გმადლობთ Nature.com-ის მონახულებისთვის.ბრაუზერის ვერსიას, რომელსაც იყენებთ, აქვს შეზღუდული CSS მხარდაჭერა.საუკეთესო შედეგისთვის, გირჩევთ გამოიყენოთ თქვენი ბრაუზერის უფრო ახალი ვერსია (ან გამორთოთ თავსებადობის რეჟიმი Internet Explorer-ში).იმავდროულად, მუდმივი მხარდაჭერის უზრუნველსაყოფად, ჩვენ ვაჩვენებთ საიტს სტილის ან JavaScript-ის გარეშე.
წითელი ჟენშენი ასობით წლის განმავლობაში გამოიყენება ტრადიციულ აზიურ მედიცინაში.ამ კვლევაში, ჩვენ შევაფასეთ სხვადასხვა რეგიონში მოყვანილი წითელი ჟენშენის ოთხი ტიპის (ჩინური წითელი ჟენშენი, კორეული წითელი ჟენშენი A, კორეული წითელი ჟენშენი C) უნარი, შეაფერხოს კანცეროგენით გამოწვეული ფილტვის წარმოქმნა და ზრდა. სიმსივნეები.ბენზო(ა)პირენის (B(a)P) ტესტი ჩატარდა A/J თაგვებზე და აღმოჩნდა, რომ კორეული წითელი ჟენშენი B იყო ყველაზე ეფექტური სიმსივნის ტვირთის შესამცირებლად ოთხ წითელ ჯიშებს შორის.გარდა ამისა, ჩვენ გავაანალიზეთ სხვადასხვა ჟენსენოზიდის (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 და Rg5) შემცველობა ოთხ წითელ ჟენშენის ექსტრაქტში და აღმოვაჩინეთ, რომ კორეის წითელი ჟენშენი B იყო ჟენსენოზიდის Rg3 (G-Rg3) ყველაზე მაღალი დონე, რაც იმაზე მეტყველებს, რომ G-Rg3 შეიძლება ითამაშოს მნიშვნელოვანი როლი მის თერაპიულ ეფექტურობაში.ეს ნაშრომი აჩვენებს, რომ G-Rg3-ს აქვს შედარებით დაბალი ბიოშეღწევადობა.თუმცა, როდესაც G-Rg3 ერთდროული იყო P-gp ინჰიბიტორ ვერაპამილთან ერთად, G-Rg3-ის გადინება Caco-2 უჯრედებში შემცირდა, G-Rg3-ის ნაწლავური შეწოვის სიჩქარე გაიზარდა ვირთხების მოდელში და G-Rg3 გაიზარდა.Caco-2 უჯრედებში Rg3-ის გადინება მცირდება, ხოლო Rg3 კონცენტრაციის დონე მცირდება.G-Rg3 მატულობს ნაწლავსა და პლაზმაში და სიმსივნეების პრევენციის უნარი ასევე გაძლიერებულია B(a)P-ით გამოწვეული სიმსივნური გენეზის ვირთხების მოდელში.ჩვენ ასევე აღმოვაჩინეთ, რომ G-Rg3 ამცირებს B(a)P-ის გამოწვეულ ციტოტოქსიურობას და დნმ-ის დანამატის წარმოქმნას ადამიანის ფილტვის უჯრედებში და აღადგენს II ფაზის ფერმენტების ექსპრესიას და აქტივობას Nrf2 გზის მეშვეობით, რაც შეიძლება დაკავშირებული იყოს მოქმედების პოტენციურ მექანიზმთან. G ინჰიბიციის -Rg3..ფილტვის სიმსივნეების გაჩენის შესახებ.ჩვენი კვლევა აჩვენებს G-Rg3-ის პოტენციურად მნიშვნელოვან როლს თაგვის მოდელებში ფილტვის სიმსივნეების დამიზნებაში.ამ ჟენსენოზიდის პერორალური ბიოშეღწევადობა გაუმჯობესებულია P-გლიკოპროტეინზე გამიზნული მიზნებით, რაც საშუალებას აძლევს მოლეკულას მოახდინოს კიბოს საწინააღმდეგო ეფექტი.
ფილტვის კიბოს ყველაზე გავრცელებული ტიპია ფილტვის არაწვრილუჯრედოვანი კიბო (NSCLC), რომელიც არის კიბოს სიკვდილიანობის ერთ-ერთი წამყვანი მიზეზი ჩინეთსა და ჩრდილოეთ ამერიკაში1,2.მთავარი ფაქტორი, რომელიც ზრდის ფილტვის არაწვრილუჯრედოვანი კიბოს განვითარების რისკს, არის მოწევა.სიგარეტის კვამლი შეიცავს 60-ზე მეტ კანცეროგენს, მათ შორის ბენზო(a)პირენს (B(a)P), ნიტროზამინებს და რადონის დაშლის რადიოაქტიურ იზოტოპებს.3 პოლიციკლური არომატული ნახშირწყალბადები B(a)P არის სიგარეტის ტოქსიკურობის მთავარი მიზეზი. მოწევა.B(a)P-ზე ზემოქმედების შემდეგ, ციტოქრომი P450 გარდაქმნის მას B(a)P-7,8-დიჰიდროდიოლ-9,10-ეპოქსიდად (BPDE), რომელიც რეაგირებს დნმ-თან და ქმნის BPDE-DNA დანამატს 4. გარდა ამისა, ეს დანამატები იწვევენ ფილტვის სიმსივნურ გენეზს თაგვებში სიმსივნის სტადიით და ადამიანის ფილტვის სიმსივნეების მსგავსი ჰისტოპათოლოგიით5.ეს მახასიათებელი აქცევს B(a)P-ით გამოწვეულ ფილტვის კიბოს მოდელს შესაფერის სისტემად შესაძლო კიბოს საწინააღმდეგო თვისებების მქონე ნაერთების შესაფასებლად.
ფილტვის კიბოს განვითარების პრევენციის ერთ-ერთი შესაძლო სტრატეგია მაღალი რისკის ჯგუფებში, განსაკუთრებით მწეველებში, არის ქიმიოპრევენციული საშუალებების გამოყენება ინტრაეპითელური ნეოპლასტიკური დაზიანებების განვითარების დასათრგუნად და ამით მათი შემდგომი პროგრესირების თავიდან ასაცილებლად ავთვისებიან სიმსივნემდე.ცხოველებზე ჩატარებული კვლევები აჩვენებს, რომ სხვადასხვა ქიმიოპრევენციული აგენტები ეფექტურია6.ჩვენმა წინა მოხსენებამ7 ხაზი გაუსვა წითელი ჟენშენის კარგ პრევენციულ ეფექტს ფილტვის კიბოსზე.ეს ბალახი საუკუნეების განმავლობაში გამოიყენებოდა ტრადიციულ აზიურ მედიცინაში სიცოცხლისა და ჯანმრთელობის გასახანგრძლივებლად და დადასტურებულია, რომ მას აქვს სიმსივნის საწინააღმდეგო ეფექტი8.
