Nature.com сайтаар зочилсонд баярлалаа.Таны ашиглаж буй хөтчийн хувилбар нь CSS-ийн дэмжлэгтэй байна.Хамгийн сайн үр дүнд хүрэхийн тулд хөтчийнхөө шинэ хувилбарыг ашиглахыг зөвлөж байна (эсвэл Internet Explorer дээр нийцтэй байдлын горимыг унтраах).Энэ хооронд байнгын дэмжлэг үзүүлэхийн тулд бид сайтыг загварчлал эсвэл JavaScriptгүйгээр харуулж байна.
Улаан хүн орхоодойг Азийн уламжлалт анагаах ухаанд олон зуун жилийн турш хэрэглэж ирсэн.Энэхүү судалгаагаар бид өөр өөр бүс нутагт ургасан дөрвөн төрлийн улаан хүн орхоодой (Хятад улаан хүн орхоодой, солонгос улаан хүн орхоодой А, солонгос улаан хүн орхоодой В, солонгос улаан хүн орхоодой С) нь хорт хавдар үүсгэгч уушигны үүсэх, өсөлтийг дарангуйлах чадварыг үнэллээ. хавдар.A/J хулгана дээр бензо(а)пирен (B(a)P)-ийн шинжилгээ хийсэн ба улаан хүн орхоодойн дөрвөн сортын дундаас Солонгосын улаан хүн орхоодой В нь хавдрын ачааллыг бууруулахад хамгийн үр дүнтэй болох нь тогтоогдсон.Нэмж дурдахад бид дөрвөн улаан хүн орхоодойн ханд дахь төрөл бүрийн хүн орхоодойн (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ба Rg5) агуулгыг шинжилж үзэхэд Солонгосын улаан хүн орхоодой В. хүн орхоодой Rg3 (G-Rg3)-ийн хамгийн өндөр түвшин нь G-Rg3 нь эмчилгээний үр дүнд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг харуулж байна.Энэхүү ажил нь G-Rg3 нь харьцангуй бага биологийн хүртээмжтэй болохыг харуулж байна.Гэсэн хэдий ч G-Rg3-ийг P-gp дарангуйлагч верапамилтай хавсарч хэрэглэхэд G-Rg3-ийн Caco-2 эсүүдэд гадагшлах урсгал буурч, хархны загварт G-Rg3-ийн гэдэс шингээх хурд нэмэгдэж, G-Rg3 нэмэгдсэн байна.Caco-2 эсүүдэд Rg3-ийн гадагшлах урсгал буурч, Rg3 концентрацийн түвшин буурдаг.Гэдэс болон сийвэн дэх G-Rg3 нь ихсэж, хавдраас урьдчилан сэргийлэх чадвар нь B(a)P-ээр үүсгэгдсэн хорт хавдар үүсэх хархны загварт мөн сайжирсан.Мөн бид G-Rg3 нь хүний уушигны эсэд B(a)P-ийн өдөөгдсөн цитотоксик болон ДНХ-ийн нэмэлт формацийг бууруулж, Nrf2 замаар дамжуулан II фазын ферментийн илэрхийлэл, идэвхийг сэргээж байгааг олж мэдсэн нь үйл ажиллагааны боломжит механизмтай холбоотой байж болох юм. G дарангуйлах -Rg3..Уушигны хавдар үүсэх тухай.Бидний судалгаагаар G-Rg3 нь хулганы загварт уушигны хавдрыг онилоход чухал үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг харуулж байна.Энэхүү женьсенозидын амны хөндийн биологийн хүртээмжийг P-гликопротейнд чиглүүлснээр сайжруулж, молекул нь хорт хавдрын эсрэг нөлөө үзүүлэх боломжийг олгодог.
Уушигны хорт хавдрын хамгийн түгээмэл төрөл бол жижиг эсийн хорт хавдар (ҮСХБХ) бөгөөд энэ нь Хятад болон Хойд Америкт хорт хавдрын нас баралтын тэргүүлэх шалтгаануудын нэг юм1,2.Уушигны жижиг бус хорт хавдраар өвчлөх эрсдэлийг нэмэгдүүлдэг гол хүчин зүйл бол тамхи татах явдал юм.Тамхины утаанд бензо(а)пирен (B(a)P), нитрозамин, радоны задралын цацраг идэвхт изотоп зэрэг 60 гаруй хорт хавдар үүсгэгч бодис агуулагддаг.3 Полициклик үнэрт нүүрсустөрөгчид B(a)P нь тамхины хордлогын гол шалтгаан болдог. утаа.B(a)P-д өртсөний дараа цитохром P450 нь түүнийг B(a)P-7,8-дигидродиол-9,10-эпоксид (BPDE) болгон хувиргадаг бөгөөд энэ нь ДНХ-тэй урвалд орж BPDE-ДНХ-ийн нэмэлт 4 үүсгэдэг. Үүнээс гадна эдгээр нь Нэмэлт бодисууд нь хүний уушигны хавдартай төстэй хавдрын үе шат, гистологи бүхий хулганад уушгины хавдар үүсэхийг өдөөдөг5.Энэ онцлог нь B(a)P-ээр өдөөгдсөн уушигны хорт хавдрын загварыг хорт хавдрын эсрэг шинж чанартай нэгдлүүдийг үнэлэхэд тохиромжтой систем болгодог.
