Nature.com сайтына кіргеніңіз үшін рахмет.Сіз пайдаланып жатқан шолғыш нұсқасында шектеулі CSS қолдауы бар.Жақсы нәтижеге қол жеткізу үшін браузеріңіздің жаңарақ нұсқасын пайдалануды ұсынамыз (немесе Internet Explorer шолғышында үйлесімділік режимін өшіріңіз).Әзірге тұрақты қолдауды қамтамасыз ету үшін біз сайтты сәндеусіз немесе JavaScriptсіз көрсетеміз.
Қызыл женьшень жүздеген жылдар бойы дәстүрлі азиялық медицинада қолданылып келеді.Бұл зерттеуде біз әртүрлі аймақтарда өсірілген қызыл женьшеньдің төрт түрінің (қытайлық қызыл женьшень, кореялық қызыл женьшень А, кореялық қызыл женьшень В және корей қызыл женьшень С) канцероген тудырған өкпенің қалыптасуы мен өсуін тежеу қабілетін бағаладық. ісіктер.A/J тышқандарында бензо(а)пирен (B(a)P) сынағы жүргізілді, ал кореялық қызыл женьшень В төрт қызыл женьшень сорттарының арасында ісік ауыртпалығын азайтуда ең тиімді болып табылды.Бұдан басқа, біз төрт қызыл женьшень сығындысындағы әртүрлі женьсенозидтердің (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 және Rg5) мазмұнын талдадық және кореялық қызыл женьшень В бар екенін анықтадық. гинсенозид Rg3 (G-Rg3) ең жоғары деңгейлері, бұл G-Rg3 оның терапевтік тиімділігінде маңызды рөл атқаруы мүмкін екенін көрсетеді.Бұл жұмыс G-Rg3 биожетімділігінің салыстырмалы түрде төмен екенін көрсетеді.Алайда G-Rg3-ті P-gp ингибиторы верапамилмен бір мезгілде қолданғанда, G-Rg3-тің Caco-2 жасушаларына өтуі төмендеді, егеуқұйрық үлгісінде G-Rg3-тің ішектен сіңу жылдамдығы жоғарылады, ал G-Rg3 арттырылды.Caco-2 жасушаларында Rg3 шығуы азаяды, ал Rg3 концентрациясының деңгейі төмендейді.G-Rg3 ішекте және плазмада жоғарылайды және оның ісіктердің алдын алу қабілеті B(a)P-индукцияланған ісіктің егеуқұйрық үлгісінде де жақсарады.Сондай-ақ, G-Rg3 адамның өкпе жасушаларында B(a)P-индукцияланған цитотоксичность және ДНҚ аддуктінің түзілуін төмендететінін және Nrf2 жолы арқылы II фаза ферменттерінің экспрессиясын және белсенділігін қалпына келтіргенін анықтадық, бұл әсер етудің ықтимал механизмімен байланысты болуы мүмкін. G тежеу -Rg3..Өкпе ісіктерінің пайда болуы туралы.Біздің зерттеуіміз G-Rg3 үшін тінтуір үлгілеріндегі өкпе ісіктерін нысанаға алуда ықтимал маңызды рөлді көрсетеді.Бұл женьсенозидтің ауызша биожетімділігі Р-гликопротеинді бағыттау арқылы жақсарады, бұл молекуланың ісікке қарсы әсерлерін көрсетуге мүмкіндік береді.
Өкпенің қатерлі ісігінің ең көп таралған түрі - бұл Қытай мен Солтүстік Америкада қатерлі ісік өлімінің жетекші себептерінің бірі болып табылатын ұсақ жасушалы емес өкпенің қатерлі ісігі (NSCLC).Өкпенің ұсақ жасушалы емес қатерлі ісігінің даму қаупін арттыратын негізгі фактор темекі шегу болып табылады.Темекі түтінінде 60-тан астам канцероген бар, соның ішінде бензо(а)пирен (В(а)Р), нитрозаминдер және радонның ыдырауынан пайда болатын радиоактивті изотоптар.3 Полициклді ароматты көмірсутектер B(a)P темекінің уыттылығының негізгі себебі болып табылады. түтін.B(a)P әсер еткенде, P450 цитохромы оны B(a)P-7,8-дигидродиол-9,10-эпоксидке (BPDE) түрлендіреді, ол ДНҚ-мен әрекеттесіп, BPDE-ДНҚ қосындысын 4 құрайды. Оған қоса, бұлар аддукттар ісік сатысы және адамның өкпе ісіктеріне ұқсас гистопатологиясы бар тышқандарда өкпе ісіктерінің пайда болуын тудырады5.Бұл мүмкіндік B(a)P-индукцияланған өкпе обыры үлгісін ықтимал ісікке қарсы қасиеттері бар қосылыстарды бағалау үшін қолайлы жүйеге айналдырады.
Тәуекел тобында, әсіресе шылым шегетін адамдарда өкпе обырының дамуын болдырмаудың ықтимал стратегиясы интраэпителиальді ісік ошақтарының дамуын басу және осылайша олардың кейіннен қатерлі ісікке айналуын болдырмау үшін химиопровентивті заттарды қолдану болып табылады.Жануарларға жүргізілген зерттеулер әртүрлі химиопревентивтік препараттардың тиімді екенін көрсетеді6.Біздің алдыңғы есеп7 қызыл женьшеньдің өкпенің қатерлі ісігіне жақсы профилактикалық әсерін атап өтті.Бұл шөп ғасырлар бойы дәстүрлі азиялық медицинада өмір мен денсаулықты ұзарту үшін қолданылған және ісікке қарсы әсері бар екендігі құжатталған8.