ჟენშენის აქტიური ფაქტორია ჟენსენოზიდი, რომელიც გამოიყენება როგორც კომპოზიტური მარკერი ჟენშენის ექსტრაქტების ხარისხის შესაფასებლად.ნედლი ჟენშენის ექსტრაქტების რაოდენობრივი ანალიზი, როგორც წესი, მოიცავს რამდენიმე ჟინსენოზიდის გამოყენებას, მათ შორის RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 და Rc9,10.გინსენოზიდებს მცირე კლინიკური გამოყენება აქვთ მათი ძალიან ცუდი პერორალური ბიოშეღწევადობის გამო11.მიუხედავად იმისა, რომ ამ ცუდი ბიოშეღწევადობის მექანიზმი არ არის ნათელი, მიზეზი შეიძლება იყოს P-გლიკოპროტეინით (P-gp)12-ით გამოწვეული გინსენოზიდების გადინება.P-gp არის ერთ-ერთი ყველაზე მნიშვნელოვანი გადინების გადამტანი ATP-ის დამაკავშირებელი კასეტების გადამტანის სუპეროჯახში, რომელიც იყენებს ATP ჰიდროლიზის ენერგიას უჯრედშიდა ნივთიერებების გარე გარემოში გასათავისუფლებლად.P-gp გადამტანები, როგორც წესი, ფართოდ არის გავრცელებული ნაწლავებში, თირკმელებში, ღვიძლში და ჰემატოენცეფალურ ბარიერში13.P-gp გადამწყვეტ როლს თამაშობს ნაწლავში შეწოვაში და P-gp-ის დათრგუნვა ზრდის ზოგიერთი კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატის ორალური შეწოვას და ხელმისაწვდომობას12,14.ლიტერატურაში ადრე გამოყენებული ინჰიბიტორების მაგალითებია ვერაპამილი და ციკლოსპორინი A15.ეს ნამუშევარი მოიცავს თაგვის სისტემის შექმნას B(a)P-ით გამოწვეული ფილტვის კიბოს შესასწავლად, რათა შეფასდეს ჩინეთიდან და კორეიდან წითელი ჟენშენის სხვადასხვა ექსტრაქტის უნარი ავთვისებიან სიმსივნეებზე ზემოქმედების მიზნით.ექსტრაქტები ინდივიდუალურად გაანალიზებული იყო სპეციფიკური ჟინსენოზიდების გამოსავლენად, რომლებმაც შეიძლება გავლენა მოახდინონ კანცეროგენეზზე.შემდეგ ვერაპამილი გამოიყენებოდა P-gp-ის სამიზნე და პერორალური ბიოშეღწევადობის გასაუმჯობესებლად და კიბოსკენ მიმართული გინსენოზიდების თერაპიული ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად.
მექანიზმი, რომლითაც ჟენშენის საპონინები ახდენენ თერაპიულ ეფექტს კანცეროგენეზზე, გაურკვეველია.კვლევამ აჩვენა, რომ სხვადასხვა ჟინსენოზიდს შეუძლია შეამციროს კანცეროგენებით გამოწვეული დნმ-ის დაზიანება ოქსიდაციური სტრესის შემცირებით და II ფაზის დეტოქსიკაციის ფერმენტების გააქტიურებით, რითაც თავიდან აიცილებს უჯრედების დაზიანებას.გლუტათიონ S-ტრანსფერაზა (GST) არის ტიპიური II ფაზის ფერმენტი, რომელიც საჭიროა კანცეროგენებით გამოწვეული დნმ-ის დაზიანების შესამცირებლად17.ბირთვული ერითროიდ 2-თან დაკავშირებული ფაქტორი 2 (Nrf2) არის მნიშვნელოვანი ტრანსკრიფციის ფაქტორი, რომელიც არეგულირებს რედოქს ჰომეოსტაზს და ააქტიურებს II ფაზის ფერმენტების გამოხატვას და ციტოპროტექტორულ ანტიოქსიდანტურ პასუხებს18.ჩვენმა კვლევამ ასევე შეისწავლა იდენტიფიცირებული ჟინსენოზიდების ეფექტები B(a)P-ით გამოწვეული ციტოტოქსიურობის და BPDE-დნმ დანამატის წარმოქმნის შემცირებაზე, აგრეთვე II ფაზის ფერმენტების ინდუქციაზე Nrf2 გზის მოდულაციის გზით ფილტვის ნორმალურ უჯრედებში.
B(a)P-ით გამოწვეული კიბოს თაგვის მოდელის შექმნა შეესაბამება წინა სამუშაოს5.სურათი 1A გვიჩვენებს თაგვის კიბოს მოდელის 20-კვირიანი მკურნალობის ექსპერიმენტულ დიზაინს, რომელიც გამოწვეულია B(a)P, წყალი (კონტროლი), ჩინური წითელი ჟენშენის ექსტრაქტი (CRG), კორეული წითელი ჟენშენის ექსტრაქტი A (KRGA) და კორეული წითელი ჟენშენი.ექსტრაქტი B (KRGB) და კორეული წითელი ჟენშენის ექსტრაქტი C (KRGC).წითელი ჟენშენის მკურნალობის 20 კვირის შემდეგ, თაგვები მსხვერპლად იქნა გაყვანილი CO2 ასფიქსიით.სურათი 1B გვიჩვენებს ფილტვის მაკროსკოპულ სიმსივნეებს ცხოველებში, რომლებსაც მკურნალობდნენ წითელი ჟენშენის სხვადასხვა ტიპებით, ხოლო სურათი 1C გვიჩვენებს სიმსივნის ნიმუშის წარმომადგენლობითი სინათლის მიკროგრაფიას.KRGB-ით ნამკურნალები ცხოველების სიმსივნური ტვირთი (1.5 ± 0.35) უფრო დაბალი იყო, ვიდრე საკონტროლო ცხოველების (0.82 ± 0.2, P <0.05), როგორც ნაჩვენებია სურათზე 1D.სიმსივნის დატვირთვის დათრგუნვის საშუალო ხარისხი იყო 45%.შემოწმებული წითელი ჟენშენის სხვა ექსტრაქტებმა არ აჩვენა ასეთი მნიშვნელოვანი ცვლილებები სიმსივნის დატვირთვაში (P > 0.05).აშკარა გვერდითი ეფექტები არ დაფიქსირებულა თაგვის მოდელზე წითელი ჟენშენის მკურნალობის 20 კვირის განმავლობაში, მათ შორის არ შეიცვლება სხეულის წონა (მონაცემები არ არის ნაჩვენები) და არ არის ღვიძლის ან თირკმელების ტოქსიკურობა (სურათი 1E,F).
წითელი ჟენშენის ექსტრაქტი მკურნალობს ფილტვის სიმსივნის განვითარებას A/J თაგვებში.(ა) ექსპერიმენტული დიზაინი.(B) ფილტვის დიდი სიმსივნეები თაგვის მოდელში.სიმსივნეები მითითებულია ისრებით.ა: ჩინური წითელი ჟენშენის ჯგუფი.ბ: კორეული წითელი ჟენშენის ჯგუფი A.გ: კორეული წითელი ჟენშენის ჯგუფი B. დ: კორეული წითელი ჟენშენის ჯგუფი C. დ: საკონტროლო ჯგუფი.(C) მსუბუქი მიკროგრაფი, რომელიც აჩვენებს ფილტვის სიმსივნეს.გადიდება: 100. ბ: 400. (დ) სიმსივნური დატვირთვა წითელი ჟენშენის ექსტრაქტის ჯგუფში.(E) ღვიძლის ფერმენტის ALT პლაზმური დონე.(F) თირკმლის ფერმენტის პლაზმური დონე Cr.მონაცემები გამოხატულია საშუალოდ ± სტანდარტული გადახრით.*P <0.05.
ამ კვლევაში გამოვლენილი წითელი ჟენშენის ექსტრაქტები გაანალიზებულია ულტრაეფექტური თხევადი ქრომატოგრაფიის ტანდემური მასის სპექტრომეტრიით (UPLC-MS/MS) შემდეგი ჟენსენოზიდების რაოდენობრივი დასადგენად: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 და Rg5.UPLC და MS პირობები, რომლებიც გამოყენებული იქნა ანალიზების გასაზომად, აღწერილი იყო წინა ანგარიშში19.ოთხი წითელი ჟენშენის ექსტრაქტის UPLC-MS/MS ქრომატოგრამები ნაჩვენებია სურათზე 2A.იყო მნიშვნელოვანი განსხვავებები საერთო ჟინსენოზიდის შემცველობაში, CRG-ში ჯინსენოზიდის ყველაზე მაღალი შემცველობა (590.27 ± 41.28 μmol/L) (სურათი 2B).ცალკეული ჟინსენოზიდების შეფასებისას (სურათი 2C), KRGB აჩვენებდა G-Rg3-ის უმაღლეს დონეს სხვა გინზენოზიდებთან შედარებით (58,33 ± 3,81 μmol/L G-Rg3s-სთვის და 41,56 ± 2,88 μmol/L G-Rg3r).L).წითელი ჟენშენის ტიპი (P <0.001).G-Rg3 გვხვდება როგორც სტერეოიზომერების წყვილი G-Rg3r და G-Rg3s, რომლებიც განსხვავდებიან ჰიდროქსილის ჯგუფის პოზიციაში ნახშირბად 20-ზე (ნახ. 2D).შედეგები მიუთითებს, რომ G-Rg3r ან G-Rg3 შეიძლება ჰქონდეს მნიშვნელოვანი კიბოს საწინააღმდეგო პოტენციალი B(a)P-ით გამოწვეული კიბოს თაგვის მოდელში.