Өндөр эрсдэлтэй бүлэгт, ялангуяа тамхи татдаг хүмүүст уушгины хорт хавдраас урьдчилан сэргийлэх нэг боломжит стратеги бол эпителийн доторх неопластик гэмтлийг дарангуйлах, улмаар хорт хавдар үүсэхээс урьдчилан сэргийлэх зорилгоор хими урьдчилан сэргийлэх бодис хэрэглэх явдал юм.Амьтны судалгаагаар янз бүрийн химийн урьдчилан сэргийлэх бодисууд үр дүнтэй болохыг харуулж байна6.Бидний өмнөх тайлан7 улаан хүн орхоодой нь уушигны хорт хавдраас урьдчилан сэргийлэх сайн нөлөөг онцолсон.Энэхүү өвслөг ургамлыг Азийн уламжлалт анагаах ухаанд олон зууны турш хүний нас, эрүүл мэндийг уртасгахын тулд хэрэглэж ирсэн бөгөөд хавдрын эсрэг үйлчилгээтэй нь нотлогдсон8.
Хүн орхоодойн идэвхтэй хүчин зүйл нь хүн орхоодойн хандны чанарыг үнэлэхэд нийлмэл маркер болгон ашигладаг хүн орхоодой юм.Хүн орхоодойн түүхий хандны тоон шинжилгээнд ихэвчлэн RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, Rc9,10 гэх мэт хэд хэдэн хүн орхоодойг хэрэглэдэг.Хүн орхоодой нь амны хөндийн биологийн хүртээмж муутай тул эмнэлзүйн хэрэглээ бага байдаг11.Биологийн хүртээмж муутай байх механизм тодорхойгүй байгаа ч P-гликопротейн (P-gp)12-аас үүдэлтэй хүнзенозидын гадагшлах урсгал нь шалтгаан байж болно.P-gp нь эсийн доторх бодисыг гадаад орчинд гаргахын тулд ATP-ийн гидролизийн энергийг ашигладаг ATP-ийг холбогч кассет зөөвөрлөгчийн супер гэр бүлийн хамгийн чухал урсгал дамжуулагчийн нэг юм.P-gp зөөвөрлөгчид ихэвчлэн гэдэс, бөөр, элэг, цус-тархины сааданд өргөн тархсан байдаг13.P-gp нь гэдэс дотор шингээхэд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг бөгөөд P-gp-ийг дарангуйлах нь амны хөндийн шимэгдэлтийг нэмэгдүүлж, хорт хавдрын эсрэг зарим эмийн хүртээмжийг нэмэгдүүлдэг12,14.Урьд нь ном зохиолд ашигласан дарангуйлагчдын жишээ бол верапамил ба циклоспорин А15 юм.Энэхүү ажил нь Хятад, Солонгосоос гаралтай улаан хүн орхоодойн янз бүрийн хандыг хорт хавдарт нөлөөлөх чадварыг үнэлэхийн тулд B(a)P-ээр үүсгэгдсэн уушигны хорт хавдрыг судлах хулганы системийг бий болгох явдал юм.Хорт хавдар үүсгэхэд нөлөөлж болох тусгай хүнзенозидыг тодорхойлохын тулд хандыг тус тусад нь шинжилсэн.Дараа нь Верапамилыг P-gp-ийг онилох, хорт хавдрыг онилох хүн орхоодойн амны биологийн хүртээмж, эмчилгээний үр нөлөөг сайжруулахад ашигласан.
Хүн орхоодойн сапонин нь хорт хавдар үүсэхэд эмчилгээний нөлөө үзүүлдэг механизм тодорхойгүй хэвээр байна.Янз бүрийн хүнсенозидууд нь исэлдэлтийн стрессийг бууруулж, хоргүйжүүлэх 2-р үе шатны ферментийг идэвхжүүлснээр хорт хавдар үүсгэгч бодисоос үүдэлтэй ДНХ-ийн эвдрэлийг бууруулж, эсийг гэмтээхээс сэргийлж чаддаг болохыг судалгаагаар тогтоожээ.Глутатион S-трансфераза (GST) нь хорт хавдар үүсгэгч бодисоос үүдэлтэй ДНХ-ийн гэмтлийг бууруулахад шаардлагатай II фазын ердийн фермент юм17.Цөмийн эритроид 2-той холбоотой хүчин зүйл 2 (Nrf2) нь редокс гомеостазыг зохицуулж, II фазын фермент болон цитопротектор антиоксидант хариу урвалыг идэвхжүүлдэг транскрипцийн чухал хүчин зүйл юм18.Бидний судалгаагаар тодорхойлогдсон женьсенозидын B(a)P-ийн өдөөгдсөн цитотоксик байдал, BPDE-ДНХ-ийн нэмэлт формацийг бууруулах, уушигны хэвийн эсүүдэд Nrf2 замыг модуляцлах замаар II фазын ферментийг өдөөх нөлөөг судалсан.
