lan kesehatan, lan wis didokumentasikake duwe efek antitumor8.
Faktor aktif ginseng yaiku ginsenoside, sing digunakake minangka marker komposit kanggo ngevaluasi kualitas ekstrak ginseng.Analisis kuantitatif ekstrak ginseng mentah biasane nggunakake sawetara ginsenosides, kalebu RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, lan Rc9,10.Ginsenosides duwe panggunaan klinis sing sithik amarga bioavailabilitas oral sing kurang 11.Senajan mekanisme kanggo bioavailability miskin iki ora cetha, efflux saka ginsenosides disebabake P-glikoprotein (P-gp)12 bisa dadi sabab.P-gp minangka salah sawijining transporter efflux sing paling penting ing superfamili transporter kaset ATP, sing nggunakake energi hidrolisis ATP kanggo ngeculake zat intraselular menyang lingkungan njaba.Transporter P-gp biasane disebarake ing usus, ginjel, ati lan alangi getih-otak13.P-gp nduweni peran kritis ing panyerepan usus, lan inhibisi P-gp nambah panyerepan lisan lan kasedhiyan sawetara obat antikanker12,14.Conto inhibitor sing sadurunge digunakake ing literatur yaiku verapamil lan cyclosporine A15.Pakaryan iki kalebu nggawe sistem tikus kanggo nyinaoni kanker paru-paru sing diakibatake B (a) P kanggo ngevaluasi kemampuan ekstrak ginseng abang sing beda-beda saka China lan Korea kanggo mengaruhi kanker.Ekstrak kasebut dianalisis kanthi individu kanggo ngenali ginsenosida spesifik sing bisa nyebabake karsinogenesis.Verapamil banjur digunakake kanggo target P-gp lan nambah bioavailability lisan lan khasiat terapeutik ginsenosides target kanker.
Mekanisme saponin ginseng menehi efek terapeutik marang karsinogenesis tetep ora jelas.Riset nuduhake manawa macem-macem ginsenosides bisa nyuda karusakan DNA sing disebabake dening karsinogen kanthi nyuda stres oksidatif lan ngaktifake enzim detoksifikasi fase II, saéngga nyegah karusakan sel.Glutathione S-transferase (GST) minangka enzim fase II khas sing dibutuhake kanggo nyuda karusakan DNA sing disebabake dening karsinogen17.Nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) minangka faktor transkripsi penting sing ngatur homeostasis redoks lan ngaktifake ekspresi enzim fase II lan respon antioksidan sitoprotektif18.Panaliten kita uga nliti efek ginsenosida sing diidentifikasi kanggo nyuda sitotoksisitas B (a) P-induced lan pembentukan adduksi BPDE-DNA, uga ngindhuksi enzim fase II kanthi modulasi jalur Nrf2 ing sel paru-paru normal.
Pembentukan model tikus kanker sing diakibatake B (a) P konsisten karo karya sadurunge5.Gambar 1A nuduhake desain eksperimen perawatan 20 minggu model kanker tikus sing diinduksi dening B (a) P, banyu (kontrol), ekstrak ginseng abang Cina (CRG), ekstrak ginseng abang Korea A (KRGA), lan abang Korea. ginseng.Ekstrak B (KRGB) lan Ekstrak Ginseng Merah Korea C (KRGC).Sawise 20 minggu perawatan ginseng abang, tikus dikorbanake kanthi asfiksia CO2.Gambar 1B nuduhake tumor paru-paru makroskopik ing kewan sing diobati karo macem-macem jinis ginseng abang, lan Gambar 1C nuduhake mikrograf cahya sing perwakilan saka sampel tumor.Beban tumor kéwan sing diobati KRGB (1.5 ± 0.35) luwih murah tinimbang kéwan kontrol (0.82 ± 0.2, P <0.05), kaya sing ditampilake ing Gambar 1D.Tingkat rata-rata inhibisi beban tumor yaiku 45%.Ekstrak ginseng abang liyane sing diuji ora nuduhake owah-owahan sing signifikan ing beban tumor (P> 0,05).Ora ana efek samping sing katon ing model tikus sajrone 20 minggu perawatan ginseng abang, kalebu ora ana owah-owahan bobot awak (data ora ditampilake) lan ora ana keracunan ati utawa ginjel (Gambar 1E, F).
Ekstrak ginseng abang ngobati perkembangan tumor paru-paru ing tikus A / J.(A) Rancangan eksperimen.(B) Tumor paru-paru gedhe ing model tikus.Tumor dituduhake kanthi panah.a: klompok ginseng abang Cina.b: klompok A saka ginseng abang Korea.c: Kelompok ginseng abang Korea B. d: Kelompok ginseng abang Korea C. d: Kelompok kontrol.(C) Mikrograf cahya nuduhake tumor paru-paru.Magnification: 100. b: 400. (D) Beban tumor ing klompok ekstrak ginseng abang.(E) Tingkat plasma enzim ati ALT.(F) Tingkat plasma enzim Cr.Data dipunandharaken kanthi rata-rata ± standar deviasi.*P <0,05.
