សូមអរគុណសម្រាប់ការទស្សនា Nature.com ។កំណែរបស់កម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលអ្នកកំពុងប្រើមានកម្រិតគាំទ្រ CSS ។ដើម្បីទទួលបានលទ្ធផលល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យប្រើកំណែថ្មីនៃកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតរបស់អ្នក (ឬបិទរបៀបភាពឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ក្នុងពេលនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្រជាបន្ត យើងកំពុងបង្ហាញគេហទំព័រដោយមិនប្រើរចនាប័ទ្ម ឬ JavaScript។
យិនស៊ិនក្រហមត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងឱសថបុរាណអាស៊ីរាប់រយឆ្នាំមកហើយ។ក្នុងការសិក្សានេះ យើងបានវាយតម្លៃសមត្ថភាពនៃយិនស៊ិនក្រហមបួនប្រភេទ (យិនស៊ិនក្រហមចិន យិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ A យិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ B និងយិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ C) ដែលដាំដុះនៅក្នុងតំបន់ផ្សេងៗគ្នា ដើម្បីទប់ស្កាត់ការបង្កើត និងការលូតលាស់នៃសួតដែលបង្កដោយសារធាតុបង្កមហារីក។ ដុំសាច់។ការធ្វើតេស្ត benzo(a)pyrene (B(a)P) ត្រូវបានធ្វើឡើងលើសត្វកណ្ដុរ A/J ហើយយិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ B ត្រូវបានរកឃើញថាមានប្រសិទ្ធភាពបំផុតក្នុងការកាត់បន្ថយបន្ទុកដុំសាច់ក្នុងចំណោមពូជយិនស៊ិនក្រហមទាំងបួន។លើសពីនេះទៀត យើងបានវិភាគមាតិកានៃ ginsenosides ផ្សេងៗ (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 និង Rg5) នៅក្នុងចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហមចំនួនបួន ហើយបានរកឃើញថា យិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ B មាន។ កម្រិតខ្ពស់បំផុតនៃ ginsenoside Rg3 (G-Rg3) ដែលបង្ហាញថា G-Rg3 អាចដើរតួយ៉ាងសំខាន់ក្នុងប្រសិទ្ធភាពព្យាបាលរបស់វា។ការងារនេះបង្ហាញថា G-Rg3 មានជីវឧស្ម័នទាប។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយនៅពេលដែល G-Rg3 ត្រូវបានគ្រប់គ្រងជាមួយ P-gp inhibitor verapamil ការហូរចេញនៃ G-Rg3 ទៅក្នុងកោសិកា Caco-2 ត្រូវបានថយចុះ អត្រានៃការស្រូបយកពោះវៀនរបស់ G-Rg3 ត្រូវបានកើនឡើងនៅក្នុងគំរូសត្វកណ្តុរ និង G-Rg3 ។ ត្រូវបានកើនឡើង។នៅក្នុងកោសិកា Caco-2 លំហូរចេញនៃ Rg3 ថយចុះ ហើយកម្រិតនៃកំហាប់ Rg3 ថយចុះ។G-Rg3 ត្រូវបានកើនឡើងនៅក្នុងពោះវៀន និងប្លាស្មា ហើយសមត្ថភាពរបស់វាក្នុងការទប់ស្កាត់ដុំសាច់ក៏ត្រូវបានពង្រឹងផងដែរនៅក្នុងគំរូកណ្តុរនៃ B(a) P-induced tumorigenesis ។យើងក៏បានរកឃើញថា G-Rg3 បានកាត់បន្ថយ B(a) P-induced cytotoxicity និងការបង្កើត DNA adduct នៅក្នុងកោសិកាសួតរបស់មនុស្ស ហើយបានស្ដារឡើងវិញនូវការបញ្ចេញមតិ និងសកម្មភាពនៃអង់ស៊ីមដំណាក់កាលទី II តាមរយៈផ្លូវ Nrf2 ដែលអាចទាក់ទងទៅនឹងយន្តការសក្តានុពលនៃសកម្មភាព។ ការទប់ស្កាត់ G -Rg3 ។.អំពីការកើតឡើងនៃដុំសាច់សួត។ការសិក្សារបស់យើងបង្ហាញពីតួនាទីដ៏មានសក្តានុពលសម្រាប់ G-Rg3 ក្នុងការកំណត់គោលដៅលើដុំសាច់ក្នុងសួតនៅក្នុងគំរូកណ្តុរ។លទ្ធភាពនៃជីវគីមីតាមមាត់របស់ ginsenoside នេះត្រូវបានពង្រឹងដោយកំណត់គោលដៅ P-glycoprotein ដែលអនុញ្ញាតឱ្យម៉ូលេគុលបញ្ចេញឥទ្ធិពលប្រឆាំងមហារីក។
ប្រភេទមហារីកសួតទូទៅបំផុតគឺមហារីកសួតមិនមែនកោសិកាតូច (NSCLC) ដែលជាមូលហេតុចម្បងមួយនៃការស្លាប់ដោយសារជំងឺមហារីកនៅក្នុងប្រទេសចិន និងអាមេរិកខាងជើង1,2។កត្តាចម្បងដែលបង្កើនហានិភ័យនៃការវិវត្តទៅជាជំងឺមហារីកសួតដែលមិនមែនជាកោសិកាតូចគឺការជក់បារី។ផ្សែងបារីមានផ្ទុកសារធាតុបង្កមហារីកច្រើនជាង 60 រួមទាំង benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrosamines និងអ៊ីសូតូបវិទ្យុសកម្មពីការពុកផុយនៃ radon.3 Polycyclic aromatic hydrocarbons B(a)P គឺជាមូលហេតុចម្បងនៃការពុលនៅក្នុងបារី។ ជក់បារី។នៅពេលប៉ះពាល់នឹង B(a)P, cytochrome P450 បំប្លែងវាទៅជា B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE) ដែលមានប្រតិកម្មជាមួយ DNA ដើម្បីបង្កើតជា BPDE-DNA adduct 4. បន្ថែមពីលើនេះទៀត សារធាតុទាំងនេះ adducts ជំរុញឱ្យមានដុំសាច់មហារីកសួតចំពោះសត្វកណ្តុរដែលមានដំណាក់កាលដុំសាច់ និងរោគវិទ្យាស្រដៀងនឹងដុំសាច់សួតរបស់មនុស្ស 5.លក្ខណៈពិសេសនេះធ្វើឱ្យគំរូមហារីកសួតដែលបណ្ដាលមកពី B(a)P ជាប្រព័ន្ធសមរម្យសម្រាប់ការវាយតម្លៃសមាសធាតុជាមួយនឹងលក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងនឹងជំងឺមហារីកដែលអាចកើតមាន។
យុទ្ធសាស្ត្រមួយដែលអាចធ្វើទៅបានដើម្បីការពារការវិវត្តនៃជំងឺមហារីកសួតនៅក្នុងក្រុមដែលមានហានិភ័យខ្ពស់ ជាពិសេសអ្នកជក់បារី គឺការប្រើប្រាស់ភ្នាក់ងារការពារគីមីដើម្បីទប់ស្កាត់ការវិវត្តនៃដំបៅ neoplastic intraepithelial ហើយដោយហេតុនេះការពារការវិវត្តជាបន្តបន្ទាប់របស់ពួកគេទៅជាសាហាវ។ការសិក្សាលើសត្វបង្ហាញថា ភ្នាក់ងារការពារគីមីផ្សេងៗមានប្រសិទ្ធភាព ៦.របាយការណ៍មុនរបស់យើងទី 7 បានលើកឡើងពីប្រសិទ្ធភាពការពារដ៏ល្អនៃយិនស៊ិនក្រហមលើជំងឺមហារីកសួត។ឱសថនេះត្រូវបានគេប្រើប្រាស់អស់ជាច្រើនសតវត្សមកហើយនៅក្នុងឱសថបុរាណអាស៊ី ដើម្បីពន្យារអាយុជីវិត និងសុខភាព ហើយត្រូវបានគេកត់ត្រាថាមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងដុំសាច់8.