B(a)P-ээр үүсгэгдсэн хорт хавдрын хулганы загварыг бий болгосон нь өмнөх ажилтай нийцэж байна5.Зураг 1А-д B(a)P, ус (хяналт), хятад улаан хүн орхоодойн ханд (CRG), солонгос улаан хүн орхоодойн ханд А (KRGA), солонгос улаанаар өдөөгдсөн хулганы хорт хавдрын 20 долоо хоногийн эмчилгээний туршилтын загварыг үзүүлэв. хүн орхоодой.В ханд (KRGB) болон Солонгосын улаан хүн орхоодойн ханд C (KRGC).Улаан хүн орхоодойг 20 долоо хоног эмчилсний дараа хулганыг CO2-ийн амьсгал боогдуулж золиослосон.Зураг 1В-д янз бүрийн төрлийн улаан хүн орхоодойгоор эмчилсэн амьтдын уушигны макроскопийн хавдрыг, Зураг 1С-д хавдрын дээжийн гэрлийн микрографыг үзүүлэв.KRGB эмчилсэн амьтдын хавдрын ачаалал (1.5 ± 0.35) хяналтын амьтдынхаас бага (0.82 ± 0.2, P < 0.05) Зураг 1D-д үзүүлэв.Хавдрын ачааллыг дарангуйлах дундаж түвшин 45% байв.Туршилтанд хамрагдсан бусад улаан хүн орхоодойн ханд нь хавдрын ачаалалд тийм их өөрчлөлт ороогүй байна (P > 0.05).Хулганы загварт улаан хүн орхоодойг 20 долоо хоногоор эмчлэх явцад биеийн жинд өөрчлөлт ороогүй (өгөгдөл үзүүлээгүй), элэг, бөөрний хордлого байхгүй (Зураг 1E,F) зэрэг илт гаж нөлөө ажиглагдаагүй.
Улаан хүн орхоодойн ханд нь A/J хулганад уушгины хавдрын хөгжлийг эмчилдэг.(A) Туршилтын загвар.(B) Хулганы загварт уушигны том хавдар.Хавдар нь сумаар тэмдэглэгдсэн байдаг.а: Хятадын улаан хүн орхоодойн бүлэг.б: Солонгосын улаан хүн орхоодойн А бүлэг.в: Солонгосын улаан хүн орхоодой бүлэг B. d: Солонгосын улаан хүн орхоодой бүлэг C. г: хяналтын бүлэг.(C) Уушигны хавдрыг харуулсан гэрлийн микрограф.Томруулах: 100. b: 400. (D) Улаан хүн орхоодойн хандны бүлгийн хавдрын ачаалал.(E) Элэгний ALT ферментийн сийвэн дэх түвшин.(F) Бөөрний ферментийн плазмын түвшин Cr.Өгөгдлийг дундаж ± стандарт хазайлтаар илэрхийлнэ.*P <0.05.
Энэхүү судалгаанд тодорхойлсон улаан хүн орхоодойн хандыг хэт өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн тандем масс спектрометрээр (UPLC-MS/MS) шинжилж, дараах хүн орхоодойн хэмжээг тодорхойлсон: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ба Rg5.Шинжилгээний бодисыг хэмжихэд ашигласан UPLC болон MS нөхцлийг өмнөх тайланд тайлбарласан19.Дөрвөн улаан хүн орхоодойн хандны UPLC-MS/MS хроматограммыг Зураг 2А-д үзүүлэв.Жинсенозидын нийт агууламжийн хувьд мэдэгдэхүйц ялгаа байсан бөгөөд CRG-д хамгийн их нийт хүнсенозидын агууламж (590.27 ± 41.28 мкмоль/л) байв (Зураг 2Б).Бие даасан хүн орхоодойг үнэлэхэд (Зураг 2C) KRGB нь бусад хүн орхоодойтой харьцуулахад G-Rg3-ийн хамгийн өндөр түвшинг харуулсан (G-Rg3s-ийн хувьд 58.33 ± 3.81 мкмоль/л, G -Rg3r-ийн хувьд 41.56 ± 2.88 мкмоль/л).улаан хүн орхоодой төрөл (P <0.001).G-Rg3 нь нүүрстөрөгч 20 дахь гидроксил бүлгийн байрлалаар ялгаатай G-Rg3r ба G-Rg3s хос стереоизомер хэлбэрээр үүсдэг (Зураг 2D).Үр дүн нь G-Rg3r эсвэл G-Rg3 нь B(a)P-ээр үүсгэгдсэн хорт хавдрын хулганы загварт хорт хавдрын эсрэг чухал ач холбогдолтой болохыг харуулж байна.