Ekstrak ginseng abang sing diidentifikasi ing panliten iki dianalisis kanthi spektrometri massa tandem kromatografi cair ultra-kinerja (UPLC-MS/MS) kanggo ngitung ginsenosida ing ngisor iki: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 lan Rg5.Kondisi UPLC lan MS sing digunakake kanggo ngukur analit diterangake ing laporan sadurunge19.Kromatogram UPLC-MS / MS saka papat ekstrak ginseng abang ditampilake ing Gambar 2A.Ana beda sing signifikan ing total isi ginsenoside, kanthi total ginsenoside paling dhuwur ing CRG (590.27 ± 41.28 μmol / L) (Gambar 2B).Nalika ngevaluasi ginsenosides individu (Gambar 2C), KRGB nuduhake tingkat paling dhuwur saka G-Rg3 dibandhingake ginsenosides liyane (58,33 ± 3,81 μmol / L kanggo G-Rg3s lan 41,56 ± 2,88 μmol / L kanggo G -Rg3r).L).jinis ginseng abang (P <0,001).G-Rg3 dumadi minangka pasangan stereoisomer G-Rg3r lan G-Rg3s, sing beda-beda ing posisi gugus hidroksil ing karbon 20 (Fig. 2D).Asil kasebut nuduhake yen G-Rg3r utawa G-Rg3 bisa duwe potensial antikanker sing penting ing model tikus kanker sing diakibatake B (a) P.
Isi ginsenosides ing macem-macem ekstrak ginseng abang.(A) Kromatogram UPLC-MS/MS saka papat ekstrak ginseng abang.(B) Estimasi total isi ginsenoside ing ekstrak sing dituduhake.(C) Deteksi ginsenosida individu ing ekstrak berlabel.(D) Struktur stereoisomer ginsenoside G-Rg3r lan G-Rg3s.Data dipunandharaken minangka rata-rata ± standar deviasi saka telung tekad.***P <0,001.
Sinau UPLC-MS / MS mbutuhake kuantifikasi ginsenosides ing sampel usus lan getih sawise 20 minggu perawatan.Perawatan karo KRGB nuduhake anané mung 0,0063 ± 0,0005 μg / ml Rg5 ing getih.Ora ana sisa ginsenosida sing dideteksi, nuduhake bioavailabilitas oral sing kurang lan mula nyuda paparan ginsenosida kasebut.
Garis sel adenokarsinoma usus besar Caco-2 sacara morfologis lan biokimia padha karo sel epitelium usus manungsa, nuduhake kegunaane kanggo ngevaluasi transportasi enterosit ngliwati penghalang epitel usus.Analisis iki adhedhasar panaliten sadurunge 20 .Tokoh 3A, B, C, D, E, F nuduhake gambar perwakilan transportasi transselular G-Rg3r lan G-Rg3 nggunakake model monolayer Caco-2.Transportasi transselular G-Rg3r utawa G-Rg3 ngliwati Caco-2 monolayers saka basolateral menyang sisih apikal (Pb-a) luwih dhuwur tinimbang saka apikal menyang sisih basolateral (Pa-b).Kanggo G-Rg3r, nilai rata-rata Pa-b yaiku 0,38 ± 0,06, sing mundhak dadi 0,73 ± 0,06 sawise perawatan karo 50 μmol / L verapamil lan dadi 1,14 ± 0,09 sawise perawatan karo 100 μmol / L verapamil (p <0,01, lan 0,01, mungguh; Gambar 2).3A).Observasi kanggo G-Rg3 ngetutake pola sing padha (Gambar 3B), lan asil nuduhake yen perawatan verapamil ningkatake transportasi G-Rg3r lan G-Rg3.Pangobatan verapamil uga nyebabake penurunan signifikan rasio efluks Pb-a lan G-Rg3r lan G-Rg3s (Gambar 3C,D,E,F), nuduhake yen perawatan verapamil nyuda isi ginsenoside ing sel efflux Caco-2..
Transportasi transselular G-Rg3 ing Caco-2 monolayers lan panyerepan usus ing assay perfusi tikus.(A) Nilai Pa-b klompok G-Rg3r ing Caco-2 monolayer.(B) Nilai Pa-b klompok G-Rg3s ing Caco-2 monolayer.(C) Nilai Pb klompok G-Rg3r ing Caco-2 monolayer.(D) Nilai Pb klompok G-Rg3s ing Caco-2 monolayer.(E) rasio ngasilaken saka kelompok G-Rg3r ing Caco-2 monolayer.(F) Rasio ngasilake klompok G-Rg3 ing monolayer Caco-2.(G) Persentase panyerepan usus G-Rg3r ing tes perfusi ing tikus.(H) Persentase panyerepan usus G-Rg3 ing tes perfusi ing tikus.Permeabilitas lan panyerepan dibandhingake tanpa tambahan verapamil.Data kasebut minangka rata-rata ± standar deviasi saka limang eksperimen independen.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Konsisten karo karya sadurunge20, perfusi usus orthotopic tikus ditindakake kanggo nemtokake manawa penyerapan G-Rg3 ing usus mundhak sawise perawatan verapamil.Tokoh 3G, H nuduhake assays perfusi perwakilan kanggo ngevaluasi persentase panyerepan usus G-Rg3r lan G-Rg3 ing tikus model kanker sajrone periode wektu ing ndhuwur.Persentase awal penyerapan G-Rg3r sing lemah kira-kira 10% mundhak dadi luwih saka 20% sawise perawatan karo 50 μM verapamil lan luwih saka 25% sawise perawatan karo 100 μM verapamil.Kajaba iku, G-Rg3, sing duwe serapan awal 10%, uga nuduhake puncak luwih saka 20% sawise perawatan karo 50 μM verapamil lan meh 30% sawise perawatan karo 100 μM verapamil, nuduhake yen inhibisi P-gp dening verapamil nambah. intestinal G-absorption Rg3 ing model tikus kanker paru-paru.