ჟინსენოზიდების შემცველობა წითელ ჟენშენის სხვადასხვა ექსტრაქტებში.(A) ოთხი წითელი ჟენშენის ექსტრაქტის UPLC-MS/MS ქრომატოგრამები.(B) ჯინსენოზიდის მთლიანი შემცველობის შეფასება მითითებულ ექსტრაქტებში.(C) ცალკეული ჟინსენოზიდების გამოვლენა ეტიკეტირებულ ექსტრაქტებში.(D) ჯინსენოზიდის სტერეოიზომერების G-Rg3r და G-Rg3s სტრუქტურები.მონაცემები გამოიხატება როგორც სამმაგი განსაზღვრების საშუალო ± სტანდარტული გადახრა.***P <0.001.
UPLC-MS/MS კვლევა მოითხოვდა გინსენოზიდების რაოდენობრივ განსაზღვრას ნაწლავისა და სისხლის ნიმუშებში მკურნალობის დაწყებიდან 20 კვირის შემდეგ.KRGB-ით მკურნალობამ აჩვენა მხოლოდ 0,0063 ± 0,0005 მკგ/მლ Rg5 სისხლში.დარჩენილი გინზენოზიდები არ იქნა გამოვლენილი, რაც მიუთითებს პერორალურ ბიოშეღწევადობაზე და, შესაბამისად, ამ გინსენოზიდების შემცირებულ ექსპოზიციაზე.
მსხვილი ნაწლავის ადენოკარცინომის უჯრედული ხაზი Caco-2 მორფოლოგიურად და ბიოქიმიურად ჰგავს ადამიანის ნაწლავის ეპითელიალურ უჯრედებს, რაც აჩვენებს მის სარგებლობას ნაწლავის ეპითელური ბარიერის გავლით ენტეროციტების ტრანსპორტირების შეფასებაში.ეს ანალიზი ეყრდნობოდა ადრინდელ კვლევას 20 .სურათებზე 3A,B,C,D,E,F ნაჩვენებია G-Rg3r და G-Rg3 ტრანსუჯრედული ტრანსპორტის წარმომადგენლობითი გამოსახულებები Caco-2 მონოშრიანი მოდელის გამოყენებით.G-Rg3r ან G-Rg3-ის ტრანსცელულარული ტრანსპორტი Caco-2 მონოლატერულ მხარეს შორის ბაზოლატერალურიდან აპიკალურ მხარეს (Pb-a) მნიშვნელოვნად მაღალი იყო, ვიდრე აპიკალურიდან ბაზოლატერალურ მხარეს (Pa-b).G-Rg3r-სთვის Pa-b-ის საშუალო მნიშვნელობა იყო 0.38 ± 0.06, რომელიც გაიზარდა 0.73 ± 0.06-მდე 50 μmol/L ვერაპამილით მკურნალობის შემდეგ და 1.14 ± 0.09-მდე 100 μmol/L ვერაპამილით მკურნალობის შემდეგ (p < 0.01 და 0.01. შესაბამისად, სურათი 2).3A).G-Rg3-ზე დაკვირვებები მიჰყვებოდა მსგავს ნიმუშს (ნახ. 3B) და შედეგებმა აჩვენა, რომ ვერაპამილით მკურნალობა აძლიერებდა G-Rg3r და G-Rg3 ტრანსპორტირებას.ვერაპამილით მკურნალობამ ასევე გამოიწვია Pb-a და G-Rg3r და G-Rg3s გამონადენის საშუალო თანაფარდობის მნიშვნელოვანი შემცირება (სურათი 3C,D,E,F), რაც მიუთითებს იმაზე, რომ ვერაპამილით მკურნალობა ამცირებს ჯინსენოზიდის შემცველობას Caco-2 გამონაბოლქვი უჯრედებში..
G-Rg3-ის ტრანსცელულარული ტრანსპორტი Caco-2 მონოშრეებში და ნაწლავური აბსორბცია ვირთხების პერფუზიის ანალიზში.(A) G-Rg3r ჯგუფის Pa-b მნიშვნელობა Caco-2 მონოფენაში.(B) G-Rg3s ჯგუფების Pa-b მნიშვნელობა Caco-2 მონოფენაში.(C) G-Rg3r ჯგუფის Pb მნიშვნელობა Caco-2 მონოფენაში.(D) G-Rg3s ჯგუფების Pb მნიშვნელობა Caco-2 მონოფენაში.(E) G-Rg3r ჯგუფების მოსავლიანობის თანაფარდობა Caco-2 მონოფენაში.(F) G-Rg3 ჯგუფების მოსავლიანობის თანაფარდობა Caco-2 მონოფენაში.(G) G-Rg3r-ის ნაწლავური შთანთქმის პროცენტი პერფუზიის ანალიზში ვირთხებში.(H) G-Rg3-ის ნაწლავური შთანთქმის პროცენტი პერფუზიის ანალიზში ვირთხებში.გამტარიანობა და აბსორბცია შედარებულია ვერაპამილის დამატების გარეშე.მონაცემები გამოიხატება ხუთი დამოუკიდებელი ექსპერიმენტის საშუალო ± სტანდარტული გადახრის სახით.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
ადრინდელი სამუშაოების შესაბამისად20, ჩატარდა ვირთხების ორთოტოპური ნაწლავური პერფუზია იმის დასადგენად, იზრდება თუ არა G-Rg3 აბსორბცია ნაწლავში ვერაპამილით მკურნალობის შემდეგ.ნახატები 3G,H გვიჩვენებს წარმომადგენლობითი პერფუზიის ანალიზებს G-Rg3r და G-Rg3 ნაწლავური შთანთქმის პროცენტის შესაფასებლად კიბოს მოდელის ვირთხებში ზემოთ მოცემულ პერიოდებში.სუსტი G-Rg3r-ის ათვისების საწყისი პროცენტი დაახლოებით 10% გაიზარდა 20%-მდე 50 μM ვერაპამილით მკურნალობის შემდეგ და 25%-ზე მეტს 100 μM ვერაპამილით მკურნალობის შემდეგ.ანალოგიურად, G-Rg3, რომელსაც ჰქონდა საწყისი შეწოვა 10%, ასევე აჩვენა პიკი 20%-ზე მეტი 50 μM ვერაპამილით მკურნალობის შემდეგ და თითქმის 30% 100 μM ვერაპამილით მკურნალობის შემდეგ, რაც ვარაუდობს, რომ ვერაპამილით P-gp-ის ინჰიბიცია აძლიერებს. ნაწლავური G- შთანთქმის Rg3 ფილტვის კიბოს თაგვის მოდელში.