Янз бүрийн улаан хүн орхоодойн ханд дахь хүн орхоодойн агууламж.(A) Дөрвөн улаан хүн орхоодойн хандны UPLC-MS/MS хроматограмм.(B) Заасан ханд дахь хүнзенозидын нийт агууламжийн тооцоо.(C) Шошготой ханднаас хүн орхоодойг илрүүлэх.(D) G-Rg3r ба G-Rg3s-ийн стереоизомеруудын бүтэц.Өгөгдлийг гурвалсан тодорхойлолтын дундаж ± стандарт хазайлтаар илэрхийлнэ.***P <0.001.
UPLC-MS/MS судалгаанд 20 долоо хоног эмчилгээ хийсний дараа гэдэс болон цусны дээжинд хүн орхоодойн хэмжээг тодорхойлох шаардлагатай байсан.KRGB-ийн эмчилгээ нь цусанд зөвхөн 0.0063 ± 0.0005 мкг / мл Rg5 байгааг харуулсан.Үлдсэн хүн орхоодой илрээгүй нь амаар уухад биологийн хүртээмж муу, улмаар эдгээр хүн орхоодойн өртөлт багассаныг харуулж байна.
Бүдүүн гэдэсний аденокарцинома эсийн шугам Caco-2 нь хүний гэдэсний хучуур эдийн эсүүдтэй морфологи, биохимийн хувьд төстэй бөгөөд гэдэсний хучуур эдийн саадыг даван энтероцитийн тээвэрлэлтийг үнэлэхэд тустайг харуулж байна.Энэхүү шинжилгээг өмнөх судалгаанд үндэслэсэн 20 .Зураг 3A,B,C,D,E,F нь Caco-2 нэг давхаргат загвар ашиглан G-Rg3r ба G-Rg3-ийн эс хоорондын тээвэрлэлтийн төлөөллийн зургийг үзүүлэв.G-Rg3r эсвэл G-Rg3-ийн Caco-2 нэг давхаргаар дамжин суурийн хажуугаас оройн тал руу (Pb-a) эс хоорондын дамжуулалт оройн хажуугаас суурь тал руу (Pa-b) хамаагүй өндөр байв.G-Rg3r-ийн хувьд Pa-b дундаж утга 0.38 ± 0.06 байсан ба 50 мкмоль/л верапамил хэрэглэсний дараа 0.73 ± 0.06 болж, 100 мкмоль/л верапамил хэрэглэсний дараа 1.14 ± 0.09 болж өссөн байна (p < 0.001, p<0.001,). Зураг 2).3A).G-Rg3-ийн ажиглалт ижил төстэй хэв маягийг дагаж мөрдсөн (Зураг 3B) бөгөөд үр дүн нь верапамил эмчилгээ нь G-Rg3r болон G-Rg3-ийн тээвэрлэлтийг сайжруулсныг харуулсан.Верапамилын эмчилгээ нь мөн Pb-a болон G-Rg3r, G-Rg3s-ийн гадагшлах урсгалын дундаж харьцааг мэдэгдэхүйц бууруулсан (Зураг 3C,D,E,F) нь верапамил эмчилгээ нь Како-2 шүүрлийн эс дэх хүнзенозидын агууламжийг бууруулдаг болохыг харуулж байна..
Caco-2 нэг давхаргад G-Rg3-ийн эс хоорондын тээвэрлэлт, харх шингээлтийн шинжилгээнд гэдэсний шингээлт.(A) Caco-2 нэг давхарга дахь G-Rg3r бүлгийн Pa-b утга.(B) Caco-2 monolayer дахь G-Rg3s бүлгүүдийн Pa-b утга.(C) Caco-2 нэг давхарга дахь G-Rg3r бүлгийн Pb утга.(D) Caco-2 нэг давхарга дахь G-Rg3s бүлгүүдийн Pb утга.(E) Caco-2 нэг давхарга дахь G-Rg3r бүлгийн гарцын харьцаа.(F) Caco-2 нэг давхарга дахь G-Rg3 бүлгийн гарцын харьцаа.(G) Харханд шингээх шинжилгээнд G-Rg3r-ийн гэдэсний шингээлтийн хувь.(H) Харханд шингээх шинжилгээнд G-Rg3-ийн гэдэсний шингээлтийн хувь.Верапамил нэмэлгүйгээр нэвчих чадвар, шингээлтийг харьцуулсан.Өгөгдлийг бие даасан таван туршилтын дундаж ± стандарт хазайлтаар илэрхийлнэ.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Өмнөх ажил20-тай нийцүүлэн, верапамил эмчилгээ хийсний дараа гэдэсний G-Rg3 шингээлт нэмэгдэж байгаа эсэхийг тодорхойлохын тулд харханд ортотопик гэдэсний сэлбэлт хийсэн.3G,H зурагт дээрх хугацааны туршид хорт хавдрын загварт хархуудад G-Rg3r ба G-Rg3-ийн гэдэсний шингээлтийн хувийг үнэлэхийн тулд төлөөлөх шингээлтийн шинжилгээг харуулав.G-Rg3r-ийн сул шингээлтийн эхний хувь нь ойролцоогоор 10% байсан нь 50 мкм верапамилтай эмчилгээний дараа 20% -иас дээш, 100 μМ верапамилтай эмчилгээний дараа 25% -иас дээш болж өссөн.Үүний нэгэн адил, G-Rg3-ийн анхны шингээлт нь 10% байсан ба 50 μM верапамилтай эмчилгээ хийсний дараа 20% -иас дээш, 100 μM верапамилтай эмчилгээ хийсний дараа бараг 30% -иар дээд цэгтээ хүрсэн нь P-gp-ийг верапамил дарангуйлдаг болохыг харуулж байна. уушигны хорт хавдрын хулганы загварт гэдэсний G-шингээлт Rg3.