Miturut cara ing ndhuwur, tikus model kanker sing diakibatake B (a) P dipérang dadi enem klompok kanthi acak, kaya sing ditampilake ing Gambar 4A.Ora ana bobot mundhut sing signifikan utawa pratandha klinis keracunan sing diamati ing klompok perawatan G-Rg3 dibandhingake karo klompok kontrol (data ora ditampilake).Sawise 20 minggu perawatan, paru-paru saben tikus diklumpukake.Gambar 4B nuduhake tumor paru-paru makroskopis ing tikus ing kelompok perawatan ing ndhuwur, lan Gambar 4C nuduhake mikrograf cahya perwakilan saka tumor sing perwakilan.Babagan beban tumor ing saben klompok (Gambar 4D), nilai kanggo tikus sing diobati karo G-Rg3r lan G-Rg3s yaiku 0,75 ± 0,29 mm3 lan 0,81 ± 0,30 mm3, masing-masing, dene nilai kanggo G Mice sing diobati. karo -Rg3s padha 1,63 mungguh ± 0,40 mm3.tikus kontrol (p <0.001), nuduhake yen perawatan G-Rg3 nyuda beban tumor ing tikus.Administrasi verapamil luwih nambah pengurangan iki: nilai verapamil + G-Rg3r tikus mudhun saka 0,75 ± 0,29 mm3 dadi 0,33 ± 0,25 mm3 (p <0,01), lan nilai verapamil + saka 0,81 ± 0,30 mm3 mudhun dadi 0,81 ± 0,30 mm3 dadi 0,30 ± 0,29 mm. mm3 ing tikus sing diobati G. -Rg3s (p <0.05), nuduhake yen verapamil bisa ningkatake efek penghambatan G-Rg3 ing tumorigenesis.Beban tumor ora ana bedane sing signifikan antarane klompok kontrol lan klompok verapamil, klompok G-Rg3r lan klompok G-Rg3s, lan klompok verapamil + G-Rg3r lan klompok verapamil + G-Rg3s.Kajaba iku, ora ana keracunan ati utawa ginjel sing digandhengake karo perawatan sing dievaluasi (Gambar 4E, F).
Beban tumor sawise perawatan G-Rg3 lan tingkat plasma utawa usus G-Rg3r lan G-Rg3 ing kelompok sing dituduhake.(A) Rancangan eksperimen.(B) Tumor makroskopik ing model tikus.Tumor dituduhake kanthi panah.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r ing kombinasi karo verapamil.d: G-Rg3 ing kombinasi karo verapamil.d: Verapamil.e: kontrol.(C) Mikrograf optik tumor ing pembesaran.Wangsulan: 100x.b: 400x.(D) Efek perawatan G-Rg3 + verapamil ing beban tumor ing tikus A / J.(E) Tingkat plasma enzim ati ALT.(F) Tingkat plasma enzim Cr.(G) Tingkat plasma G-Rg3r utawa G-Rg3 saka klompok sing dituduhake.(H) Tingkat G-Rg3r utawa G-Rg3s ing usus kelompok sing dituduhake.Data dipunandharaken minangka rata-rata ± standar deviasi saka telung tekad.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Tingkat G-Rg3 ing tikus model kanker B (a) P-induced ditaksir dening UPLC-MS / MS sawise periode perawatan 20 minggu miturut metode sing diterangake ing bagean Metode.Angka 4G lan H nuduhake tingkat G-Rg3 plasma lan usus.Tingkat G-Rg3r ing plasma yaiku 0,44 ± 0,32 μmol / L lan mundhak dadi 1,17 ± 0,47 μmol / L kanthi administrasi verapamil bebarengan (p <0,001), dene tingkat G-Rg3r usus yaiku 0,53 ± 0,08 µg.Nalika digabungake karo verapamil, g mundhak dadi 1,35 ± 0,13 μg / g (p <0,001).Kanggo G-Rg3, asil kasebut ngetutake pola sing padha, nuduhake yen perawatan verapamil ningkatake bioavailabilitas oral G-Rg3 ing tikus A / J.