ზემოაღნიშნული მეთოდის მიხედვით, B(a)P-ით გამოწვეული კიბოს მოდელის თაგვები შემთხვევით დაყვეს ექვს ჯგუფად, როგორც ნაჩვენებია სურათზე 4A.წონის მნიშვნელოვანი დაკლება ან ტოქსიკურობის კლინიკური ნიშნები არ დაფიქსირებულა G-Rg3 მკურნალობის ჯგუფში საკონტროლო ჯგუფთან შედარებით (მონაცემები არ არის ნაჩვენები).20 კვირის მკურნალობის შემდეგ, თითოეული თაგვის ფილტვები შეგროვდა.სურათი 4B გვიჩვენებს ფილტვის მაკროსკოპიულ სიმსივნეებს თაგვებში ზემოაღნიშნულ სამკურნალო ჯგუფებში და სურათი 4C გვიჩვენებს წარმომადგენლობითი სიმსივნის წარმომადგენლობითი სინათლის მიკროგრაფიას.რაც შეეხება სიმსივნის დატვირთვას თითოეულ ჯგუფში (ნახ. 4D), მნიშვნელობები თაგვებისთვის, რომლებიც მკურნალობდნენ G-Rg3r და G-Rg3s იყო 0,75 ± 0,29 მმ3 და 0,81 ± 0,30 მმ3, შესაბამისად, ხოლო მნიშვნელობები G- თაგვებისთვის, რომლებიც მკურნალობდნენ. ერთად -Rg3 იყო 1.63 შესაბამისად ±0.40 მმ3.საკონტროლო თაგვები (p <0.001), რაც მიუთითებს, რომ G-Rg3 მკურნალობა ამცირებს სიმსივნის დატვირთვას თაგვებში.ვერაპამილის შეყვანამ კიდევ უფრო გააძლიერა ეს შემცირება: ვერაპამილი+ G-Rg3r თაგვებში შემცირდა 0,75 ± 0,29 მმ3-დან 0,33 ± 0,25 მმ3-მდე (p <0,01), ხოლო ვერაპამილი+ მნიშვნელობები 0,81 ± 0,30 მმ3-მდე შემცირდა 0,81 ± 0,30 მმ3-მდე. mm3 G. -Rg3s-ით ნამკურნალევ თაგვებში (p <0.05), რაც მიუთითებს, რომ ვერაპამილმა შეიძლება გააძლიეროს G-Rg3-ის ინჰიბიტორული ეფექტი სიმსივნის გენეზზე.სიმსივნური ტვირთი არ აჩვენებდა მნიშვნელოვან განსხვავებებს საკონტროლო ჯგუფსა და ვერაპამილის ჯგუფს, G-Rg3r ჯგუფსა და G-Rg3s ჯგუფს და ვერაპამილ+G-Rg3r ჯგუფსა და ვერაპამილ+G-Rg3s ჯგუფს შორის.გარდა ამისა, არ იყო მნიშვნელოვანი ღვიძლის ან თირკმელების ტოქსიკურობა დაკავშირებული შეფასებულ მკურნალობასთან (სურათი 4E,F).
სიმსივნის დატვირთვა G-Rg3 მკურნალობის შემდეგ და პლაზმური ან ნაწლავური G-Rg3r და G-Rg3 დონეები მითითებულ ჯგუფებში.(ა) ექსპერიმენტული დიზაინი.(B) მაკროსკოპული სიმსივნეები თაგვის მოდელში.სიმსივნეები მითითებულია ისრებით.a: G-Rg3r.ბ: G-Rg3s.გ: G-Rg3r ვერაპამილთან კომბინაციაში.d: G-Rg3 ვერაპამილთან კომბინაციაში.დ: ვერაპამილი.ე: კონტროლი.(C) სიმსივნის ოპტიკური მიკროგრაფი გადიდების დროს.პასუხი: 100x.ბ: 400X.(D) G-Rg3 + ვერაპამილით მკურნალობის ეფექტი სიმსივნის დატვირთვაზე A/J თაგვებში.(E) ღვიძლის ფერმენტის ALT-ის პლაზმური დონე.(F) თირკმლის ფერმენტის პლაზმური დონე Cr.(G) მითითებული ჯგუფების G-Rg3r ან G-Rg3 პლაზმური დონეები.(H) G-Rg3r ან G-Rg3s დონეები მითითებული ჯგუფების ნაწლავებში.მონაცემები გამოიხატება როგორც სამმაგი განსაზღვრების საშუალო ± სტანდარტული გადახრა.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
G-Rg3 დონეები B(a)P-ით გამოწვეული კიბოს მოდელის თაგვებში შეფასებული იყო UPLC-MS/MS-ით 20-კვირიანი მკურნალობის პერიოდის შემდეგ, მეთოდების ნაწილში აღწერილი მეთოდის მიხედვით.ფიგურები 4G და H გვიჩვენებს პლაზმის და ნაწლავის G-Rg3 დონეებს, შესაბამისად.პლაზმაში G-Rg3r დონე იყო 0.44 ± 0.32 μmol/L და გაიზარდა 1.17 ± 0.47 μmol/L ვერაპამილის ერთდროული მიღებით (p <0.001), ხოლო ნაწლავის G-Rg3r დონე იყო 0.53 ± 0.08 μg/l.ვერაპამილთან შერწყმისას, გ გაიზარდა 1,35 ± 0,13 მკგ/გ-მდე (p <0,001).G-Rg3-ისთვის, შედეგები მოჰყვა მსგავს ნიმუშს, რაც მიუთითებს იმაზე, რომ ვერაპამილით მკურნალობამ გაზარდა G-Rg3-ის ორალური ბიოშეღწევადობა A/J თაგვებში.
უჯრედის სიცოცხლისუნარიანობის ანალიზი გამოყენებული იყო B(a)P და G-Rg3 ციტოტოქსიკურობის შესაფასებლად hEL უჯრედებზე.B(a)P-ით გამოწვეული ციტოტოქსიკურობა hEL უჯრედებში ნაჩვენებია ნახატზე 5A, ხოლო G-Rg3r და G-Rg3-ის არატოქსიკური თვისებები ნაჩვენებია სურათებში 5A და 5B.5B, C. G-Rg3-ის ციტოპროტექტორული ეფექტის შესაფასებლად, B(a)P იყო ერთდროულად შეყვანილი G-Rg3r ან G-Rg3 სხვადასხვა კონცენტრაციებთან ერთად hEL უჯრედებში.როგორც ნაჩვენებია სურათზე 5D, G-Rg3r 5 μM, 10 μM და 20 μM კონცენტრაციებში აღადგინა უჯრედის სიცოცხლისუნარიანობა 58.3%, 79.3% და 77.3% შესაბამისად.მსგავსი შედეგები ასევე შეიძლება ნახოთ G-Rg3s ჯგუფში.როდესაც G-Rg3s კონცენტრაციები იყო 5 μM, 10 μM და 20 μM, უჯრედის სიცოცხლისუნარიანობა აღდგა შესაბამისად 58.3%, 72.7% და 76.7% (სურათი 5E).).BPDE-DNA დანამატების არსებობა გაზომილი იყო ELISA ნაკრების გამოყენებით.ჩვენმა შედეგებმა აჩვენა, რომ BPDE-დნმ დანამატის დონეები გაიზარდა B(a)P-ნამკურნალევ ჯგუფში საკონტროლო ჯგუფთან შედარებით, მაგრამ G-Rg3 ერთობლივ მკურნალობასთან შედარებით, BPDE-დნმ დანამატის დონეები B(a)P ჯგუფში. B ნამკურნალევ ჯგუფში, დნმ-ის დანამატის დონე მნიშვნელოვნად შემცირდა.მხოლოდ B(a)P-ით მკურნალობის შედეგები ნაჩვენებია სურათზე 5F (1.87 ± 0.33 vs. 3.77 ± 0.42 G-Rg3r-სთვის, 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 G-Rg3s, p <0.0).