Дээрх аргын дагуу B(a)P-ээр үүсгэгдсэн хорт хавдрын загвар хулганыг 4А-р зурагт үзүүлсэн шиг санамсаргүй байдлаар зургаан бүлэгт хуваасан.G-Rg3 эмчилгээний бүлэгт хяналтын бүлэгтэй харьцуулахад жингийн мэдэгдэхүйц бууралт, хордлогын эмнэлзүйн шинж тэмдэг илрээгүй (өгөгдлийг харуулаагүй).20 долоо хоног эмчилгээ хийсний дараа хулгана бүрийн уушгийг цуглуулсан.Зураг 4В-д дээрх эмчилгээний бүлгүүдийн хулганад уушигны макроскопийн хавдрыг харуулсан ба Зураг 4С-д хавдрын төлөөллийн гэрлийн микрографыг үзүүлэв.Бүлэг тус бүрийн хавдрын ачааллын тухайд (Зураг 4D) G-Rg3r ба G-Rg3s-ээр эмчилсэн хулганын утгууд тус тус 0.75 ± 0.29 мм3 ба 0.81 ± 0.30 мм3 байсан бол G хулганын утгууд тус тус байв. -Rg3-тай 1.63 ±0.40 мм3 байна.хяналтын хулгана (p <0.001) нь G-Rg3 эмчилгээ нь хулгана дахь хавдрын ачааллыг бууруулдаг болохыг харуулж байна.Верапамилын хэрэглээ нь энэ бууралтыг улам сайжруулсан: верапамил+ G-Rg3r хулганад 0.75 ± 0.29 мм3-аас 0.33 ± 0.25 мм3 (p < 0.01) болж буурч, верапамил+ 0.81 ± 0.30 мм 29-аас 1 ± 0.29 болж буурсан. G. -Rg3s-ээр эмчилсэн хулганад мм3 (p<0.05) байгаа нь верапамил нь G-Rg3-ийн хавдар үүсэхийг дарангуйлах нөлөөг сайжруулж болохыг харуулж байна.Хавдрын ачаалал нь хяналтын бүлэг ба верапамилийн бүлэг, G-Rg3r бүлэг ба G-Rg3s бүлэг, верапамил+G-Rg3r бүлэг, верапамил+G-Rg3s бүлгийн хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа байгаагүй.Түүнчлэн, үнэлэгдсэн эмчилгээтэй холбоотой элэг, бөөрний мэдэгдэхүйц хордлого илрээгүй (Зураг 4E,F).
G-Rg3 эмчилгээ хийсний дараа хавдрын ачаалал, заасан бүлгүүдэд плазм эсвэл гэдэсний G-Rg3r ба G-Rg3 түвшин.(A) Туршилтын загвар.(B) Хулганы загвар дахь макроскопийн хавдар.Хавдар нь сумаар тэмдэглэгдсэн байдаг.а: G-Rg3r.b: G-Rg3s.в: G-Rg3r верапамилтай хавсарсан.d: G-Rg3 верапамилтай хавсарсан.г: Верапамил.e: хяналт.(C) Томруулах үед хавдрын оптик микрографи.Хариулт: 100x.b: 400X.(D) A/J хулгана дахь хавдрын ачаалалд G-Rg3 + верапамил эмчилгээний нөлөө.(E) Элэгний ALT ферментийн сийвэн дэх түвшин.(F) Бөөрний ферментийн плазмын түвшин Cr.(G) Заасан бүлгүүдийн G-Rg3r эсвэл G-Rg3-ийн плазмын түвшин.(H) Заасан бүлгүүдийн гэдэс дэх G-Rg3r эсвэл G-Rg3-ийн түвшин.Өгөгдлийг гурвалсан тодорхойлолтын дундаж ± стандарт хазайлтаар илэрхийлнэ.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
B(a)P-ээр өдөөгдсөн хорт хавдрын загвар хулгануудын G-Rg3 түвшинг Аргачлалын хэсэгт тайлбарласан аргын дагуу 20 долоо хоногийн эмчилгээний хугацааны дараа UPLC-MS/MS-ээр үнэлэв.Зураг 4G болон H нь сийвэнгийн болон гэдэсний G-Rg3 түвшинг тус тус харуулж байна.Цусны сийвэн дэх G-Rg3r-ийн түвшин 0.44 ± 0.32 мкмоль/л байсан ба верапамилыг нэгэн зэрэг хэрэглэснээр 1.17 ± 0.47 мкмоль/л болж өссөн (p<0.001), харин гэдэсний G-Rg3r-ийн түвшин 0.53±0.08 мкг/л байв.Верапамилтай хавсарсан үед g нь 1.35 ± 0.13 мкг / г хүртэл нэмэгддэг (p <0.001).G-Rg3-ийн хувьд үр дүн нь ижил төстэй загвартай байсан нь верапамил эмчилгээ нь A/J хулганад G-Rg3-ийн амны хөндийн био хүртээмжийг нэмэгдүүлсэн болохыг харуулж байна.