Assay viabilitas sel digunakake kanggo ngevaluasi sitotoksisitas B (a) P lan G-Rg3 ing sel hEL.Sitotoksisitas sing disebabake dening B (a) P ing sel hEL ditampilake ing Gambar 5A, dene sifat nontoxic saka G-Rg3r lan G-Rg3 ditampilake ing Gambar 5A lan 5B.5B, C. Kanggo ngevaluasi efek cytoprotective saka G-Rg3, B (a) P disedhiyakake bebarengan karo macem-macem konsentrasi G-Rg3r utawa G-Rg3 menyang sel hEL.Kaya sing ditampilake ing Gambar 5D, G-Rg3r ing konsentrasi 5 μM, 10 μM, lan 20 μM mulihake daya tahan sel dadi 58,3%, 79,3%, lan 77,3%.Asil sing padha uga bisa dideleng ing grup G-Rg3s.Nalika konsentrasi G-Rg3s ana 5 µM, 10 µM lan 20 µM, viabilitas sel dibalèkaké dadi 58,3%, 72,7% lan 76,7% (Gambar 5E).).Anane tambahan BPDE-DNA diukur nggunakake kit ELISA.Asil kita nuduhake yen tingkat adduct BPDE-DNA tambah ing grup B (a) P-dianggep dibandhingake karo grup kontrol, nanging dibandhingake karo G-Rg3 co-treatment, tingkat adduct BPDE-DNA ing grup B (a) P. B ing klompok sing diobati, tingkat tambahan DNA dikurangi sacara signifikan.Asil perawatan karo B (a) P piyambak ditampilake ing Gambar 5F (1.87 ± 0.33 vs. 3.77 ± 0.42 kanggo G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 kanggo G -Rg3s, p <0.001).
Viabilitas sel lan pembentukan tambahan BPDE-DNA ing sel hEL sing diobati karo G-Rg3 lan B (a) P.(A) Viabilitas sel hEL sing diobati karo B(a)P.(B) Viabilitas sel hEL sing diobati karo G-Rg3r.(C) Viabilitas sel hEL sing diobati karo G-Rg3.(D) Viabilitas sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3r.(E) Viabilitas sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3.(F) Tingkat tambahan BPDE-DNA ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3.Data dipunandharaken minangka rata-rata ± standar deviasi saka telung tekad.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Ekspresi enzim GST dideteksi sawise co-treatment karo 10 μM B (a) P lan 10 μM G-Rg3r utawa G-Rg3s.Asil kita nuduhake yen B (a) P nyuda ekspresi GST (59.7 ± 8.2% ing grup G-Rg3r lan 39 ± 4.5% ing grup G-Rg3s), lan B (a) P digandhengake karo G-Rg3r. , utawa karo G-Rg3r, utawa karo G-Rg3r.Co-treatment karo G-Rg3s dibalèkaké expression GST.Ekspresi GST (103,7 ± 15,5% ing grup G-Rg3r lan 110 ± 11,1% ing grup G-Rg3s, p <0,05 lan p <0,001, masing-masing, Gambar 6A, B, lan C).Aktivitas GST ditaksir nggunakake kit uji aktivitas.Asil kita nuduhake yen klompok perawatan kombinasi nduweni aktivitas GST sing luwih dhuwur tinimbang klompok B (a) P mung (96,3 ± 6,6% vs 35,7 ± 7,8% ing grup G-Rg3r vs. ).% vs 35,7 ± 7,8% ing grup G-Rg3s, p <0,001, Gambar 6D).
Ekspresi GST lan Nrf2 ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3.(A) Deteksi ekspresi GST dening Western blotting.(B) Ekspresi kuantitatif GST ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3r.(C) Ekspresi kuantitatif GST ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3s.(D) Aktivitas GST ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3.(E) Deteksi ekspresi Nrf2 dening Western blotting.(F) Ekspresi kuantitatif Nrf2 ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3r.(G) Ekspresi kuantitatif Nrf2 ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3s.Data dipunandharaken minangka rata-rata ± standar deviasi saka telung tekad.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Kanggo njlentrehake jalur sing ana ing penindasan G-Rg3-mediated tumorigenesis B (a) P-induced, ekspresi Nrf2 ditaksir dening Western blotting.Kaya sing dituduhake ing Gambar 6E, F, G, dibandhingake karo klompok kontrol, mung tingkat Nrf2 ing grup perawatan B (a) P dikurangi;Nanging, dibandhingake karo klompok perawatan B (a) P, tingkat B (a) Nrf2 ing grup PG-Rg3 tambah (106 ± 9.5% kanggo G-Rg3r vs. 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% kanggo G-Rg3r vs 41 ± 9,8% kanggo G-Rg3s, p <0,01).