Женьшеньдің белсенді факторы женьшень сығындыларының сапасын бағалау үшін композиттік маркер ретінде пайдаланылатын женьсенозид болып табылады.Шикі женьшень сығындыларының сандық талдауы әдетте RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 және Rc9,10 сияқты бірнеше женьсенозидтерді қолдануды қамтиды.Женсенозидтердің өте нашар биожетімділігіне байланысты клиникалық қолданысы шамалы11.Бұл нашар биожетімділіктің механизмі анық болмаса да, P-гликопротеин (P-gp)12 тудырған женьсенозидтердің ағуы себеп болуы мүмкін.P-gp жасушаішілік заттарды сыртқы ортаға шығару үшін АТФ гидролизінің энергиясын пайдаланатын АТФ-байланыстыратын кассета тасымалдаушыларының супертүріндегі ең маңызды ағынды тасымалдаушылардың бірі болып табылады.P-gp тасымалдаушылары әдетте ішекте, бүйректе, бауырда және гематоэнцефалдық тосқауылда кең таралған13.P-gp ішектің сіңуінде маңызды рөл атқарады, ал P-gp тежелуі кейбір ісікке қарсы препараттардың ауызша сіңуін және қолжетімділігін арттырады12,14.Әдебиетте бұрын қолданылған ингибиторлардың мысалдары верапамил және циклоспорин А15 болып табылады.Бұл жұмыс Қытай мен Кореядан келген қызыл женьшень сығындыларының қатерлі ісіктерге әсер ету қабілетін бағалау үшін B(a)P-индукцияланған өкпе обырын зерттеуге арналған тінтуір жүйесін құруды қамтиды.Канцерогенезге әсер етуі мүмкін ерекше женьсенозидтерді анықтау үшін сығындылар жеке талданды.Содан кейін верапамил P-gp-ге бағытталған және қатерлі ісікке қарсы женьсенозидтердің ауызша биожетімділігін және емдік тиімділігін жақсарту үшін пайдаланылды.
Женьшень сапониндерінің канцерогенезге емдік әсер ету механизмі әлі белгісіз.Зерттеулер көрсеткендей, әртүрлі женьсенозидтер тотығу стрессін азайту және II фазадағы детоксикация ферменттерін белсендіру арқылы канцерогендерден туындаған ДНҚ зақымдануын азайтады, осылайша жасуша зақымдануын болдырмайды.Глутатион S-трансфераза (GST) канцерогендерден туындаған ДНҚ зақымдануын азайту үшін қажет типтік II фаза ферменті болып табылады17.Ядролық эритроидты 2-байланысты фактор 2 (Nrf2) тотығу-тотықсыздану гомеостазын реттейтін және II фаза ферменттерінің экспрессиясын және цитопротекторлық антиоксиданттық реакцияларды белсендіретін маңызды транскрипция факторы болып табылады18.Біздің зерттеуіміз сондай-ақ анықталған женьсенозидтердің B(a)P-индукцияланған цитотоксичность және BPDE-ДНҚ қосындысының түзілуін азайтуға әсерін, сондай-ақ қалыпты өкпе жасушаларында Nrf2 жолын модуляциялау арқылы II фаза ферменттерін индукциялауды зерттеді.
B(a)P-индукцияланған қатерлі ісіктің тышқан үлгісін құру алдыңғы жұмыспен сәйкес келеді5.1А суретінде B(a)P, су (бақылау), қытайлық қызыл женьшень сығындысы (CRG), корей қызыл женьшень сығындысы A (KRGA) және корей қызыл сығындысымен туындаған тінтуірдің қатерлі ісігінің үлгісін 20 апталық емдеудің тәжірибелік дизайны көрсетілген. женьшень.B сығындысы (KRGB) және корей қызыл женьшень С сығындысы (KRGC).20 апталық қызыл женьшеньмен емдеуден кейін тышқандар СО2 тұншығуымен құрбан болды.1В суретте қызыл женьшеньдің әртүрлі түрлерімен емделген жануарлардағы өкпенің макроскопиялық ісіктері көрсетілген, ал 1С суретінде ісік үлгісінің репрезентативті жарық микрографы көрсетілген.KRGB-мен өңделген жануарлардың ісік жүктемесі (1,5 ± 0,35) 1D суретінде көрсетілгендей, бақылау жануарларына қарағанда (0,82 ± 0,2, P <0,05) төмен болды.Ісік жүктемесінің тежелуінің орташа дәрежесі 45% құрады.Сынақтан өткен басқа қызыл женьшень сығындылары ісік жүктемесінде мұндай елеулі өзгерістерді көрсетпеді (P > 0,05).Қызыл женьшеньмен емдеудің 20 аптасында тінтуір үлгісінде айқын жанама әсерлер байқалмады, соның ішінде дене салмағының өзгеруі (деректер көрсетілмеген) және бауыр немесе бүйрек уыттылығы жоқ (1E,F сурет).
Қызыл женьшень сығындысы A/J тышқандарындағы өкпе ісіктерінің дамуын емдейді.(A) Эксперименттік жоба.(B) Тышқан үлгісіндегі үлкен өкпе ісіктері.Ісіктерді көрсеткілер арқылы көрсетеді.а: Қытайдың қызыл женьшень тобы.b: корей қызыл женьшеньінің А тобы.c: корей қызыл женьшень тобы B. d: корей қызыл женьшень тобы C. d: бақылау тобы.(C) Өкпенің ісігін көрсететін жарық микросуреті.Үлкейту: 100. b: 400. (D) Қызыл женьшень сығындысы тобындағы ісік жүктемесі.(E) АЛТ бауыр ферментінің плазмадағы деңгейі.(F) Бүйрек ферментінің плазмадағы деңгейі Cr.Деректер орташа ± стандартты ауытқу ретінде көрсетіледі.*P <0,05.
Осы зерттеуде анықталған қызыл женьшень сығындылары келесі женьсенозидтердің санын анықтау үшін ультра өнімді сұйық хроматография тандемдік масс-спектрометриясымен (UPLC-MS/MS) талданды: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 және Rg5.Аналитикалық заттарды өлшеу үшін пайдаланылатын UPLC және MS шарттары алдыңғы есепте сипатталған19.Төрт қызыл женьшень сығындысының UPLC-MS/MS хроматограммалары 2А суретінде көрсетілген.CRG (590,27 ± 41,28 мкмоль/л) ең жоғары жалпы женьсенозид мазмұнымен жалпы женьсенозид құрамында елеулі айырмашылықтар болды (2В-сурет).Жеке женьсенозидтерді бағалау кезінде (2С-сурет), KRGB басқа женьсенозидтермен салыстырғанда G-Rg3-тің ең жоғары деңгейін көрсетті (G-Rg3s үшін 58,33 ± 3,81 мкмоль/л және G -Rg3r үшін 41,56 ± 2,88 мкмоль/л).қызыл женьшень түрі (P <0,001).G-Rg3 G-Rg3r және G-Rg3s жұп стереоизомерлер түрінде кездеседі, олар 20 көміртегідегі гидроксил тобының орнында ерекшеленеді (2D-сурет).Нәтижелер G-Rg3r немесе G-Rg3 B(a)P-индукцияланған қатерлі ісік тінтуірінің үлгісінде маңызды ісікке қарсы әлеуетке ие болуы мүмкін екенін көрсетеді.