HEL эсүүд дээрх B(a)P ба G-Rg3-ийн цитотоксик чанарыг үнэлэхэд эсийн амьдрах чадварын шинжилгээг ашигласан.hEL эсэд B(a)P-ээр өдөөгдсөн эсийн хоруу чанарыг Зураг 5А-д харуулсан бол G-Rg3r ба G-Rg3-ийн хоргүй шинж чанарыг Зураг 5А, 5В-д үзүүлэв.5B, C. G-Rg3-ийн цитопротектор нөлөөг үнэлэхийн тулд B(a)P-ийг янз бүрийн концентрацитай G-Rg3r эсвэл G-Rg3-тай хамт hEL эсүүдэд оруулсан.Зураг 5D-д үзүүлсэнчлэн G-Rg3r 5 μM, 10 μM, 20 μM-ийн концентрацид эсийн амьдрах чадварыг 58.3%, 79.3%, 77.3% болгон сэргээсэн.Үүнтэй төстэй үр дүнг G-Rg3s бүлэгт ч харж болно.G-Rg3-ийн концентраци 5 μM, 10 μM ба 20 μM байх үед эсийн амьдрах чадвар тус тус 58.3%, 72.7% болон 76.7% болж сэргэсэн (Зураг 5E).).BPDE-ДНХ-ийн нэмэлт бодис байгаа эсэхийг ELISA хэрэгсэл ашиглан хэмжсэн.Бидний үр дүнгээс харахад B(a)P-ээр эмчилсэн бүлэгт BPDE-ДНХ-ийн нэмэгдлийн түвшин хяналтын бүлэгтэй харьцуулахад нэмэгдсэн боловч G-Rg3-ийн хамтарсан эмчилгээтэй харьцуулахад B(a)P бүлгийн BPDE-ДНХ-ийн нэмэгдлийн түвшин нэмэгдсэн байна. Б эмчилсэн бүлгийн ДНХ-ийн нэмэлтийн түвшин мэдэгдэхүйц буурсан байна.Зөвхөн B(a)P-ийн эмчилгээний үр дүнг Зураг 5F-д үзүүлэв (G-Rg3r-ийн хувьд 1.87 ± 0.33-ийн эсрэг 3.77 ± 0.42, G -Rg3s-ийн хувьд 1.93 ± 0.48, p < 0.001-ийн хувьд 3.77 ± 0.42).
G-Rg3 ба B(a)P-ээр эмчилсэн hEL эсүүдэд эсийн амьдрах чадвар ба BPDE-DNA adduct үүсэх.(A) B(a)P-тэй эмчилсэн hEL эсийн амьдрах чадвар.(B) G-Rg3r-ээр эмчилсэн hEL эсийн амьдрах чадвар.(C) G-Rg3-ээр эмчилсэн hEL эсийн амьдрах чадвар.(D) B(a)P ба G-Rg3r-ээр эмчилсэн hEL эсийн амьдрах чадвар.(E) B(a)P ба G-Rg3-аар эмчилсэн hEL эсийн амьдрах чадвар.(F) B(a)P болон G-Rg3-тай эмчилсэн hEL эсүүд дэх BPDE-ДНХ-ийн нэмэлтийн түвшин.Өгөгдлийг гурвалсан тодорхойлолтын дундаж ± стандарт хазайлтаар илэрхийлнэ.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
10 μM B(a)P ба 10 μM G-Rg3r эсвэл G-Rg3s-тэй хамтарсан эмчилгээний дараа GST ферментийн илэрхийлэл илэрсэн.Бидний үр дүнгээс харахад B(a)P нь GST-ийн илэрхийлэлийг дарангуйлдаг (G-Rg3r бүлэгт 59.7 ± 8.2%, G-Rg3s бүлэгт 39 ± 4.5%), B(a)P нь G-Rg3r-ийн аль нэгтэй нь холбоотой болохыг харуулсан. , эсвэл G-Rg3r, эсвэл G-Rg3r.G-Rg3-тай хамтран эмчилгээ хийснээр GST илэрхийлэл сэргэсэн.GST илэрхийлэл (G-Rg3r бүлэгт 103.7 ± 15.5%, G-Rg3s бүлэгт 110 ± 11.1%, p < 0.05 ба p < 0.001, Зураг 6A, B, C).GST-ийн үйл ажиллагааг үйл ажиллагааны шинжилгээний иж бүрдэл ашиглан үнэлэв.Бидний үр дүнгээс харахад хосолсон эмчилгээний бүлэг нь зөвхөн B(a)P бүлэгтэй харьцуулахад GST-ийн идэвхжил өндөр байгааг харуулсан (G-Rg3r бүлэгт 96.3 ± 6.6%, G-Rg3r бүлэгт 92.3 ± 6.5% эсрэг). ).G-Rg3s бүлэгт % vs 35.7 ± 7.8%, p <0.001, Зураг 6D).