កត្តាសកម្មនៃយិនស៊ិនគឺ ginsenoside ដែលត្រូវបានប្រើជាសមាសធាតុសម្គាល់ដើម្បីវាយតម្លៃគុណភាពនៃសារធាតុចម្រាញ់ពីយិនស៊ិន។ការវិភាគបរិមាណនៃសារធាតុចម្រាញ់ពីយិនស៊ិនឆៅ ជាធម្មតាពាក់ព័ន្ធនឹងការប្រើប្រាស់ ginsenosides ជាច្រើន រួមមាន RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, និង Rc9,10។Ginsenosides មានការប្រើប្រាស់តិចតួចក្នុងការព្យាបាលដោយសារតែជីវភាពមាត់ខ្សោយខ្លាំងរបស់ពួកគេ ១១.ទោះបីជាយន្តការសម្រាប់ជីវភាពក្រីក្រនេះមិនមានភាពច្បាស់លាស់ក៏ដោយ ការហូរចេញនៃ ginsenosides ដែលបណ្តាលមកពី P-glycoprotein (P-gp)12 អាចជាមូលហេតុ។P-gp គឺជាអ្នកដឹកជញ្ជូន efflux ដ៏សំខាន់បំផុតមួយនៅក្នុង ATP-binding cassette transporter superfamily ដែលប្រើប្រាស់ថាមពលនៃ ATP hydrolysis ដើម្បីបញ្ចេញសារធាតុ intracellular ទៅក្នុងបរិយាកាសខាងក្រៅ។ឧបករណ៍ដឹកជញ្ជូន P-gp ជាធម្មតាត្រូវបានចែកចាយយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងពោះវៀន តម្រងនោម ថ្លើម និងរបាំងឈាម-ខួរក្បាល 13.P-gp ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការស្រូបចូលពោះវៀន ហើយការទប់ស្កាត់ P-gp បង្កើនការស្រូបតាមមាត់ និងលទ្ធភាពទទួលបានថ្នាំប្រឆាំងមហារីកមួយចំនួន 12,14 ។ឧទាហរណ៏នៃថ្នាំ inhibitors ដែលត្រូវបានប្រើពីមុននៅក្នុងអក្សរសិល្ប៍គឺ verapamil និង cyclosporine A15 ។ការងារនេះពាក់ព័ន្ធនឹងការបង្កើតប្រព័ន្ធកណ្តុរសម្រាប់សិក្សាជំងឺមហារីកសួតដែលបង្កដោយ B(a) P-induced ដើម្បីវាយតម្លៃសមត្ថភាពនៃសារធាតុចម្រាញ់ពីយិនស៊ិនក្រហមផ្សេងៗគ្នាពីប្រទេសចិន និងកូរ៉េដើម្បីជះឥទ្ធិពលដល់ជំងឺសាហាវ។ការដកស្រង់ត្រូវបានវិភាគជាលក្ខណៈបុគ្គលដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណ ginsenosides ជាក់លាក់ដែលអាចប៉ះពាល់ដល់ការបង្កើតមហារីក។បន្ទាប់មក Verapamil ត្រូវបានគេប្រើដើម្បីកំណត់គោលដៅ P-gp និងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវលទ្ធភាពនៃជីវៈផ្ទាល់មាត់ និងប្រសិទ្ធភាពព្យាបាលនៃ ginsenosides គោលដៅមហារីក។
យន្តការដែលយិនស៊ិន saponins បញ្ចេញឥទ្ធិពលព្យាបាលលើការបង្កមហារីកនៅមិនទាន់ច្បាស់នៅឡើយ។ការស្រាវជ្រាវបានបង្ហាញថា ginsenosides ជាច្រើនអាចកាត់បន្ថយការខូចខាត DNA ដែលបណ្តាលមកពីសារធាតុបង្កមហារីក ដោយកាត់បន្ថយភាពតានតឹងអុកស៊ីតកម្ម និងធ្វើឱ្យអង់ស៊ីមបន្សាបជាតិពុលដំណាក់កាលទី 2 សកម្ម ដោយហេតុនេះការពារការបំផ្លាញកោសិកា។Glutathione S-transferase (GST) គឺជាអង់ស៊ីមដំណាក់កាលទី 2 ធម្មតាដែលត្រូវបានទាមទារដើម្បីកាត់បន្ថយការខូចខាត DNA ដែលបណ្តាលមកពីសារធាតុបង្កមហារីក 17 ។កត្តាដែលទាក់ទង erythroid 2 (Nrf2) គឺជាកត្តាចម្លងដ៏សំខាន់មួយ ដែលគ្រប់គ្រងដំណើរការ redox homeostasis និងធ្វើឱ្យសកម្មនៃការបញ្ចេញអង់ស៊ីមដំណាក់កាលទី 2 និងការឆ្លើយតបប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្ម cytoprotective 18 ។ការសិក្សារបស់យើងក៏បានពិនិត្យលើផលប៉ះពាល់នៃ ginsenosides ដែលបានកំណត់អត្តសញ្ញាណលើការកាត់បន្ថយ B(a) P-induced cytotoxicity និង BPDE-DNA adduct ក៏ដូចជាការជំរុញអង់ស៊ីមដំណាក់កាលទី 2 ដោយការកែប្រែផ្លូវ Nrf2 នៅក្នុងកោសិកាសួតធម្មតា។
ការបង្កើតគំរូកណ្ដុរនៃជំងឺមហារីកដែលបណ្ដាលមកពី B(a)P គឺស្របនឹងការងារមុន 5.រូបភាពទី 1A បង្ហាញពីការរចនាពិសោធន៍នៃការព្យាបាលរយៈពេល 20 សប្តាហ៍នៃគំរូមហារីកកណ្ដុរដែលបង្កឡើងដោយ B(a)P, ទឹក (ការគ្រប់គ្រង), ចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហមចិន (CRG), ចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ A (KRGA) និងក្រហមកូរ៉េ។ យិនស៊ិនស្រង់ B (KRGB) និង Korean Red Ginseng Extract C (KRGC) ។បន្ទាប់ពីការព្យាបាលយិនស៊ិនក្រហមរយៈពេល 20 សប្តាហ៍ សត្វកណ្ដុរត្រូវបានលះបង់ដោយការដកដង្ហើមចេញ CO2 ។រូបភាពទី 1B បង្ហាញពីដុំសាច់សួតម៉ាក្រូស្កូបនៅក្នុងសត្វដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយយិនស៊ិនក្រហមប្រភេទផ្សេងៗគ្នា ហើយរូបភាពទី 1C បង្ហាញពីមីក្រូក្រាហ្វពន្លឺតំណាងនៃគំរូដុំសាច់។បន្ទុកដុំសាច់នៃសត្វដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ KRGB (1.5 ± 0.35) គឺទាបជាងសត្វគ្រប់គ្រង (0.82 ± 0.2, P < 0.05) ដូចបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1D ។កម្រិតមធ្យមនៃការទប់ស្កាត់ការផ្ទុកដុំសាច់គឺ 45% ។ចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហមផ្សេងទៀតដែលបានធ្វើតេស្តមិនបង្ហាញពីការផ្លាស់ប្តូរយ៉ាងសំខាន់ក្នុងបន្ទុកដុំសាច់ (P> 0.05) ។គ្មានផលប៉ះពាល់ជាក់ស្តែងត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងគំរូកណ្តុរក្នុងអំឡុងពេល 20 សប្តាហ៍នៃការព្យាបាលយិនស៊ិនក្រហម រួមទាំងមិនមានការផ្លាស់ប្តូរទម្ងន់ខ្លួន (ទិន្នន័យមិនបានបង្ហាញ) និងគ្មានការពុលថ្លើម ឬតម្រងនោម (រូបភាព 1E, F)។
ចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហម ព្យាបាលការវិវត្តនៃដុំសាច់ក្នុងសួតក្នុងសត្វកណ្តុរ A/J ។(ក) ការរចនាពិសោធន៍។(ខ) ដុំសាច់សួតធំនៅក្នុងគំរូកណ្តុរ។ដុំសាច់ត្រូវបានចង្អុលបង្ហាញដោយព្រួញ។ក៖ ក្រុមយិនស៊ិនក្រហមចិន។ខ៖ ក្រុម A នៃយិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ។គ៖ ក្រុមយិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ B. ឃ៖ ក្រុមយិនស៊ិនក្រហមកូរ៉េ C. ឃ៖ ក្រុមត្រួតពិនិត្យ។(គ) មីក្រូក្រាហ្វពន្លឺបង្ហាញពីដុំសាច់សួត។ការពង្រីក: 100. ខ: 400. (ឃ) ការផ្ទុកដុំសាច់នៅក្នុងក្រុមចម្រាញ់យិនស៊ិនក្រហម។(ង) កម្រិតប្លាស្មានៃអង់ស៊ីមថ្លើម ALT ។(F) កម្រិតប្លាស្មានៃអង់ស៊ីមតំរងនោម Cr.ទិន្នន័យត្រូវបានបង្ហាញជាគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។*P <0.05.
ចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហមដែលកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុងការសិក្សានេះត្រូវបានវិភាគដោយអង្គធាតុរាវ chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) ដើម្បីកំណត់បរិមាណ ginsenosides ខាងក្រោម៖ Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3 , Rh2, F1, Rk1 និង Rg5 ។លក្ខខណ្ឌ UPLC និង MS ដែលប្រើដើម្បីវាស់វែងអ្នកវិភាគត្រូវបានពិពណ៌នានៅក្នុងរបាយការណ៍មុន 19 ។UPLC-MS/MS chromatograms នៃសារធាតុចម្រាញ់ពីយិនស៊ិនក្រហមចំនួនបួនត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាព 2A។មានភាពខុសប្លែកគ្នាយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងមាតិកា ginsenoside សរុប ជាមួយនឹងមាតិកា ginsenoside សរុបខ្ពស់បំផុតនៅក្នុង CRG (590.27 ± 41.28 μmol/L) (រូបភាព 2B) ។នៅពេលវាយតម្លៃ ginsenosides បុគ្គល (រូបភាព 2C) KRGB បានបង្ហាញពីកម្រិតខ្ពស់បំផុតនៃ G-Rg3 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង ginsenosides ផ្សេងទៀត (58.33 ± 3.81 μmol/L សម្រាប់ G-Rg3s និង 41.56 ± 2.88 μmol/L សម្រាប់ G -Rg3r) ។ប្រភេទយិនស៊ិនក្រហម (P<0.001)។G-Rg3 កើតឡើងជាគូនៃ stereoisomers G-Rg3r និង G-Rg3s ដែលខុសគ្នានៅក្នុងទីតាំងនៃក្រុម hydroxyl នៅកាបូន 20 (រូបភាព 2D) ។លទ្ធផលបង្ហាញថា G-Rg3r ឬ G-Rg3 អាចមានសក្តានុពលប្រឆាំងមហារីកដ៏សំខាន់នៅក្នុងគំរូកណ្តុរមហារីកដែលបណ្ដាលមកពី B(a)P ។
ខ្លឹមសារនៃ ginsenosides ក្នុងចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហមផ្សេងៗ។(ក) UPLC-MS/MS chromatograms នៃសារធាតុចម្រាញ់ពីយិនស៊ិនក្រហមចំនួនបួន។(ខ) ការប៉ាន់ប្រមាណនៃមាតិកា ginsenoside សរុបនៅក្នុងការដកស្រង់ដែលបានចង្អុលបង្ហាញ។(គ) ការរកឃើញសារធាតុ ginsenosides នីមួយៗនៅក្នុងសារធាតុចម្រាញ់ដែលមានស្លាក។(ឃ) រចនាសម្ព័នរបស់ ginsenoside stereoisomers G-Rg3r និង G-Rg3s ។ទិន្នន័យត្រូវបានបង្ហាញជាគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារនៃការកំណត់បីដង។***P <0.001.
