Misaotra anao nitsidika ny Nature.com.Ny kinova navigateur ampiasainao dia manana fanohanana CSS voafetra.Mba hahazoana vokatra tsara indrindra, dia manoro hevitra izahay ny hampiasa dikan-teny vaovao kokoa amin'ny navigateur (na hamono ny fomba fampifanarahana amin'ny Internet Explorer).Mandritra izany fotoana izany, mba hahazoana antoka ny fanohanana mitohy, dia mampiseho ny tranokala tsy misy styling na JavaScript izahay.
Ny ginseng mena dia nampiasaina tamin'ny fitsaboana nentim-paharazana Aziatika nandritra ny an-jatony taona.Ao amin'ity fanadihadiana ity, dia nanombantombana ny fahafahan'ny karazana ginseng mena efatra ( ginseng mena sinoa, ginseng mena Koreana A, ginseng mena Koreana B, ary ginseng mena Koreana C) nambolena tany amin'ny faritra samihafa mba hanakanana ny fananganana sy ny fitomboan'ny havokavoka vokatry ny carcinogen. fivontosana.Ny fitsapana benzo (a) pyrene (B (a) P) dia natao tamin'ny totozy A / J, ary ny ginseng mena Koreana B dia hita fa mahomby indrindra amin'ny fampihenana ny enta-mavesatry ny fivontosana eo amin'ireo karazana ginseng mena efatra.Ankoatr'izay, nodinihinay ny votoatin'ny ginsenosides isan-karazany (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ary Rg5) tamin'ny fitrandrahana ginseng mena efatra ary hita fa nanana ginseng mena Koreana B. Ny haavon'ny ginsenoside Rg3 (G-Rg3) avo indrindra, dia manoro hevitra fa ny G-Rg3 dia mety manana anjara toerana lehibe amin'ny fahombiazany amin'ny fitsaboana.Ity asa ity dia mampiseho fa ny G-Rg3 dia manana bioavailability kely.Na izany aza, rehefa niara-niasa tamin'ny verapamil inhibitor P-gp ny G-Rg3, dia nihena ny fivoahan'ny G-Rg3 tao amin'ny sela Caco-2, nitombo ny tahan'ny fidiran'ny tsinay ny G-Rg3 tamin'ny modely voalavo, ary ny G-Rg3 nitombo.Ao amin'ny sela Caco-2, mihena ny fivoahan'ny Rg3, ary mihena ny haavon'ny Rg3.Ny G-Rg3 dia mitombo ao amin'ny tsinay sy ny plasma, ary ny fahafahany misoroka ny fivontosana dia ampitomboina ihany koa amin'ny modely voalavo B (a) P-induced tumorigenesis.Hitanay ihany koa fa ny G-Rg3 dia nampihena ny cytotoxicity B (a) P-induced sy ny fananganana ADN ao amin'ny selan'ny havokavoka olombelona, ary namerina ny fanehoana sy ny asan'ny enzymes phase II amin'ny alàlan'ny lalan'ny Nrf2, izay mety mifandray amin'ny fomba fiasa mety. ny G inhibition -Rg3..Momba ny fisian'ny fivontosana havokavoka.Ny fandalinantsika dia mampiseho ny anjara toerana manan-danja ho an'ny G-Rg3 amin'ny kendrena ny fivontosan'ny havokavoka amin'ny maodely totozy.Ny bioavailability am-bava an'ity ginsenoside ity dia ampitomboina amin'ny alàlan'ny fikendrena ny P-glycoprotein, mamela ny molekiola hampiasa fiantraikany antikanser.
Ny karazana homamiadan'ny havokavoka mahazatra indrindra dia ny homamiadan'ny havokavoka tsy misy sela kely (NSCLC), izay iray amin'ireo antony voalohany mahatonga ny fahafatesan'ny homamiadana any Shina sy Amerika Avaratra1,2.Ny antony lehibe mampitombo ny mety hisian'ny homamiadan'ny havokavoka tsy misy sela kely dia ny fifohana sigara.Ny setroky ny sigara dia misy carcinogens mihoatra ny 60, anisan'izany ny benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrosamines, ary isotope radioaktifa avy amin'ny fahalon'ny radon.3 Ny hydrocarbons aromatika polycyclic B(a)P no tena mahatonga ny poizina amin'ny sigara. setroka.Rehefa voan'ny B(a)P, ny cytochrome P450 dia mamadika azy ho B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), izay mamaly amin'ny ADN ka mamorona BPDE-DNA adduct 4. Ny adducts dia miteraka tumorigenesis amin'ny havokavoka amin'ny totozy miaraka amin'ny dingan'ny fivontosana sy ny histopathology mitovy amin'ny fivontosana amin'ny havokavoka olombelona5.Ity endri-javatra ity dia mahatonga ny modelin'ny kanseran'ny havokavoka vokatry ny B(a)P ho rafitra mety amin'ny fanombanana ny fitambarana misy fananana antikanser.
Ny paikady iray azo atao hisorohana ny fivoaran'ny homamiadan'ny havokavoka amin'ny vondrona atahorana indrindra, indrindra ny mpifoka sigara, dia ny fampiasana ny chemopreventive agents mba hanakanana ny fivoaran'ny neoplastika intraepithelial ary amin'izany dia hisorohana ny fivoaran'izy ireo amin'ny malignancy.Ny fanadihadiana momba ny biby dia mampiseho fa mahomby ny fanafody chemopreventive6.Ny tatitray teo aloha7 dia nanasongadina ny fiantraikany tsara amin'ny fisorohana ny ginseng mena amin'ny homamiadan'ny havokavoka.Ity anana ity dia nampiasaina nandritra ny taonjato maro tamin'ny fitsaboana nentim-paharazana Aziatika mba hanalava ny androm-piainana sy ny fahasalamana, ary voarakitra an-tsoratra fa misy fiantraikany amin'ny antitumor8.
Ny singa mavitrika amin'ny ginseng dia ginsenoside, izay ampiasaina ho marika mitambatra hanombanana ny kalitaon'ny fitrandrahana ginseng.Ny famakafakana ny fatran'ny ginseng crude dia matetika mampiasa ginsenosides maromaro, anisan'izany ny RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, ary Rc9,10.Ny ginsenosides dia kely ampiasaina amin'ny fitsaboana noho ny tsy fahampian'ny bioavailability am-bava11.Na dia tsy mazava aza ny mekanika ho an'ity bioavailability mahantra ity, ny fivoahan'ny ginsenosides vokatry ny P-glycoprotein (P-gp)12 dia mety ho antony.P-gp dia iray amin'ireo mpitatitra efflux manan-danja indrindra ao amin'ny superfamily mpitatitra kasety mifatotra ATP, izay mampiasa ny angovon'ny hydrolysis ATP hamoahana ireo akora intracellular ho any amin'ny tontolo ivelany.Ny mpitatitra P-gp dia matetika miparitaka any amin'ny tsinainy, ny voa, ny atiny ary ny sakana amin'ny ati-doha13.Ny P-gp dia mitana anjara toerana lehibe amin'ny fidiran'ny tsinay, ary ny fanakanana ny P-gp dia mampitombo ny fidiran'ny vava sy ny fisian'ny fanafody antikansera sasany12,14.Ohatra amin'ny inhibitors nampiasaina taloha tao amin'ny literatiora dia verapamil sy cyclosporine A15.Ity asa ity dia misy ny fametrahana rafitra totozy amin'ny fandalinana ny homamiadan'ny havokavoka B(a) P-induced mba hanombanana ny fahafahan'ny ginseng mena samihafa avy any Shina sy Korea mba hisy fiantraikany amin'ny homamiadana.Ny fitrandrahana dia nodinihina tsirairay mba hamantarana ginsenosides manokana izay mety hisy fiantraikany amin'ny carcinogenesis.Verapamil dia nampiasaina tamin'ny tanjona P-gp ary nanatsara ny bioavailability am-bava sy ny fahombiazan'ny fitsaboana ny ginsenosides mikendry ny homamiadana.