B(a)P ба G-Rg3-тай эмчилсэн hEL эсүүд дэх GST ба Nrf2-ийн илэрхийлэл.(A) Western blotting ашиглан GST илэрхийлэлийг илрүүлэх.(B) B(a)P болон G-Rg3r-ээр эмчилсэн hEL эсүүд дэх GST-ийн тоон илэрхийлэл.(C) B(a)P ба G-Rg3s-ээр эмчилсэн hEL эсүүд дэх GST-ийн тоон илэрхийлэл.(D) B(a)P ба G-Rg3-тай эмчилсэн hEL эсүүд дэх GST идэвхжил.(E) Western blotting ашиглан Nrf2 илэрхийлэлийг илрүүлэх.(F) B(a)P ба G-Rg3r-ээр эмчилсэн hEL эсүүд дэх Nrf2-ийн тоон илэрхийлэл.(G) B(a)P ба G-Rg3s-ээр эмчилсэн hEL эсүүд дэх Nrf2-ийн тоон илэрхийлэл.Өгөгдлийг гурвалсан тодорхойлолтын дундаж ± стандарт хазайлтаар илэрхийлнэ.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
B(a)P-ийн өдөөгдсөн хавдар үүсэхийг G-Rg3-аар дарангуйлахад оролцдог замыг тодруулахын тулд Nrf2-ийн илэрхийлэлийг Western blotting-ээр үнэлэв.Зураг 6E,F,G-д үзүүлснээр хяналтын бүлэгтэй харьцуулахад зөвхөн B(a)P эмчилгээний бүлэгт Nrf2-ийн түвшин буурсан;Гэсэн хэдий ч B(a)P эмчилгээний бүлэгтэй харьцуулахад PG-Rg3 бүлгийн B(a) Nrf2 түвшин нэмэгдсэн (G-Rg3r-ийн хувьд 106 ± 9.5%, 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2%). G-Rg3r-ийн эсрэг 41 ± 9.8% G-Rg3s, p <0.01).
Бид тусгай жижиг хөндлөнгийн РНХ (siRNA) ашиглан Nrf2 илэрхийлэлийг дарах замаар Nrf2-ийн урьдчилан сэргийлэх үүргийг баталгаажуулсан.Nrf2-г буулгах нь Western blotting-ээр батлагдсан (Зураг 7A,B).Зураг 7C,D-д үзүүлснээр, hEL эсийг B(a)P ба G-Rg3-тай хамтран эмчлэх нь B(a)P-тэй харьцуулахад BPDE-ДНХ-ийн нэмэлтүүдийн тоо (1.47 ± 0.21) буурсан байна. хяналтын siRNA бүлэгт дангаараа.) G-Rg3r 4.13 ± 0.49, G-Rg3s 1.8 ± 0.32 ба 4.1 ± 0.57, p < 0.01).Гэсэн хэдий ч G-Rg3-ийн BPDE-ДНХ үүсэхийг дарангуйлах нөлөө нь Nrf2-ийг устгаснаар арилсан.siNrf2 бүлэгт B(a)P ба G-Rg3-ийн хамтарсан эмчилгээ болон дангаар нь B(a)P эмчилгээний хооронд BPDE-ДНХ-ийн нэмэлт үүсэхэд мэдэгдэхүйц ялгаа байгаагүй (G-Rg3r-ийн хувьд 3.0 ± 0.21, 3.56 ± 0.32). ).G-Rg3r-ийн хувьд 3.6-ийн эсрэг G-Rg3s-ийн хувьд ±0.45-ийн эсрэг 4.0±0.37, p > 0.05).
