Nature.com сайтына киргениңиз үчүн рахмат.Сиз колдонуп жаткан браузердин версиясы чектелген CSS колдоосуна ээ.Мыкты натыйжалар үчүн браузериңиздин жаңыраак версиясын колдонууну сунуштайбыз (же Internet Explorerде шайкештик режимин өчүрүүнү).Ошол эле учурда, үзгүлтүксүз колдоону камсыз кылуу үчүн биз сайтты стилдөөсүз же JavaScriptсиз көрсөтүп жатабыз.
Кызыл женьшень жүздөгөн жылдар бою салттуу азиялык медицинада колдонулат.Бул изилдөөдө биз ар кайсы аймактарда өстүрүлгөн кызыл женьшеньдин төрт түрүнүн (кытайлык кызыл женьшень, кореялык кызыл женьшень А, кореялык кызыл женьшень В жана кореялык кызыл женьшень С) канцерогендик өпкөнүн пайда болушуна жана өсүшүнө бөгөт коюу жөндөмдүүлүгүн бааладык. шишиктер.A/J чычкандарында бензо(а)пирен (B(a)P) сыноосу жүргүзүлүп, кореялык кызыл женьшень В төрт кызыл женьшень сортунун ичинен шишик жүгүн азайтуу боюнча эң натыйжалуу деп табылган.Мындан тышкары, биз төрт кызыл женьшень экстрактысында ар кандай женьсенозиддердин (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 жана Rg5) мазмунун талдап көрдүк жана кореялык кызыл женьшень В бар экенин аныктадык. гинсенозид Rg3 (G-Rg3) эң жогорку деңгээли, бул G-Rg3 анын терапиялык натыйжалуулугунда маанилүү ролду ойношу мүмкүн экенин көрсөтүп турат.Бул иш G-Rg3 салыштырмалуу төмөн биожеткиликтүүлүгүн көрсөтөт.Бирок, G-Rg3 P-gp ингибитору верапамил менен бирге колдонулганда, G-Rg3тин Caco-2 клеткаларына агып чыгышы азайып, келемиш моделинде G-Rg3 ичегиден сиңирүү ылдамдыгы жогорулаган жана G-Rg3 көбөйтүлдү.Caco-2 клеткаларында Rg3 агып чыгышы азаят, ал эми Rg3 концентрациясынын деңгээли төмөндөйт.G-Rg3 ичегиде жана плазмада көбөйүп, анын шишиктердин алдын алуу жөндөмү B (a) P-индукцияланган шишиктин келемиш моделинде да жогорулайт.Биз ошондой эле G-Rg3 адамдын өпкө клеткаларында B (a) P-индукцияланган цитотоксиктикти жана ДНК кошулмаларын түзүүнү азайтканын жана Nrf2 жолу аркылуу II фазадагы ферменттердин экспрессиясын жана активдүүлүгүн калыбына келтиргенин таптык, бул аракеттин потенциалдуу механизмине байланыштуу болушу мүмкүн G ингибициясы -Rg3..Өпкө шишиктеринин пайда болушу жөнүндө.Биздин изилдөө чычкан моделдеринде өпкө шишиктерин бутага алууда G-Rg3 үчүн потенциалдуу маанилүү ролду көрсөтөт.Бул гинсенозиддин оозеки биожеткиликтүүлүгү P-гликопротеинди максаттуу кылуу менен жакшыртылып, молекуланын антиракка каршы таасирин тийгизет.
Өпкө рагынын эң кеңири таралган түрү - бул Кытайда жана Түндүк Америкада рактан каза болгондордун негизги себептеринин бири болуп саналган кичинекей клеткалык эмес өпкө рагы (КСКК).Чакан клеткалык эмес өпкө рагынын пайда болуу коркунучун жогорулаткан негизги фактор тамеки тартуу болуп саналат.Тамекинин түтүнүндө 60тан ашык канцерогендер бар, анын ичинде бензо(а)пирен (В(а)Р), нитрозаминдер жана радондун ажыроосунун радиоактивдүү изотоптору.3 Полициклдүү ароматтык углеводороддор B(a)P тамекидеги уулуулуктун негизги себеби болуп саналат. түтүн.B(a)P таасири астында P450 цитохрому аны B(a)P-7,8-дигидродиол-9,10-эпоксидге (BPDE) айлантат, ал ДНК менен реакцияга кирип, BPDE-ДНК 4 кошулмасын пайда кылат. Мындан тышкары, булар adducts шишик стадиясында жана адамдын өпкө шишигине окшош гистопатологиясы бар чычкандарда өпкө шишигинин пайда болушун шарттайт5.Бул өзгөчөлүк B(a)P-индукцияланган өпкө рагы моделин мүмкүн болуучу антирак касиеттери бар кошулмаларды баалоо үчүн ылайыктуу системага айлантат.
Өпкөнүн рак оорусунун жогорку тобокелдик топторунда, өзгөчө тамеки тарткандарда алдын алуунун мүмкүн болгон стратегияларынын бири интраэпителиалдык шишиктердин өнүгүшүн басаңдатуу жана ошону менен алардын кийинки залалдуу шишикке өтүшүн алдын алуу үчүн химиопревентивдик каражаттарды колдонуу болуп саналат.Жаныбарларга жасалган изилдөөлөр көрсөткөндөй, ар кандай химиопревентивдик каражаттар натыйжалуу6.Биздин мурунку баяндамада7 кызыл женьшендин өпкө рагына жакшы профилактикалык таасирин баса белгилеген.Бул чөп кылымдар бою салттуу азиялык медицинада өмүрдү жана ден соолукту узартуу үчүн колдонулуп келген жана шишикке каршы таасири бар экени тастыкталган8.