Kita ngonfirmasi peran pencegahan Nrf2 kanthi nyuda ekspresi Nrf2 nggunakake RNA interfering cilik tartamtu (siRNA).Nrf2 knockdown dikonfirmasi dening Western blotting (Fig. 7A, B).Minangka ditampilake ing Gambar 7C, D, co-treatment sel hEL karo B (a) P lan G-Rg3 nyebabake nyuda jumlah tambahan BPDE-DNA (1.47 ± 0.21) dibandhingake karo perawatan karo B (a) P. piyambak ing grup siRNA kontrol.) G-Rg3r ana 4,13 ± 0,49, G-Rg3s ana 1,8 ± 0,32 lan 4,1 ± 0,57, p <0,01).Nanging, efek inhibisi G-Rg3 ing pembentukan BPDE-DNA dibuwang dening Nrf2 knockdown.Ing grup siNrf2, ora ana prabédan sing signifikan ing pambentukan tambahan BPDE-DNA antarane B (a) P lan G-Rg3 co-treatment lan perawatan B (a) P piyambak (3.0 ± 0.21 kanggo G-Rg3r vs. 3.56 ± 0.32). ).kanggo G-Rg3r mungsuh 3,6 kanggo G-Rg3s mungsuh ± 0,45 mungsuh 4,0 ± 0,37, p> 0,05).
Efek knockdown Nrf2 ing pambentukan tambahan BPDE-DNA ing sel hEL.(A) Nrf2 knockdown dikonfirmasi dening Western blotting.(B) Kuantifikasi intensitas pita Nrf2.(C) Efek knockdown Nrf2 ing tingkat adduct BPDE-DNA ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3r.(D) Efek knockdown Nrf2 ing tingkat adduct BPDE-DNA ing sel hEL sing diobati karo B (a) P lan G-Rg3.Data dipunandharaken minangka rata-rata ± standar deviasi saka telung tekad.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Panliten iki ngevaluasi efek pencegahan saka macem-macem ekstrak ginseng abang ing model tikus kanker paru-paru B (a) P-induced, lan perawatan KRGB nyuda beban tumor kanthi signifikan.Ngelingi yen G-Rg3 nduweni kandungan paling dhuwur ing ekstrak ginseng iki, peran penting ginsenoside iki kanggo nyegah tumorigenesis wis diteliti.Loro-lorone G-Rg3r lan G-Rg3 (loro epimer G-Rg3) nyuda beban tumor kanthi signifikan ing model tikus kanker B (a) P-induced.G-Rg3r lan G-Rg3 nduwe efek antikanker kanthi ngindhuksi apoptosis sel tumor21, nyegah pertumbuhan tumor22, nyegah siklus sel23 lan mengaruhi angiogenesis24.G-Rg3 uga wis ditampilake kanggo nyandhet metastasis seluler25, lan kemampuan G-Rg3 kanggo nambah efek saka kemoterapi lan radioterapi wis documented26,27.Poon et al nuduhake yen perawatan G-Rg3 bisa nyuda efek genotoksik saka B (a) P28.Panaliten iki nuduhake potensial terapeutik G-Rg3 kanggo nargetake molekul karsinogenik lingkungan lan nyegah kanker.
Senadyan potensial prophylactic sing apik, bioavailabilitas oral sing kurang saka ginsenosides nyebabake tantangan kanggo panggunaan klinis molekul kasebut.Analisis farmakokinetik saka administrasi oral ginsenosides ing tikus nuduhake yen bioavailabilitas isih kurang saka 5%29.Tes kasebut nuduhake yen sawise periode perawatan 20 minggu, mung tingkat getih Rg5 sing mudhun.Sanajan mekanisme dhasar saka bioavailabilitas sing ora apik isih kudu dijlentrehake, P-gp dianggep melu efluks ginsenosides.Karya iki nuduhake pisanan yen administrasi verapamil, blocker P-gp, nambah bioavailabilitas oral G-Rg3r lan G-Rg3s.Mangkono, panemuan iki nuduhake yen G-Rg3r lan G-Rg3s tumindak minangka substrat P-gp kanggo ngatur efluks.
Karya iki nduduhake yen perawatan kombinasi karo verapamil nambah bioavailabilitas oral G-Rg3 ing model tikus kanker paru-paru.Temuan iki didhukung dening tambah transportasi transselular usus saka G-Rg3 marang blokade P-gp, saéngga nambah panyerepan.Assays ing sel Caco2 nuduhake yen perawatan verapamil nyuda efflux G-Rg3r lan G-Rg3s nalika nambah permeabilitas membran.Sinau dening Yang et al.Panaliten nuduhake yen perawatan karo cyclosporine A (blocker P-gp liyane) nambah bioavailabilitas ginsenoside Rh2 saka nilai awal 1%20 dadi luwih saka 30%.Senyawa ginsenosides K lan Rg1 uga nuduhake asil sing padha30,31.Nalika verapamil lan cyclosporin A diwenehake bebarengan, efluks senyawa K ing sel Caco-2 dikurangi sacara signifikan saka 26,6 dadi kurang saka 3, dene tingkat intraselular mundhak 40 kali lipat.Ing ngarsane verapamil, tingkat Rg1 mundhak ing sel epitel paru-paru tikus, nuduhake peran kanggo P-gp ing efflux ginsenoside, kaya sing dituduhake dening Meng et al.31.Nanging, verapamil ora duwe efek sing padha ing efflux sawetara ginsenosides (kayata Rg1, F1, Rh1 lan Re), nuduhake yen padha ora kena pengaruh substrat P-gp, kaya sing dituduhake dening Liang et al.32 .Pengamatan iki bisa uga ana hubungane karo keterlibatan transporter liyane lan struktur ginsenoside alternatif.