Mbola tsy mazava ny fomba fiasan'ny saponins ginseng amin'ny fitsaboana amin'ny carcinogenesis.Ny fikarohana dia naneho fa ny ginsenosides isan-karazany dia afaka mampihena ny fahasimban'ny ADN vokatry ny carcinogens amin'ny alàlan'ny fampihenana ny adin-tsaina oxidative sy ny fampandehanana ny enzyme detoxification dingana II, ka hisorohana ny fahasimban'ny sela.Glutathione S-transferase (GST) dia anzima mahazatra dingana II izay ilaina mba hampihenana ny fahasimban'ny ADN vokatry ny carcinogens17.Nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) dia singa manan-danja transcription izay mifehy ny homeostasis redox ary manetsika ny fanehoana ny enzymes phase II sy ny valin'ny antioxidant cytoprotective18.Ny fandinihanay koa dia nandinika ny vokatry ny ginsenosides fantatra amin'ny fampihenana ny cytotoxicity B (a) P-induced sy ny fananganana BPDE-DNA adduct, ary koa ny fanentanana ny enzymes phase II amin'ny alàlan'ny fanovana ny lalan'ny Nrf2 amin'ny sela havokavoka mahazatra.
Ny fananganana modely totozy amin'ny homamiadan'ny B (a) P-induced dia mifanaraka amin'ny asa teo aloha5.Ny sary 1A dia mampiseho ny famolavolana andrana amin'ny fitsaboana 20 herinandro amin'ny maodely homamiadan'ny totozy vokatry ny B (a) P, rano (fifehezana), fitrandrahana ginseng mena Shinoa (CRG), fitrandrahana ginseng mena Koreana A (KRGA), ary mena Koreana. ginseng.Extract B (KRGB) sy Korean Red Ginseng Extract C (KRGC).Taorian'ny 20 herinandro ny fitsaboana ginseng mena, totozy dia natao sorona noho ny CO2 asphyxiation.Ny sary 1B dia mampiseho fivontosan'ny havokavoka macroscopic amin'ny biby tsaboina amin'ny karazana ginseng mena isan-karazany, ary ny sary 1C dia mampiseho mikrôgrafia maivana misolo tena ny santionan'ny fivontosana.Ny enta-mavesatry ny fivontosana biby voatsabo KRGB (1.5 ± 0.35) dia ambany noho ny an'ny biby mifehy (0.82 ± 0.2, P <0.05), araka ny aseho amin'ny sary 1D.Ny salan'isa eo ho eo amin'ny fampihenana ny enta-mavesatra dia 45%.Ny fitrandrahana ginseng mena hafa nosedraina dia tsy naneho fiovana lehibe teo amin'ny vesatry ny fivontosana (P> 0.05).Tsy misy fiantraikany miharihary hita ao amin'ny maodely totozy mandritra ny herinandro 20 amin'ny fitsaboana ginseng mena, anisan'izany ny tsy fiovan'ny lanjan'ny vatana (data tsy aseho) ary tsy misy poizina amin'ny atiny na voa (sary 1E, F).
Ny fitrandrahana ginseng mena dia mitsabo ny fivoaran'ny fivontosan'ny havokavoka amin'ny totozy A/J.(A) Famolavolana andrana.(B) Fivontosana lehibe amin'ny havokavoka amin'ny maodely totozy.Ny fivontosana dia aseho amin'ny zana-tsipìka.a.: Vondrona ginseng mena sinoa.b: vondrona A amin'ny ginseng mena Koreana.c: Vondrona ginseng mena Koreana B. d: Vondrona ginseng mena Koreana C. d: Vondrona mifehy.(C) Mikrografy maivana mampiseho fivontosan'ny havokavoka.Fanamafisana: 100. b: 400. (D) Ny enta-mavesatry ny tumor ao amin'ny vondron'ny ginseng mena.(E) Ny haavon'ny plasma an'ny enzyme ALT.(F) Ny haavon'ny plasma an'ny enzyme Cr.Ny angona dia aseho amin'ny hoe mean ± deviation standard.*P <0.05.
Ny fitrandrahana ginseng mena fantatra amin'ity fanadihadiana ity dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS / MS) mba hamaritana ireto ginsenosides manaraka ireto: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ary Rg5.Ny fepetra UPLC sy MS ampiasaina handrefesana ny analytes dia nofaritana tamin'ny tatitra teo aloha19.Ny chromatograms UPLC-MS / MS amin'ny fitrandrahana ginseng mena efatra dia aseho amin'ny sary 2A.Nisy fahasamihafana lehibe teo amin'ny votoatin'ny ginsenoside manontolo, miaraka amin'ny totalin'ny ginsenoside avo indrindra ao amin'ny CRG (590.27 ± 41.28 μmol / L) (sary 2B).Rehefa manombantombana ny ginsenosides tsirairay (sary 2C), ny KRGB dia naneho ny haavon'ny G-Rg3 ambony indrindra raha oharina amin'ny ginsenosides hafa (58.33 ± 3.81 μmol / L ho an'ny G-Rg3s ary 41.56 ± 2.88 μmol / L ho an'ny G -Rg3r).L).karazana ginseng mena (P <0.001).G-Rg3 dia miseho ho mpivady stereoisomera G-Rg3r sy G-Rg3s, izay tsy mitovy amin'ny toeran'ny vondrona hydroxyl amin'ny karbaona 20 (sary 2D).Ny valiny dia manondro fa ny G-Rg3r na G-Rg3 dia mety manana hery lehibe manohitra ny homamiadana amin'ny modely totozy homamiadana B (a) P.
Ny votoatin'ny ginsenosides amin'ny fitrandrahana ginseng mena isan-karazany.(A) UPLC-MS/MS chromatograms amin'ny fitrandrahana ginseng mena efatra.(B) Tombanana ny votoatin'ny ginsenoside manontolo ao amin'ny fitrandrahana voalaza.(C) Fikarohana ny ginsenosides tsirairay amin'ny fitrandrahana misy marika.(D) Ny firafitry ny stereoisomera ginsenoside G-Rg3r sy G-Rg3s.Ny angon-drakitra dia aseho ho toy ny mean ± fivilian-dàlana mahazatra amin'ny famaritana telo sosona.***P <0.001.