Женьшеньдин активдүү фактору женьшень экстракттарынын сапатын баалоо үчүн композиттик маркер катары колдонулган женьсенозид болуп саналат.Чийки женьшень экстрактыларынын сандык анализи, адатта, RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 жана Rc9,10, анын ичинде бир нече женьсенозиддерди колдонууну камтыйт.Ginsenosides алардын өтө начар оозеки биожеткиликтүүлүгүнө байланыштуу аз клиникалык колдонууга ээ11.Бул начар биожеткиликтүүлүк механизми так эмес болсо да, P-гликопротеин (P-gp) 12 менен шартталган женьсенозиддердин агып чыгышы себеп болушу мүмкүн.P-gp клетка ичиндеги заттарды сырткы чөйрөгө чыгаруу үчүн АТФ гидролизинин энергиясын колдонгон АТФ-байланыштуу кассеталык ташуучу супер үй-бүлөдөгү эң маанилүү агып чыгуучу транспорттордун бири.P-gp транспортерлери, адатта, ичегиде, бөйрөктө, боордо жана кан-мээ тоскоолдуктарында кеңири таралган13.P-gp ичегиден сиңирүүдө чечүүчү ролду ойнойт, ал эми P-gpдин бөгөт коюусу ракка каршы кээ бир дарылардын оозеки сиңирүүсүн жана жеткиликтүүлүгүн жогорулатат12,14.Мурда адабиятта колдонулган ингибиторлордун мисалдары верапамил жана циклоспорин A15 болуп саналат.Бул иш Кытайдан жана Кореядан келген ар кандай кызыл женьшень экстрактыларынын залалдуу ооруларга таасир тийгизүү жөндөмдүүлүгүн баалоо үчүн B (a) P менен шартталган өпкө рагын изилдөө үчүн чычкан системасын түзүүнү камтыйт.Экстракттар канцерогенезге таасир этиши мүмкүн болгон белгилүү женьсенозиддерди аныктоо үчүн жекече талданган.Верапамил андан кийин P-gpди максаттуу жана рак оорусуна каршы багытталган женьсенозиддердин оозеки биожеткиликтүүлүгүн жана терапиялык натыйжалуулугун жогорулатуу үчүн колдонулган.
Женьшень сапониндеринин канцерогенезге терапиялык таасирин тийгизген механизми белгисиз бойдон калууда.Изилдөөлөр көрсөткөндөй, ар кандай женьсенозиддер канцерогендерден келип чыккан ДНКнын бузулушун азайтып, кычкылдануу стрессин азайтып, II фазадагы детоксикация ферменттерин активдештирип, клетканын бузулушун алдын алат.Glutathione S-transferase (GST) канцерогендерден келип чыккан ДНКнын бузулушун азайтуу үчүн талап кылынган типтүү II фаза ферменти.Ядролук эритроид 2-байланыштуу фактор 2 (Nrf2) редокстук гомеостазды жөнгө салуучу жана II фазадагы ферменттердин экспрессиясын жана цитопротектордук антиоксиданттык реакцияларды18 активдештирүүчү маанилүү транскрипция фактору болуп саналат.Биздин изилдөөбүз ошондой эле аныкталган гинсенозиддердин B (a) P-индукцияланган цитотоксиктүүлүгүн жана BPDE-ДНК кошулмаларынын пайда болушун азайтуу боюнча таасирин, ошондой эле кадимки өпкө клеткаларында Nrf2 жолун модуляциялоо менен II фаза ферменттерин индукциялоону изилдеди.
B (a) P-индукцияланган рактын чычкан моделин түзүү мурунку иш менен шайкеш келет5.Сүрөт 1A B(a)P, суу (контролдоо), кытай кызыл женьшень экстракты (CRG), корей кызыл женьшень экстракты A (KRGA) жана корей кызылы менен шартталган чычкандын рагы моделин 20 жумалык дарылоонун эксперименталдык дизайнын көрсөтөт. женьшень.В экстракты (KRGB) жана кореялык кызыл женьшень экстракты C (KRGC).Кызыл женьшень менен 20 жумалык дарылоодон кийин чычкандар CO2 асфиксиясынан курмандыкка чалынышты.Сүрөт 1B кызыл женьшень ар кандай түрлөрү менен дарыланган жаныбарлардын макроскопиялык өпкө шишигин көрсөтөт, жана Figure 1C шишик үлгүсүнүн өкүлү жарык micrograph көрсөтөт.KRGB менен дарыланган жаныбарлардын шишик жүгү (1,5 ± 0,35) 1D-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, контролдук жаныбарларга (0,82 ± 0,2, P <0,05) караганда төмөн болгон.шишик жүгү бөгөт коюу орточо даражасы 45% түздү.Сыналган башка кызыл женьшень экстрактылары шишик жүктөмүндө мындай олуттуу өзгөрүүлөрдү көрсөткөн эмес (P > 0,05).Кызыл женьшень менен дарылоонун 20 жумасында чычкан моделинде эч кандай ачык-айкын терс таасирлер байкалган эмес, анын ичинде дене салмагынын өзгөрүүсү (маалыматтар көрсөтүлгөн эмес) жана боор же бөйрөктүн уулуулугу жок (Figure 1E, F).
Кызыл женьшень экстракты A/J чычкандарында өпкө шишигинин өнүгүшүн дарылайт.(A) Эксперименттик долбоорлоо.(B) чычкан моделинде чоң өпкө шишиктери.Шишиктер жебелер менен көрсөтүлөт.а: Кытай кызыл женьшень тобу.б: корей кызыл женьшенинин А тобу.c: Корей кызыл женьшень тобу B. d: Корей кызыл женьшень тобу C. d: Контролдук топ.(C) өпкө шишигин көрсөткөн жарык микросүрөт.Чоңойтуу: 100. б: 400. (D) Кызыл женьшень экстракты тобунда шишик жүгү.(E) АЛТ боор ферментинин плазмадагы деңгээли.(F) Бүйрек ферментинин плазмадагы деңгээли Cr.Маалыматтар орточо ± стандарттык четтөө катары көрсөтүлөт.*P <0,05.
Бул изилдөөдө аныкталган кызыл женьшень экстракттары төмөнкү женьсенозиддердин санын аныктоо үчүн ультра натыйжалуу суюк хроматография тандемдик масс-спектрометрия (UPLC-MS/MS) менен талданды: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 жана Rg5.Анализдерди өлчөө үчүн колдонулган UPLC жана MS шарттары мурунку отчетто19 сүрөттөлгөн.Төрт кызыл женьшень экстрактысынын UPLC-MS/MS хроматограммалары 2A-сүрөттө көрсөтүлгөн.CRG (590.27 ± 41.28 мкмоль / л) (Figure 2B) жогорку жалпы Ginsenoside мазмуну менен, жалпы ginsenoside мазмуну олуттуу айырмачылыктар бар эле.жеке ginsenosides баалоодо (Figure 2C), KRGB башка ginsenosides (58,33 ± 3,81 μmol / L G-Rg3s жана 41,56 ± 2,88 μmol / L G -Rg3r) салыштырганда G-Rg3 жогорку даражасын көрсөттү).кызыл женьшень түрү (P <0,001).G-Rg3 20-көмүртектеги гидроксил тобунун абалы боюнча айырмаланган G-Rg3r жана G-Rg3s жуп стереоизомерлеринде пайда болот (2D-сүрөт).Натыйжалар G-Rg3r же G-Rg3 B (a) P менен шартталган рак чычкан моделинде маанилүү антирак дараметин ээ болушу мүмкүн экенин көрсөтүп турат.