Әртүрлі қызыл женьшень сығындыларындағы женьсенозидтердің мазмұны.(A) Төрт қызыл женьшень сығындысының UPLC-MS/MS хроматограммалары.(B) Көрсетілген сығындылардағы женьсенозидтердің жалпы мазмұнын бағалау.(C) Белгіленген сығындыларда жеке женьсенозидтерді анықтау.(D) G-Rg3r және G-Rg3s гинсенозидтер стереоизомерлерінің құрылымдары.Деректер үш еселік анықтаулардың орташа ± стандартты ауытқуы ретінде көрсетіледі.***P <0,001.
UPLC-MS/MS зерттеуі емдеудің 20 аптасынан кейін ішек пен қан үлгілеріндегі женьсенозидтердің мөлшерін анықтауды талап етті.KRGB-мен емдеу қанда тек 0,0063 ± 0,0005 мкг/мл Rg5 бар екенін көрсетті.Қалған женьсенозидтер анықталмады, бұл ішу арқылы қабылданатын биожетімділігінің нашарлығын және осыған байланысты осы женьсенозидтердің экспозициясының төмендеуін көрсетеді.
Caco-2 тоқ ішек аденокарциномасының жасушалық желісі морфологиялық және биохимиялық жағынан адамның ішек эпителий жасушаларына ұқсас, бұл ішек эпителий тосқауылымен энтероциттердің тасымалдануын бағалауда оның пайдалылығын көрсетеді.Бұл талдау бұрынғы зерттеуге негізделген 20 .3A,B,C,D,E,F суреттерінде Caco-2 моноқабат үлгісін пайдаланып G-Rg3r және G-Rg3 жасушааралық тасымалдануының репрезентативті кескіндері көрсетілген.G-Rg3r немесе G-Rg3-тің Caco-2 моноқабаттары арқылы базолатеральдан апикальды жаққа (Pb-a) жасушааралық тасымалдануы апикальдан базолатеральды жаққа (Pa-b) қарағанда айтарлықтай жоғары болды.G-Rg3r үшін орташа Pa-b мәні 0,38 ± 0,06 болды, ол 50 мкмоль/л верапамилмен емдеуден кейін 0,73 ± 0,06 дейін және 100 мкмоль/л верапамилмен емдеуден кейін 1,14 ± 0,09 дейін өсті (p < 0,001 және тиісінше 2-сурет);3A).G-Rg3 үшін бақылаулар ұқсас үлгіні ұстанды (3B-сурет) және нәтижелер верапамилмен емдеу G-Rg3r және G-Rg3 тасымалдауын күшейткенін көрсетті.Верапамилмен емдеу сонымен қатар орташа Pb-a және G-Rg3r және G-Rg3s ағу коэффициенттерінің айтарлықтай төмендеуіне әкелді (3C,D,E,F-сурет), бұл верапамилмен емдеу Caco-2 эффлюкс жасушаларындағы женьсенозидтердің құрамын төмендететінін көрсетеді..
Caco-2 моноқабаттарында G-Rg3-тің жасушааралық тасымалдануы және егеуқұйрық перфузиялық талдауда ішектің сіңірілуі.(A) Caco-2 моноқабатындағы G-Rg3r тобының Pa-b мәні.(B) Caco-2 моноқабатындағы G-Rg3s топтарының Pa-b мәні.(C) Caco-2 моноқабатындағы G-Rg3r тобының Pb мәні.(D) Caco-2 моноқабатындағы G-Rg3s топтарының Pb мәні.(E) Caco-2 моноқабатындағы G-Rg3r топтарының кірістілік қатынасы.(F) Caco-2 моноқабатындағы G-Rg3 топтарының кірістілік қатынасы.(G) Егеуқұйрықтардағы перфузиялық талдауда G-Rg3r ішекте сіңірілу пайызы.(H) Егеуқұйрықтардағы перфузиялық талдаудағы G-Rg3-тің ішек арқылы сіңірілу пайызы.Өткізгіштігі мен сіңуі верапамилді қоспай-ақ салыстырылды.Деректер бес тәуелсіз эксперименттің орташа ± стандартты ауытқуы ретінде көрсетіледі.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Бұрынғы жұмысқа20 сәйкес, верапамилмен емдеуден кейін ішекте G-Rg3 сіңуінің жоғарылауын анықтау үшін егеуқұйрықтардың ортотопиялық ішек перфузиясы жүргізілді.3G, H суреттері жоғарыда көрсетілген уақыт кезеңдері ішінде қатерлі ісік үлгісіндегі егеуқұйрықтардағы G-Rg3r және G-Rg3 ішек сіңіру пайызын бағалау үшін өкілді перфузиялық талдауларды көрсетеді.Әлсіз G-Rg3r сіңуінің шамамен 10% бастапқы пайызы 50 мкм верапамилмен емдеуден кейін 20%-дан астамға және 100 мкм верапамилмен емдеуден кейін 25%-дан астамға дейін өсті.Сол сияқты, бастапқы сіңуі 10% болатын G-Rg3 де 50 мкм верапамилмен емдеуден кейін 20%-дан астам және 100 мкМ верапамилмен емдеуден кейін 30%-ға жуық шыңды көрсетті, бұл верапамилмен P-gp тежелуін күшейтеді дегенді білдіреді. өкпенің қатерлі ісігінің тінтуір үлгісінде ішек G-сіңіру Rg3.