Ny fandalinana UPLC-MS / MS dia nitaky ny hamaritana ny ginsenosides amin'ny tsinay sy santionany amin'ny ra aorian'ny 20 herinandro fitsaboana.Ny fitsaboana amin'ny KRGB dia mampiseho ny fisian'ny 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 ao amin'ny ra.Tsy nisy ginsenosides tavela hita, izay manondro ny tsy fahampian'ny bioavailability am-bava ary noho izany dia mampihena ny fihanaky ny ginsenosides.
Ny tsipika cellule adenocarcinoma colon Caco-2 dia mitovitovy amin'ny sela epithelial tsinain'ny olombelona amin'ny morphologically sy biochemically, mampiseho ny fampiasana azy amin'ny fanombanana ny fitaterana enterocyte manerana ny sakana epithelial intestinal.Ity famakafakana ity dia nifototra tamin'ny fianarana teo aloha 20 .Ny sary 3A, B, C, D, E, F dia mampiseho sary solontenan'ny fitaterana transcellular an'ny G-Rg3r sy G-Rg3 mampiasa modely monolayer Caco-2.Ny fitaterana transcellular an'ny G-Rg3r na G-Rg3 manerana ny Caco-2 monolayers avy amin'ny basolateral mankany amin'ny lafiny apical (Pb-a) dia avo kokoa noho ny avy amin'ny apical mankany amin'ny sisiny basolateral (Pa-b).Ho an'ny G-Rg3r, ny sandan'ny Pa-b dia 0.38 ± 0.06, izay nitombo ho 0.73 ± 0.06 taorian'ny fitsaboana tamin'ny 50 μmol / L verapamil ary hatramin'ny 1.14 ± 0.09 taorian'ny fitsaboana tamin'ny 100 μmol / L verapamil (p <0.01, 0.01 sy 0.01). Sary 2).3A).Ny fandinihana ny G-Rg3 dia nanaraka lamina mitovy (sary 3B), ary ny valiny dia naneho fa ny fitsaboana verapamil dia nanatsara ny fitaterana ny G-Rg3r sy G-Rg3.Ny fitsaboana Verapamil koa dia nahatonga ny fihenan'ny Pb-a sy ny G-Rg3r ary ny G-Rg3s efflux ratios (sary 3C, D, E, F), izay manondro fa ny fitsaboana verapamil dia mampihena ny votoatin'ny ginsenoside ao amin'ny sela efflux Caco-2..
Ny fitaterana transcellular an'ny G-Rg3 ao amin'ny monolayers Caco-2 sy ny fidiran'ny tsinay amin'ny fitsirihana rat perfusion.(A) Pa-b sandan'ny vondrona G-Rg3r ao amin'ny monolayer Caco-2.(B) Ny sandan'ny Pa-b an'ny vondrona G-Rg3s ao amin'ny monolayer Caco-2.(C) sandan'ny Pb an'ny vondrona G-Rg3r ao amin'ny monolayer Caco-2.(D) Ny sandan'ny Pb an'ny vondrona G-Rg3s ao amin'ny monolayer Caco-2.(E) Ny tahan'ny vokatra amin'ny vondrona G-Rg3r amin'ny monolayer Caco-2.(F) Ny tahan'ny vokatra amin'ny vondrona G-Rg3 amin'ny monolayer Caco-2.(G) Isan-jaton'ny fidiran'ny tsinay ny G-Rg3r amin'ny fitsirihana perfusion amin'ny voalavo.(H) Isan-jaton'ny fidiran'ny tsinay ny G-Rg3 amin'ny fitsirihana perfusion amin'ny voalavo.Ny permeability sy ny absorption dia nampitahaina raha tsy nampiana verapamil.Ny angon-drakitra dia aseho ho ny mean ± fivilian-dàlana amin'ny andrana tsy miankina dimy.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Mifanaraka amin'ny asa teo aloha20, ny perfusion intestinal orthotopic amin'ny voalavo dia natao mba hamaritana raha mitombo ny fidiran'ny G-Rg3 ao amin'ny tsinay aorian'ny fitsaboana verapamil.Figures 3G, H dia mampiseho ny fanombanana ny perfusion solontena hanombantombanana ny isan-jaton'ny fidiran'ny tsinay ny G-Rg3r sy G-Rg3 amin'ny voalavo modely homamiadana mandritra ny vanim-potoana etsy ambony.Ny isan-jato voalohany amin'ny fihenan'ny G-Rg3r malemy eo amin'ny 10% eo ho eo dia nitombo ho mihoatra ny 20% taorian'ny fitsaboana tamin'ny verapamil 50 μM ary mihoatra ny 25% taorian'ny fitsaboana tamin'ny verapamil 100 μM.Toy izany koa, ny G-Rg3, izay nahitana 10% voalohany, dia nampiseho tampon'isa mihoatra ny 20% taorian'ny fitsaboana tamin'ny 50 μM verapamil ary efa ho 30% taorian'ny fitsaboana tamin'ny 100 μM verapamil, nanoro hevitra fa ny fampihenana ny P-gp amin'ny verapamil dia manatsara. Intestinal G-absorption Rg3 amin'ny modely totozy amin'ny homamiadan'ny havokavoka.
Araka ny fomba voalaza etsy ambony, ny B (a) P-induced kansera modelin'ny totozy dia nozaraina kisendrasendra ho vondrona enina, araka ny hita ao amin'ny Figure 4A.Tsy nisy fatiantoka lehibe na famantarana klinika momba ny poizina hita tao amin'ny vondrona fitsaboana G-Rg3 raha oharina amin'ny vondrona mpanara-maso (data tsy aseho).Rehefa afaka 20 herinandro ny fitsaboana dia nangonina ny havokavoky ny totozy tsirairay.Ny sary 4B dia mampiseho fivontosan'ny havokavoka macroscopic amin'ny totozy ao amin'ireo vondrona fitsaboana etsy ambony, ary ny sary 4C dia mampiseho mikrôgrafia maivana solontenan'ny fivontosana solontena.Momba ny enta-mavesatry ny fivontosana ao amin'ny vondrona tsirairay (sary 4D), ny soatoavina ho an'ny totozy tsaboina amin'ny G-Rg3r sy G-Rg3s dia 0.75 ± 0.29 mm3 sy 0.81 ± 0.30 mm3, raha ny sanda ho an'ny G Mice voatsabo. miaraka amin'ny -Rg3s dia 1.63 tsirairay avy ± 0.40 mm3.totozy mifehy (p <0.001), izay manondro fa ny fitsaboana G-Rg3 dia mampihena ny enta-mavesatra amin'ny totozy.Ny fitantanana ny verapamil dia nanatsara kokoa ity fampihenana ity: ny sanda amin'ny verapamil + G-Rg3r totozy dia nihena avy amin'ny 0.75 ± 0.29 mm3 ka hatramin'ny 0.33 ± 0.25 mm3 (p <0.01), ary ny sanda ho an'ny verapamil + avy amin'ny 0.81 ± 0.30 mm3 dia nihena ho 0.81 ± 0.30 mm3. mm3 amin'ny totozy voatsabo G. -Rg3s (p <0.05), izay manondro fa ny verapamil dia mety hanatsara ny fiantraikan'ny G-Rg3 amin'ny tumorigenesis.Ny enta-mavesatry ny tumora dia tsy nahitana fahasamihafana lehibe teo amin'ny vondrona mpanara-maso sy ny vondrona verapamil, ny vondrona G-Rg3r sy ny vondrona G-Rg3s, ary ny vondrona verapamil + G-Rg3r ary ny vondrona verapamil + G-Rg3s.Ankoatr'izay, tsy nisy poizina amin'ny atiny na voa mifandray amin'ny fitsaboana nodinihina (sary 4E, F).