Ар кандай кызыл женьшень экстрактыларында женьсенозиддердин мазмуну.(A) төрт кызыл женьшень экстрактыларынын UPLC-MS/MS хроматограммалары.(B) Көрсөтүлгөн экстракттарда женьсенозиддердин жалпы мазмунун баалоо.(C) Белгиленген экстракттарда жеке гинсенозиддерди аныктоо.(D) G-Rg3r жана G-Rg3s гинсенозид стереоизомерлеринин структуралары.Маалыматтар үч эселенген аныктоолордун орточо ± стандарттык четтөөлөрү катары көрсөтүлөт.***P <0,001.
UPLC-MS/MS изилдөөсү 20 жумалык дарылоодон кийин ичеги жана кан үлгүлөрүндөгү женьсенозиддердин санын аныктоону талап кылды.КРГБ менен дарылоо канда 0,0063 ± 0,0005 мкг/мл Rg5 гана бар экенин көрсөткөн.Эч кандай калган женьсенозиддер табылган жок, бул начар оозеки биожеткиликтүүлүгүн жана ошондуктан бул женьсенозиддердин таасири азайгандыгын көрсөтүп турат.
Жоон ичеги аденокарциномасынын клетка линиясы Caco-2 морфологиялык жана биохимиялык жактан адамдын ичеги эпителий клеткаларына окшош, бул ичеги эпителий тосмосу аркылуу энтероциттердин ташууларын баалоодо анын пайдалуулугун көрсөтөт.Бул талдоо мурда изилдөө 20 негизделген.Фигуралар 3A, B, C, D, E, F G-Rg3r жана G-Rg3 клеткаларынын трансклеткалык ташууларынын репрезентативдик сүрөттөрүн көрсөтөт.G-Rg3r же G-Rg3тин Caco-2 моно катмарлары аркылуу базотерапалдан апикалдык тарапка (Pb-a) апикалдык тараптан базотерапалдык тарапка (Па-б) караганда бир кыйла жогору болгон.G-Rg3r үчүн орточо Pa-b мааниси 0,38 ± 0,06 болгон, ал 50 мкмоль/л верапамил менен дарылоодон кийин 0,73 ± 0,06га чейин жана 100 мкмоль/л верапамил менен дарылоодон кийин 1,14 ± 0,09 чейин көбөйгөн (б <0,001 жана 2-сүрөт);3A).G-Rg3 үчүн байкоолор окшош үлгү (сүрөт. 3B) ээрчип, натыйжалар verapamil дарылоо G-Rg3r жана G-Rg3 ташуу күчөтүлгөн экенин көрсөттү.Верапамил менен дарылоо, ошондой эле орточо Pb-a жана G-Rg3r жана G-Rg3s агып чыгуу катышынын олуттуу төмөндөшүнө алып келди (Figure 3C, D, E, F), бул верапамил менен дарылоо Како-2 агып чыгуучу клеткалардагы ginsenoside мазмунун азайтат..
Како-2 моно катмарларында G-Rg3 трансклеткалык транспорту жана келемиш перфузиялык анализде ичегиден сиңирүү.(A) Caco-2 monolayer G-Rg3r тобунун Pa-b мааниси.(B) Caco-2 monolayer G-Rg3s топтордун Pa-b мааниси.(C) Caco-2 monolayer G-Rg3r тобунун Pb мааниси.(D) Caco-2 monolayer G-Rg3s топтордун Pb мааниси.(E) Caco-2 моно катмарындагы G-Rg3r топторунун кирешелүүлүгү.(F) Caco-2 monolayer G-Rg3 топторунун кирешелүүлүгү катышы.(G) келемиштер бир перфузиялык талдоо G-Rg3r ичеги сиңирүү пайызы.(H) келемиштер бир перфузиялык талдоо G-Rg3 ичеги сиңирүү пайызы.Өткөмдүүлүк жана сиңирүү верапамилди кошпостон салыштырылган.Маалыматтар беш көз карандысыз эксперименттин орточо ± стандарттык четтөө катары көрсөтүлөт.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Мурунку work20 менен шайкеш келемиштердин ортотопиялык ичеги перфузиясы верапамил менен дарылоодон кийин ичегиде G-Rg3 сиңирүү көбөйөт же жокпу, аныктоо үчүн аткарылган.Фигуралар 3G, H жогоруда көрсөтүлгөн убакыт аралыгында рак моделиндеги келемиштерде G-Rg3r жана G-Rg3 ичегиден сиңирүү пайызын баалоо үчүн өкүл перфузиялык анализдерди көрсөтөт.Болжол менен 10% начар G-Rg3r кабыл алуунун баштапкы пайызы 50 мкм верапамил менен дарылоодон кийин 20% га чейин жана 100 мкм верапамил менен дарылоодон кийин 25% дан ашык көбөйгөн.Ошо сыяктуу эле, баштапкы кабыл алуу 10% болгон G-Rg3 да 50 μM верапамил менен дарылоодон кийин 20% дан жогору жана 100 мкм верапамил менен дарылоодон кийин дээрлик 30% ды көрсөттү, бул верапамил менен P-gpдин ингибициясын күчөтөт дегенди билдирет. өпкө рагынын чычкан моделинде ичеги G-абсорбция Rg3.
Жогорудагы ыкмага ылайык, B (a) P менен шартталган рак модели чычкандар 4A сүрөттө көрсөтүлгөндөй, туш келди алты топко бөлүнгөн.G-Rg3 дарылоо тобунда эч кандай олуттуу салмак жоготуу же уулуулугунун клиникалык белгилери байкалган эмес (маалыматтар көрсөтүлгөн эмес).20 жумалык дарылоодон кийин ар бир чычкандын өпкөлөрү чогултулган.Figure 4B жогоруда дарылоо топтордогу чычкандардын макроскопиялык өпкө шишигин көрсөтөт, жана Figure 4C өкүлү шишик өкүлү жарык micrograph көрсөтөт.Ар бир топтогу шишик жүктөмүнө карата (4D-сүрөт), G-Rg3r жана G-Rg3s менен дарыланган чычкандардын маанилери тиешелүүлүгүнө жараша 0,75 ± 0,29 мм3 жана 0,81 ± 0,30 мм3 болгон, ал эми G чычкандары үчүн маанилер. менен -Rg3s тиешелүүлүгүнө жараша 1,63 ± 0,40 мм3 болгон.контролдоо чычкандар (p <0.001), G-Rg3 дарылоо чычкандардын шишик жүгүн азайткан экенин көрсөтүп турат.Верапамилди колдонуу бул кыскарууну ого бетер күчөттү: verapamil+ G-Rg3r чычкандарындагы көрсөткүчтөр 0,75 ± 0,29 мм3 тен 0,33 ± 0,25 мм3 ге чейин (p < 0,01), ал эми верапамил+ үчүн 0,81 ± 0,30 0,29 2 ге чейин төмөндөгөн. mm3 G. -Rg3s менен мамиле чычкандар (б <0.05), verapamil шишик G-Rg3 бөгөт коюу таасирин күчөтүшү мүмкүн экенин көрсөтүп турат.Шишик жүгү контролдоочу топ менен verapamil тобунун, G-Rg3r тобунун жана G-Rg3s тобунун жана верапамил+G-Rg3r тобунун жана верапамил+G-Rg3s тобунун ортосунда олуттуу айырмачылыктарды көрсөткөн жок.Мындан тышкары, бааланган дарылоо (Figure 4E, F) менен байланышкан эч кандай олуттуу боор же бөйрөк уулуулугу болгон.