Жоғарыда көрсетілген әдіске сәйкес, B(a)P-индукцияланған қатерлі ісік үлгісі тышқандары 4А суретінде көрсетілгендей кездейсоқ түрде алты топқа бөлінді.Бақылау тобымен салыстырғанда G-Rg3 емдеу тобында салмақ жоғалту немесе уыттылықтың клиникалық белгілері байқалған жоқ (деректер көрсетілмеген).20 апталық емдеуден кейін әрбір тышқанның өкпесі жиналды.4В суретте жоғарыда аталған емдеу топтарындағы тышқандардағы макроскопиялық өкпе ісіктері көрсетілген, ал 4С суретте өкілдік ісіктің репрезентативті жарық микрографы көрсетілген.Әрбір топтағы ісік жүктемесіне қатысты (4D-сурет), G-Rg3r және G-Rg3s препараттарымен өңделген тышқандар үшін мәндер сәйкесінше 0,75 ± 0,29 мм3 және 0,81 ± 0,30 мм3 болды, ал G тышқандары үшін мәндер. -Rg3s сәйкесінше 1,63 ±0,40 мм3 болды.бақылау тышқандары (p <0,001), бұл G-Rg3 емдеу тышқандардағы ісік жүктемесін төмендететінін көрсетеді.Верапамилді енгізу бұл төмендеуді одан әрі күшейтті: верапамил+ G-Rg3r тышқандарындағы мәндер 0,75 ± 0,29 мм3-тен 0,33 ± 0,25 мм3-ке дейін (p < 0,01) төмендеді, ал верапамил+ үшін мәндер 0,81 ± 0,30 ± 0,29,2-ге дейін төмендеді. mm3 G. -Rg3s өңделген тышқандарда (p < 0,05), бұл верапамилдің ісік пайда болуына G-Rg3 тежегіш әсерін күшейтуі мүмкін екенін көрсетеді.Ісік жүктемесі бақылау тобы мен верапамил тобы, G-Rg3r тобы және G-Rg3s тобы және верапамил+G-Rg3r тобы мен верапамил+G-Rg3s тобы арасында айтарлықтай айырмашылықтар көрсетпеді.Сонымен қатар, бағаланған емдерге байланысты бауыр немесе бүйректің елеулі уыттылығы болған жоқ (4E,F-сурет).
G-Rg3 емдеуден кейінгі ісік ауыртпалығы және көрсетілген топтардағы плазма немесе ішек G-Rg3r және G-Rg3 деңгейлері.(A) Эксперименттік жоба.(B) Тышқан үлгісіндегі макроскопиялық ісіктер.Ісіктерді көрсеткілер арқылы көрсетеді.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r верапамилмен біріктірілген.d: G-Rg3 верапамилмен біріктірілген.г: Верапамил.e: бақылау.(C) Үлкейту кезіндегі ісіктің оптикалық микросуреті.Жауабы: 100x.b: 400X.(D) G-Rg3 + верапамилмен емдеудің A/J тышқандарындағы ісік жүктемесіне әсері.(E) АЛТ бауыр ферментінің плазмадағы деңгейі.(F) Бүйрек ферментінің плазмадағы деңгейі Cr.(G) Көрсетілген топтардың G-Rg3r немесе G-Rg3 плазмалық деңгейлері.(H) Көрсетілген топтардың ішектеріндегі G-Rg3r немесе G-Rg3s деңгейлері.Деректер үш еселік анықтаулардың орташа ± стандартты ауытқуы ретінде көрсетіледі.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B(a)P-индукцияланған қатерлі ісік үлгісі тышқандарындағы G-Rg3 деңгейлері Әдістер бөлімінде сипатталған әдіске сәйкес 20 апталық емдеу кезеңінен кейін UPLC-MS/MS арқылы бағаланды.4G және H суреттері сәйкесінше плазма және ішек G-Rg3 деңгейлерін көрсетеді.Қан плазмасындағы G-Rg3r деңгейі 0,44 ± 0,32 мкмоль/л болды және верапамилді бір мезгілде қабылдағанда 1,17 ± 0,47 мкмоль/л-ге дейін өсті (p < 0,001), ішектегі G-Rg3r деңгейі 0,53 ± 0,08 мкг/л болды.Верапамилмен біріктірілгенде g 1,35 ± 0,13 мкг/г дейін өсті (p <0,001).G-Rg3 үшін нәтижелер ұқсас үлгіні ұстанды, бұл верапамилмен емдеу A/J тышқандарында G-Rg3 пероральді биожетімділігін арттырғанын көрсетеді.
HEL жасушаларында B(a)P және G-Rg3 цитоуыттылығын бағалау үшін жасуша өміршеңдігін талдау қолданылды.hEL жасушаларында B(a)P индукциялаған цитотоксиктік 5А суретте көрсетілген, ал G-Rg3r және G-Rg3 уытты емес қасиеттері 5А және 5В суреттерінде көрсетілген.5B, C. G-Rg3 цитопротекторлық әсерін бағалау үшін B(a)P hEL жасушаларына G-Rg3r немесе G-Rg3 әртүрлі концентрацияларымен бірге енгізілді.5D суретінде көрсетілгендей, 5 мкм, 10 мкм және 20 мкм концентрациялардағы G-Rg3r жасуша өміршеңдігін тиісінше 58,3%, 79,3% және 77,3% қалпына келтірді.Ұқсас нәтижелерді G-Rg3s тобында да көруге болады.G-Rg3s концентрациясы 5 мкМ, 10 мкМ және 20 мкМ болғанда, жасуша өміршеңдігі тиісінше 58,3%, 72,7% және 76,7% қалпына келтірілді (5E-сурет).).BPDE-ДНҚ қосындыларының болуы ELISA жинағы арқылы өлшенді.Біздің нәтижелер BPDE-ДНҚ қосындысының деңгейлері бақылау тобымен салыстырғанда B(a)P өңделген топта жоғарылағанын көрсетті, бірақ G-Rg3 бірлескен емдеумен салыстырғанда B(a)P тобындағы BPDE-ДНҚ қосынды деңгейлері. Өңделген топтағы B, ДНҚ аддукт деңгейі айтарлықтай төмендеді.Тек B(a)P-мен емдеу нәтижелері 5F суретінде көрсетілген (G-Rg3r үшін 1,87 ± 0,33 қарсы 3,77 ± 0,42, G -Rg3s үшін 1,93 ± 0,48 және 3,77 ± 0,42, p < 0,001).
G-Rg3 және B(a)P өңделген hEL жасушаларында жасуша өміршеңдігі және BPDE-ДНҚ қосымшасының түзілуі.(A) B(a)P өңделген hEL жасушаларының өміршеңдігі.(B) G-Rg3r өңделген hEL жасушаларының өміршеңдігі.(C) G-Rg3 өңделген hEL жасушаларының өміршеңдігі.(D) B(a)P және G-Rg3r өңделген hEL жасушаларының өміршеңдігі.(E) B(a)P және G-Rg3 өңделген hEL жасушаларының өміршеңдігі.(F) B(a)P және G-Rg3 өңделген hEL жасушаларындағы BPDE-ДНҚ қосындысының деңгейлері.Деректер үш еселік анықтаулардың орташа ± стандартты ауытқуы ретінде көрсетіледі.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
GST ферментінің экспрессиясы 10 μM B(a)P және 10 μM G-Rg3r немесе G-Rg3s бірге өңдеуден кейін анықталды.Біздің нәтижелер B(a)P GST өрнегін (G-Rg3r тобында 59,7 ± 8,2% және G-Rg3s тобында 39 ± 4,5%) басады және B(a)P G-Rg3r екеуімен байланысты болды. , немесе G-Rg3r немесе G-Rg3r.G-Rg3s-пен бірге емдеу GST экспрессиясын қалпына келтірді.GST өрнегі (G-Rg3r тобында 103,7 ± 15,5% және G-Rg3s тобында 110 ± 11,1%, тиісінше p < 0,05 және p < 0,001, 6A, B және C суреті).GST белсенділігі белсенділікті талдау жинағы арқылы бағаланды.Біздің нәтижелеріміз біріктірілген емдеу тобының тек B(a)P тобымен салыстырғанда GST белсенділігінің жоғары екенін көрсетті (G-Rg3r тобындағы 96,3 ± 6,6%-ға қарсы 35,7 ± 7,8%-ға қарсы. G-Rg3r тобындағы 92,3 ± 6,5%). ).G-Rg3s тобындағы % қарсы 35,7 ± 7,8%, p < 0,001, 6D сурет).