ការសិក្សា UPLC-MS/MS ទាមទារបរិមាណ ginsenosides ក្នុងសំណាកពោះវៀន និងឈាម បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 20 សប្តាហ៍។ការព្យាបាលជាមួយ KRGB បានបង្ហាញវត្តមានត្រឹមតែ 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 ក្នុងឈាម។គ្មានសារធាតុ ginsenosides ដែលនៅសេសសល់ត្រូវបានគេរកឃើញទេ ដែលបង្ហាញពីលទ្ធភាពទទួលបានជីវសាស្រ្តមិនល្អនៅក្នុងមាត់ ដូច្នេះហើយកាត់បន្ថយការប៉ះពាល់ជាមួយ ginsenosides ទាំងនេះ។
ខ្សែកោសិកាពោះវៀនធំ adenocarcinoma Caco-2 គឺមានលក្ខណៈសរីរវិទ្យា និងជីវគីមីស្រដៀងទៅនឹងកោសិកា epithelial ពោះវៀនរបស់មនុស្ស ដោយបង្ហាញពីអត្ថប្រយោជន៍របស់វាក្នុងការវាយតម្លៃការដឹកជញ្ជូន enterocyte ឆ្លងកាត់របាំង epithelial ពោះវៀន។ការវិភាគនេះត្រូវបានផ្អែកលើការសិក្សាមុន 20 ។រូបភាព 3A,B,C,D,E,F បង្ហាញរូបភាពតំណាងនៃការដឹកជញ្ជូនឆ្លងកាត់កោសិកានៃ G-Rg3r និង G-Rg3 ដោយប្រើគំរូ Caco-2 monolayer ។ការដឹកជញ្ជូនឆ្លងកាត់កោសិកានៃ G-Rg3r ឬ G-Rg3 ឆ្លងកាត់ Caco-2 monolayers ពី basolateral ទៅ apical side (Pb-a) គឺខ្ពស់ជាងយ៉ាងខ្លាំងពី apical ទៅ basolateral (Pa-b) ។សម្រាប់ G-Rg3r តម្លៃមធ្យម Pa-b គឺ 0.38 ± 0.06 ដែលកើនឡើងដល់ 0.73 ± 0.06 បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយ 50 μmol/L verapamil និងដល់ 1.14 ± 0.09 បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយ 100 μmol/L verapamil (p < 0.01 និង រូបភាពទី 2) ។៣ ក)។ការសង្កេតសម្រាប់ G-Rg3 បានធ្វើតាមគំរូស្រដៀងគ្នា (រូបភាពទី 3B) ហើយលទ្ធផលបានបង្ហាញថាការព្យាបាលដោយ verapamil បានបង្កើនការដឹកជញ្ជូន G-Rg3r និង G-Rg3 ។ការព្យាបាល Verapamil ក៏បណ្តាលឱ្យមានការថយចុះគួរឱ្យកត់សម្គាល់នូវសមាមាត្រនៃការបញ្ចេញទឹករំអិលជាមធ្យម Pb-a និង G-Rg3r និង G-Rg3s (រូបភាព 3C, D, E, F) ដែលបង្ហាញថាការព្យាបាល verapamil កាត់បន្ថយមាតិកា ginsenoside នៅក្នុងកោសិកា Caco-2 efflux ។.
ការដឹកជញ្ជូនឆ្លងកាត់កោសិកានៃ G-Rg3 នៅក្នុង monolayers Caco-2 និងការស្រូបចូលពោះវៀនក្នុងការវិភាគការបំប្លែងរបស់កណ្តុរ។(ក) តម្លៃ Pa-b នៃក្រុម G-Rg3r ក្នុង Caco-2 monolayer ។(ខ) តម្លៃ Pa-b នៃក្រុម G-Rg3s ក្នុង Caco-2 monolayer ។(C) តម្លៃ Pb នៃក្រុម G-Rg3r ក្នុង Caco-2 monolayer ។(ឃ) តម្លៃ Pb នៃក្រុម G-Rg3s ក្នុង Caco-2 monolayer ។(ង) សមាមាត្រទិន្នផលនៃក្រុម G-Rg3r ក្នុង Caco-2 monolayer ។(F) សមាមាត្រទិន្នផលនៃក្រុម G-Rg3 នៅក្នុង monolayer Caco-2 ។(G) ភាគរយនៃការស្រូបចូលពោះវៀនរបស់ G-Rg3r ក្នុងការធ្វើតេស្ត perfusion នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ។(H) ភាគរយនៃការស្រូបចូលពោះវៀនរបស់ G-Rg3 ក្នុងការធ្វើតេស្ត perfusion នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ។ភាពជ្រាបចូល និងការស្រូបចូលត្រូវបានប្រៀបធៀបដោយគ្មានការបន្ថែមនៃ verapamil ។ទិន្នន័យត្រូវបានបង្ហាញជាគម្លាតស្តង់ដារ ± ស្តង់ដារនៃការពិសោធន៍ឯករាជ្យចំនួនប្រាំ។*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
ដោយអនុលោមតាមការងារ 20 មុន ការបញ្ចូលពោះវៀនរបស់សត្វកណ្តុរត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីកំណត់ថាតើការស្រូបយក G-Rg3 នៅក្នុងពោះវៀនកើនឡើងបន្ទាប់ពីការព្យាបាល verapamil ។តួលេខ 3G,H បង្ហាញពីការវាយតម្លៃការបំប្លែងតំណាងដើម្បីវាយតម្លៃភាគរយនៃការស្រូបយកពោះវៀនរបស់ G-Rg3r និង G-Rg3 នៅក្នុងកណ្តុរគំរូមហារីកក្នុងអំឡុងពេលខាងលើ។ភាគរយដំបូងនៃការប្រើប្រាស់ G-Rg3r ខ្សោយប្រហែល 10% កើនឡើងដល់ជាង 20% បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយ 50 μM verapamil និងច្រើនជាង 25% បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយ 100 μM verapamil ។ដូចគ្នានេះដែរ G-Rg3 ដែលមានការកើនឡើងដំបូងនៃ 10% ក៏បានបង្ហាញពីកម្រិតខ្ពស់ជាង 20% បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយ 50 μM verapamil និងជិត 30% បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយ 100 μM verapamil ដែលបង្ហាញថាការទប់ស្កាត់ P-gp ដោយ verapamil ធ្វើអោយប្រសើរឡើង។ ពោះវៀន G-absorption Rg3 នៅក្នុងគំរូកណ្តុរនៃជំងឺមហារីកសួត។
យោងតាមវិធីសាស្ត្រខាងលើ កណ្ដុរគំរូមហារីកដែលបណ្ដាលមកពី P-induced ត្រូវបានបែងចែកដោយចៃដន្យជាប្រាំមួយក្រុម ដូចបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 4A ។គ្មានការស្រកទម្ងន់គួរឱ្យកត់សម្គាល់ ឬសញ្ញាគ្លីនិកនៃការពុលត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងក្រុមព្យាបាល G-Rg3 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុមត្រួតពិនិត្យ (ទិន្នន័យមិនត្រូវបានបង្ហាញ) ។បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 20 សប្តាហ៍ សួតរបស់កណ្តុរនីមួយៗត្រូវបានប្រមូល។រូបភាពទី 4B បង្ហាញពីដុំសាច់មហារីកសួតក្នុងសត្វកណ្តុរក្នុងក្រុមព្យាបាលខាងលើ ហើយរូបភាពទី 4C បង្ហាញមីក្រូក្រាហ្វពន្លឺតំណាងនៃដុំសាច់តំណាង។ទាក់ទងនឹងបន្ទុកដុំសាច់ក្នុងក្រុមនីមួយៗ (រូបភាព 4D) តម្លៃសម្រាប់សត្វកណ្តុរដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ G-Rg3r និង G-Rg3s គឺ 0.75 ± 0.29 mm3 និង 0.81 ± 0.30 mm3 រៀងគ្នា ខណៈពេលដែលតម្លៃសម្រាប់ G កណ្តុរដែលបានព្យាបាល ជាមួយ -Rg3s គឺ 1.63 រៀងគ្នា ±0.40 mm3 ។គ្រប់គ្រងសត្វកណ្តុរ (p <0.001) ដែលបង្ហាញថាការព្យាបាល G-Rg3 កាត់បន្ថយបន្ទុកដុំសាច់ក្នុងសត្វកណ្តុរ។ការគ្រប់គ្រង verapamil បង្កើនការកាត់បន្ថយនេះបន្ថែមទៀត៖ តម្លៃនៅក្នុងសត្វកណ្តុរ verapamil+ G-Rg3r ថយចុះពី 0.75 ± 0.29 mm3 ដល់ 0.33 ± 0.25 mm3 (p < 0.01) និងតម្លៃ verapamil+ ពី 0.81 ± 0.29 mm3 ថយចុះដល់ 0.81 ± 0.10 mm mm3 ក្នុង G. -Rg3s-ព្យាបាលសត្វកណ្តុរ (p <0.05) ដែលបង្ហាញថា verapamil អាចបង្កើនប្រសិទ្ធភាព inhibitory នៃ G-Rg3 លើដុំសាច់ដុះ។បន្ទុកដុំសាច់មិនបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាខ្លាំងរវាងក្រុមត្រួតពិនិត្យ និងក្រុម verapamil ក្រុម G-Rg3r និងក្រុម G-Rg3s និងក្រុម verapamil + G-Rg3r និងក្រុម verapamil + G-Rg3s ។ជាងនេះទៅទៀត ពុំមានជាតិពុលក្នុងថ្លើម ឬក្រលៀនដែលពាក់ព័ន្ធជាមួយនឹងការព្យាបាលដែលបានវាយតម្លៃនោះទេ (រូបភាព 4E,F)។