Ny enta-mavesatry ny tumora aorian'ny fitsaboana G-Rg3 sy ny plasma na ny tsinay G-Rg3r sy G-Rg3 amin'ny vondrona voalaza.(A) Famolavolana andrana.(B) tumors macroscopic amin'ny maodely totozy.Ny fivontosana dia aseho amin'ny zana-tsipìka.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r miaraka amin'ny verapamil.d: G-Rg3 miaraka amin'ny verapamil.d: Verapamil.e: fehy.(C) mikrôgrafika optika ny fivontosana amin'ny fampitomboana.Valiny: 100x.b:400x.(D) Ny fiantraikan'ny fitsaboana G-Rg3 + verapamil amin'ny enta-mavesatra amin'ny totozy A / J.(E) Ny haavon'ny plasma an'ny enzyme ALT.(F) Ny haavon'ny plasma an'ny enzyme Cr.(G) Ny haavon'ny plasma amin'ny G-Rg3r na G-Rg3 amin'ireo vondrona voalaza.(H) Ny haavon'ny G-Rg3r na G-Rg3s ao amin'ny tsinain'ireo vondrona voalaza.Ny angon-drakitra dia aseho ho toy ny mean ± fivilian-dàlana mahazatra amin'ny famaritana telo sosona.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Ny haavon'ny G-Rg3 ao amin'ny B (a) P-induced kanseran'ny totozy dia nodinihina tamin'ny UPLC-MS / MS taorian'ny vanim-potoana fitsaboana 20 herinandro araka ny fomba voalaza ao amin'ny fizarana Methods.Ny sary 4G sy H dia mampiseho ny haavon'ny plasma sy ny tsinay G-Rg3.Ny haavon'ny plasma G-Rg3r dia 0.44 ± 0.32 μmol / L ary nitombo ho 1.17 ± 0.47 μmol / L miaraka amin'ny fitantanana ny verapamil (p <0.001), raha ny haavon'ny G-Rg3r amin'ny tsinay dia 0.53 ± 0.08 µg.Rehefa ampiarahina amin'ny verapamil dia nitombo ho 1.35 ± 0.13 μg/g ny g (p <0.001).Ho an'ny G-Rg3, ny valiny dia nanaraka lamina mitovy, izay manondro fa ny fitsaboana verapamil dia nampitombo ny bioavailability am-bava an'ny G-Rg3 amin'ny totozy A / J.
Ny fitiliana ny viability sela dia nampiasaina hanombanana ny cytotoxicity B (a) P sy G-Rg3 amin'ny sela hEL.Ny cytotoxicity ateraky ny B (a) P ao amin'ny sela hEL dia aseho amin'ny sary 5A, raha ny toetra tsy misy poizina amin'ny G-Rg3r sy G-Rg3 kosa dia aseho amin'ny sary 5A sy 5B.5B, C. Mba hanombanana ny fiantraikan'ny cytoprotective amin'ny G-Rg3, B (a) P dia nokarakaraina miaraka amin'ny fifantohana isan-karazany amin'ny G-Rg3r na G-Rg3 ao anaty sela hEL.Araka ny asehon'ny sary 5D, ny G-Rg3r amin'ny fifantohana amin'ny 5 μM, 10 μM, ary 20 μM dia namerina ny fahafahan'ny sela ho 58.3%, 79.3% ary 77.3%.Ny vokatra mitovy amin'izany dia azo jerena ao amin'ny vondrona G-Rg3s.Rehefa 5 µM, 10 µM ary 20 µM ny fifantohana amin'ny G-Rg3s, dia niverina tamin'ny 58.3%, 72.7% ary 76.7% ny fahafahan'ny sela (sary 5E).).Ny fisian'ny adducts BPDE-DNA dia norefesina tamin'ny fampiasana kitapo ELISA.Ny valiny dia naneho fa ny haavon'ny BPDE-DNA dia nitombo tao amin'ny vondrona B (a) P-tsaboina raha oharina amin'ny vondrona mpanara-maso, fa raha oharina amin'ny fitsaboana miaraka amin'ny G-Rg3, ny haavon'ny BPDE-DNA ao amin'ny vondrona B (a) P B ao amin'ny vondrona voatsabo dia nihena be ny haavon'ny ADN.Ny vokatry ny fitsaboana amin'ny B (a) P irery dia aseho amin'ny Figure 5F (1.87 ± 0.33 vs. 3.77 ± 0.42 ho an'ny G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 ho an'ny G -Rg3s, p <0.001).
Ny fahafahan'ny sela sy ny fananganana BPDE-DNA amin'ny sela hEL voatsabo amin'ny G-Rg3 sy B (a) P.(A) Ny fahafahan'ny sela hEL tsaboina amin'ny B(a)P.(B) Ny fahafahan'ny sela hEL tsaboina amin'ny G-Rg3r.(C) Ny fahafahan'ny sela hEL tsaboina amin'ny G-Rg3.(D) Ny fahafahan'ny sela hEL tsaboina amin'ny B (a) P sy G-Rg3r.(E) Viability ny sela hEL tsaboina amin'ny B (a) P sy G-Rg3.(F) Ny haavon'ny BPDE-DNA adduct ao amin'ny sela hEL tsaboina amin'ny B (a) P sy G-Rg3.Ny angon-drakitra dia aseho ho toy ny mean ± fivilian-dàlana mahazatra amin'ny famaritana telo sosona.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Ny fanehoana anzima GST dia hita taorian'ny fitsaboana miaraka amin'ny 10 μM B (a) P sy 10 μM G-Rg3r na G-Rg3s.Ny valiny dia naneho fa ny B (a) P dia nanakana ny fanehoana GST (59.7 ± 8.2% ao amin'ny vondrona G-Rg3r ary 39 ± 4.5% ao amin'ny vondrona G-Rg3s), ary ny B (a) P dia mifandray amin'ny G-Rg3r. , na miaraka amin'ny G-Rg3r, na miaraka amin'ny G-Rg3r.Fitsaboana miaraka amin'ny G-Rg3 dia namerina ny fanehoana GST.GST expression (103.7 ± 15.5% ao amin'ny vondrona G-Rg3r ary 110 ± 11.1% ao amin'ny vondrona G-Rg3s, p <0.05 ary p <0.001, tsirairay avy, sary 6A, B, ary C).Ny asan'ny GST dia nodinihina tamin'ny alàlan'ny kitapom-panadinana hetsika.Ny valiny dia naneho fa ny vondrona fitsaboana mitambatra dia manana hetsika GST ambony kokoa raha oharina amin'ny vondrona B (a) P ihany (96.3 ± 6.6% vs. 35.7 ± 7.8% ao amin'ny vondrona G-Rg3r vs. 92.3 ± 6.5 ao amin'ny vondrona G-Rg3r ).% vs 35.7 ± 7.8% ao amin'ny vondrona G-Rg3s, p <0.001, sary 6D).