Mekanisme efek pencegahan G-Rg3 ing kanker ora jelas.Panaliten sadurunge wis nuduhake yen G-Rg3 nyegah karusakan DNA lan apoptosis kanthi nyuda stres oksidatif lan inflamasi16,33, sing bisa dadi mekanisme dhasar kanggo nyegah tumorigenesis sing diakibatake B (a) P.Sawetara laporan nuduhake yen genotoksisitas sing disebabake dening B (a) P bisa dikurangi kanthi modulasi enzim fase II kanggo mbentuk BPDE-DNA34.GST minangka enzim fase II khas sing nyegah pambentukan tambahan BPDE-DNA kanthi ningkatake ikatan GSH menyang BPDE, saéngga nyuda karusakan DNA sing disebabake dening B (a) P35.Asil kita nuduhake yen perawatan G-Rg3 nyuda sitotoksisitas B (a) P-induced lan pambentukan tambahan BPDE-DNA ing sel hEL lan mulihake ekspresi lan aktivitas GST ing vitro.Nanging, efek kasebut ora ana amarga ora ana Nrf2, sing nuduhake yen G-Rg3 nyebabake efek sitoprotektif liwat jalur Nrf2.Nrf2 minangka faktor transkripsi utama kanggo enzim detoksifikasi fase II sing ningkatake reresik xenobiotik36.Aktivasi jalur Nrf2 nyebabake cytoprotection lan nyuda karusakan jaringan37.Kajaba iku, sawetara laporan wis ndhukung peran Nrf2 minangka penekan tumor ing karsinogenesis38.Panliten kita nuduhake yen induksi jalur Nrf2 dening G-Rg3 nduweni peran regulasi sing penting ing genotoksisitas B (a) P-induced kanthi nyebabake detoksifikasi B (a) P kanthi ngaktifake enzim fase II, saéngga nyegah proses tumorigenesis.
Pakaryan kita mbukak potensial ginseng abang kanggo nyegah kanker paru-paru B (a) P-induced ing tikus liwat keterlibatan penting ginsenoside G-Rg3.Bioavailabilitas oral sing kurang saka molekul iki ngalangi aplikasi klinis.Nanging, panliten iki nuduhake pisanan yen G-Rg3 minangka substrat P-gp, lan administrasi inhibitor P-gp nambah bioavailabilitas G-Rg3 in vitro lan in vivo.G-Rg3 nyuda sitotoksisitas B (a) P-induced kanthi ngatur jalur Nrf2, sing bisa dadi mekanisme potensial kanggo fungsi pencegahan.Panaliten kita negesake potensial ginsenoside G-Rg3 kanggo nyegah lan ngobati kanker paru-paru.
Tikus A/J wadon umur enem minggu (20 ± 1 g) lan tikus Wistar lanang umur 7 minggu (250 ± 20 g) dipikolehi saka Laboratorium Jackson (Bar Harbor, AS) lan Institut Zoologi Wuhan.Universitas (Wuhan, China).Pusat Koleksi Budaya Tipe Cina (Wuhan, China) nyedhiyakake sel Caco-2 lan hEL.Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) minangka sumber B (a) P lan tricaprine.Ginsenosides dimurnèkaké G-Rg3r lan G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 proliferation assay kit (MTS), verapamil, minimal essential medium (MEM), lan fetal bovine serum (FBS) dituku saka Chengdu Must Bio-Technology. .Co., Ltd.(Chengdu, China).Kit mini DNA QIAamp lan kit tambahan ELISA BPDE-DNA dituku saka Qiagen (Stanford, CA, USA) lan Cell Biolabs (San Diego, CA, USA).GST activity assay kit lan total protein assay kit (metode BCA standar) dituku saka Solarbio (Beijing, China).Kabeh ekstrak ginseng abang disimpen ing Laboratorium Mingyu 7. Universitas Baptis Hong Kong (Hong Kong, China) lan Pusat Kanker Korea (Seoul, Korea) minangka sumber komersial ekstrak CRG lan macem-macem ekstrak ginseng abang saka macem-macem asal Korea (kalebu KRGA, KRGB). lan KRGC).Ginseng abang digawe saka oyod ginseng seger umur 6 taun.Ekstrak ginseng abang dipikolehi kanthi ngumbah ginseng nganggo banyu kaping telu, banjur konsentrasi ekstrak banyu, lan pungkasane garing ing suhu sing kurang kanggo entuk bubuk ekstrak ginseng.Antibodi (anti-Nrf2, anti-GST, lan β-actin), horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit immunoglobulin G (IgG), reagen transfeksi, kontrol siRNA, lan Nrf2 siRNA dituku saka Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). .), AS).