បន្ទុកដុំសាច់បន្ទាប់ពីការព្យាបាល G-Rg3 និងប្លាស្មាឬកម្រិត G-Rg3r និង G-Rg3 ពោះវៀននៅក្នុងក្រុមដែលបានចង្អុលបង្ហាញ។(ក) ការរចនាពិសោធន៍។(ខ) ដុំសាច់ម៉ាក្រូស្កូបនៅក្នុងគំរូកណ្តុរ។ដុំសាច់ត្រូវបានចង្អុលបង្ហាញដោយព្រួញ។ក៖ G-Rg3r ។ខ៖ G-Rg3s ។c: G-Rg3r រួមផ្សំជាមួយ verapamil ។d: G-Rg3 រួមផ្សំជាមួយ verapamil ។ឃ: Verapamil ។e: គ្រប់គ្រង។(គ) មីក្រូក្រាហ្វអុបទិកនៃដុំសាច់នៅពេលពង្រីក។ចម្លើយ៖ 100x ។b: 400X ។(ឃ) ប្រសិទ្ធភាពនៃការព្យាបាល G-Rg3 + verapamil លើបន្ទុកដុំសាច់នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ A/J ។(ង) កម្រិតប្លាស្មានៃអង់ស៊ីមថ្លើម ALT ។(F) កម្រិតប្លាស្មានៃអង់ស៊ីមតំរងនោម Cr.(G) កម្រិតប្លាស្មានៃ G-Rg3r ឬ G-Rg3 នៃក្រុមដែលបានចង្អុលបង្ហាញ។(H) កម្រិតនៃ G-Rg3r ឬ G-Rg3s នៅក្នុងពោះវៀននៃក្រុមដែលបានចង្អុលបង្ហាញ។ទិន្នន័យត្រូវបានបង្ហាញជាគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារនៃការកំណត់បីដង។*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
កម្រិត G-Rg3 នៅក្នុងកណ្ដុរគំរូមហារីកដែលបណ្ដាលមកពី B(a)P ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយ UPLC-MS/MS បន្ទាប់ពីរយៈពេលនៃការព្យាបាល 20 សប្តាហ៍ យោងទៅតាមវិធីសាស្ត្រដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងផ្នែក Methods ។តួលេខ 4G និង H បង្ហាញពីកម្រិតប្លាស្មា និងពោះវៀន G-Rg3 រៀងគ្នា។កម្រិតប្លាស្មា G-Rg3r គឺ 0.44 ± 0.32 μmol/L និងកើនឡើងដល់ 1.17 ± 0.47 μmol/L ជាមួយនឹងការគ្រប់គ្រងដំណាលគ្នានៃ verapamil (p < 0.001) ខណៈពេលដែលកម្រិត G-Rg3r ពោះវៀនគឺ 0.53 ± 0.08 µg/gនៅពេលផ្សំជាមួយ verapamil, g កើនឡើងដល់ 1.35 ± 0.13 μg/g (p < 0.001) ។សម្រាប់ G-Rg3 លទ្ធផលបានធ្វើតាមគំរូស្រដៀងគ្នានេះ ដែលបង្ហាញថា ការព្យាបាល verapamil បានបង្កើនលទ្ធភាពជីវៈផ្ទាល់មាត់របស់ G-Rg3 នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ A/J ។
ការវិភាគលទ្ធភាពជោគជ័យរបស់កោសិកាត្រូវបានប្រើដើម្បីវាយតម្លៃ cytotoxicity នៃ B(a)P និង G-Rg3 នៅលើកោសិកា hEL ។cytotoxicity បង្កឡើងដោយ B(a)P ក្នុងកោសិកា hEL ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាព 5A ខណៈពេលដែលលក្ខណៈសម្បត្តិមិនពុលរបស់ G-Rg3r និង G-Rg3 ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាព 5A និង 5B ។5B, C. ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាព cytoprotective នៃ G-Rg3, B(a)P ត្រូវបានគ្រប់គ្រងជាមួយកំហាប់ផ្សេងៗនៃ G-Rg3r ឬ G-Rg3 ទៅក្នុងកោសិកា hEL ។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាព 5D, G-Rg3r នៅកំហាប់នៃ 5 μM, 10 μM, និង 20 μM បានស្ដារឡើងវិញនូវលទ្ធភាពជោគជ័យរបស់កោសិកាដល់ 58.3%, 79.3%, និង 77.3% រៀងគ្នា។លទ្ធផលស្រដៀងគ្នាក៏អាចត្រូវបានគេមើលឃើញនៅក្នុងក្រុម G-Rg3s ផងដែរ។នៅពេលដែលកំហាប់នៃ G-Rg3s គឺ 5 µM, 10 µM និង 20 µM លទ្ធភាពជោគជ័យរបស់កោសិកាត្រូវបានស្ដារឡើងវិញទៅ 58.3%, 72.7% និង 76.7% រៀងគ្នា (រូបភាព 5E) ។)វត្តមានរបស់ BPDE-DNA adducts ត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍ ELISA ។លទ្ធផលរបស់យើងបានបង្ហាញថាកម្រិត adduct BPDE-DNA ត្រូវបានកើនឡើងនៅក្នុងក្រុម B(a)P-treated បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងក្រុមត្រួតពិនិត្យ ប៉ុន្តែបើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងការព្យាបាលរួមគ្នា G-Rg3 កម្រិត adduct BPDE-DNA នៅក្នុងក្រុម B(a)P B នៅក្នុងក្រុមដែលត្រូវបានព្យាបាល កម្រិតនៃ DNA adduct ត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំង។លទ្ធផលនៃការព្យាបាលជាមួយ B(a)P តែឯងត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាព 5F (1.87 ± 0.33 ទល់នឹង 3.77 ± 0.42 សម្រាប់ G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 ទល់នឹង 3.77 ± 0.42 សម្រាប់ G -Rg3s, p < 0.001) ។
លទ្ធភាពជោគជ័យនៃកោសិកា និងការបង្កើតសារធាតុបន្ថែម BPDE-DNA នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ G-Rg3 និង B(a)P ។(ក) លទ្ធភាពជោគជ័យនៃកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P ។(ខ) លទ្ធភាពជោគជ័យនៃកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ G-Rg3r ។(គ) លទ្ធភាពជោគជ័យនៃកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ G-Rg3 ។(D) លទ្ធភាពជោគជ័យនៃកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3r ។(ង) លទ្ធភាពជោគជ័យនៃកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3 ។(F) កម្រិតនៃសារធាតុបន្ថែម BPDE-DNA នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3។ទិន្នន័យត្រូវបានបង្ហាញជាគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារនៃការកំណត់បីដង។*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
ការបញ្ចេញអង់ស៊ីម GST ត្រូវបានរកឃើញបន្ទាប់ពីការព្យាបាលរួមគ្នាជាមួយ 10 μM B(a)P និង 10 μM G-Rg3r ឬ G-Rg3s ។លទ្ធផលរបស់យើងបានបង្ហាញថា B(a)P បានទប់ស្កាត់ការបញ្ចេញមតិ GST (59.7 ± 8.2% នៅក្នុងក្រុម G-Rg3r និង 39 ± 4.5% នៅក្នុងក្រុម G-Rg3s) ហើយ B(a)P ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹង G-Rg3r ឬជាមួយ G-Rg3r ឬជាមួយ G-Rg3r ។ការព្យាបាលរួមគ្នាជាមួយ G-Rg3s បានស្ដារកន្សោម GST ។កន្សោម GST (103.7 ± 15.5% នៅក្នុងក្រុម G-Rg3r និង 110 ± 11.1% នៅក្នុងក្រុម G-Rg3s, p < 0.05 និង p < 0.001 រៀងគ្នា រូបភាព 6A, B និង C) ។សកម្មភាព GST ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើឧបករណ៍វាយតម្លៃសកម្មភាព។លទ្ធផលរបស់យើងបានបង្ហាញថាក្រុមព្យាបាលរួមបញ្ចូលគ្នាមានសកម្មភាព GST ខ្ពស់ជាងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុម B(a)P តែមួយគត់ (96.3 ± 6.6% ទល់នឹង 35.7 ± 7.8% ក្នុងក្រុម G-Rg3r ធៀបនឹង 92.3 ± 6.5 ក្នុងក្រុម G-Rg3r )% ទល់នឹង 35.7 ± 7.8% ក្នុងក្រុម G-Rg3s, p < 0.001, រូបភាពទី 6D)។