Fanehoana ny GST sy Nrf2 amin'ny sela hEL tsaboina amin'ny B (a) P sy G-Rg3.(A) Fikarohana ny fanehoana GST amin'ny alalan'ny famafazana tandrefana.(B) Ny fanehoana ny GST amin'ny sela hEL voatsabo amin'ny B (a) P sy G-Rg3r.(C) fanehoana ny GST amin'ny sela hEL tsaboina amin'ny B (a) P sy G-Rg3s.(D) hetsika GST ao amin'ny sela hEL tsaboina amin'ny B (a) P sy G-Rg3.(E) Fikarohana ny fanehoana Nrf2 amin'ny alàlan'ny famafazana tandrefana.(F) Ny fanehoana ny Nrf2 amin'ny sela hEL voatsabo amin'ny B (a) P sy G-Rg3r.(G) Ny fanehoana ny Nrf2 amin'ny sela hEL voatsabo amin'ny B (a) P sy G-Rg3s.Ny angon-drakitra dia aseho ho toy ny mean ± fivilian-dàlana mahazatra amin'ny famaritana telo sosona.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Mba hanazavana ny lalana tafiditra ao amin'ny G-Rg3-mediated famoretana ny B (a) P-induced tumorigenesis, ny fanehoana Nrf2 dia nodinihina tamin'ny famafazana tandrefana.Araka ny asehon'ny sary 6E, F, G, raha oharina amin'ny vondrona mpanara-maso, ny haavon'ny Nrf2 ao amin'ny vondrona fitsaboana B (a) P ihany no nihena;Na izany aza, raha ampitahaina amin'ny vondrona fitsaboana B (a) P, ny haavon'ny B (a) Nrf2 ao amin'ny vondrona PG-Rg3 dia nitombo (106 ± 9.5% ho an'ny G-Rg3r vs. 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% ho an'ny G-Rg3r vs. 41 ± 9.8% ho an'ny G-Rg3s, p <0.01).
Nohamafisinay ny andraikitry ny fisorohana ny Nrf2 amin'ny alàlan'ny fanafoanana ny fitenenana Nrf2 amin'ny fampiasana RNA kely manelingelina (siRNA).Nrf2 knockdown dia nohamafisin'ny Western blotting (sary 7A, B).Araka ny aseho amin'ny sary 7C, D, ny fitsaboana miaraka amin'ny sela hEL miaraka amin'ny B (a) P sy G-Rg3 dia nahatonga ny fihenan'ny isan'ny BPDE-DNA addducts (1.47 ± 0.21) raha oharina amin'ny fitsaboana amin'ny B (a) P irery ao amin'ny vondrona siRNA mifehy.) G-Rg3r dia 4.13 ± 0.49, G-Rg3s dia 1.8 ± 0.32 ary 4.1 ± 0.57, p <0.01).Na izany aza, ny fiantraikan'ny G-Rg3 amin'ny fananganana BPDE-DNA dia nofoanana tamin'ny alàlan'ny Nrf2 knockdown.Ao amin'ny vondrona siNrf2, tsy misy fahasamihafana lehibe amin'ny fananganana BPDE-DNA eo amin'ny B (a) P sy G-Rg3 miaraka amin'ny fitsaboana ary B (a) P irery (3.0 ± 0.21 ho an'ny G-Rg3r vs. 3.56 ± 0.32). ).ho an'ny G-Rg3r versus 3.6 ho an'ny G-Rg3s versus ± 0.45 versus 4.0±0.37, p > 0.05).
Ny fiantraikan'ny Nrf2 knockdown amin'ny fananganana BPDE-DNA amin'ny sela hEL.(A) Nrf2 knockdown dia nohamafisin'ny Western blotting.(B) Famaritana ny hamafin'ny tarika Nrf2.(C) Ny fiantraikan'ny fandoroana Nrf2 amin'ny haavon'ny BPDE-DNA amin'ny sela hEL voatsabo amin'ny B (a) P sy G-Rg3r.(D) Ny fiantraikan'ny Nrf2 knockdown amin'ny haavon'ny BPDE-DNA amin'ny sela hEL voatsabo amin'ny B (a) P sy G-Rg3.Ny angon-drakitra dia aseho ho toy ny mean ± fivilian-dàlana mahazatra amin'ny famaritana telo sosona.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Ity fanadihadiana ity dia nanombantombana ny fiantraikan'ny fisorohana ny fitrandrahana ginseng mena isan-karazany amin'ny maodely totozy B (a) P-induced kanseran'ny havokavoka, ary ny fitsaboana KRGB dia nampihena be ny enta-mavesatry ny fivontosana.Raha jerena fa ny G-Rg3 dia manana votoaty avo indrindra amin'ity fitrandrahana ginseng ity, ny anjara asa lehibe amin'ity ginsenoside ity amin'ny fanakanana ny tumorigenesis dia nodinihina.Ny G-Rg3r sy G-Rg3 (epimer roa an'ny G-Rg3) dia nampihena be ny enta-mavesatry ny fivontosana tamin'ny maodely totozy B (a) P-induced cancer.Ny G-Rg3r sy G-Rg3 dia misy fiantraikany amin'ny homamiadana amin'ny alàlan'ny fampidiran-drivotra ny cellule tumor21, manakana ny fitomboan'ny tumor22, misambotra ny tsingerin'ny sela23 ary misy fiantraikany amin'ny angiogenesis24.Ny G-Rg3 dia naseho ihany koa fa manakana ny metastasis sela25, ary ny fahafahan'ny G-Rg3 hanatsara ny vokatry ny chimiothérapie sy radiotherapy dia voarakitra26,27.Poon et al dia naneho fa ny fitsaboana G-Rg3 dia mety hampihena ny fiantraikan'ny genotoxic amin'ny B (a) P28.Ity fanadihadiana ity dia mampiseho ny mety ho fitsaboana amin'ny G-Rg3 amin'ny fikendrena ny molekiolan'ny carcinogenic tontolo iainana sy ny fisorohana ny homamiadana.