უჯრედის სიცოცხლისუნარიანობა და BPDE-დნმ დანამატის წარმოქმნა hEL უჯრედებში, რომლებიც დამუშავებულნი არიან G-Rg3 და B(a)P.(A) B(a)P-ით დამუშავებული hEL უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობა.(B) G-Rg3r-ით დამუშავებული hEL უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობა.(C) G-Rg3-ით დამუშავებული hEL უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობა.(D) hEL უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობა დამუშავებული B(a)P და G-Rg3r.(E) B(a)P და G-Rg3-ით დამუშავებული hEL უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობა.(F) BPDE-დნმ დანამატის დონეები hEL უჯრედებში დამუშავებულ B(a)P და G-Rg3.მონაცემები გამოიხატება როგორც სამმაგი განსაზღვრების საშუალო ± სტანდარტული გადახრა.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
GST ფერმენტის ექსპრესია გამოვლინდა 10 μM B(a)P და 10 μM G-Rg3r ან G-Rg3s ერთობლივი მკურნალობის შემდეგ.ჩვენმა შედეგებმა აჩვენა, რომ B(a)P თრგუნავდა GST ექსპრესიას (59.7 ± 8.2% G-Rg3r ჯგუფში და 39 ± 4.5% G-Rg3s ჯგუფში), და B(a)P ასოცირდებოდა რომელიმესთან G-Rg3r-თან. , ან G-Rg3r-ით, ან G-Rg3r-ით.G-Rg3s-ით ერთობლივმა მკურნალობამ აღადგინა GST ექსპრესია.GST გამოხატულება (103.7 ± 15.5% G-Rg3r ჯგუფში და 110 ± 11.1% G-Rg3s ჯგუფში, p <0.05 და p <0.001, შესაბამისად, სურ. 6A, B და C).GST აქტივობა შეფასდა აქტივობის ანალიზის ნაკრების გამოყენებით.ჩვენმა შედეგებმა აჩვენა, რომ კომბინირებული მკურნალობის ჯგუფს ჰქონდა უფრო მაღალი GST აქტივობა მხოლოდ B(a)P ჯგუფთან შედარებით (96.3 ± 6.6% წინააღმდეგ 35.7 ± 7.8% G-Rg3r ჯგუფში წინააღმდეგ 92.3 ± 6.5 G-Rg3r ჯგუფში. ).% vs 35.7 ± 7.8% G-Rg3s ჯგუფში, p <0.001, სურათი 6D).
GST და Nrf2-ის გამოხატულება hEL უჯრედებში დამუშავებულ B(a)P და G-Rg3-ით.(ა) GST გამოხატვის გამოვლენა Western blotting-ით.(B) GST-ის რაოდენობრივი გამოხატულება hEL უჯრედებში დამუშავებულ B(a)P და G-Rg3r.(C) GST-ის რაოდენობრივი გამოხატულება hEL უჯრედებში, დამუშავებულ B(a)P და G-Rg3s.(D) GST აქტივობა hEL უჯრედებში დამუშავებულ B(a)P და G-Rg3.(E) Nrf2 გამოხატვის აღმოჩენა Western blotting-ით.(F) Nrf2-ის რაოდენობრივი გამოხატულება hEL უჯრედებში დამუშავებულ B(a)P და G-Rg3r.(G) Nrf2-ის რაოდენობრივი გამოხატულება hEL უჯრედებში დამუშავებულ B(a)P და G-Rg3s.მონაცემები გამოიხატება როგორც სამმაგი განსაზღვრების საშუალო ± სტანდარტული გადახრა.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
იმ გზების გასარკვევად, რომლებიც ჩართულია G-Rg3-ის შუამავლობით B(a)P-ით გამოწვეული სიმსივნური გენეზის ჩახშობაში, Nrf2 ექსპრესია შეფასდა Western blotting-ით.როგორც ნაჩვენებია 6E,F,G სურათზე, საკონტროლო ჯგუფთან შედარებით, მხოლოდ Nrf2-ის დონე B(a)P მკურნალობის ჯგუფში იყო შემცირებული;თუმცა, B(a)P მკურნალობის ჯგუფთან შედარებით, B(a) Nrf2 დონეები PG-Rg3 ჯგუფში გაიზარდა (106 ± 9.5% G-Rg3r-ის წინააღმდეგ 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% G-Rg3r წინააღმდეგ 41 ± 9.8% G-Rg3s-ისთვის, p <0.01).
ჩვენ დავადასტურეთ Nrf2-ის პრევენციული როლი Nrf2 ექსპრესიის ჩახშობით სპეციფიკური მცირე ინტერფერენტული რნმ-ის (siRNA) გამოყენებით.Nrf2 ნოკდაუნი დადასტურდა Western blotting-ით (ნახ. 7A,B).როგორც ნაჩვენებია სურათებში 7C,D, hEL უჯრედების ერთდროულმა მკურნალობამ B(a)P და G-Rg3 გამოიწვია BPDE-DNA დანამატების რაოდენობის შემცირება (1.47 ± 0.21) B(a)P მკურნალობასთან შედარებით. მარტო საკონტროლო siRNA ჯგუფში.) G-Rg3r იყო 4,13 ± 0,49, G-Rg3s იყო 1,8 ± 0,32 და 4,1 ± 0,57, p <0,01).თუმცა, G-Rg3-ის ინჰიბიტორული ეფექტი BPDE-დნმ-ის ფორმირებაზე გაუქმდა Nrf2 ნოკდაუნით.siNrf2 ჯგუფში არ იყო მნიშვნელოვანი განსხვავება BPDE-DNA დანამატის ფორმირებაში B(a)P და G-Rg3 ერთობლივ მკურნალობასა და B(a)P მკურნალობას შორის (3.0 ± 0.21 G-Rg3r-სთვის 3.56 ± 0.32-ის წინააღმდეგ. ).G-Rg3r-სთვის 3.6-ისთვის G-Rg3s-ისთვის ±0.45-ის წინააღმდეგ 4.0±0.37-ის წინააღმდეგ, p > 0.05).
Nrf2 ნოკდაუნის ეფექტი BPDE-დნმ დანამატის წარმოქმნაზე hEL უჯრედებში.(A) Nrf2 ნოკდაუნი დადასტურდა Western blotting-ით.(B) Nrf2 ზოლის ინტენსივობის რაოდენობრივი განსაზღვრა.(C) Nrf2 ნოკდაუნის ეფექტი BPDE-დნმ დანამატის დონეებზე hEL უჯრედებში, რომლებიც მკურნალობდნენ B(a)P და G-Rg3r.(D) Nrf2 ნოკდაუნის ეფექტი BPDE-დნმ დანამატის დონეებზე hEL უჯრედებში, რომლებიც მკურნალობდნენ B(a)P და G-Rg3.მონაცემები გამოიხატება როგორც სამმაგი განსაზღვრების საშუალო ± სტანდარტული გადახრა.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
ამ კვლევამ შეაფასა სხვადასხვა წითელი ჟენშენის ექსტრაქტის პრევენციული ეფექტი B(a)P-ით გამოწვეული ფილტვის კიბოს თაგვის მოდელზე და KRGB მკურნალობამ მნიშვნელოვნად შეამცირა სიმსივნის დატვირთვა.იმის გათვალისწინებით, რომ G-Rg3-ს აქვს ყველაზე მაღალი შემცველობა ამ ჟენშენის ექსტრაქტში, შესწავლილია ამ ჟენსენოზიდის მნიშვნელოვანი როლი სიმსივნის წარმოქმნის ინჰიბირებაში.ორივე G-Rg3r და G-Rg3 (G-Rg3-ის ორი ეპიმერი) მნიშვნელოვნად ამცირებდნენ სიმსივნის დატვირთვას B(a)P-ით გამოწვეული კიბოს თაგვის მოდელში.G-Rg3r და G-Rg3 ახდენენ კიბოს საწინააღმდეგო ეფექტებს სიმსივნური უჯრედების აპოპტოზის გამოწვევით21, სიმსივნის ზრდის ინჰიბირებით22, აჩერებენ უჯრედულ ციკლს23 და გავლენას ახდენენ ანგიოგენეზზე24.ასევე ნაჩვენებია, რომ G-Rg3 თრგუნავს უჯრედულ მეტასტაზებს25 და G-Rg3-ის უნარი გააძლიეროს ქიმიოთერაპიისა და რადიოთერაპიის ეფექტები, დოკუმენტირებულია26,27.პუნმა და სხვებმა აჩვენეს, რომ G-Rg3 მკურნალობამ შეიძლება შეამციროს B(a)P28-ის გენოტოქსიური ეფექტები.ეს კვლევა აჩვენებს G-Rg3-ის თერაპიულ პოტენციალს გარემოს კანცეროგენული მოლეკულების მიმართ და კიბოს პრევენციაში.