ការបង្ហាញនៃ GST និង Nrf2 នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3 ។(ក) ការរកឃើញកន្សោម GST ដោយ blotting លោកខាងលិច។(ខ) កន្សោមបរិមាណនៃ GST នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3r ។(C) កន្សោមបរិមាណនៃ GST នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3s ។(ឃ) សកម្មភាព GST នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3 ។(ង) ការរកឃើញកន្សោម Nrf2 ដោយ blotting លោកខាងលិច។(F) កន្សោមបរិមាណនៃ Nrf2 នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3r ។(G) កន្សោមបរិមាណនៃ Nrf2 នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3s ។ទិន្នន័យត្រូវបានបង្ហាញជាគម្លាតស្តង់ដារ ± ស្តង់ដារនៃការកំណត់បីដង។*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
ដើម្បីបំភ្លឺផ្លូវដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការបង្ក្រាប G-Rg3-សម្របសម្រួលនៃ B(a) P-induced tumorigenesis កន្សោម Nrf2 ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយ blotting លោកខាងលិច។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាព 6E,F,G បើប្រៀបធៀបជាមួយក្រុមត្រួតពិនិត្យ មានតែកម្រិត Nrf2 នៅក្នុងក្រុមព្យាបាល B(a)P ត្រូវបានថយចុះ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងក្រុមព្យាបាល B(a)P កម្រិត B(a) Nrf2 ក្នុងក្រុម PG-Rg3 ត្រូវបានកើនឡើង (106 ± 9.5% សម្រាប់ G-Rg3r ទល់នឹង 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% សម្រាប់ G-Rg3r ទល់នឹង 41 ± 9.8% សម្រាប់ G-Rg3s, p < 0.01) ។
យើងបានបញ្ជាក់ពីតួនាទីការពាររបស់ Nrf2 ដោយទប់ស្កាត់ការបញ្ចេញមតិ Nrf2 ដោយប្រើ RNA ជ្រៀតជ្រែកតូចជាក់លាក់ (siRNA) ។Nrf2 knockdown ត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយការ blotting លោកខាងលិច (រូបភាព 7A,B) ។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាព 7C,D ការព្យាបាលរួមគ្នានៃកោសិកា hEL ជាមួយ B(a)P និង G-Rg3 បណ្តាលឱ្យមានការថយចុះនៃចំនួន BPDE-DNA adducts (1.47 ± 0.21) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការព្យាបាលជាមួយ B(a)P តែម្នាក់ឯងនៅក្នុងក្រុម siRNA វត្ថុបញ្ជា។) G-Rg3r គឺ 4.13 ± 0.49, G-Rg3s គឺ 1.8 ± 0.32 និង 4.1 ± 0.57, p < 0.01) ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយឥទ្ធិពលរារាំងនៃ G-Rg3 លើការបង្កើត BPDE-DNA ត្រូវបានលុបចោលដោយការទម្លាក់ Nrf2 ។នៅក្នុងក្រុម siNrf2 មិនមានភាពខុសប្លែកគ្នាខ្លាំងនៅក្នុងការបង្កើត BPDE-DNA adduct រវាង B(a)P និង G-Rg3 co-treatment និង B(a)P តែម្នាក់ឯង (3.0 ± 0.21 សម្រាប់ G-Rg3r ទល់នឹង 3.56 ± 0.32 ទេ។ )សម្រាប់ G-Rg3r ធៀបនឹង 3.6 សម្រាប់ G-Rg3s ធៀបនឹង ±0.45 ធៀបនឹង 4.0±0.37, ទំ > 0.05)។
ឥទ្ធិពលនៃការធ្លាក់ចុះ Nrf2 លើការបង្កើតសារធាតុបន្ថែម BPDE-DNA នៅក្នុងកោសិកា hEL ។(ក) Nrf2 knockdown ត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយការ blotting លោកខាងលិច។(ខ) បរិមាណនៃអាំងតង់ស៊ីតេនៃក្រុម Nrf2 ។(C) ឥទ្ធិពលនៃការទម្លាក់ Nrf2 លើកម្រិត BPDE-DNA adduct នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3r ។(ឃ) ឥទ្ធិពលនៃការធ្លាក់ចុះ Nrf2 លើកម្រិត BPDE-DNA adduct នៅក្នុងកោសិកា hEL ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P និង G-Rg3។ទិន្នន័យត្រូវបានបង្ហាញជាគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារនៃការកំណត់បីដង។*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
ការសិក្សានេះបានវាយតម្លៃពីឥទ្ធិពលការពារនៃសារធាតុចម្រាញ់ពីយិនស៊ិនក្រហមផ្សេងៗលើគំរូកណ្តុរនៃជំងឺមហារីកសួតដែលបណ្ដាលមកពី B(a) P និងការព្យាបាល KRGB បានកាត់បន្ថយបន្ទុកដុំសាច់យ៉ាងខ្លាំង។ដោយពិចារណាថា G-Rg3 មានមាតិកាខ្ពស់បំផុតនៅក្នុងចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិននេះ តួនាទីសំខាន់នៃ ginsenoside នេះក្នុងការទប់ស្កាត់ដុំសាច់មហារីកត្រូវបានសិក្សា។ទាំង G-Rg3r និង G-Rg3 (ពីរ epimers នៃ G-Rg3) បានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំងនូវបន្ទុកដុំសាច់នៅក្នុងគំរូកណ្តុរនៃ B(a) P-induced cancer ។G-Rg3r និង G-Rg3 បញ្ចេញឥទ្ធិពលប្រឆាំងមហារីកដោយបង្កើត apoptosis នៃកោសិកាដុំសាច់ 21 រារាំងការលូតលាស់នៃដុំសាច់ 22 ចាប់យកកោសិកា 23 និងប៉ះពាល់ដល់ angiogenesis24 ។G-Rg3 ត្រូវបានបង្ហាញផងដែរក្នុងការរារាំងកោសិកាកោសិកា metastasis25 ហើយសមត្ថភាពរបស់ G-Rg3 ដើម្បីបង្កើនឥទ្ធិពលនៃការព្យាបាលដោយគីមីនិងការព្យាបាលដោយវិទ្យុសកម្មត្រូវបានកត់ត្រាទុក 26,27 ។Poon et al បានបង្ហាញថាការព្យាបាល G-Rg3 អាចកាត់បន្ថយឥទ្ធិពល genotoxic នៃ B(a)P28 ។ការសិក្សានេះបង្ហាញពីសក្តានុពលព្យាបាលរបស់ G-Rg3 ក្នុងការកំណត់គោលដៅម៉ូលេគុលបង្កមហារីកបរិស្ថាន និងការពារជំងឺមហារីក។