Na dia eo aza ny tanjaky ny prophylactic tsara, ny tsy fahampian'ny bioavailability am-bava amin'ny ginsenosides dia miteraka fanamby amin'ny fampiasana klinika ireo molekiola ireo.Ny famakafakana pharmacokinetic momba ny fitantanana am-bava ny ginsenosides amin'ny voalavo dia nampiseho fa ny bioavailability dia mbola latsaky ny 5%29.Nasehon'ireo fitsapana ireo fa taorian'ny fe-potoana fitsaboana 20 herinandro, ny tahan'ny Rg5 ao amin'ny ra ihany no nihena.Na dia mbola hazavaina aza ny rafitra fototry ny tsy fahampian'ny bioavailability, ny P-gp dia heverina ho tafiditra amin'ny fivoahan'ny ginsenosides.Ity asa ity dia naneho voalohany fa ny fitantanana ny verapamil, P-gp blocker, dia mampitombo ny bioavailability am-bava ny G-Rg3r sy G-Rg3s.Noho izany, ity fikarohana ity dia manoro hevitra fa ny G-Rg3r sy G-Rg3s dia miasa ho substrate amin'ny P-gp mba hifehezana ny fivoahany.
Ity asa ity dia mampiseho fa ny fitsaboana mitambatra miaraka amin'ny verapamil dia mampitombo ny bioavailability am-bava an'ny G-Rg3 amin'ny modely totozy amin'ny homamiadan'ny havokavoka.Ity fikarohana ity dia tohanan'ny fitaterana transcellular intestinal amin'ny G-Rg3 amin'ny sakana P-gp, ka mampitombo ny fidirany.Ny fanadihadiana ao amin'ny sela Caco2 dia naneho fa ny fitsaboana verapamil dia nampihena ny fivoahan'ny G-Rg3r sy G-Rg3s ary manatsara ny fifindran'ny membrane.Fandalinana nataon'i Yang et al.Ny fanadihadiana dia naneho fa ny fitsaboana amin'ny cyclosporine A (mpikatroka P-gp iray hafa) dia mampitombo ny bioavailability ny ginsenoside Rh2 avy amin'ny sanda fototra 1% 20 ka hatramin'ny 30%.Ny kapoaky ny ginsenosides K sy Rg1 koa dia nampiseho vokatra mitovy amin'izany30,31.Rehefa niara-nikarakara ny verapamil sy cyclosporin A, dia nihena be ny fivoahan'ny fitambaran'ny K ao amin'ny sela Caco-2 avy amin'ny 26.6 ka latsaky ny 3, raha nitombo 40-fold30 ny haavon'ny intracellular.Eo anatrehan'ny verapamil, ny haavon'ny Rg1 dia nitombo tao amin'ny sela epithelial lung, izay nanoro ny anjara asan'ny P-gp amin'ny ginsenoside efflux, araka ny asehon'i Meng et al.31.Na izany aza, ny verapamil dia tsy nanana fiantraikany mitovy amin'ny fivoahan'ny ginsenosides sasany (toy ny Rg1, F1, Rh1 ary Re), izay manondro fa tsy misy fiantraikany amin'ny substrate P-gp izy ireo, araka ny asehon'i Liang et al.32 .Ity fandinihana ity dia mety misy ifandraisany amin'ny fidiran'ny mpitatitra hafa sy ny rafitra ginsenoside hafa.
Ny mekanika amin'ny fiantraikan'ny G-Rg3 amin'ny homamiadana dia tsy mazava.Ny fikarohana teo aloha dia naneho fa ny G-Rg3 dia manakana ny fahasimban'ny ADN sy ny apoptose amin'ny alàlan'ny fampihenana ny adin-tsaina sy ny areti-maso oxidative16,33, izay mety ho rafitra fototra amin'ny fisorohana ny tumorigenesis B (a) P-induced.Ny tatitra sasany dia manondro fa ny genotoxicity ateraky ny B (a) P dia azo ahena amin'ny alàlan'ny fanodinana ny enzymes phase II mba hamorona BPDE-DNA34.Ny GST dia enzyme dingana II mahazatra izay manakana ny fananganana BPDE-DNA amin'ny alàlan'ny fampiroboroboana ny fatoran'ny GSH amin'ny BPDE, ka mampihena ny fahasimban'ny ADN vokatry ny B(a)P35.Ny valiny dia mampiseho fa ny fitsaboana G-Rg3 dia mampihena ny cytotoxicity B (a) P-induced sy ny fananganana BPDE-DNA adduct ao amin'ny sela hEL ary mamerina ny fanehoana GST sy ny hetsika in vitro.Na izany aza, ireo vokatra ireo dia tsy teo amin'ny tsy fisian'ny Nrf2, izay manoro hevitra fa ny G-Rg3 dia miteraka fiantraikany cytoprotective amin'ny alàlan'ny lalan'ny Nrf2.Ny Nrf2 dia anton-javatra transcription lehibe ho an'ny enzyme detoxification dingana II izay mampiroborobo ny fanesorana ny xenobiotics36.Ny fampahavitrihana ny lalan'ny Nrf2 dia miteraka cytoprotection ary mampihena ny fahasimban'ny sela37.Ankoatr'izay, tatitra maromaro no nanohana ny anjara asan'ny Nrf2 ho toy ny fivontosana suppressor amin'ny carcinogenesis38.Ny fandinihanay dia mampiseho fa ny fampidirana ny lalan'ny Nrf2 amin'ny G-Rg3 dia mitana andraikitra manan-danja amin'ny B (a) P-induced genotoxicity amin'ny alàlan'ny famongorana ny B (a) P amin'ny alàlan'ny fampandehanana ny enzymes phase II, ka manakana ny fizotry ny tumorigenesis.
Ny asantsika dia manambara ny mety ho ginseng mena amin'ny fisorohana ny homamiadan'ny havokavoka B (a) P-induced amin'ny totozy amin'ny alàlan'ny fandraisana anjara lehibe amin'ny ginsenoside G-Rg3.Ny tsy fahampian'ny bioavailability am-bava an'io molekiola io dia manakana ny fampiharana azy amin'ny klinika.Na izany aza, ity fanadihadiana ity dia mampiseho voalohany fa ny G-Rg3 dia substrate amin'ny P-gp, ary ny fitantanana ny inhibitor P-gp dia mampitombo ny bioavailability ny G-Rg3 in vitro sy in vivo.G-Rg3 dia mampihena ny cytotoxicity B (a) P-induced amin'ny alàlan'ny fanaraha-maso ny lalan'ny Nrf2, izay mety ho mekanika mety ho an'ny asany fisorohana.Ny fandinihanay dia manamafy ny mety hisian'ny ginsenoside G-Rg3 amin'ny fisorohana sy fitsaboana ny homamiadan'ny havokavoka.