Caco2 lan sel hEL dibudidaya ing piring kultur sel 100 mm2 kanthi MEM ngemot 10% FBS ing 37 ° C ing atmosfer humidified 5% CO2.Kanggo nemtokake efek kondisi perawatan, sel hEL diinkubasi kanthi konsentrasi B (a) P lan G-Rg3 sing beda ing MEM kanggo 48 jam.Sèl bisa luwih dianalisis utawa diklumpukake kanggo nyiapake ekstrak tanpa sel.
Kabeh eksperimen disetujoni dening Komite Etika Kewan Eksperimen saka Tongji Medical College, Universitas Ilmu lan Teknologi Huazhong (No. Persetujuan 2019; Registrasi No. 4587TH).Kabeh eksperimen ditindakake miturut pedoman lan peraturan sing relevan, lan panliten kasebut ditindakake miturut pedoman Riset Kewan: Pelaporan Eksperimen In Vivo (ARRIVE).Tikus A / J wolung minggu pisanan disuntikake intraperitoneally karo B (a) P ing larutan tricaprine (100 mg / kg, 0.2 ml).Sawise seminggu, tikus kasebut kanthi acak dipérang dadi kelompok kontrol lan kelompok perawatan sing béda, 15 tikus ing saben kelompok, lan digavasi sapisan dina.Sawise 20 minggu perawatan, kewan dikorbanake kanthi asfiksia CO2.Paru-paru diklumpukake lan tetep 24 jam.Jumlah tumor dangkal lan ukuran tumor individu diitung kanggo saben paru-paru ing mikroskop dissecting.Perkiraan volume tumor (V) diitung kanthi nggunakake ekspresi ing ngisor iki: V (mm3) = 4/3πr3, ing ngendi r yaiku diameter tumor.Jumlah total kabeh volume tumor ing paru-paru tikus nggambarake total volume tumor, lan rata-rata total volume tumor ing saben klompok nuduhake beban tumor.Sampel getih lan usus kabèh diklumpukake lan disimpen ing -80 ° C kanggo penentuan UPLC-MS / MS.Serum diklumpukake lan analisa kimia otomatis digunakake kanggo nganalisa tingkat alanine aminotransferase (ALT) lan kreatinin serum (Cr) kanggo netepake fungsi ati lan ginjel.
Sampel sing diklumpukake dicopot saka panyimpenan sing adhem, dilebur, ditimbang, lan dilebokake ing tabung kaya sing kasebut ing ndhuwur.Iki ditambahake 0,5 μM phlorizin (standar internal) ing larutan metanol 0,8 ml.Jaringan kasebut banjur homogenisasi nggunakake Tissue-Tearor lan homogenat kasebut banjur ditransfer menyang tabung microcentrifuge 1,5 ml.Campuran kasebut disentrifugasi ing 15500 rpm suwene 15 menit.Sawise njabut 1,0 ml supernatant, garing karo nitrogen.Rong atus microliter metanol digunakake kanggo pemulihan.Getih diklumpukake lan diproses ing siji baris lan digunakake minangka referensi kanggo kabeh pangukuran.
Piring Transwell 24 sumur dibiji kanthi 1.0 × 105 sel Caco-2 saben sumur kanggo ngevaluasi potensial peningkatan transportasi G-Rg3 kanthi tambahan verapamil.Sawise 3 minggu kultur, sel wis dikumbah nganggo HBSS lan preincubated ing 37 ° C.400 μL saka 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, utawa campuran karo 50 utawa 100 μM verapamil) disuntikake ing sisih basolateral utawa apikal saka monolayer, lan 600 μL larutan HBSS ditambahake menyang liyane. sisih.Kumpulake 100 µl medium kultur ing wektu sing wis ditemtokake (0, 15, 30, 45, 60, 90 lan 120 menit) lan tambahake 100 µl HBSS kanggo nggawe volume iki.Sampel disimpen ing −4 ° C nganti deteksi dening UPLC-MS / MS.Ekspresi Papp = dQ/(dT × A × C0) digunakake kanggo ngitung permeabilitas apikal lan basolateral unidirectional sing katon lan kosok balene (Pa-b lan Pb-a, mungguh);dQ/dT yaiku owah-owahan konsentrasi, A (0,6 cm2) minangka area permukaan monolayer, lan C0 minangka konsentrasi donor awal.Rasio efflux diitung minangka Pb-a / Pa-b, sing nuduhake tingkat efflux saka obat sinau.