ថ្វីបើមានសក្តានុពល prophylactic ល្អរបស់ពួកគេក៏ដោយ លទ្ធភាពនៃជីវគីមីនៃ ginsenosides មាត់មិនល្អ បង្កឱ្យមានបញ្ហាប្រឈមសម្រាប់ការប្រើប្រាស់ គ្លីនិកនៃម៉ូលេគុលទាំងនេះ។ការវិភាគ Pharmacokinetic នៃការគ្រប់គ្រងផ្ទាល់មាត់នៃ ginsenosides នៅក្នុងសត្វកណ្តុរបានបង្ហាញថាជីវសាស្រ្តរបស់វានៅតែតិចជាង 5% 29 ។ការធ្វើតេស្តទាំងនេះបានបង្ហាញថាបន្ទាប់ពីរយៈពេលនៃការព្យាបាល 20 សប្តាហ៍មានតែកម្រិតឈាម Rg5 បានថយចុះ។ទោះបីជាយន្តការមូលដ្ឋាននៃភាពអាចរកបានជីវសាស្រ្តមិនល្អនៅតែត្រូវបានបកស្រាយក៏ដោយ P-gp ត្រូវបានគេគិតថាពាក់ព័ន្ធនឹងការហូរចេញនៃ ginsenosides ។ការងារនេះបានបង្ហាញជាលើកដំបូងថាការគ្រប់គ្រងរបស់ verapamil ដែលជា P-gp blocker បង្កើនលទ្ធភាពជីវៈផ្ទាល់មាត់របស់ G-Rg3r និង G-Rg3s ។ដូច្នេះ ការរកឃើញនេះបង្ហាញថា G-Rg3r និង G-Rg3s ដើរតួជាស្រទាប់ខាងក្រោមនៃ P-gp ដើម្បីគ្រប់គ្រងលំហូរចេញរបស់វា។
ការងារនេះបង្ហាញថា ការព្យាបាលដោយផ្សំជាមួយ verapamil បង្កើនលទ្ធភាពជីវៈនៃ G-Rg3 នៅក្នុងគំរូកណ្តុរនៃជំងឺមហារីកសួត។ការរកឃើញនេះត្រូវបានគាំទ្រដោយការកើនឡើងនៃការដឹកជញ្ជូនឆ្លងកាត់ពោះវៀននៃ G-Rg3 លើការទប់ស្កាត់ P-gp ដោយហេតុនេះបង្កើនការស្រូបយករបស់វា។ការវិភាគនៅក្នុងកោសិកា Caco2 បានបង្ហាញថាការព្យាបាល verapamil បានកាត់បន្ថយការបញ្ចេញ G-Rg3r និង G-Rg3s ខណៈពេលដែលធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពជ្រាបនៃភ្នាស។ការសិក្សាដោយ Yang et al ។ការសិក្សាបានបង្ហាញថាការព្យាបាលជាមួយ cyclosporine A (P-gp blocker ផ្សេងទៀត) បង្កើនជីវឧស្ម័ននៃ ginsenoside Rh2 ពីតម្លៃមូលដ្ឋានពី 1% 20 ដល់ជាង 30% ។សមាសធាតុ Ginsenosides K និង Rg1 ក៏បង្ហាញលទ្ធផលស្រដៀងគ្នា 30,31 ។នៅពេលដែល verapamil និង cyclosporin A ត្រូវបានគ្រប់គ្រងរួមគ្នា ការហូរចេញនៃសមាសធាតុ K នៅក្នុងកោសិកា Caco-2 ត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំងពី 26.6 ទៅតិចជាង 3 ខណៈពេលដែលកម្រិតខាងក្នុងរបស់វាកើនឡើង 40-30 ។នៅក្នុងវត្តមានរបស់ verapamil កម្រិត Rg1 បានកើនឡើងនៅក្នុងកោសិកា epithelial សួតរបស់កណ្តុរ ដែលបង្ហាញពីតួនាទីសម្រាប់ P-gp ក្នុងការបញ្ចេញជាតិ ginsenoside ដូចដែលបានបង្ហាញដោយ Meng et al.31។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ verapamil មិនមានឥទ្ធិពលដូចគ្នាទៅលើការបញ្ចេញសារធាតុ ginsenosides មួយចំនួន (ដូចជា Rg1, F1, Rh1 និង Re) ដែលបង្ហាញថាពួកគេមិនត្រូវបានប៉ះពាល់ដោយស្រទាប់ខាងក្រោម P-gp ដូចដែលបានបង្ហាញដោយ Liang et al ។៣២.ការសង្កេតនេះអាចទាក់ទងនឹងការចូលរួមរបស់អ្នកដឹកជញ្ជូនផ្សេងទៀត និងរចនាសម្ព័ន្ធ ginsenoside ជំនួស។
យន្តការនៃឥទ្ធិពលការពាររបស់ G-Rg3 លើជំងឺមហារីកគឺមិនច្បាស់លាស់។ការសិក្សាពីមុនបានបង្ហាញថា G-Rg3 ការពារការខូចខាត DNA និង apoptosis ដោយកាត់បន្ថយភាពតានតឹងអុកស៊ីតកម្មនិងការរលាក 16,33 ដែលអាចជាយន្តការមូលដ្ឋានសម្រាប់ការពារ B(a) P-induced tumorigenesis ។របាយការណ៍ខ្លះបង្ហាញថាការពុលហ្សែនដែលបណ្តាលមកពី B(a)P អាចត្រូវបានកាត់បន្ថយដោយការកែប្រែអង់ស៊ីមដំណាក់កាលទី 2 ដើម្បីបង្កើត BPDE-DNA34 ។GST គឺជាអង់ស៊ីមដំណាក់កាលទី 2 ធម្មតាដែលរារាំងការបង្កើត BPDE-DNA adduct ដោយលើកកម្ពស់ការភ្ជាប់ GSH ទៅ BPDE ដោយហេតុនេះកាត់បន្ថយការខូចខាត DNA ដែលបណ្តាលមកពី B(a)P35 ។លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថាការព្យាបាល G-Rg3 កាត់បន្ថយ B(a) P-induced cytotoxicity និងការបង្កើត BPDE-DNA adduct នៅក្នុងកោសិកា hEL និងស្តារការបញ្ចេញ GST និងសកម្មភាពនៅក្នុង vitro ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយផលប៉ះពាល់ទាំងនេះគឺអវត្តមានដោយអវត្តមាននៃ Nrf2 ដែលបង្ហាញថា G-Rg3 បង្កើតឥទ្ធិពល cytoprotective តាមរយៈផ្លូវ Nrf2 ។Nrf2 គឺជាកត្តាចម្លងដ៏សំខាន់សម្រាប់អង់ស៊ីមបន្សាបជាតិពុលដំណាក់កាលទី 2 ដែលជំរុញការបោសសំអាត xenobiotics36 ។ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃផ្លូវ Nrf2 បង្កឱ្យមាន cytoprotection និងកាត់បន្ថយការខូចខាតជាលិកា37.លើសពីនេះទៅទៀត របាយការណ៍ជាច្រើនបានគាំទ្រតួនាទីរបស់ Nrf2 ជាអ្នកទប់ស្កាត់ដុំសាច់នៅក្នុង carcinogenesis38។ការសិក្សារបស់យើងបង្ហាញថាការបញ្ចូលផ្លូវ Nrf2 ដោយ G-Rg3 ដើរតួជានិយតកម្មដ៏សំខាន់នៅក្នុង B(a) P-induced genotoxicity ដោយបណ្តាលឱ្យមានការបន្សាបជាតិពុល B(a)P ដោយការធ្វើឱ្យអង់ស៊ីមដំណាក់កាលទី 2 សកម្ម ដោយហេតុនេះរារាំងដំណើរការនៃដុំសាច់។
ការងាររបស់យើងបង្ហាញពីសក្ដានុពលនៃយិនស៊ិនក្រហមក្នុងការទប់ស្កាត់ជំងឺមហារីកសួតដែលបណ្ដាលមកពី B(a) P-induced ក្នុងសត្វកណ្តុរតាមរយៈការចូលរួមដ៏សំខាន់នៃ ginsenoside G-Rg3 ។ភាពអាចរកបាននៃជីវសាស្ត្រមាត់មិនល្អនៃម៉ូលេគុលនេះរារាំងការអនុវត្តគ្លីនិករបស់វា។ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសិក្សានេះបង្ហាញជាលើកដំបូងថា G-Rg3 គឺជាស្រទាប់ខាងក្រោមនៃ P-gp ហើយការគ្រប់គ្រងរបស់ P-gp inhibitor បង្កើនជីវៈភាពនៃ G-Rg3 នៅក្នុង vitro និង in vivo ។G-Rg3 កាត់បន្ថយ B(a)P-induced cytotoxicity ដោយធ្វើនិយ័តកម្មផ្លូវ Nrf2 ដែលអាចជាយន្តការដ៏មានសក្តានុពលសម្រាប់មុខងារបង្ការរបស់វា។ការសិក្សារបស់យើងបញ្ជាក់ពីសក្តានុពលនៃ ginsenoside G-Rg3 សម្រាប់ការការពារ និងព្យាបាលជំងឺមហារីកសួត។
កណ្តុរ A/J ភេទស្រីអាយុប្រាំមួយសប្តាហ៍ (20 ± 1 ក្រាម) និងកណ្តុរ Wistar ឈ្មោលអាយុ 7 សប្តាហ៍ (250 ± 20 ក្រាម) ត្រូវបានទទួលពីមន្ទីរពិសោធន៍ Jackson (Bar Harbor សហរដ្ឋអាមេរិក) និងវិទ្យាស្ថានសត្វវិទ្យា Wuhan ។សាកលវិទ្យាល័យ (វូហាន ប្រទេសចិន) ។មជ្ឈមណ្ឌលប្រមូលវប្បធម៌ប្រភេទចិន (វូហាន ប្រទេសចិន) បានផ្តល់ឱ្យយើងនូវកោសិកា Caco-2 និង hEL ។Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) គឺជាប្រភពនៃ B(a)P និង tricaprine ។ginsenosides បន្សុត G-Rg3r និង G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 proliferation assay assay kit (MTS), verapamil, minimal essential essential (MEM) និង serum bovine ទារក (FBS) ត្រូវបានទិញពី Chengdu Must Bio-Technology .