B(a)P және G-Rg3 өңделген hEL жасушаларында GST және Nrf2 экспрессиясы.(A) Western blotting арқылы GST экспрессиясын анықтау.(B) B(a)P және G-Rg3r өңделген hEL жасушаларында GST сандық экспрессиясы.(C) B(a)P және G-Rg3s өңделген hEL жасушаларында GST сандық экспрессиясы.(D) B(a)P және G-Rg3 өңделген hEL жасушаларындағы GST белсенділігі.(E) Western blotting арқылы Nrf2 өрнегін анықтау.(F) B(a)P және G-Rg3r өңделген hEL жасушаларында Nrf2 сандық экспрессиясы.(G) B(a)P және G-Rg3s өңделген hEL жасушаларында Nrf2 сандық экспрессиясы.Деректер үш еселік анықтаулардың орташа ± стандартты ауытқуы ретінде көрсетіледі.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B(a)P-индукцияланған ісік пайда болуының G-Rg3-делдалдық басылуына қатысатын жолдарды түсіндіру үшін Nrf2 экспрессиясы Western blotting әдісімен бағаланды.6E,F,G суреттерінде көрсетілгендей, бақылау тобымен салыстырғанда, B(a)P емдеу тобындағы Nrf2 деңгейі ғана төмендеді;дегенмен, B(a)P емдеу тобымен салыстырғанда, PG-Rg3 тобындағы B(a) Nrf2 деңгейлері жоғарылады (G-Rg3r үшін 106 ± 9,5%-ға қарсы 51,3 ± 6,8%-ға, 117 ± 6, 2%-ға G-Rg3r қарсы 41 ± 9,8% G-Rg3s үшін, p <0,01).
Біз Nrf2-нің профилактикалық рөлін арнайы кішкене кедергі жасайтын РНҚ (siRNA) арқылы Nrf2 өрнектерін басу арқылы растадық.Nrf2 нокдаун Батыс блотинг арқылы расталды (сурет 7A,B).7C,D суреттерінде көрсетілгендей, hEL жасушаларын B(a)P және G-Rg3-пен бірге өңдеу B(a)P-мен емдеумен салыстырғанда BPDE-ДНҚ қосындыларының санының (1,47 ± 0,21) төмендеуіне әкелді. бақылау siRNA тобында жалғыз.) G-Rg3r 4,13 ± 0,49, G-Rg3s 1,8 ± 0,32 және 4,1 ± 0,57, p < 0,01).Дегенмен, G-Rg3-тің BPDE-ДНҚ түзілуіне ингибиторлық әсері Nrf2 нокдаунымен жойылды.siNrf2 тобында B(a)P және G-Rg3 бірлескен емі мен жалғыз B(a)P өңдеуі арасында BPDE-ДНҚ қосындысының түзілуінде айтарлықтай айырмашылық болмады (G-Rg3r үшін 3,0 ± 0,21 және 3,56 ± 0,32 қарсы). ).G-Rg3r үшін 3,6-ға қарсы G-Rg3s үшін ±0,45-ке қарсы 4,0±0,37, p > 0,05).
Nrf2 нокдаунының hEL жасушаларында BPDE-ДНҚ қосындысының түзілуіне әсері.(A) Nrf2 нокдаун Батыс блотинг арқылы расталды.(B) Nrf2 жолағы қарқындылығын сандық анықтау.(C) B(a)P және G-Rg3r өңделген hEL жасушаларындағы BPDE-ДНҚ қосымша деңгейлеріне Nrf2 нокдаунының әсері.(D) B(a)P және G-Rg3 өңделген hEL жасушаларындағы BPDE-ДНҚ қосымша деңгейлеріне Nrf2 нокдаунының әсері.Деректер үш еселік анықтаулардың орташа ± стандартты ауытқуы ретінде көрсетіледі.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Бұл зерттеу әртүрлі қызыл женьшень сығындыларының B(a)P-индукцияланған өкпе қатерлі ісігінің тышқан үлгісіне профилактикалық әсерін бағалады және KRGB емдеу ісік жүктемесін айтарлықтай төмендетті.Бұл женьшень сығындысында G-Rg3 ең жоғары мазмұнға ие екенін ескере отырып, бұл женьсенозидтің ісік пайда болуын тежеудегі маңызды рөлі зерттелді.G-Rg3r және G-Rg3 екеуі де (G-Rg3-тің екі эпимері) B(a)P-индукцияланған қатерлі ісіктің тышқан үлгісінде ісік жүктемесін айтарлықтай төмендетті.G-Rg3r және G-Rg3 ісік жасушаларының21 апоптозын индукциялау, ісік өсуін тежеу22, жасушалық циклды тоқтату23 және ангиогенезге24 әсер ету арқылы ісікке қарсы әсер етеді.Сондай-ақ G-Rg3 жасушалық метастаздарды25 тежейтіні көрсетілген, ал G-Rg3 химиотерапия мен сәулелік терапияның әсерін күшейту қабілеті құжатталған26,27.Пун және басқалар G-Rg3 емдеу B(a)P28 генотоксикалық әсерін төмендетуі мүмкін екенін көрсетті.Бұл зерттеу G-Rg3-тің қоршаған ортадағы канцерогендік молекулаларға бағытталған емдік әлеуетін көрсетеді және қатерлі ісіктің алдын алады.