G-Rg3 дарылоо жана көрсөтүлгөн топтордо плазма же ичеги G-Rg3r жана G-Rg3 денгээлде кийин шишик жүгү.(A) Эксперименттик долбоорлоо.(B) чычкан моделинде макроскопиялык шишиктер.Шишиктер жебелер менен көрсөтүлөт.а: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r верапамил менен айкалышта.d: G-Rg3 верапамил менен бирге.г: Верапамил.д: контролдоо.(C) чоңойтуу учурунда шишиктин оптикалык микрографы.Жооп: 100x.b: 400X.(D) A / J чычкандардын шишик жүгү боюнча G-Rg3 + verapamil дарылоонун таасири.(E) АЛТ боор ферментинин плазмадагы деңгээли.(F) Бүйрек ферментинин плазмадагы деңгээли Cr.(G) Көрсөтүлгөн топтордун G-Rg3r же G-Rg3 плазмасынын деңгээли.(H) Көрсөтүлгөн топтордун ичегилериндеги G-Rg3r же G-Rg3s деңгээли.Маалыматтар үч эселенген аныктоолордун орточо ± стандарттык четтөөлөрү катары көрсөтүлөт.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B (a) P менен шартталган рак модели чычкандарындагы G-Rg3 деңгээли Методдор бөлүмүндө сүрөттөлгөн ыкмага ылайык 20 жумалык дарылоо мезгилинен кийин UPLC-MS/MS тарабынан бааланган.4G жана H көрсөткүчтөрү тиешелүүлүгүнө жараша плазманы жана ичеги G-Rg3 деңгээлин көрсөтөт.Плазмадагы G-Rg3r деңгээли 0,44 ± 0,32 мкмоль/л болгон жана верапамилди бир убакта колдонуу менен 1,17 ± 0,47 мкмоль/лге чейин көбөйгөн (p <0,001), ал эми ичегидеги G-Rg3r деңгээли 0,53 ± 0,08 мкмоль/л болгон.Verapamil менен айкалышканда, г 1,35 ± 0,13 мкг / г чейин көбөйгөн (б <0,001).G-Rg3 үчүн натыйжалар ушуга окшош схемага ээ болуп, верапамил менен дарылоо A/J чычкандарында G-Rg3 оозеки биожеткиликтүүлүгүн жогорулатканын көрсөтүп турат.
HEL клеткаларында B (a) P жана G-Rg3 цитотоксиктигин баалоо үчүн клетканын жашоо жөндөмдүүлүгүн анализдөө колдонулган.HEL клеткаларындагы B(a)P тарабынан индукцияланган цитотоксиктүүлүк 5А-сүрөттө, ал эми G-Rg3r жана G-Rg3тин токсиндик эмес касиеттери 5A жана 5B сүрөттөрүндө көрсөтүлгөн.5B, C. G-Rg3 cytoprotective таасирин баалоо үчүн, B (а) P hEL клеткаларына G-Rg3r же G-Rg3 ар кандай концентрациялары менен бирге башкарылган.5D-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, G-Rg3r 5 μM, 10 μM жана 20 μM концентрацияларында клетканын жашоо жөндөмдүүлүгүн тиешелүүлүгүнө жараша 58.3%, 79.3% жана 77.3% калыбына келтирди.Ушундай эле натыйжаларды G-Rg3s тобунан да көрүүгө болот.G-Rg3s концентрациясы 5 μM, 10 μM жана 20 μM болгондо, клетканын жашоо жөндөмдүүлүгү тиешелүүлүгүнө жараша 58.3%, 72.7% жана 76.7% чейин калыбына келтирилди (5E-сүрөт).).BPDE-ДНК кошулмаларынын болушу ELISA комплектинин жардамы менен өлчөнгөн.Биздин натыйжалар BPDE-ДНК аддук деңгээли B (a) P менен дарылоо тобунда контролдук топко салыштырмалуу көбөйгөнүн көрсөттү, бирок G-Rg3 биргелешип дарылоо менен салыштырганда, B (a) P тобунда BPDE-ДНК аддук деңгээли дарыланган топтун B, ДНК addduct деңгээли бир кыйла кыскарган.B (a) P менен дарылоонун натыйжалары 5F-сүрөттө (1.87 ± 0.33 жана G-Rg3r үчүн 3.77 ± 0.42, G -Rg3s үчүн 1.93 ± 0.48 жана 3.77 ± 0.42, б < 0.001) көрсөтүлгөн.
G-Rg3 жана B (a) P менен мамиле hEL клеткаларында клетка жашоо жөндөмдүүлүгү жана BPDE-ДНК adduct түзүү.(A) B (a) P менен мамиле hEL клеткаларынын жашоо жөндөмдүүлүгү.(B) G-Rg3r менен мамиле hEL клеткаларынын жашоо жөндөмдүүлүгү.(C) G-Rg3 менен мамиле hEL клеткаларынын жашоо жөндөмдүүлүгү.(D) B (a) P жана G-Rg3r менен мамиле hEL клеткаларынын жашоо жөндөмдүүлүгү.(E) B (a) P жана G-Rg3 менен мамиле hEL клеткаларынын жашоо жөндөмдүүлүгү.(F) B (a) P жана G-Rg3 менен мамиле hEL клеткаларындагы BPDE-ДНК аддуктунун деңгээли.Маалыматтар үч эселенген аныктоолордун орточо ± стандарттык четтөөлөрү катары көрсөтүлөт.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
GST энзим экспрессиясы 10 μM B (a) P жана 10 μM G-Rg3r же G-Rg3s менен биргелешип дарылоодон кийин аныкталган.Биздин натыйжалар B (a) P GST экспрессиясын (G-Rg3r тобунда 59.7 ± 8.2% жана G-Rg3s тобунда 39 ± 4.5%) жана B (a) P G-Rg3r менен байланышкандыгын көрсөттү. , же G-Rg3r менен, же G-Rg3r менен.G-Rg3s менен бирге дарылоо GST экспрессиясын калыбына келтирди.GST туюнтмасы (G-Rg3r тобунда 103,7 ± 15,5% жана G-Rg3s тобунда 110 ± 11,1%, p <0,05 жана p <0,001, тиешелүүлүгүнө жараша, 6A, B жана C-сүрөт).GST активдүүлүгү активдүүлүктү анализдөө комплектинин жардамы менен бааланган.Биздин натыйжалар айкалыштырылган дарылоо тобунун B (a) P гана тобуна салыштырмалуу GST активдүүлүгү жогору экенин көрсөттү (G-Rg3r тобунда 96.3 ± 6.6% га каршы 35.7 ± 7.8% G-Rg3r тобунда 92.3 ± 6.5). ).G-Rg3s тобунда % vs 35,7 ± 7,8%, p <0,001, 6D сүрөт).