ខូអិលធីឌី(ទីក្រុង Chengdu ប្រទេសចិន) ។ឧបករណ៍ QIAamp DNA mini និង BPDE-DNA adduct ELISA kit ត្រូវបានទិញពី Qiagen (Stanford, CA, USA) និង Cell Biolabs (San Diego, CA, USA)។ឧបករណ៍វិភាគសកម្មភាព GST និងឧបករណ៍ធ្វើតេស្តប្រូតេអ៊ីនសរុប (វិធីសាស្ត្រ BCA ស្តង់ដារ) ត្រូវបានទិញពីក្រុមហ៊ុន Solarbio (ទីក្រុងប៉េកាំង ប្រទេសចិន)។ចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហមទាំងអស់ត្រូវបានរក្សាទុកនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ Mingyu 7. សាកលវិទ្យាល័យហុងកុងបាទីស្ទ (ហុងកុង ចិន) និងមជ្ឈមណ្ឌលមហារីកកូរ៉េ (សេអ៊ូល កូរ៉េ) គឺជាប្រភពពាណិជ្ជកម្មនៃចំរាញ់ចេញពី CRG និងសារធាតុចម្រាញ់ពីយិនស៊ិនក្រហមជាច្រើននៃប្រភពដើមកូរ៉េ (រួមទាំង KRGA, KRGB និង KRGC) ។យិនស៊ិនក្រហមត្រូវបានផលិតចេញពីឫសនៃយិនស៊ិនស្រស់អាយុ៦ឆ្នាំ។ចំរាញ់ចេញពីយិនស៊ិនក្រហមត្រូវបានទទួលដោយការលាងយិនស៊ិនជាមួយទឹកបីដង បន្ទាប់មកប្រមូលផ្តុំសារធាតុចម្រាញ់ចេញពីទឹក ហើយចុងក្រោយស្ងួតនៅសីតុណ្ហភាពទាបដើម្បីទទួលបានម្សៅចម្រាញ់យិនស៊ិន។អង់ទីករ (anti-Nrf2, anti-GST, និង β-actin), horseradish peroxidase-conjugated anti-ទន្សាយ immunoglobulin G (IgG), ភ្នាក់ងារចម្លងមេរោគ, គ្រប់គ្រង siRNA, និង Nrf2 siRNA ត្រូវបានទិញពីបច្ចេកវិទ្យាជីវសាស្ត្រសាន់តា Cruz (Santa Cruz, CA) .) សហរដ្ឋអាមេរិក) ។
កោសិកា Caco2 និង hEL ត្រូវបានដាំដុះក្នុងចានវប្បធម៌កោសិកា 100 mm2 ជាមួយ MEM ដែលមាន 10% FBS នៅសីតុណ្ហភាព 37 °C ក្នុងបរិយាកាសសើមនៃ 5% CO2 ។ដើម្បីកំណត់ពីឥទ្ធិពលនៃលក្ខខណ្ឌនៃការព្យាបាល កោសិកា hEL ត្រូវបាន incubated ជាមួយកំហាប់ផ្សេងគ្នានៃ B(a)P និង G-Rg3 ក្នុង MEM រយៈពេល 48 ម៉ោង។កោសិកាអាចត្រូវបានវិភាគបន្ថែម ឬប្រមូលដើម្បីរៀបចំការដកស្រង់ដែលគ្មានកោសិកា។
ការពិសោធន៍ទាំងអស់ត្រូវបានអនុម័តដោយគណៈកម្មាធិការសីលធម៌សត្វពិសោធន៍នៃមហាវិទ្យាល័យវេជ្ជសាស្ត្រ Tongji សាកលវិទ្យាល័យវិទ្យាសាស្ត្រ និងបច្ចេកវិទ្យា Huazhong (ការអនុម័តលេខ 2019; ការចុះឈ្មោះលេខ 4587TH) ។ការពិសោធន៍ទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តដោយអនុលោមតាមគោលការណ៍ណែនាំ និងបទប្បញ្ញត្តិពាក់ព័ន្ធ ហើយការសិក្សាត្រូវបានធ្វើឡើងដោយអនុលោមតាម ការស្រាវជ្រាវសត្វ៖ ការរាយការណ៍អំពីការពិសោធន៍នៅក្នុងវីវ៉ូ (ARRIVE) គោលការណ៍ណែនាំ។សត្វកណ្ដុរ A/J ដែលមានអាយុប្រាំបីសប្តាហ៍ត្រូវបានចាក់បញ្ចូលទៅក្នុងពោះវៀនដំបូងជាមួយនឹង B(a)P ក្នុងដំណោះស្រាយ tricaprine (100 mg/kg, 0.2 ml)។បន្ទាប់ពីមួយសប្តាហ៍ សត្វកណ្ដុរត្រូវបានបែងចែកដោយចៃដន្យទៅជាក្រុមត្រួតពិនិត្យ និងក្រុមព្យាបាលផ្សេងៗគ្នា សត្វកណ្តុរចំនួន 15 ក្បាលក្នុងក្រុមនីមួយៗ ហើយបានលេបម្តងក្នុងមួយថ្ងៃ។បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 20 សប្តាហ៍ សត្វត្រូវបានបូជាដោយ CO2 asphyxia ។សួតត្រូវបានប្រមូលនិងជួសជុលរយៈពេល 24 ម៉ោង។ចំនួននៃដុំសាច់លើផ្ទៃ និងទំហំដុំសាច់នីមួយៗ ត្រូវបានគេកំណត់បរិមាណសម្រាប់សួតនីមួយៗ ក្រោមមីក្រូទស្សន៍កាត់។ការប៉ាន់ប្រមាណបរិមាណដុំសាច់ (V) ត្រូវបានគណនាដោយប្រើកន្សោមខាងក្រោម៖ V (mm3) = 4/3πr3 ដែល r ជាអង្កត់ផ្ចិតដុំសាច់។ផលបូកសុទ្ធនៃបរិមាណដុំសាច់ទាំងអស់នៅក្នុងសួតរបស់សត្វកណ្តុរតំណាងឱ្យបរិមាណដុំសាច់សរុប ហើយបរិមាណដុំសាច់សរុបជាមធ្យមនៅក្នុងក្រុមនីមួយៗតំណាងឱ្យការផ្ទុកដុំសាច់។សំណាកឈាម និងពោះវៀនទាំងមូលត្រូវបានប្រមូល និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព −80°C សម្រាប់ការកំណត់ UPLC-MS/MS។សេរ៉ូមត្រូវបានប្រមូល ហើយឧបករណ៍វិភាគគីមីស្វ័យប្រវត្តិត្រូវបានប្រើដើម្បីវិភាគកម្រិត alanine aminotransferase (ALT) និងសេរ៉ូម creatinine (Cr) ដើម្បីវាយតម្លៃមុខងារថ្លើម និងតម្រងនោម។
សំណាកដែលប្រមូលបានត្រូវបានយកចេញពីកន្លែងផ្ទុកត្រជាក់ រលាយ ថ្លឹង និងដាក់ក្នុងបំពង់ដូចបានរៀបរាប់ខាងលើ។វាត្រូវបានបន្ថែម 0.5 μM phlorizin (ស្តង់ដារខាងក្នុង) ក្នុងដំណោះស្រាយមេតាណុល 0,8 មីលីលីត្រ។បន្ទាប់មកជាលិកាត្រូវបានធ្វើឱ្យដូចគ្នាដោយប្រើ Tissue-Tearor ហើយ homogenate ត្រូវបានផ្ទេរជាបន្តបន្ទាប់ទៅបំពង់ microcentrifuge 1.5 មីលីលីត្រ។ល្បាយនេះត្រូវបាន centrifuged នៅ 15500 rpm សម្រាប់ 15 នាទី។បន្ទាប់ពីយក 1.0 មីលីលីត្រនៃ supernatant ស្ងួតជាមួយអាសូត។មេតាណុលពីររយមីក្រូលីត្រត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការស្តារឡើងវិញ។ឈាមត្រូវបានប្រមូល និងដំណើរការនៅលើបន្ទាត់មួយ ហើយត្រូវបានគេប្រើជាឯកសារយោងសម្រាប់ការវាស់វែងទាំងអស់។
ចាន Transwell 24 អណ្តូងត្រូវបានបណ្តុះដោយកោសិកា 1.0 × 105 Caco-2 ក្នុងមួយអណ្តូង ដើម្បីវាយតម្លៃការពង្រឹងសក្តានុពលនៃការដឹកជញ្ជូន G-Rg3 ដោយការបន្ថែម verapamil ។បន្ទាប់ពីរយៈពេល 3 សប្តាហ៍នៃវប្បធម៌ កោសិកាត្រូវបានលាងសម្អាតដោយ HBSS និង preincubated នៅ 37 ° C ។400 μL នៃ 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, ឬល្បាយជាមួយ 50 ឬ 100 μM verapamil) ត្រូវបានចាក់ទៅលើផ្នែកចំហៀង ឬ apical នៃ monolayer ហើយ 600 μL នៃដំណោះស្រាយ HBSS ត្រូវបានបន្ថែមទៅផ្សេងទៀត។ ចំហៀង។ប្រមូលឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌ 100 µl តាមពេលវេលាកំណត់ (0, 15, 30, 45, 60, 90 និង 120 នាទី) ហើយបន្ថែម 100 µl នៃ HBSS ដើម្បីបង្កើតបរិមាណនេះ។គំរូត្រូវបានរក្សាទុកនៅ −4 °C រហូតដល់ការរកឃើញដោយ UPLC-MS/MS ។កន្សោម Papp = dQ/(dT × A × C0) ត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់បរិមាណនៃ apical unidirectional permeability និង basolateral permeability និងច្រាសមកវិញ (Pa-b និង Pb-a រៀងគ្នា);dQ/dT គឺជាការផ្លាស់ប្តូរកំហាប់ A (0.6 cm2) គឺជាផ្ទៃនៃ monolayer ហើយ C0 គឺជាកំហាប់ម្ចាស់ជំនួយដំបូង។សមាមាត្រនៃការបញ្ចេញទឹករំអិលត្រូវបានគណនាជា Pb-a/Pa-b ដែលតំណាងឱ្យអត្រាលំហូរចេញនៃថ្នាំសិក្សា។