Tikus Wistar lanang padha pasa 24 jam, mung ngombe banyu, lan dibius nganggo larutan pentobarbital 3,5% intravena.Tabung silikon intubasi nduweni ujung duodenum minangka lawang mlebu lan mburi ileum minangka metu.Gunakake pompa peristaltik kanggo ngompa inlet kanthi 10 µM G-Rg3r utawa G-Rg3s ing HBSS isotonik kanthi laju aliran 0,1 ml/menit.Efek verapamil ditaksir kanthi nambahake 50 μM utawa 100 μM senyawa kasebut menyang 10 μM G-Rg3r utawa G-Rg3s.UPLC-MS / MS ditindakake ing ekstrak perfusi sing diklumpukake ing titik wektu 60, 90, 120, lan 150 menit sawise wiwitan perfusi.Persentase panyerepan diukur kanthi rumus % panyerepan = (1 – Cout/Cin) × 100%;konsentrasi G-Rg3 ing stopkontak lan inlet ditulis dening Cout lan Cin, mungguh.
Sel hEL diselehake ing piring sumur 96 kanthi kerapatan 1 × 104 sel saben sumur lan diobati karo B (a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) utawa G-Rg3 sing dilarutake ing DMSO .Obat kasebut banjur diencerake karo medium kultur kanggo macem-macem konsentrasi (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) sajrone 48 jam.Nggunakake kit assay MTS sing kasedhiya kanthi komersial, sel kasebut tundhuk protokol standar lan banjur diukur nggunakake maca microplate ing 490 nm.Tingkat viabilitas sel saka klompok sing diobati karo B (a) P (10 μM) lan G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) ditaksir miturut metode ing ndhuwur lan dibandhingake karo klompok sing ora diobati.
Sel hEL ditanem ing piring 6 sumur kanthi kapadhetan 1 × 105 sel / sumur lan diolah kanthi 10 μMB (a) P ing ngarsane utawa ora ana 10 μM G-Rg3.Sawise perawatan 48 jam, DNA diekstrak saka sel hEL nggunakake Kit Mini DNA QIAamp miturut protokol pabrikan.Pembentukan tambahan BPDE-DNA dideteksi nggunakake kit ELISA tambahan BPDE-DNA.Tingkat relatif saka tambahan BPDE-DNA diukur nggunakake pembaca microplate kanthi ngukur absorbansi ing 450 nm.
Sel hEL diselehake ing piring 96 sumur kanthi kapadhetan 1 × 104 sel saben sumur lan diobati kanthi 10 μMB (a) P tanpa ana utawa ana 10 μM G-Rg3 suwene 48 jam.Aktivitas GST diukur nggunakake kit uji aktivitas GST komersial miturut protokol pabrikan.Aktivasi GST relatif diukur kanthi absorbansi ing 450 nm nggunakake maca microplate.
sel hEL dikumbah nganggo PBS kadhemen es lan banjur dilisis nganggo buffer uji radioimmunoprecipitation sing ngemot inhibitor protease lan inhibitor fosfatase.Sawise kuantifikasi protein nggunakake kit assay protein total, 30 μg protein ing saben sampel dipisahake dening 12% SDS-PAGE lan ditransfer menyang membran PVDF kanthi elektroforesis.Membrane diblokir nganggo susu skim 5% lan diinkubasi karo antibodi primer ing wayah wengi ing suhu 4 ° C.Sawise inkubasi karo antibodi sekunder konjugasi peroksidase horseradish, reagen chemiluminescence sing ditingkatake ditambahake kanggo nggambarake sinyal pengikat.Intensitas saben pita protein diukur nggunakake piranti lunak ImageJ.
Piranti lunak GraphPad Prism 7.0 digunakake kanggo nganalisis kabeh data, ditulis minangka rata-rata ± standar deviasi.Variasi antarane klompok perawatan ditaksir nggunakake uji t Student utawa analisis varian siji arah, kanthi nilai P <0,05 nuduhake signifikansi statistik.
Kabeh data sing dipikolehi utawa dianalisis sajrone panliten iki kalebu ing artikel sing diterbitake lan file informasi tambahan.
Torre, LA, Siegel, RL lan Jemal, A. statistik kanker paru-paru.adverbia.Kadaluwarsa.obat.biologi.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Karsinogen tembakau, biomarker lan kanker sing diakibatake tembakau.Nat.Pendeta Kanker.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH lan Venitt, S. DNA lan protein adducts ing jaringan manungsa asil saka paparan asap rokok.internasionalitas.J. Kanker.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA lan Yu M. Efek saka Houttuynia cordata lan silibinin ing benzo (a) pyrene-induced tumorigenesis paru-paru ing tikus A / J.Kanker 7, 1053-1057 (2005).
Tang, W. et al.Produk alami antikanker sing diisolasi saka bahan obat Cina.rahang.obat.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Khasiat polifenon E, ginseng abang, lan rapamycin ing tumorigenesis paru-paru benzo (a) pyrene ing tikus A / J.Kanker 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS lan Yuan, KS Red, keterlibatan ing terapi kanker.rahang.J. Nunut.obat.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS lan Gao, L. Ginsenosides ing werna lan godhong ginseng Amérika.J. Agric.Kimia panganan.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA lan Yuan KS Farmakologi ginseng: akeh komponen lan akeh efek.biokimia.farmakologi.58, 1685–1693 (1999).
Wektu kirim: Sep-17-2023