Ny totozy A / J vavy enina herinandro (20 ± 1 g) sy voalavo Wistar lahy 7 herinandro (250 ± 20 g) dia azo avy amin'ny The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Etazonia) sy ny Wuhan Institute of Zoology.Oniversite (Wuhan, Sina).Ny Foibe fanangonana Kolontsaina Sinoa (Wuhan, Shina) dia nanome anay sela Caco-2 sy hEL.Sigma-Aldrich (St. Louis, Etazonia) dia loharanon'ny B(a)P sy tricaprine.Ny ginsenosides voadio G-Rg3r sy G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 proliferation assay kit (MTS), verapamil, minimal essential medium (MEM), ary foetal bovine serum (FBS) dia novidina tao amin'ny Chengdu Must Bio-Technology. .Co., Ltd.(Chengdu, Sina).Ny kitapo QIAamp DNA mini sy ny kitapo BPDE-DNA addduct ELISA dia novidina avy any Qiagen (Stanford, CA, Etazonia) sy Cell Biolabs (San Diego, CA, Etazonia).Ny kitapom-panadinana hetsika GST sy ny kitapom-panadinana proteinina manontolo (fomba BCA manara-penitra) dia novidina tany Solarbio (Beijing, Shina).Ny fitrandrahana ginseng mena rehetra dia voatahiry ao amin'ny Mingyu Laboratory 7. Hong Kong Baptist University (Hong Kong, Shina) sy Korea Cancer Center (Seoul, Korea) dia loharano ara-barotra amin'ny fitrandrahana CRG sy ny fitrandrahana ginseng mena isan-karazany avy amin'ny fiaviana Koreana samihafa (anisan'izany ny KRGA, KRGB). ary KRGC).Ny ginseng mena dia vita amin'ny fakan'ny ginseng vaovao 6 taona.Ny fitrandrahana ginseng mena dia azo amin'ny fanasana ginseng amin'ny rano in-telo, avy eo mifantoka amin'ny fitrandrahana rano, ary amin'ny farany dia maina amin'ny hafanana ambany mba hahazoana vovobony nalaina avy amin'ny ginseng.Antibodies (anti-Nrf2, anti-GST, ary β-actin), horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit immunoglobulin G (IgG), transfection reagent, control siRNA, ary Nrf2 siRNA dia novidina tao amin'ny Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). .), USA).
Ny sela Caco2 sy ny hEL dia novolavolaina tao amin'ny lovia kolontsaina sela 100 mm2 miaraka amin'ny MEM misy 10% FBS amin'ny 37 ° C ao anaty atmosfera mafana amin'ny 5% CO2.Mba hamaritana ny fiantraikan'ny toe-pahasalamana, ny sela hEL dia natsipy tamin'ny fifantohana samihafa amin'ny B (a) P sy G-Rg3 ao amin'ny MEM mandritra ny 48 h.Azo anadihadiana na angonina bebe kokoa ny sela mba hanomanana ny fitrandrahana tsy misy sela.
Ny fanandramana rehetra dia nankatoavin'ny Komitin'ny Etika momba ny biby andrana ao amin'ny Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology (Fankatoavana No. 2019; Fisoratana anarana 4587TH).Ny fanandramana rehetra dia natao mifanaraka amin'ny torolàlana sy fitsipika mifandraika amin'izany, ary ny fandalinana dia natao araka ny torolàlana momba ny Fikarohana momba ny biby: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE).Ny totozy A / J valo herinandro dia nampidirina voalohany tamin'ny B (a) P amin'ny vahaolana tricaprine (100 mg / kg, 0.2 ml).Taorian'ny herinandro, ny totozy dia nozaraina an-tsokosoko ho vondrona fanaraha-maso sy vondrona fitsaboana samihafa, totozy 15 isaky ny vondrona tsirairay, ary nalaina indray mandeha isan'andro.Rehefa afaka 20 herinandro ny fitsaboana dia natao sorona ny biby noho ny asphyxia CO2.Ny havokavoka dia nangonina ary raikitra nandritra ny 24 ora.Ny isan'ny fivontosana ambony sy ny haben'ny fivontosana tsirairay dia nofaritana ho an'ny havokavoka tsirairay teo ambanin'ny mikraoskaopy iray.Ny fanombanana ny habetsahan'ny tumors (V) dia nokajiana tamin'ny fampiasana ity teny manaraka ity: V (mm3) = 4/3πr3, izay r ny savaivony fivontosana.Ny fitambaran'ny habetsaky ny fivontosana rehetra ao amin'ny havokavoky ny totozy dia maneho ny totalin'ny fivontosana, ary ny salan'isa totalin'ny fivontosana ao amin'ny vondrona tsirairay dia maneho ny enta-mavesatry ny fivontosana.Ny ra manontolo sy ny santionan'ny tsinay dia nangonina ary voatahiry ao amin'ny -80 ° C ho an'ny famaritana UPLC-MS / MS.Nangonina ny serum ary nampiasaina ny mpandinika simia mandeha ho azy handinihana ny haavon'ny alanine aminotransferase (ALT) sy ny creatinine serum (Cr) mba hanombanana ny fiasan'ny atiny sy ny voa.
Ny santionany voaangona dia nesorina tao amin'ny fitahirizana mangatsiaka, natsofoka, nolanjaina ary napetraka tao anaty fantsona araka ny voalaza etsy ambony.Izany dia nampiana 0,5 μM phlorizin (fenitra anatiny) amin'ny vahaolana methanol 0,8 ml.Ny tavy dia natao homogène tamin'ny fampiasana Tissue-Tearor ary ny homogenate dia nafindra tany amin'ny fantsona microcentrifuge 1.5 ml.Ny fangaro dia natao centrifuge tamin'ny 15500 rpm nandritra ny 15 minitra.Rehefa avy nesorina 1,0 ml ny supernatant, maina amin`ny azota.Methanol roanjato litatra no nampiasaina ho fanarenana.Angonina sy karakaraina amin'ny tsipika iray ny ra ary ampiasaina ho fanondroana ny fandrefesana rehetra.
Ny takelaka Transwell 24-well dia nambolena tamin'ny sela 1.0 × 105 Caco-2 isaky ny lavadrano mba hanombanana ny mety ho fanatsarana ny fitaterana G-Rg3 amin'ny fanampiana ny verapamil.Taorian'ny 3 herinandro ny kolontsaina, ny sela dia nosasana tamin'ny HBSS ary preincubated tamin'ny 37 ° C.400 μL amin'ny 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, na fifangaroan'ny 50 na 100 μM verapamil) dia natsindrona teo amin'ny lafiny basolateral na apical amin'ny monolayer, ary 600 μL ny vahaolana HBSS dia nampiana ny iray hafa. lafiny.Manangona 100 µl amin'ny fitaovana kolontsaina amin'ny fotoana voatondro (0, 15, 30, 45, 60, 90 ary 120 minitra) ary ampio 100 µl HBSS mba hanomanana ity boky ity.Ny santionany dia voatahiry ao amin'ny -4 ° C mandra-pahitana ny UPLC-MS / MS.Ny fitenenana Papp = dQ/(dT × A × C0) dia ampiasaina hamaritana ny permeability apical sy basolateral hita mibaribary ary ny mifamadika amin'izany (Pa-b sy Pb-a, tsirairay avy);dQ/dT dia ny fiovan'ny fifantohana, A (0.6 cm2) ny velaran'ny monolayer, ary C0 no fifantohana voalohany amin'ny mpamatsy.Ny tahan'ny efflux dia kajy ho Pb-a / Pa-b, izay maneho ny tahan'ny efflux ny zava-mahadomelina fianarana.