កណ្តុរឈ្មោល Wistar ត្រូវបានតមអាហាររយៈពេល 24 ម៉ោង ដោយផឹកតែទឹក និងចាក់ថ្នាំស្ពឹកតាមសរសៃឈាមនៃដំណោះស្រាយ pentobarbital 3.5% ។បំពង់ស៊ីលីកូនដែលដាក់បញ្ចូលមានចុងនៃ duodenum ជាច្រកចូល និងចុងបញ្ចប់នៃ ileum ជាច្រកចេញ។ប្រើស្នប់ peristaltic ដើម្បីបូមទឹកចូលជាមួយ 10 µM G-Rg3r ឬ G-Rg3s ក្នុង isotonic HBSS ក្នុងអត្រាលំហូរ 0.1 ml/min ។ឥទ្ធិពលនៃ verapamil ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយបន្ថែម 50 μM ឬ 100 μM នៃសមាសធាតុទៅ 10 μM G-Rg3r ឬ G-Rg3s ។UPLC-MS/MS ត្រូវបានអនុវត្តលើការស្រង់ចេញ perfusion ដែលប្រមូលបាននៅម៉ោង 60, 90, 120 និង 150 នាទីបន្ទាប់ពីការចាប់ផ្តើមនៃ perfusion ។ភាគរយនៃការស្រូបយកត្រូវបានគណនាតាមរូបមន្ត % absorption = (1 – Cout/Cin) × 100%;ការប្រមូលផ្តុំ G-Rg3 នៅច្រកចេញនិងច្រកចូលត្រូវបានបង្ហាញដោយ Cout និង Cin រៀងគ្នា។
កោសិកា hEL ត្រូវបានបណ្ដុះក្នុងចានអណ្តូង 96 នៅដង់ស៊ីតេ 1 × 104 កោសិកាក្នុងមួយអណ្តូង ហើយត្រូវបានព្យាបាលដោយ B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) ឬ G-Rg3 រំលាយក្នុង DMSO .បន្ទាប់មកថ្នាំត្រូវបានពនឺជាមួយនឹងមជ្ឈដ្ឋានវប្បធម៌ទៅកំហាប់ផ្សេងៗ (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) ក្នុងរយៈពេល 48 ម៉ោង។ដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគ MTS ដែលមានពាណិជ្ជកម្ម កោសិកាត្រូវបានទទួលរងនូវពិធីការស្តង់ដារ ហើយបន្ទាប់មកវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍អានមីក្រូប្លាតនៅ 490 nm ។កម្រិតលទ្ធភាពនៃកោសិកានៃក្រុមដែលត្រូវបានព្យាបាលរួមគ្នាជាមួយ B(a)P (10 μM) និង G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) ត្រូវបានវាយតម្លៃតាមវិធីសាស្ត្រខាងលើ ហើយប្រៀបធៀបជាមួយក្រុមដែលមិនព្យាបាល។
កោសិកា hEL ត្រូវបានបណ្ដុះក្នុងចានអណ្តូង 6 នៅដង់ស៊ីតេ 1 × 105 កោសិកា/អណ្តូង ហើយត្រូវបានព្យាបាលដោយ 10 μMB(a)P ក្នុងវត្តមាន ឬអវត្តមាន 10 μM G-Rg3 ។បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 48 ម៉ោង DNA ត្រូវបានស្រង់ចេញពីកោសិកា hEL ដោយប្រើ QIAamp DNA Mini Kit យោងទៅតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ការបង្កើត BPDE-DNA adducts ត្រូវបានរកឃើញដោយប្រើឧបករណ៍ BPDE-DNA adduct ELISA ។កម្រិតដែលទាក់ទងនៃ adduct BPDE-DNA ត្រូវបានវាស់ដោយប្រើ microplate reader ដោយវាស់ការស្រូបយកនៅ 450 nm ។
កោសិកា hEL ត្រូវបានបណ្ដុះក្នុងចានអណ្តូង 96 នៅដង់ស៊ីតេ 1 × 104 កោសិកាក្នុងមួយអណ្តូង ហើយត្រូវបានព្យាបាលដោយ 10 μMB(a)P ក្នុងការអវត្តមាន ឬវត្តមាន 10 μM G-Rg3 រយៈពេល 48 ម៉ោង។សកម្មភាព GST ត្រូវបានវាស់វែងដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគសកម្មភាព GST ពាណិជ្ជកម្មយោងទៅតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ការធ្វើឱ្យសកម្ម GST ទាក់ទងត្រូវបានវាស់ដោយការស្រូបនៅ 450 nm ដោយប្រើឧបករណ៍អានមីក្រូប្លាត។
កោសិកា hEL ត្រូវបានទឹកនាំទៅដោយ PBS ត្រជាក់ទឹកកក ហើយបន្ទាប់មក lysed ដោយប្រើ radioimmunoprecipitation buffer ដែលមានសារធាតុទប់ស្កាត់ protease និង phosphatase inhibitors ។បន្ទាប់ពីការគណនាបរិមាណប្រូតេអ៊ីនដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគប្រូតេអ៊ីនសរុប 30 μgនៃប្រូតេអ៊ីននៅក្នុងគំរូនីមួយៗត្រូវបានបំបែកដោយ 12% SDS-PAGE ហើយផ្ទេរទៅភ្នាស PVDF ដោយ electrophoresis ។Membranes ត្រូវបានរារាំងដោយទឹកដោះគោ 5% និង incubated ជាមួយអង្គបដិប្រាណចម្បងមួយយប់នៅ 4 ° C ។បន្ទាប់ពីការភ្ញាស់ជាមួយអង្គបដិប្រាណបន្ទាប់បន្សំដែលផ្សំពី horseradish peroxidase-conjugated, សារធាតុ chemiluminescence ដែលត្រូវបានកែលម្អត្រូវបានបន្ថែម ដើម្បីមើលឃើញសញ្ញានៃការចង។អាំងតង់ស៊ីតេនៃក្រុមប្រូតេអ៊ីននីមួយៗត្រូវបានគណនាដោយប្រើកម្មវិធី ImageJ ។
កម្មវិធី GraphPad Prism 7.0 ត្រូវបានប្រើដើម្បីវិភាគទិន្នន័យទាំងអស់ ដែលបង្ហាញថាជាគម្លាតស្តង់ដារមធ្យម។បំរែបំរួលរវាងក្រុមព្យាបាលត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើតេស្ត t របស់សិស្ស ឬការវិភាគមួយផ្លូវនៃការប្រែប្រួល ដោយតម្លៃ P <0.05 បង្ហាញពីសារៈសំខាន់ស្ថិតិ។
ទិន្នន័យទាំងអស់ដែលទទួលបាន ឬវិភាគក្នុងអំឡុងពេលសិក្សានេះត្រូវបានបញ្ចូលក្នុងអត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពផ្សាយនេះ និងឯកសារព័ត៌មានបន្ថែម។
Torre, LA, Siegel, RL និង Jemal, A. ស្ថិតិជំងឺមហារីកសួត។គុណកិរិយា។ផុតកំណត់។ថ្នាំ។ជីវវិទ្យា។893, 1–19 (2016)។
Hecht, S. Tobacco carcinogens, biomarkers និងមហារីកដែលបណ្តាលមកពីថ្នាំជក់។ណាត។បព្វជិតមហារីក។៣, ៧៣៣–៧៤៤ (២០០៣)។
Phillips, DH និង Venitt, S. DNA និងប្រូតេអ៊ីន adduct នៅក្នុងជាលិការបស់មនុស្សដែលបណ្តាលមកពីការប៉ះពាល់នឹងផ្សែងថ្នាំជក់។អន្តរជាតិ។J. មហារីក។131, 2733–2753 (2012)។
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA និង Yu M. ឥទ្ធិពលនៃ Houttuynia cordata និង silibinin លើដុំសាច់សួតដែលបណ្ដាលមកពី benzo(a) pyrene នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ A/J ។មហារីក 7, 1053–1057 (2005) ។
Tang, W. et al ។ផលិតផលធម្មជាតិប្រឆាំងមហារីក ដាច់ដោយឡែកពីវត្ថុធាតុដើមឱសថចិន។ថ្គាម។ថ្នាំ។6, 27 (2011) ។
Yang, Y. et al ។ប្រសិទ្ធភាពនៃសារធាតុ polyphenon E, យិនស៊ិនក្រហម និង rapamycin លើដុំសាច់សួតដែលបណ្ដាលមកពី benzo(a) pyrene នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ A/J ។មហារីក 8, 52–58 (2006) ។
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS និង Yuan, KS Red, ការចូលរួមក្នុងការព្យាបាលជំងឺមហារីក។ថ្គាម។ជេ នុត។ថ្នាំ។១៤, ៧–១៦ (២០១៦)។
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS និង Gao, L. Ginsenosides នៅក្នុងឫស និងស្លឹករបស់យិនស៊ិនអាមេរិក។J. Agric ។គីមីវិទ្យាអាហារ។៤៤, ៧១៧–៧២០ (១៩៩៦)។
Attele AS, Wu JA និង Yuan KS Pharmacology of ginseng: សមាសធាតុជាច្រើន និងផលប៉ះពាល់ជាច្រើន។ជីវគីមី។ឱសថវិទ្យា។58, 1685–1693 (1999)។
ពេលវេលាប្រកាស៖ ថ្ងៃទី ១៧ ខែកញ្ញា ឆ្នាំ ២០២៣