Жақсы профилактикалық әлеуетіне қарамастан, женьсенозидтердің ауызша биожетімділігінің нашарлығы осы молекулаларды клиникалық қолдануда қиындық тудырады.Егеуқұйрықтардағы женьсенозидтерді ішке қабылдаудың фармакокинетикалық талдауы оның биожетімділігі әлі де 5%-дан аз екенін көрсетті29.Бұл сынақтар 20 апталық емдеу кезеңінен кейін қандағы Rg5 деңгейінің ғана төмендегенін көрсетті.Нашар биожетімділігінің негізгі механизмі әлі де анықталмағанымен, P-gp женьсенозидтердің ағып кетуіне қатысады деп есептеледі.Бұл жұмыс P-gp блокаторы верапамилді енгізу G-Rg3r және G-Rg3s пероральді биожетімділігін арттыратынын алғаш рет көрсетті.Осылайша, бұл қорытынды G-Rg3r және G-Rg3s оның ағынын реттеу үшін P-gp субстраттары ретінде әрекет ететінін көрсетеді.
Бұл жұмыс верапамилмен біріктірілген емнің өкпе обырының тышқан үлгісінде G-Rg3 ауызша биожетімділігін арттыратынын көрсетеді.Бұл нәтиже P-gp блокадасы кезінде G-Rg3-тің ішек арқылы жасушааралық тасымалдануының жоғарылауымен расталады, осылайша оның сіңуін арттырады.Caco2 жасушаларындағы талдаулар верапамилмен емдеу мембрана өткізгіштігін жақсарта отырып, G-Rg3r және G-Rg3s ағынын азайтатынын көрсетті.Янг және басқалардың зерттеуі.Зерттеулер циклоспорин Амен (басқа P-gp блокаторымен) емдеу гинсенозид Rh2 биожетімділігін бастапқы мәннен 1%20-дан 30% астамға дейін арттыратынын көрсетті.Ginsenosids K және Rg1 қосылыстары да ұқсас нәтижелер көрсетті30,31.Верапамил мен циклоспорин А бірге тағайындалғанда, Caco-2 жасушаларында К қосылысының ағуы 26,6-дан 3-тен төменге дейін айтарлықтай төмендеді, ал оның жасушаішілік деңгейі 40 есеге артты30.Верапамилдің қатысуымен егеуқұйрықтардың өкпе эпителий жасушаларында Rg1 деңгейлері жоғарылады, бұл Meng және т.б.31 көрсеткендей, женьсенозидтердің шығуында P-gp рөлін көрсетеді.Дегенмен, верапамил кейбір женьсенозидтердің (мысалы, Rg1, F1, Rh1 және Re сияқты) ағып кетуіне бірдей әсер етпеді, бұл олардың P-gp субстраттары әсер етпейтінін көрсетеді, Liang және т.б.32 .Бұл бақылау басқа тасымалдаушылардың және балама женьсенозид құрылымдарының қатысуына байланысты болуы мүмкін.
G-Rg3-тің қатерлі ісікке профилактикалық әсер ету механизмі түсініксіз.Алдыңғы зерттеулер G-Rg3 тотығу стрессін және қабынуды16,33 азайту арқылы ДНҚ зақымдануын және апоптозды болдырмайтынын көрсетті, бұл B(a)P-индукцияланған ісік пайда болуының алдын алудың негізгі механизмі болуы мүмкін.Кейбір есептер B(a)P индукциялаған генотоксичность BPDE-DNA34 түзу үшін II фаза ферменттерін модуляциялау арқылы азайтылуы мүмкін екенін көрсетеді.GST - бұл GSH-ның BPDE-мен байланысуын ынталандыру арқылы BPDE-ДНҚ қосындысының түзілуін тежейтін, осылайша B(a)P35 индукцияланған ДНҚ зақымдануын азайтатын типтік фаза II ферменті.Біздің нәтижелеріміз G-Rg3 емдеу B(a)P-индукцияланған цитотоксикалық әсерді және hEL жасушаларында BPDE-ДНҚ қосымша түзілуін төмендететінін және GST экспрессиясын және in vitro белсенділігін қалпына келтіретінін көрсетеді.Дегенмен, бұл әсерлер Nrf2 болмаған кезде болмады, бұл G-Rg3 Nrf2 жолы арқылы цитопротекторлық әсерлерді тудырады деп болжайды.Nrf2 – ксенобиотиктердің клиренсіне ықпал ететін II фазадағы детоксикация ферменттері үшін негізгі транскрипция факторы36.Nrf2 жолын белсендіру цитопротекцияны тудырады және тіндердің зақымдануын азайтады37.Сонымен қатар, бірнеше есептер Nrf2-нің канцерогенездегі ісіктерді басатын рөлін қолдады38.Біздің зерттеуіміз G-Rg3 арқылы Nrf2 жолын индукциялау B(a)P-индукцияланған генотоксиктікте маңызды реттеуші рөл атқаратынын, II фаза ферменттерін белсендіру арқылы B(a)P детоксикациясын тудыратынын көрсетеді, осылайша ісік пайда болу процесін тежейді.
Біздің жұмысымыз G-Rg3 женьсенозидінің маңызды қатысуы арқылы тышқандардағы B(a)P-индукцияланған өкпе обырының алдын алудағы қызыл женьшеньдің әлеуетін ашады.Бұл молекуланың ауызша биожетімділігінің төмендігі оның клиникалық қолданылуын қиындатады.Дегенмен, бұл зерттеу G-Rg3 P-gp субстраты екенін және P-gp тежегішін енгізу G-Rg3 биожетімділігін in vitro және in vivo жоғарылататынын бірінші рет көрсетеді.G-Rg3 Nrf2 жолын реттеу арқылы B(a)P-индукцияланған цитоуыттылықты төмендетеді, бұл оның алдын алу функциясының әлеуетті механизмі болуы мүмкін.Біздің зерттеуіміз өкпе обырының алдын алу және емдеу үшін гинсенозид G-Rg3 әлеуетін растайды.