Ny voalavo Wistar lahy dia nifady hanina nandritra ny 24 ora, tsy nisotro afa-tsy rano, ary nodiovina tamin'ny tsindrona 3,5% ny vahaolana pentobarbital.Ny fantsona silicone intubated dia manana ny faran'ny duodenum ho fidirana ary ny faran'ny ileum ho fivoahana.Mampiasà paompy peristaltika hanondrahana ny fidirana amin'ny 10 µM G-Rg3r na G-Rg3s amin'ny HBSS isotonic amin'ny taham-pidirana 0.1 ml/min.Ny vokatry ny verapamil dia nodinihina tamin'ny fampidirana 50 μM na 100 μM ny fitambarana amin'ny 10 μM G-Rg3r na G-Rg3s.Ny UPLC-MS / MS dia natao tamin'ny fitrandrahana perfusion nangonina tamin'ny fotoana 60, 90, 120, ary 150 minitra taorian'ny nanombohan'ny perfusion.Ny isan-jaton'ny absorption dia isaina amin'ny formula % absorption = (1 - Cout/Cin) × 100%;ny fifantohan'ny G-Rg3 amin'ny fivoahana sy ny fidirana dia asehon'ny Cout sy Cin, tsirairay avy.
Ny sela hEL dia nafafy tamin'ny takelaka 96-lavaka amin'ny haavon'ny sela 1 × 104 isaky ny lavadrano ary nokarakaraina tamin'ny B (a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) na G-Rg3 levona ao amin'ny DMSO .Ny zava-mahadomelina avy eo dia nopotehina tamin'ny medium culture ho an'ny fifantohana isan-karazany (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) nandritra ny 48 ora.Amin'ny fampiasana kitapom-panadinana MTS azo alaina ara-barotra, ny sela dia niharan'ny protocole mahazatra ary avy eo norefesina tamin'ny fampiasana mpamaky microplate amin'ny 490 nm.Ny haavon'ny fahafahan'ny sela amin'ny vondrona miaraka amin'ny B (a) P (10 μM) sy G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) dia nodinihina araka ny fomba etsy ambony ary nampitahaina tamin'ny vondrona tsy voatsabo.
Ny sela hEL dia nafafy tamin'ny takelaka 6-lavaka amin'ny hakitroky ny sela 1 × 105 / lava ary nokarakaraina tamin'ny 10 μMB (a) P raha misy na tsy misy 10 μM G-Rg3.Taorian'ny fitsaboana 48 ora dia nesorina tao amin'ny sela hEL ny ADN tamin'ny alàlan'ny QIAamp DNA Mini Kit araka ny protocole an'ny mpanamboatra.Ny fananganana BPDE-DNA adducts dia hita tamin'ny fampiasana kitapo BPDE-DNA addduct ELISA.Ny haavon'ny BPDE-DNA adduct dia norefesina tamin'ny fampiasana mpamaky microplate amin'ny fandrefesana ny absorbance amin'ny 450 nm.
Ny sela hEL dia nafafy tamin'ny takelaka 96-lavaka amin'ny haavon'ny sela 1 × 104 isaky ny lavadrano ary notsaboina tamin'ny 10 μMB (a) P raha tsy misy na misy 10 μM G-Rg3 mandritra ny 48 ora.Ny hetsika GST dia norefesina tamin'ny alàlan'ny kitapom-panadinana hetsika GST ara-barotra araka ny fitsipiky ny mpanamboatra.Ny fampahavitrihana GST havanana dia norefesina tamin'ny alàlan'ny absorbance amin'ny 450 nm mampiasa mpamaky microplate.
Ny sela hEL dia nosasana tamin'ny PBS mangatsiaka ary avy eo dia nodiovina tamin'ny fampiasana radioimmunoprecipitation assay buffer misy protease inhibitors sy phosphatase inhibitors.Taorian'ny fampitomboana ny proteinina amin'ny fampiasana kitapom-panadinana proteinina manontolo, ny proteinina 30 μg amin'ny santionany tsirairay dia nosarahan'ny 12% SDS-PAGE ary nafindra tany amin'ny fonon'ny PVDF tamin'ny alàlan'ny electrophoresis.Nosakanana tamin'ny ronono 5% ny membrane ary natsofoka tamin'ny antibody voalohany nandritra ny alina tamin'ny 4 ° C.Taorian'ny incubation tamin'ny horseradish peroxidase-conjugated antibody faharoa, dia nampiana reagents chemiluminescence nohatsaraina mba hijery ny famantarana mamatotra.Ny hamafin'ny tarika proteinina tsirairay dia nofaritana tamin'ny alàlan'ny rindrambaiko ImageJ.
Ny rindrambaiko GraphPad Prism 7.0 dia nampiasaina hamakafaka ny angon-drakitra rehetra, aseho amin'ny hoe mean ± fivilian-dàlana.Ny fiovaovana eo amin'ny vondrona fitsaboana dia nodinihina tamin'ny fampiasana ny t test an'ny mpianatra na ny famakafakana ny tsy fitoviana amin'ny fomba tokana, miaraka amin'ny sanda P <0.05 izay manondro ny lanjan'ny statistika.
Ny angon-drakitra rehetra azo na nodinihina nandritra ity fanadihadiana ity dia tafiditra ao anatin'ity lahatsoratra navoaka ity sy ireo rakitra fampahalalana fanampiny.
Torre, LA, Siegel, RL ary Jemal, A. statistikan'ny homamiadan'ny havokavoka.adverb.Lany daty.fanafody.biolojia.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Tobacco carcinogens, ny biomarkers sy ny homamiadan'ny paraky.Nat.Mpitandrina momba ny homamiadana.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH ary Venitt, S. ADN sy proteinina fanampiny ao amin'ny vatan'olombelona vokatry ny setroky ny paraky.iraisam-pirenena.J. Kansera.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA ary Yu M. Ny vokatry ny Houttuynia cordata sy ny silibinin amin'ny benzo (a) pyrene-induced lung tumorigenesis amin'ny totozy A / J.Cancer 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et al.Vokatra voajanahary miady amin'ny homamiadana mitokana amin'ny akora fanafody sinoa.valanorano.fanafody.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Ny fahombiazan'ny polyphenon E, ny ginseng mena, ary ny rapamycin amin'ny benzo (a) pyrene-induced lung tumorigenesis amin'ny totozy A / J.Cancer 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS ary Yuan, KS Red, fandraisana anjara amin'ny fitsaboana homamiadana.valanorano.J. Nutt.fanafody.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS ary Gao, L. Ginsenosides amin'ny fakany sy ny ravin'ny ginseng amerikana.J. Agric.Simika sakafo.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA ary Yuan KS Pharmacology of ginseng: singa maro sy fiantraikany maro.biochemistry.pharmacology.58, 1685–1693 (1999).
Fotoana fandefasana: Sep-17-2023