მიუხედავად მათი კარგი პროფილაქტიკური პოტენციალისა, ჟინსენოზიდების ცუდი ორალური ბიოშეღწევადობა გამოწვევას უქმნის ამ მოლეკულების კლინიკურ გამოყენებას.ვირთხებში ჯინსენოზიდების პერორალური მიღების ფარმაკოკინეტიკური ანალიზმა აჩვენა, რომ მისი ბიოშეღწევადობა ჯერ კიდევ 5%-ზე ნაკლებია29.ამ ტესტებმა აჩვენა, რომ 20-კვირიანი მკურნალობის პერიოდის შემდეგ სისხლში მხოლოდ Rg5-ის დონე მცირდება.მიუხედავად იმისა, რომ ცუდი ბიოშეღწევადობის ძირითადი მექანიზმი ჯერ კიდევ გასარკვევია, ითვლება, რომ P-gp მონაწილეობს გინსენოზიდების გადინებაში.ამ ნაშრომმა პირველად აჩვენა, რომ ვერაპამილის, P-gp ბლოკატორის მიღება, ზრდის G-Rg3r და G-Rg3s ორალური ბიოშეღწევადობას.ამრიგად, ეს დასკვნა ვარაუდობს, რომ G-Rg3r და G-Rg3s მოქმედებენ როგორც P-gp-ის სუბსტრატები მისი გადინების დასარეგულირებლად.
ეს ნაშრომი აჩვენებს, რომ ვერაპამილთან კომბინირებული მკურნალობა ზრდის G-Rg3-ის ორალურ ბიოშეღწევადობას თაგვის ფილტვის კიბოს მოდელში.ამ დასკვნას მხარს უჭერს G-Rg3 ნაწლავური ტრანსცელულარული ტრანსპორტი P-gp ბლოკადის დროს, რითაც იზრდება მისი შეწოვა.Caco2 უჯრედების ანალიზებმა აჩვენა, რომ ვერაპამილით მკურნალობა ამცირებს G-Rg3r და G-Rg3s გამონადენს მემბრანის გამტარიანობის გაუმჯობესებისას.იანგის და სხვ.კვლევებმა აჩვენა, რომ ციკლოსპორინ A-ით მკურნალობა (სხვა P-gp ბლოკატორი) ზრდის ჟინსენოზიდის Rh2 ბიოშეღწევადობას საბაზისო მნიშვნელობიდან 1%20-დან 30%-ზე მეტამდე.გინსენოზიდების ნაერთებმა K და Rg1 ასევე აჩვენეს მსგავსი შედეგები30,31.ვერაპამილისა და ციკლოსპორინ A-ს ერთდროული გამოყენებისას, K ნაერთის გადინება Caco-2 უჯრედებში მნიშვნელოვნად შემცირდა 26,6-დან 3-ზე ნაკლებამდე, ხოლო მისი უჯრედშიდა დონეები გაიზარდა 40-ჯერ30.ვერაპამილის თანდასწრებით, Rg1 დონე გაიზარდა ვირთხის ფილტვის ეპითელიალურ უჯრედებში, რაც მიუთითებს P-gp-ის როლზე ჟინსენოზიდის გამონადენში, როგორც ნაჩვენებია Meng et al.31.თუმცა, ვერაპამილს არ ჰქონდა იგივე ეფექტი ზოგიერთი ჟინზენოზიდის (როგორიცაა Rg1, F1, Rh1 და Re) გადინებაზე, რაც მიუთითებს იმაზე, რომ მათზე გავლენას არ ახდენს P-gp სუბსტრატები, როგორც ეს აჩვენა Liang et al.32 .ეს დაკვირვება შეიძლება დაკავშირებული იყოს სხვა გადამზიდავებთან და ალტერნატიულ ჟინსენოზიდის სტრუქტურებთან.
G-Rg3-ის პრევენციული ეფექტის მექანიზმი კიბოსზე გაურკვეველია.წინა კვლევებმა აჩვენა, რომ G-Rg3 ხელს უშლის დნმ-ის დაზიანებას და აპოპტოზს ოქსიდაციური სტრესისა და ანთების შემცირებით16,33, რაც შეიძლება იყოს B(a)P-ით გამოწვეული სიმსივნური წარმოშობის პრევენციის ძირითადი მექანიზმი.ზოგიერთი მოხსენება მიუთითებს, რომ B(a)P-ით გამოწვეული გენოტოქსიკურობა შეიძლება შემცირდეს II ფაზის ფერმენტების მოდულირებით BPDE-DNA34-ის წარმოქმნით.GST არის ტიპიური II ფაზის ფერმენტი, რომელიც თრგუნავს BPDE-დნმ დანამატის წარმოქმნას GSH-ის BPDE-თან შეკავშირების ხელშეწყობით, რითაც ამცირებს B(a)P35-ით გამოწვეული დნმ-ის დაზიანებას.ჩვენი შედეგები აჩვენებს, რომ G-Rg3 მკურნალობა ამცირებს B(a)P-ით გამოწვეულ ციტოტოქსიკურობას და BPDE-DNA დანამატის წარმოქმნას hEL უჯრედებში და აღადგენს GST ექსპრესიას და აქტივობას in vitro.თუმცა, ეს ეფექტები არ იყო Nrf2-ის არარსებობის შემთხვევაში, რაც ვარაუდობს, რომ G-Rg3 იწვევს ციტოპროტექტორულ ეფექტებს Nrf2 გზის მეშვეობით.Nrf2 არის II ფაზის დეტოქსიკაციის ფერმენტების ტრანსკრიფციის ძირითადი ფაქტორი, რომელიც ხელს უწყობს ქსენობიოტიკების კლირენსს36.Nrf2 გზის გააქტიურება იწვევს ციტოპროტექციას და ამცირებს ქსოვილების დაზიანებას37.გარდა ამისა, რამდენიმე მოხსენებამ მხარი დაუჭირა Nrf2-ის, როგორც სიმსივნის სუპრესორის როლს კანცეროგენეზში38.ჩვენი კვლევა აჩვენებს, რომ Nrf2 გზის ინდუქცია G-Rg3-ით თამაშობს მნიშვნელოვან მარეგულირებელ როლს B(a)P-ინდუცირებულ გენოტოქსიკურობაში, რაც იწვევს B(a)P დეტოქსიკაციას II ფაზის ფერმენტების გააქტიურებით, რითაც აფერხებს სიმსივნის წარმოქმნის პროცესს.
ჩვენი ნაშრომი ავლენს წითელი ჟენშენის პოტენციალს B(a)P-ით გამოწვეული ფილტვის კიბოს პრევენციაში თაგვებში ჯინსენოზიდის G-Rg3 მნიშვნელოვანი მონაწილეობით.ამ მოლეკულის ცუდი ორალური ბიოშეღწევადობა აფერხებს მის კლინიკურ გამოყენებას.თუმცა, ეს კვლევა პირველად აჩვენებს, რომ G-Rg3 არის P-gp-ის სუბსტრატი და P-gp ინჰიბიტორის მიღება ზრდის G-Rg3-ის ბიოშეღწევადობას in vitro და in vivo.G-Rg3 ამცირებს B(a)P-ით გამოწვეულ ციტოტოქსიკურობას Nrf2 გზის რეგულირებით, რაც შეიძლება იყოს მისი პრევენციული ფუნქციის პოტენციური მექანიზმი.ჩვენი კვლევა ადასტურებს ჟინსენოზიდის G-Rg3 პოტენციალს ფილტვის კიბოს პროფილაქტიკისა და მკურნალობისთვის.