B(a)P жана G-Rg3 менен иштетилген hEL клеткаларында GST жана Nrf2 экспрессиясы.(A) Western blotting аркылуу GST экспрессиясын аныктоо.(B) B (а) P жана G-Rg3r менен мамиле hEL клеткаларындагы GST сандык туюнту.(C) B (a) P жана G-Rg3s менен мамиле hEL клеткаларындагы GST сандык туюнту.(D) B (a) P жана G-Rg3 менен мамиле hEL клеткаларында GST иш.(E) Western blotting аркылуу Nrf2 туюнтмасын аныктоо.(F) B (a) P жана G-Rg3r менен мамиле hEL клеткаларындагы Nrf2 сандык туюнту.(G) B (a) P жана G-Rg3s менен мамиле hEL клеткаларындагы Nrf2 сандык туюнту.Маалыматтар үч эселенген аныктоолордун орточо ± стандарттык четтөөлөрү катары көрсөтүлөт.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B (a) P-индукцияланган шишиктин G-Rg3 ортомчулугу менен басылышына катышкан жолдорду түшүндүрүү үчүн, Nrf2 туюнтмасы Western blotting менен бааланган.6E, F, G сүрөттөрүндө көрсөтүлгөндөй, контролдук топ менен салыштырганда, B (a) P дарылоо тобунда Nrf2 деңгээли гана төмөндөгөн;бирок, B (a) P дарылоо тобу менен салыштырганда, PG-Rg3 тобундагы B (а) Nrf2 деңгээли көбөйгөн (G-Rg3r үчүн 106 ± 9,5% 51,3 ± 6,8%, 117 ± 6, 2% үчүн G-Rg3r каршы G-Rg3s үчүн 41 ± 9,8%, б <0,01).
Биз Nrf2нин алдын алуу ролун атайын кичинекей интерференциялоочу РНКны (siRNA) колдонуу менен Nrf2 туюнтмасын басуу менен тастыктадык.Nrf2 нокдаун Батыш блотинг менен тастыкталды (сүр. 7A,B).7C,D сүрөттөрүндө көрсөтүлгөндөй, B(a)P жана G-Rg3 менен hEL клеткаларын биргелешип дарылоо B(a)P менен дарылоого салыштырмалуу BPDE-ДНК кошулмаларынын санынын (1,47 ± 0,21) азайышына алып келди. башкаруу siRNA тобунда жалгыз.) G-Rg3r 4,13 ± 0,49, G-Rg3s 1,8 ± 0,32 жана 4,1 ± 0,57, б <0,01 болгон).Бирок, BPDE-ДНК түзүлүшү боюнча G-Rg3 ингибитордук таасири Nrf2 нокдаун менен жоюлган.siNrf2 тобунда B (a) P жана G-Rg3 биргелешип дарылоо жана B (a) P дарылоо (3.0 ± 0.21 G-Rg3r үчүн 3.56 ± 0.32 үчүн 3.0 ± 0.32) ортосунда BPDE-ДНК кошулмаларын түзүүдө олуттуу айырма болгон эмес. ).G-Rg3r үчүн 3,6га каршы G-Rg3s үчүн ±0,45ке каршы 4,0±0,37ге каршы, б > 0,05).
HEL клеткаларында BPDE-ДНК аддуктун пайда болушуна Nrf2 кулатуунун таасири.(A) Nrf2 нокдаун Батыш менен тастыкталды.(B) Nrf2 тилкесинин интенсивдүүлүгүнүн сандык көрсөткүчү.(C) B (a) P жана G-Rg3r менен дарыланган hEL клеткаларындагы BPDE-ДНК кошулмаларынын деңгээлине Nrf2 нокаунтунун таасири.(D) B(a)P жана G-Rg3 менен дарыланган hEL клеткаларындагы BPDE-ДНКнын кошумча деңгээлине Nrf2 кулатуунун таасири.Маалыматтар үч эселенген аныктоолордун орточо ± стандарттык четтөөлөрү катары көрсөтүлөт.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Бул изилдөө B (a) P менен шартталган өпкө рагы чычкан моделине ар кандай кызыл женьшень экстрактыларынын алдын алуучу таасирин баалады жана KRGB дарылоо шишик жүгүн олуттуу кыскартты.G-Rg3 бул женьшень экстрактысында эң жогорку мазмунга ээ экенин эске алып, шишиктин алдын алууда бул женьсенозиддин маанилүү ролу изилденген.G-Rg3r жана G-Rg3 (G-Rg3 эки эпимери) B (a) P-индукцияланган рактын чычкан моделинде шишиктин жүгүн олуттуу кыскартты.G-Rg3r жана G-Rg3 шишик клеткаларынын апоптозун 21 индукциялоо, шишиктин өсүшүнө22 бөгөт коюу, клетка циклин токтотуу23 жана ангиогенезге24 таасир берүү аркылуу ракка каршы таасир көрсөтөт.G-Rg3 ошондой эле уюлдук metastasis25 бөгөт коюу үчүн көрсөтүлдү, жана химиотерапия жана радиотерапиянын таасирин күчөтүү үчүн G-Rg3 жөндөмдүүлүгү документтештирилген 26,27.Poon et al G-Rg3 дарылоо B (a) P28 генотоксиктик таасирин азайтышы мүмкүн экенин көрсөттү.Бул изилдөө экологиялык канцерогендик молекулаларды бутага алууда жана рактын алдын алууда G-Rg3 терапиялык потенциалын көрсөтөт.