Алты апталық аналық A/J тышқандары (20 ± 1 г) және 7 апталық еркек Вистар егеуқұйрықтары (250 ± 20 г) Джексон зертханасынан (Бар Харбор, АҚШ) және Ухань зоология институтынан алынды.Университет (Ухань, Қытай).Қытайлық типтегі мәдениеттерді жинау орталығы (Ухань, Қытай) бізге Caco-2 және hEL жасушаларын берді.Сигма-Олдрих (Сент-Луис, АҚШ) B(a)P және трикаприннің көзі болып табылады.Тазартылған женьсенозидтер G-Rg3r және G-Rg3s, диметил сульфоксиді (DMSO), CellTiter-96 пролиферациясын талдау жинағы (MTS), верапамил, минималды маңызды орта (MEM) және ұрықтың ірі қара сарысуы (FBS) Chengdu Must Bio-Technology компаниясынан сатып алынды. .Co., Ltd.(Чэнду, Қытай).QIAamp ДНҚ шағын жинағы және BPDE-DNA қосымша ELISA жинағы Qiagen (Стэнфорд, Калифорния, АҚШ) және Cell Biolabs (Сан-Диего, CA, АҚШ) компанияларынан сатып алынды.GST белсенділігін талдау жинағы және жалпы ақуызды талдау жинағы (стандартты BCA әдісі) Solarbio (Бейжің, Қытай) компаниясынан сатып алынды.Барлық қызыл женьшень сығындылары Мингю зертханасында 7 сақталады. Гонконг баптист университеті (Гонконг, Қытай) және Кореяның қатерлі ісік орталығы (Сеул, Корея) CRG сығындысының және әртүрлі корей шыққан қызыл женьшень сығындыларының коммерциялық көздері болып табылады (соның ішінде KRGA, KRGB). және KRGC).Қызыл женьшень 6 жасар жаңа женьшеньдің тамырынан жасалады.Қызыл женьшень сығындысы женьшеньді үш рет сумен жуу, содан кейін сулы сығындыны концентрлеу және ең соңында женьшень сығындысының ұнтағын алу үшін төмен температурада кептіру арқылы алынады.Антиденелер (анти-Nrf2, анти-GST және β-актин), желкек пероксидазасымен конъюгацияланған қоянға қарсы иммуноглобулин G (IgG), трансфекциялық реагент, бақылау siRNA және Nrf2 siRNA Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) компаниясынан сатып алынды. .), АҚШ).
Caco2 және hEL жасушалары 5% CO2 ылғалдандырылған атмосферада 37 °C температурада 10% FBS бар MEM бар 100 мм2 жасуша өсіретін ыдыстарда өсірілді.Емдеу жағдайларының әсерін анықтау үшін hEL жасушалары 48 сағат бойы MEM-де әртүрлі B(a)P және G-Rg3 концентрациясы бар инкубацияланды.Клеткасыз сығындыларды дайындау үшін жасушаларды одан әрі талдауға немесе жинауға болады.
Барлық эксперименттерді Хуажун ғылым және технология университетінің Тунджи медициналық колледжінің эксперименталды жануарлар этикасы комитеті мақұлдады (Бекіту № 2019; тіркеу № 4587TH).Барлық эксперименттер тиісті нұсқаулар мен ережелерге сәйкес орындалды және зерттеу Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE) нұсқауларына сәйкес жүргізілді.Сегіз апталық A/J тышқандарына алғаш рет трикаприн ерітіндісінде (100 мг/кг, 0,2 мл) В(а)Р іш қуысына енгізілді.Бір аптадан кейін тышқандар кездейсоқ бақылау топтарына және әртүрлі емдеу топтарына, әр топта 15 тышқанға бөлініп, күніне бір рет гаваж жасалды.20 апталық емдеуден кейін жануарлар CO2 асфиксиясымен құрбан болды.Өкпе жиналып, 24 сағат бойы бекітілді.Үстіңгі ісіктердің саны және жеке ісік өлшемдері әр өкпе үшін диссекциялық микроскоп астында сандық түрде анықталды.Ісік көлемін бағалау (V) келесі өрнек арқылы есептелді: V (мм3) = 4/3πr3, мұндағы r – ісік диаметрі.Тышқандардың өкпесіндегі барлық ісік көлемінің таза қосындысы ісіктің жалпы көлемін, ал әрбір топтағы орташа жалпы ісік көлемі ісік жүктемесін көрсетті.UPLC-MS/MS анықтау үшін толық қан мен ішек үлгілері жиналып, -80°C температурада сақталды.Сарысу жиналды және аланинаминотрансфераза (ALT) және бауыр мен бүйрек қызметін бағалау үшін қан сарысуындағы креатинин (Cr) деңгейлерін талдау үшін автоматтандырылған химиялық анализатор пайдаланылды.
Жиналған үлгілер салқын қоймадан шығарылды, ерітілді, өлшенеді және жоғарыда сипатталғандай түтіктерге салынды.Бұған 0,8 мл метанол ерітіндісіндегі 0,5 мкм флоризин (ішкі стандарт) қосылды.Содан кейін тін Tissue-Tearor көмегімен гомогенизацияланды және гомогенат кейіннен 1,5 мл микроцентрифуга түтігіне ауыстырылды.Қоспаны 15 минут бойы 15500 айн/мин центрифугалады.1,0 мл үстіңгі затты алып тастағаннан кейін азотпен кептіреді.Қалпына келтіру үшін екі жүз микролитр метанол жұмсалды.Қан бір сызықта жиналады және өңделеді және барлық өлшемдер үшін анықтамалық ретінде пайдаланылады.
24 шұңқырлы Transwell пластиналары верапамилді қосу арқылы G-Rg3 тасымалдануының әлеуетті күшеюін бағалау үшін ұңғымаға 1,0 × 105 Caco-2 жасушаларымен себілді.3 апталық культурадан кейін жасушалар HBSS-пен жуылды және 37°C алдын ала инкубацияланды.400 мкл 10 мкм G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s немесе 50 немесе 100 мкм верапамил қоспасы) моноқабаттың базотерапал немесе апикальды жағына енгізілді, ал екіншісіне 600 мкл HBSS ерітіндісі қосылды. жағы.Белгіленген уақытта (0, 15, 30, 45, 60, 90 және 120 минут) 100 мкл қоректік ортаны жинаңыз және осы көлемді толтыру үшін 100 мкл HBSS қосыңыз.Үлгілер UPLC-MS/MS арқылы анықталғанға дейін -4 °C температурада сақталды.Papp = dQ/(dT × A × C0) өрнегі көрінетін бір бағытты апикальды және базотерапиялық өткізгіштіктің сандық мәнін анықтау үшін қолданылады және керісінше (тиісінше Pa-b және Pb-a);dQ/dT – концентрацияның өзгеруі, A (0,6 см2) – моноқабаттың бетінің ауданы, ал С0 – бастапқы донор концентрациясы.Эффлюкс коэффициенті зерттелетін препараттың ағу жылдамдығын білдіретін Pb-a/Pa-b ретінде есептеледі.