ექვსი კვირის მდედრი A/J თაგვები (20 ± 1 გ) და 7 კვირის მამრი ვისტარის ვირთხები (250 ± 20 გ) მიღებულ იქნა ჯექსონის ლაბორატორიიდან (ბარ ჰარბორი, აშშ) და ვუჰანის ზოოლოგიის ინსტიტუტიდან.უნივერსიტეტი (უჰანი, ჩინეთი).ჩინური ტიპების კულტურის შეგროვების ცენტრმა (უჰანი, ჩინეთი) მოგვაწოდა Caco-2 და hEL უჯრედები.სიგმა-ოლდრიხი (სენტ-ლუი, აშშ) არის B(a)P-ისა და ტრიკაპრინის წყარო.გაწმენდილი ჟინსენოზიდები G-Rg3r და G-Rg3s, დიმეთილ სულფოქსიდი (DMSO), CellTiter-96 პროლიფერაციის საანალიზო ნაკრები (MTS), ვერაპამილი, მინიმალური აუცილებელი საშუალო (MEM) და ნაყოფის მსხვილფეხა რქოსანი შრატი (FBS) შეძენილი იყო Chengdu Must Bio-Technology-დან. .კომპანია, შპს(ჩენგდუ, ჩინეთი).QIAamp დნმ-ის მინი ნაკრები და BPDE-DNA დანამატის ELISA ნაკრები შეძენილი იქნა Qiagen-დან (სტენფორდი, კალიფორნია, აშშ) და Cell Biolabs (სან დიეგო, კალიფორნია, აშშ).GST აქტივობის ანალიზის ნაკრები და მთლიანი ცილის ანალიზის ნაკრები (სტანდარტული BCA მეთოდი) შეძენილია Solarbio-დან (პეკინი, ჩინეთი).ყველა წითელი ჟენშენის ექსტრაქტი ინახება Mingyu Laboratory 7-ში. ჰონგ კონგის ბაპტისტური უნივერსიტეტი (ჰონკონგი, ჩინეთი) და კორეის კიბოს ცენტრი (სეული, კორეა) არის CRG ექსტრაქტისა და სხვადასხვა კორეული წარმოშობის წითელი ჟენშენის ექსტრაქტების კომერციული წყაროები (KRGA, KRGB ჩათვლით). და KRGC).წითელი ჟენშენი მზადდება 6 წლის ახალი ჟენშენის ფესვებისგან.წითელი ჟენშენის ექსტრაქტი მიიღება ჟენშენის წყლით სამჯერ გარეცხვით, შემდეგ წყლის ექსტრაქტის კონცენტრაციით და ბოლოს დაბალ ტემპერატურაზე გაშრობით ჟენშენის ექსტრაქტის ფხვნილის მისაღებად.ანტისხეულები (ანტი-Nrf2, ანტი-GST და β-აქტინი), კურდღლის პეროქსიდაზა-კონიუგირებული ანტი-კურდღლის იმუნოგლობულინი G (IgG), ტრანსფექციის რეაგენტი, საკონტროლო siRNA და Nrf2 siRNA შეძენილი იქნა სანტა კრუზის ბიოტექნოლოგიიდან (Santa Cruz, CA) .), ᲐᲨᲨ).
Caco2 და hEL უჯრედები კულტივირებული იყო 100 მმ2 უჯრედის კულტურის ჭურჭელში MEM-ით, რომელიც შეიცავდა 10% FBS-ს 37 °C ტემპერატურაზე 5% CO2 ტენიან ატმოსფეროში.მკურნალობის პირობების ეფექტის დასადგენად, hEL უჯრედები ინკუბირებული იყო B(a)P და G-Rg3 სხვადასხვა კონცენტრაციით MEM-ში 48 საათის განმავლობაში.უჯრედების შემდგომი ანალიზი ან შეგროვება შესაძლებელია უჯრედებისგან თავისუფალი ექსტრაქტების მოსამზადებლად.
ყველა ექსპერიმენტი დამტკიცებული იყო ტონჯის სამედიცინო კოლეჯის, ჰუაჟონგის მეცნიერებისა და ტექნოლოგიების უნივერსიტეტის ექსპერიმენტული ცხოველების ეთიკის კომიტეტის მიერ (დამტკიცება No. 2019; რეგისტრაციის No. 4587TH).ყველა ექსპერიმენტი ჩატარდა შესაბამისი გაიდლაინების და რეგულაციების შესაბამისად და კვლევა ჩატარდა Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE) გაიდლაინების შესაბამისად.რვა კვირის A/J თაგვებს პირველად გაუკეთეს ინტრაპერიტონეალურად B(a)P ტრიკაპრინის ხსნარში (100 მგ/კგ, 0.2 მლ).ერთი კვირის შემდეგ, თაგვები შემთხვევით დაყვეს საკონტროლო ჯგუფებად და მკურნალობის სხვადასხვა ჯგუფებად, თითო ჯგუფში 15 თაგვად და დღეში ერთხელ აიყვანეს.20 კვირიანი მკურნალობის შემდეგ ცხოველები მსხვერპლად შეწირეს CO2 ასფიქსიით.ფილტვები შეგროვდა და დაფიქსირდა 24 საათის განმავლობაში.ზედაპირული სიმსივნეების რაოდენობა და სიმსივნის ინდივიდუალური ზომები რაოდენობრივად იქნა შეფასებული თითოეული ფილტვისთვის დისექციის მიკროსკოპის ქვეშ.სიმსივნის მოცულობის შეფასებები (V) გამოითვლებოდა შემდეგი გამოხატვის გამოყენებით: V (მმ3) = 4/3πr3, სადაც r არის სიმსივნის დიამეტრი.თაგვების ფილტვებში სიმსივნის ყველა მოცულობის წმინდა ჯამი წარმოადგენდა სიმსივნის მთლიან მოცულობას, ხოლო სიმსივნის საშუალო მთლიანი მოცულობა თითოეულ ჯგუფში წარმოადგენდა სიმსივნის დატვირთვას.მთლიანი სისხლისა და ნაწლავის ნიმუშები შეგროვდა და ინახება -80°C ტემპერატურაზე UPLC-MS/MS განსაზღვრისთვის.შრატი შეგროვდა და ავტომატური ქიმიური ანალიზატორი იქნა გამოყენებული ალანინ ამინოტრანსფერაზას (ALT) და შრატის კრეატინინის (Cr) დონის გასაანალიზებლად ღვიძლისა და თირკმელების ფუნქციის შესაფასებლად.
შეგროვებული ნიმუშები ამოღებულ იქნა ცივ საცავიდან, გალღობდნენ, აიწონეს და მოათავსეს მილებში, როგორც ზემოთ იყო აღწერილი.ამას დაემატა 0,5 μM ფლორიზინი (შიდა სტანდარტი) 0,8 მლ მეთანოლის ხსნარში.შემდეგ ქსოვილი ჰომოგენიზირებული იყო Tissue-Tearor-ის გამოყენებით და ჰომოგენატი შემდგომ გადაიტანეს 1.5 მლ მიკროცენტრიფუგა მილში.ნარევი ცენტრიფუგირებულ იქნა 15500 rpm-ზე 15 წუთის განმავლობაში.1,0 მლ ზენატანის ამოღების შემდეგ გააშრეთ აზოტით.აღდგენისთვის გამოიყენეს ორასი მიკროლიტრი მეთანოლი.სისხლი გროვდება და მუშავდება ერთ ხაზზე და გამოიყენება როგორც მითითება ყველა გაზომვისთვის.
24 ჭაბურღილის ტრანსველის ფირფიტები დათესეს 1.0 × 105 Caco-2 უჯრედებით თითო ჭაბურღილში G-Rg3 ტრანსპორტის პოტენციური გაძლიერების შესაფასებლად ვერაპამილის დამატებით.კულტურის 3 კვირის შემდეგ, უჯრედები გარეცხილი იქნა HBSS-ით და წინასწარ ინკუბირებული იყო 37°C-ზე.400 μL 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, ან ნაზავი 50 ან 100 μM ვერაპამილთან) შეყვანილი იქნა მონოლატერალური ან აპიკალური მხარის მხარეს, ხოლო 600 μL HBSS ხსნარი დაემატა მეორეს. მხარეს.შეაგროვეთ 100 μl კულტურის გარემო დანიშნულ დროს (0, 15, 30, 45, 60, 90 და 120 წუთი) და დაამატეთ 100 μl HBSS ამ მოცულობის შესავსებად.ნიმუშები ინახებოდა -4 °C ტემპერატურაზე UPLC-MS/MS-ით გამოვლენამდე.გამოთქმა Papp = dQ/(dT × A × C0) გამოიყენება აშკარა ცალმხრივი აპიკალური და ბაზოლატერალური გამტარიანობის რაოდენობრივი დასადგენად და პირიქით (შესაბამისად, Pa-b და Pb-a);dQ/dT არის კონცენტრაციის ცვლილება, A (0,6 სმ2) არის მონოფენის ზედაპირის ფართობი და C0 არის საწყისი დონორის კონცენტრაცია.გადინების კოეფიციენტი გამოითვლება როგორც Pb-a/Pa-b, რომელიც წარმოადგენს საკვლევი პრეპარატის გადინების სიჩქარეს.