Алардын жакшы профилактикалык потенциалына карабастан, женьсенозиддердин оозеки биологиялык жетишсиздиги бул молекулаларды клиникалык колдонууда кыйынчылыктарды жаратат.Келемиштерге женьсенозиддерди оозеки кабыл алуунун фармакокинетикалык анализи анын биожеткиликтүүлүгү дагы эле 5%29дан аз экенин көрсөттү.Бул тесттер 20 жумалык дарылоо мезгили өткөндөн кийин, Rg5 гана кан көлөмү азайган экенин көрсөттү.Начар биожеткиликтүүлүктүн негизги механизми тактала элек болсо да, P-gp гинсенозиддердин агып чыгышына катышат деп эсептелет.Бул иш биринчи жолу verapamil, башкаруу P-gp блокатор, G-Rg3r жана G-Rg3s оозеки биожеткиликтүүлүгүн жогорулатат деп көрсөттү.Ошентип, бул табылга G-Rg3r жана G-Rg3s анын агып чыгуусун жөнгө салуу үчүн P-gp субстраттары катары иш-аракет кылат.
Бул иш верапамил менен айкалыштыруу дарылоо өпкө рагынын чычкан моделинде G-Rg3 оозеки биожеткиликтүүлүгүн жогорулатат экенин көрсөтүп турат.Бул табылга P-gp блокадасынын үстүнө G-Rg3 ичеги трансклеткалык транспорт көбөйүп, ошону менен анын сиңирүү жогорулатуу менен колдоого алынат.Caco2 клеткаларындагы анализдер верапамил менен дарылоо G-Rg3r жана G-Rg3s агып чыгууну азайтып, ал эми мембрананын өткөрүмдүүлүгүн жакшыртаарын көрсөттү.Янг жана башкалар тарабынан жүргүзүлгөн изилдөө.Изилдөөлөр көрсөткөндөй, циклоспорин А (башка P-gp блокатору) менен дарылоо гинсенозид Rh2 биожеткиликтүүлүгүн 1%20 баштапкы мааниден 30%ке чейин жогорулатат.Ginsenosides кошулмалар K жана Rg1 да окшош натыйжаларды көрсөттү30,31.Верапамил менен циклоспорин А биргелешип берилгенде, Caco-2 клеткаларындагы К кошулмасынын агып чыгуусу 26,6дан 3кө чейин азайган, ал эми анын клетка ичиндеги деңгээли 40 эсеге30 жогорулаган.Verapamil катышуусунда, Rg1 деңгээл Meng et al.31 көрсөткөндөй, Ginsenoside агып P-gp үчүн ролду сунуш, келемиш өпкө эпителий клеткаларында көбөйгөн.Бирок, verapamil Liang ж.б. көрсөткөндөй, алар P-gp субстраттардын таасири жок экенин көрсөтүп, кээ бир ginsenosides (мисалы, Rg1, F1, Rh1 жана Re сыяктуу) агып чыгуу боюнча бирдей таасир эткен эмес.32 .Бул байкоо башка транспортёрлордун жана альтернативалуу гинсенозиддик структуралардын катышуусу менен байланыштуу болушу мүмкүн.
G-Rg3 рактын алдын алуучу таасиринин механизми түшүнүксүз.Мурунку изилдөөлөр көрсөткөндөй, G-Rg3 кычкылдануу стрессин жана сезгенүүнү азайтып, ДНКнын бузулушун жана апоптозду алдын алат, бул B (a) P-индукцияланган шишиктин алдын алуунун негизги механизми болушу мүмкүн.Кээ бир отчеттор B(a)P тарабынан индукцияланган генотоксиктүүлүк BPDE-DNA34 түзүү үчүн II фаза ферменттерин модуляциялоо аркылуу азайтылышы мүмкүн экенин көрсөтүп турат.GST типтүү фаза II ферменти болуп саналат, ал BPDE-ДНК кошулмаларынын пайда болушуна тоскоол болуп, GSHдин BPDE менен туташуусуна көмөктөшөт, ошону менен B(a)P35 тарабынан ДНКнын бузулушун азайтат.Биздин натыйжалар G-Rg3 дарылоо B (a) P-индукцияланган цитотоксиктүүлүгүн жана HEL клеткаларында BPDE-ДНК аддуктун түзүлүшүн азайтып, GST экспрессиясын жана активдүүлүгүн in vitro калыбына келтирерин көрсөтүп турат.Бирок, бул таасирлер G-Rg3 Nrf2 жолу аркылуу цитопротектордук таасирлерди жаратат деп болжолдоп, Nrf2 жок болгон.Nrf2 - бул ксенобиотиктердин36 тазаланышына көмөктөшүүчү II фазадагы детоксикация ферменттери үчүн негизги транскрипция фактору.Nrf2 жолунун активдешүүсү цитопротекцияны индукциялап, кыртыштын зыянын азайтат37.Мындан тышкары, бир нече отчеттор Nrf2дин канцерогенездеги шишик басуучу катары ролун колдошкон38.Биздин изилдөө Nrf2 жолунун G-Rg3 тарабынан индукциясы B(a)P-индукцияланган генотоксикацияда маанилүү жөнгө салуучу ролду ойноорун, II фаза ферменттерин активдештирүү аркылуу B(a)P детоксикациясын жаратып, ошону менен шишик пайда болуу процессине тоскоол болоорун көрсөтүп турат.
Биздин иш ginsenoside G-Rg3 маанилүү тартуу аркылуу чычкандардын B (a) P-индукцияланган өпкө рагын алдын алууда кызыл женьшендин дараметин ачып берет.Бул молекуланын начар оозеки биожеткиликтүүлүгү аны клиникалык колдонууга тоскоолдук кылат.Бирок, бул изилдөө G-Rg3 P-gp субстраты экенин биринчи жолу көрсөтүп турат, жана P-gp ингибиторун башкаруу G-Rg3 биожеткиликтүүлүгүн in vitro жана in vivo жогорулатат.G-Rg3 анын алдын алуу функциясы үчүн потенциалдуу механизм болушу мүмкүн Nrf2 жолун жөнгө салуу менен B (a) P-индукцияланган цитотоксикацияны азайтат.Биздин изилдөө өпкө рагын алдын алуу жана дарылоо үчүн ginsenoside G-Rg3 дараметин тастыктайт.