Wistar аталық егеуқұйрықтарды 24 сағат бойы аш ұстады, тек су ішіп, 3,5% пентобарбитал ерітіндісін көктамыр ішіне енгізу арқылы жансыздандырды.Интубацияланған силикон түтікшенің он екі елі ішектің соңы кіреберіс және шажырқайдың соңы шығатын жері болады.0,1 мл/мин ағын жылдамдығында изотоникалық HBSS жүйесінде 10 мкМ G-Rg3r немесе G-Rg3s бар кірісті айдау үшін перистальтикалық сорғыны пайдаланыңыз.Верапамилдің әсері 10 мкм G-Rg3r немесе G-Rg3s-ге 50 мкм немесе 100 мкм қосылыс қосу арқылы бағаланды.UPLC-MS/MS перфузия басталғаннан кейін 60, 90, 120 және 150 минут уақыт нүктелерінде жиналған перфузиялық сығындыларда орындалды.Сіңу пайызы % сіңіру = (1 – Cout/Cin) × 100% формуласымен сандық түрде анықталады;шығыс пен кірістегі G-Rg3 концентрациясы сәйкесінше Cout және Cin арқылы өрнектеледі.
hEL жасушалары әр ұңғымаға 1 × 104 ұяшық тығыздығындағы 96 шұңқырлы пластиналарға егілді және B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 мкм) немесе DMSO-да ерітілген G-Rg3 өңделген. .Содан кейін препараттар қоректік ортамен әртүрлі концентрацияларға (0, 1, 2, 5, 10, 20 мкм) дейін 48 сағат бойы сұйылтылған.Коммерциялық қолжетімді MTS талдау жинағын пайдаланып, жасушалар стандартты хаттамаға ұшырап, содан кейін 490 нм микропластинаны оқу құралы арқылы өлшенді.B(a)P (10 μM) және G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) бірге өңделген топтардың жасуша өміршеңдігі деңгейі жоғарыда аталған әдіске сәйкес бағаланды және өңделмеген топпен салыстырылды.
hEL жасушалары 1 × 105 ұяшық/ұңғыма тығыздығындағы 6 шұңқырлы пластиналарға егілді және 10 мкм G-Rg3 бар немесе жоқ болғанда 10 мкМБ(a)P өңделеді.48 сағаттық өңдеуден кейін өндірушінің хаттамасына сәйкес QIAamp DNA Mini Kit көмегімен hEL жасушаларынан ДНҚ алынды.BPDE-ДНҚ қосындыларының түзілуі BPDE-DNA аддуктінің ELISA жинағының көмегімен анықталды.BPDE-ДНҚ қосындысының салыстырмалы деңгейлері 450 нм абсорбентті өлшеу арқылы микропластинаны оқу құралы арқылы өлшенді.
hEL жасушалары 96 шұңқырлы пластиналарға әр ұңғымаға 1 × 104 жасуша тығыздығында егілді және 48 сағат бойы 10 мкм G-Rg3 жоқ немесе бар болған кезде 10 мкМБ(a)P өңделеді.GST белсенділігі өндірушінің хаттамасына сәйкес коммерциялық GST белсенділігін талдау жинағы арқылы өлшенді.Салыстырмалы GST белсендіру микропластинаны оқу құралы арқылы 450 нм абсорбент арқылы өлшенді.
hEL жасушалары мұздай салқын PBS көмегімен жуылды, содан кейін құрамында протеаза ингибиторлары мен фосфатаза тежегіштері бар радиоиммунды преципитация талдау буферінің көмегімен лизиске ұшырады.Протеиннің жалпы талдау жинағын пайдалана отырып, ақуыздың мөлшерін анықтағаннан кейін әрбір үлгідегі 30 мкг ақуыз 12% SDS-PAGE арқылы бөлініп, электрофорез арқылы PVDF мембранасына ауыстырылды.Мембраналар 5% майсыздандырылған сүтпен бітеліп, түнде 4°C температурада бастапқы антиденелермен инкубацияланды.Желкек пероксидазасымен конъюгацияланған қайталама антиденелермен инкубациялаудан кейін байланыстыру сигналын визуализациялау үшін күшейтілген хемилюминесценция реагенттері қосылды.Әрбір ақуыз жолағының қарқындылығы ImageJ бағдарламалық құралының көмегімен сандық түрде анықталды.
Орташа ± стандартты ауытқу ретінде көрсетілген барлық деректерді талдау үшін GraphPad Prism 7.0 бағдарламалық құралы пайдаланылды.Емдеу топтары арасындағы вариация Стьюденттің t сынағы немесе дисперсияның бір жақты талдауы арқылы бағаланды, статистикалық маңыздылықты көрсететін P мәні <0,05.
Осы зерттеу барысында алынған немесе талданған барлық деректер осы жарияланған мақалада және қосымша ақпарат файлдарында қамтылған.
Торре, LA, Siegel, RL және Jemal, A. Өкпе ісігі статистикасы.үстеу.Жарамдылық мерзімі өткен.дәрі.биология.893, 1–19 (2016 ж.).
Хехт, С. Темекі канцерогендері, олардың биомаркерлері және темекі тудыратын қатерлі ісік.Нат.Қатерлі ісік дінінің қызметкері.3, 733–744 (2003).
Филлипс, DH және Venitt, S. Темекі түтінінің әсерінен пайда болатын адам тіндеріндегі ДНҚ және ақуыз қосындылары.интернационалдық.J. Қатерлі ісік.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA және Yu M. Houttuynia cordata және силибининнің A/J тышқандарындағы бензо (а) пирен тудырған өкпе ісіктерінің пайда болуына әсері.Рак 7, 1053–1057 (2005).
Тан, В. және т.б.Қытайлық дәрілік материалдардан алынған ісікке қарсы табиғи өнім.жақ.дәрі.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Полифенон E, қызыл женьшень және рапамициннің A/J тышқандарындағы бензо(а)пирен тудырған өкпе ісіктерінің тиімділігі.Рак 8, 52–58 (2006).
Ван, CZ, Андерсон, С., Ду, В., Ол, TS және Юань, К.С. Қызыл, қатерлі ісік терапиясына қатысу.жақ.Дж. Натт.дәрі.14, 7–16 (2016 ж.).
Ли, TS, Mazza, G., Cottrell, AS және Gao, L. Американдық женьшень тамыры мен жапырақтарында Ginsenosides.Дж.Агрич.Тамақтану химиясы.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA және Yuan KS Женьшень фармакологиясы: көптеген компоненттер және көптеген әсерлер.биохимия.фармакология.58, 1685–1693 (1999).
Жіберу уақыты: 17 қыркүйек 2023 ж