ვისტარის მამრი ვირთხები უზმოზე იყვნენ 24 საათის განმავლობაში, სვამდნენ მხოლოდ წყალს და ანესთეზირებდნენ 3.5% პენტობარბიტალის ხსნარის ინტრავენური ინექციით.ინტუბირებული სილიკონის მილს აქვს თორმეტგოჯა ნაწლავის ბოლო, როგორც შესასვლელი, ხოლო ნაწლავის ბოლო, როგორც გასასვლელი.გამოიყენეთ პერისტალტიკური ტუმბო, რათა ამოტუმბოთ შესასვლელი 10 μM G-Rg3r ან G-Rg3s იზოტონურ HBSS-ში 0,1 მლ/წთ სიჩქარით.ვერაპამილის ეფექტი შეფასდა 50 μM ან 100 μM ნაერთის დამატებით 10 μM G-Rg3r ან G-Rg3s.UPLC-MS/MS ჩატარდა პერფუზიის ექსტრაქტებზე, რომლებიც შეგროვდა დროის წერტილებში პერფუზიის დაწყებიდან 60, 90, 120 და 150 წუთში.აბსორბციის პროცენტი რაოდენობრივად განისაზღვრება ფორმულით % შთანთქმის = (1 – Cout/Cin) × 100%;G-Rg3-ის კონცენტრაცია გამოსასვლელსა და შესასვლელში გამოიხატება Cout-ით და Cin-ით, შესაბამისად.
hEL უჯრედები დათესეს 96 ჭაბურღილიან ფირფიტებში 1 × 104 უჯრედის სიმკვრივით თითო ჭაბურღილში და დამუშავდა B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) ან DMSO-ში გახსნილი G-Rg3. .შემდეგ წამლები განზავებული იქნა კულტივირების საშუალებით სხვადასხვა კონცენტრაციამდე (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) 48 საათის განმავლობაში.კომერციულად ხელმისაწვდომი MTS ანალიზის ნაკრების გამოყენებით, უჯრედები დაექვემდებარა სტანდარტულ პროტოკოლს და შემდეგ გაზომეს მიკროპლატის წამკითხველის გამოყენებით 490 ნმ.B(a)P (10 μM) და G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) ერთობლივად დამუშავებული ჯგუფების უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობის დონე შეფასდა ზემოაღნიშნული მეთოდის მიხედვით და შედარება არანამკურნალევ ჯგუფთან.
hEL უჯრედები დათესეს 6 ჭაბურღილიან ფირფიტებში 1 × 105 უჯრედი/ჭა სიმკვრივით და დამუშავდა 10 μMB(a)P 10 μM G-Rg3-ის თანდასწრებით ან არარსებობით.მკურნალობის 48 საათის შემდეგ, დნმ ამოღებულია hEL უჯრედებიდან QIAamp DNA Mini Kit-ის გამოყენებით მწარმოებლის პროტოკოლის მიხედვით.BPDE-DNA დანამატების წარმოქმნა გამოვლინდა BPDE-DNA დანამატის ELISA ნაკრების გამოყენებით.BPDE-დნმ დანამატის შედარებითი დონეები გაზომილი იყო მიკროპლატის წამკითხველის გამოყენებით შთანთქმის გაზომვით 450 ნმ.
hEL უჯრედები დათესეს 96 ჭაბურღილიან ფირფიტებში 1 × 104 უჯრედის სიმკვრივით თითო ჭაბურღილში და დამუშავდა 10 μMB(a)P-ით 10 μM G-Rg3-ის არარსებობის ან არსებობის შემთხვევაში 48 საათის განმავლობაში.GST აქტივობა გაზომილი იყო კომერციული GST აქტივობის ანალიზის ნაკრების გამოყენებით მწარმოებლის პროტოკოლის მიხედვით.ფარდობითი GST აქტივაცია გაზომილი იყო შთანთქმის გზით 450 ნმ-ზე მიკროპლატის წამკითხველის გამოყენებით.
hEL უჯრედები გარეცხილი იყო ყინულით ცივი PBS-ით და შემდეგ ლიზირებული იქნა რადიოიმუნოპრეციპიტაციური ანალიზის ბუფერის გამოყენებით, რომელიც შეიცავს პროტეაზას ინჰიბიტორებს და ფოსფატაზას ინჰიბიტორებს.ცილის რაოდენობრივი განსაზღვრის შემდეგ მთლიანი ცილის ანალიზის ნაკრების გამოყენებით, 30 მკგ ცილა თითოეულ ნიმუშში გამოეყო 12% SDS-PAGE-ით და გადავიდა PVDF მემბრანაზე ელექტროფორეზით.მემბრანები დაიბლოკა 5% უცხიმო რძით და ინკუბირებული იყო პირველადი ანტისხეულებით ღამით 4°C-ზე.რძის პეროქსიდაზას კონიუგირებული მეორადი ანტისხეულებით ინკუბაციის შემდეგ, დაემატა გაძლიერებული ქიმილუმინესცენციის რეაგენტები, რათა ვიზუალურად გამოეჩინათ სავალდებულო სიგნალი.თითოეული ცილის ზოლის ინტენსივობა რაოდენობრივად განისაზღვრა ImageJ პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით.
GraphPad Prism 7.0 პროგრამული უზრუნველყოფა იყო გამოყენებული ყველა მონაცემის გასაანალიზებლად, გამოხატული საშუალოდ ± სტანდარტული გადახრით.ვარიაცია სამკურნალო ჯგუფებს შორის შეფასდა სტუდენტის t ტესტის ან ცალმხრივი ვარიაციის ანალიზის გამოყენებით, P მნიშვნელობა <0.05, რაც მიუთითებს სტატისტიკურ მნიშვნელობაზე.
ამ კვლევის დროს მიღებული ან გაანალიზებული ყველა მონაცემი შედის ამ გამოქვეყნებულ სტატიაში და დამატებით საინფორმაციო ფაილებში.
Torre, LA, Siegel, RL and Jemal, A. ფილტვის კიბოს სტატისტიკა.ზმნიზედა.ვადა გაუვიდა.წამალი.ბიოლოგია.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. თამბაქოს კანცეროგენები, მათი ბიომარკერები და თამბაქოს მიერ გამოწვეული კიბო.ნატ.კიბოს კაპელანი.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH და Venitt, S. დნმ და ცილის დანამატები ადამიანის ქსოვილებში თამბაქოს კვამლის ზემოქმედების შედეგად.საერთაშორისოობა.J. კირჩხიბი.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA და Yu M. Houttuynia cordata და სილიბინინის ეფექტი ბენზო(ა)პირენით გამოწვეული ფილტვის სიმსივნეზე A/J თაგვებში.კიბო 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. და სხვ.კიბოს საწინააღმდეგო ბუნებრივი პროდუქტი, იზოლირებული ჩინური სამკურნალო მასალებისგან.ყბა.წამალი.6, 27 (2011).
Yang, Y. და სხვ.პოლიფენონის E, წითელი ჟენშენისა და რაპამიცინის ეფექტურობა ბენზო(ა)პირენით გამოწვეული ფილტვის სიმსივნეზე A/J თაგვებში.კიბო 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS და Yuan, KS Red, მონაწილეობა კიბოს თერაპიაში.ყბა.ჯ.ნუტი.წამალი.14, 7–16 (2016).
ლი, TS, Mazza, G., Cottrell, AS და Gao, L. Ginsenosides ამერიკული ჟენშენის ფესვებსა და ფოთლებში.ჯ.აგრიკ.საკვები ქიმია.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA და Yuan KS ჟენშენის ფარმაკოლოგია: მრავალი კომპონენტი და მრავალი ეფექტი.ბიოქიმია.ფარმაკოლოგია.58, 1685–1693 (1999).
გამოქვეყნების დრო: სექ-17-2023