Алты жумалык ургаачы A/J чычкандары (20 ± 1 г) жана 7 жумалык эркек Вистар келемиштери (250 ± 20 г) Джексон лабораториясынан (Бар Харбор, АКШ) жана Ухань зоология институтунан алынган.Университет (Ухань, Кытай).Кытай түрү маданиятын чогултуу борбору (Ухань, Кытай) бизге Caco-2 жана hEL клеткаларын берди.Сигма-Олдрих (Сент-Луис, АКШ) B(a)P жана трикаприндин булагы болуп саналат.Тазаланган женьсенозиддер G-Rg3r жана G-Rg3s, диметил сульфоксид (DMSO), CellTiter-96 пролиферациясын текшерүү комплекти (MTS), верапамил, минималдуу маанилүү чөйрө (MEM) жана түйүлдүктүн сывороткасы (FBS) Chengdu Must Bio-Technology компаниясынан сатылып алынган. .Co., Ltd.(Чэнду, Кытай).QIAamp ДНК мини комплекти жана BPDE-ДНК кошумча ELISA комплекти Qiagen (Stanford, CA, USA) жана Cell Biolabs (Сан-Диего, CA, АКШ) компанияларынан сатылып алынган.GST активдүүлүгүн анализдөө комплекти жана жалпы протеинди анализдөө комплекти (стандартты BCA ыкмасы) Solarbio (Пекин, Кытай) компаниясынан сатып алынган.Бардык кызыл женьшень экстракттары Мингю лабораториясында сакталат 7. Гонконг баптист университети (Гонконг, Кытай) жана Кореянын онкология борбору (Сеул, Корея) CRG экстрактысынын жана ар кандай корей тектүү кызыл женьшень экстракттарынын коммерциялык булагы болуп саналат (анын ичинде KRGA, KRGB). жана КРГК).Кызыл женьшень 6 жылдык жаңы женьшеньдин тамырынан жасалат.Кызыл женьшень экстракты женьшеньди үч жолу суу менен жууп, андан кийин суулуу экстракты концентрациялоодон жана акырында төмөн температурада кургатуудан женьшень экстракты порошокту алуудан алынат.Антителолор (анти-Nrf2, анти-GST жана β-актин), хрен пероксидазасы менен конъюгацияланган анти-коендук иммуноглобулин G (IgG), трансфекция реагенти, контролдук siRNA жана Nrf2 siRNA Санта-Круз биотехнологиясынан (Санта Круз, CA) сатылып алынган. .), АКШ).
Caco2 жана hEL клеткалары 5% CO2 нымдалган атмосферада 37 °Cде 10% FBS камтыган MEM менен 100 mm2 клетка маданияты идиштерине өстүрүлгөн.Дарылоо шарттарынын таасирин аныктоо үчүн hEL клеткалары 48 саат бою MEMде B (a) P жана G-Rg3 ар кандай концентрациялары менен инкубацияланган.Клеткаларды андан ары талдоо же клеткасыз экстракты даярдоо үчүн чогултууга болот.
Бардык эксперименттер Huazhong илим жана технология университетинин Тонгжи медициналык колледжинин эксперименталдык жаныбарлардын этика комитети тарабынан жактырылган (бекитүү № 2019; Каттоо № 4587TH).Бардык эксперименттер тиешелүү көрсөтмөлөргө жана эрежелерге ылайык жүргүзүлдү жана изилдөө Animal Research: In Vivo Experiments Reporting (ARRIVE) көрсөтмөлөрүнө ылайык жүргүзүлдү.Сегиз жумалык A/J чычкандарына биринчи жолу трикаприн эритмесинде (100 мг/кг, 0,2 мл) B(a)P интраперитоналдык инъекцияланган.Бир жумадан кийин, чычкандар туш келди башкаруу топторуна жана ар кандай дарылоо топторуна, ар бир топто 15 чычканга бөлүнүп, күнүнө бир жолу гавага алынган.20 жумалык дарылоодон кийин, жаныбарлар CO2 асфиксиясынан курмандыкка чалынышты.Өпкөлөр чогултулуп, 24 саатка бекитилди.Үстүнкү шишиктердин саны жана жеке шишик өлчөмдөрү диссекциялоочу микроскоптун астында ар бир өпкө үчүн эсептелген.Шишик көлөмүн баалоо (V) төмөнкү туюнтма аркылуу эсептелген: V (мм3) = 4/3πr3, мында r шишик диаметри.Чычкандардын өпкөсүндөгү бардык шишик көлөмүнүн таза суммасы шишиктин жалпы көлөмүн, ал эми ар бир топтогу шишиктин орточо жалпы көлөмү шишик жүгүн билдирген.Толук кан жана ичеги үлгүлөрү чогултулган жана UPLC-MS / MS аныктоо үчүн -80 ° C сакталган.Сыворотка чогултулуп, боор менен бөйрөктүн иштешин баалоо үчүн аланин аминотрансфераза (ALT) жана креатинин (Cr) деңгээлин анализдөө үчүн автоматташтырылган химиялык анализатор колдонулган.
Чогултулган үлгүлөр муздак сактоочу жайдан алынып, эритип, таразага тартылып, жогоруда айтылгандай түтүкчөлөргө салынды.Буга 0,8 мл метанол эритмесинде 0,5 мкм флоризин (ички стандарт) кошулган.Андан кийин ткань Tissue-Tearor аркылуу гомогендештирилди жана гомогенат кийинчерээк 1,5 мл микроцентрифуга түтүгүнө которулду.Аралашма 15 мүнөт 15500 айн/мин центрифугаланган.1,0 мл супернатантты алып салгандан кийин азот менен кургатат.Калыбына келтирүү үчүн эки жүз микролитр метанол колдонулган.Кан чогултулуп, бир сапта иштетилет жана бардык өлчөөлөр үчүн маалымдама катары колдонулат.
24 скважиналуу Transwell плиталары 1,0 × 105 Како-2 клеткалары менен сепилген жана верапамилди кошуу менен G-Rg3 ташуу потенциалын жогорулатууга баа берүү үчүн.3 жумалык маданияттан кийин клеткалар HBSS менен жууп, 37°Cде алдын ала инкубацияланган.400 мкл 10 мкМ G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s же 50 же 100 мкм верапамил аралашмасы) моно катмардын базотерапалдык же апикалдык жагына сайылып, экинчи катмарына 600 мкл HBSS эритмеси кошулду. тарап.Белгиленген убакыттарда (0, 15, 30, 45, 60, 90 жана 120 мүнөт) 100 мкл маданият чөйрөсүн чогултуңуз жана бул көлөмдү толуктоо үчүн 100 мкл HBSS кошуңуз.Үлгүлөр UPLC-MS/MS тарабынан аныкталганга чейин -4 °Cде сакталган.Papp = dQ/(dT × A × C0) туюнтмасы көрүнгөн бир багыттуу апикалдык жана базотерапалдык өткөрүмдүүлүктү сандык аныктоо үчүн колдонулат жана тескерисинче (Па-b жана Pb-a, тиешелүүлүгүнө жараша);dQ/dT – концентрациянын өзгөрүшү, A (0,6 см2) – монокатмардын бетинин аянты, ал эми С0 – баштапкы донор концентрациясы.Эффлюкс коэффициенти Pb-a/Pa-b катары эсептелет, ал изилденүүчү препараттын агып чыгуу ылдамдыгын билдирет.
Эркек Wistar келемиштери 24 саат бою ачка кармалып, суу гана ичип, 3,5% пентобарбитал эритмесин венага инъекция менен наркоз кылышкан.Интубацияланган силикон түтүктүн он эки эли ичегинин аягы кире бериш, ал эми ичеги ичегисинин аягы чыгуучу жери бар.0,1 мл/мин агымдын ылдамдыгы менен изотоникалык HBSS ичинде 10 μM G-Rg3r же G-Rg3s менен киришти насостоо үчүн перистальтикалык насосту колдонуңуз.Верапамилдин таасири 50 мкм же 100 мкм кошулманы 10 мкм G-Rg3r же G-Rg3s кошуу менен бааланган.UPLC-MS/MS перфузия башталгандан кийин 60, 90, 120 жана 150 мүнөттөрдө чогултулган перфузиялык экстрактыларда аткарылган.Жутуунун пайызы % сиңүү = (1 – Cout/Cin) × 100% формуласы менен сандык аныкталат;чыгууда жана кириште G-Rg3 концентрациясы тиешелүүлүгүнө жараша Cout жана Cin тарабынан көрсөтүлөт.
hEL клеткалары 96 көзөнөктүү плиталарга 1 × 104 клетканын тыгыздыгында себилген жана B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) же DMSOда эриген G-Rg3 менен дарыланган. .Андан кийин дарылар маданий чөйрө менен ар кандай концентрацияларга (0, 1, 2, 5, 10, 20 мкм) чейин 48 саат бою суюлтулган.Коммерциялык жеткиликтүү MTS анализ комплектинин жардамы менен клеткалар стандарттык протоколго дуушар болгон жана андан кийин 490 нм микропластинаны окугуч менен өлчөнгөн.B(a)P (10 μM) жана G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) менен бирге дарыланган топтордун клетканын жашоо жөндөмдүүлүгү жогорудагы ыкмага ылайык бааланган жана тазаланбаган топ менен салыштырылган.
hEL клеткалары 1 × 105 клетка/скважинанын тыгыздыгында 6 көзөнөктүү плиталарга себилген жана 10 μM G-Rg3 бар же жок болгон учурда 10 μMB (a) P менен дарыланган.48 сааттык дарылоодон кийин, өндүрүүчүнүн протоколуна ылайык QIAamp DNA Mini Kit аркылуу hEL клеткаларынан ДНК алынган.BPDE-ДНК кошулмаларынын пайда болушу BPDE-ДНК кошумча ELISA комплектинин жардамы менен аныкталган.BPDE-ДНК кошулмасынын салыштырмалуу деңгээли 450 нм абсорбенцияны өлчөө жолу менен микропластинаны окугучтун жардамы менен өлчөнгөн.
hEL клеткалары 1 × 104 клеткалардын тыгыздыгы боюнча 96-кудук плиталарга себилген жана 10 μM G-Rg3 жок же катышуусунда 10 μMB (a) P менен 48 саат бою иштетилген.GST активдүүлүгү өндүрүүчүнүн протоколуна ылайык коммерциялык GST активдүүлүгүн анализдөө комплекти менен өлчөнгөн.Салыштырмалуу GST активдештирүү микропластинаны окугучту колдонуу менен 450 нм абсорбенция менен өлчөнгөн.
hEL клеткалары муздак PBS менен жууп, андан кийин протеаза ингибиторлорун жана фосфатаза ингибиторлорун камтыган радиоиммунопреципитацияны анализдөө буферин колдонуу менен лизистелген.Жалпы протеинди анализдөө комплектинин жардамы менен протеиндин санын аныктоодон кийин, ар бир үлгүдөгү 30 мкг протеин 12% SDS-PAGE менен бөлүнүп, электрофорез аркылуу PVDF мембранасына өткөрүлүп берилди.Мембраналар 5% майсыздандырылган сүт менен жабылып, 4°C түн ичинде баштапкы антителолор менен инкубацияланган.Хрен пероксидазасы менен конъюгацияланган экинчилик антителолор менен инкубациялангандан кийин, байланыш сигналын көрүү үчүн жакшыртылган хемилюминесценция реагенттери кошулган.Ар бир протеин тилкесинин интенсивдүүлүгү ImageJ программалык камсыздоосу аркылуу сандык бааланган.
GraphPad Prism 7.0 программасы бардык маалыматтарды талдоо үчүн колдонулган, орточо ± стандарттык четтөө катары көрсөтүлгөн.Дарылоо топторунун ортосундагы вариация Студенттин t тестинин же дисперсиянын бир тараптуу анализинин жардамы менен бааланган, Р мааниси <0,05 статистикалык маанини көрсөтүү менен.
Бул изилдөөнүн жүрүшүндө алынган же талданган бардык маалыматтар ушул жарыяланган макалада жана кошумча маалымат файлдарында камтылган.
Торре, LA, Siegel, RL жана Jemal, A. Өпкө рагы статистикасы.тактооч.Мөөнөтү бүттү.дары.биология.893, 1–19 (2016).
Хехт, С. Тамеки канцерогендери, алардын биомаркерлери жана тамекиден пайда болгон рак.Нат.Рак капеллан.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH жана Venitt, S. ДНК жана тамеки түтүнүнүн таасири натыйжасында адам кыртыштарында белок кошулмалары.интернационалдык.J. Рак.131, 2733–2753 (2012).
Янг Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA жана Yu M. A / J чычкандардын бензо (а) пирен менен шартталган өпкө шишиктери боюнча Houttuynia cordata жана silibinin таасири.Рак 7, 1053–1057 (2005).
Танг, В.Кытай дары-дармектеринен бөлүнүп алынган ракка каршы табигый продукт.жаак.дары.6, 27 (2011).
Янг, Y. жана башкалар.Polyphenon E, кызыл женьшень жана рапамициндин A / J чычкандарында бензо (а) пирен менен шартталган өпкө шишигинин натыйжалуулугу.Рак 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Андерсон, S., Du, W., Ал, TS жана Юан, KS Red, рак терапиясына тартуу.жаак.J. Nutt.дары.14, 7–16 (2016).
Ли, TS, Mazza, G., Cottrell, AS жана Гао, L. Ginsenosides тамыры жана америкалык женьшень жалбырактары.J. Agric.Тамак-аш химиясы.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA жана Yuan KS женьшень фармакологиясы: көптөгөн компоненттер жана көптөгөн эффекттер.биохимия.фармакология.58, 1685–1693 (1999).
Посттун убактысы: 2023-жылдын 17-сентябрына чейин