Nrf2-ийн уналт нь hEL эсүүдэд BPDE-ДНХ-ийн нэмэлт үүсэхэд үзүүлэх нөлөө.(A) Nrf2 унасан нь Western blotting-ээр батлагдсан.(B) Nrf2 зурвасын эрчмийн тоон үзүүлэлт.(C) B(a)P болон G-Rg3r-тай эмчилсэн hEL эсүүд дэх BPDE-ДНХ-ийн нэмэлтийн түвшинд Nrf2-ийн уналтад үзүүлэх нөлөө.(D) B(a)P болон G-Rg3-тай эмчилсэн hEL эсүүд дэх BPDE-ДНХ-ийн нэмэлтийн түвшинд Nrf2-ийн уналтад үзүүлэх нөлөө.Өгөгдлийг гурвалсан тодорхойлолтын дундаж ± стандарт хазайлтаар илэрхийлнэ.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Энэхүү судалгаагаар улаан хүн орхоодойн янз бүрийн хандыг B(a)P-ээр үүсгэгдсэн уушгины хорт хавдрын хулганы загварт урьдчилан сэргийлэх нөлөөг үнэлж, KRGB эмчилгээ нь хавдрын ачааллыг эрс багасгасан.Энэхүү хүн орхоодойн ханд дахь G-Rg3 нь хамгийн өндөр агууламжтай болохыг харгалзан энэхүү хүн орхоодой нь хавдар үүсэхийг зогсооход чухал үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг судалсан.G-Rg3r ба G-Rg3 (G-Rg3-ийн хоёр эпимер) хоёулаа B(a)P-ээр үүсгэгдсэн хорт хавдрын хулганы загварт хавдрын ачааллыг мэдэгдэхүйц бууруулсан.G-Rg3r ба G-Rg3 нь хавдрын эсийн апоптозыг өдөөж21, хавдрын өсөлтийг саатуулж22, эсийн мөчлөгийг зогсоож23, ангиогенезид нөлөөлж хорт хавдрын эсрэг үйлчилгээ үзүүлдэг.Мөн G-Rg3 нь эсийн үсэрхийллийг дарангуйлдаг25 бөгөөд G-Rg3 нь хими болон туяа эмчилгээний үр нөлөөг нэмэгдүүлэх чадвартай болохыг баримтжуулсан байна26,27.Poon нар G-Rg3 эмчилгээ нь B(a)P28-ийн генотоксик нөлөөг бууруулж болохыг харуулсан.Энэхүү судалгаа нь хүрээлэн буй орчны хорт хавдар үүсгэгч молекулуудыг онилж, хорт хавдраас урьдчилан сэргийлэхэд G-Rg3-ийн эмчилгээний чадамжийг харуулж байна.
Урьдчилан сэргийлэх сайн чадавхитай хэдий ч хүн орхоодойн амны хөндийн биологийн хүртээмж муу байгаа нь эдгээр молекулуудын эмнэлзүйн хэрэглээнд хүндрэл учруулж байна.Харханд хүнсенозидын амаар хэрэглэх фармакокинетик шинжилгээ нь түүний биоидэвхит байдал 5% -иас бага хэвээр байгааг харуулж байна29.Эдгээр туршилтууд нь 20 долоо хоногийн эмчилгээний дараа зөвхөн Rg5-ийн цусан дахь түвшин буурсан болохыг харуулсан.Биологийн хүртээмж муу байгаагийн үндсэн механизмыг тайлбарлаагүй байгаа ч P-gp нь хүнзенозидын гадагшлах урсгалд оролцдог гэж үздэг.Энэхүү ажил нь P-gp хориглогч верапамилыг хэрэглэх нь G-Rg3r ба G-Rg3s-ийн амны хөндийн био хүртээмжийг нэмэгдүүлдэг болохыг анх удаа харуулсан.Иймээс энэ дүгнэлт нь G-Rg3r ба G-Rg3s нь түүний урсацыг зохицуулахын тулд P-gp-ийн субстратын үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг харуулж байна.
Энэхүү ажил нь верапамилтай хавсарсан эмчилгээ нь уушигны хорт хавдрын хулганы загварт G-Rg3-ийн амны хөндийн биологийн хүртээмжийг нэмэгдүүлдэг болохыг харуулж байна.Энэхүү дүгнэлт нь P-gp блокадсан үед G-Rg3-ийн гэдэсний эс хоорондын тээвэрлэлт нэмэгдэж, улмаар түүний шингээлтийг нэмэгдүүлдэг.Caco2 эсийн шинжилгээгээр верапамил эмчилгээ нь G-Rg3r ба G-Rg3-ийн гадагшлах урсгалыг бууруулж, мембраны нэвчилтийг сайжруулдаг болохыг харуулсан.Yang нар хийсэн судалгаа.Судалгаанаас үзэхэд циклоспорин А (өөр P-gp хориглогч) эмчилгээ нь женьсенозидын Rh2-ийн биологийн хүртээмжийг 1%20-аас 30% хүртэл нэмэгдүүлдэг.Ginsenosides K болон Rg1 нэгдлүүд мөн ижил төстэй үр дүнг үзүүлэв30,31.Верапамил ба циклоспорин А-г хамт хэрэглэх үед Caco-2 эсэд агуулагдах К нэгдлийн гадагшлах хэмжээ 26.6-аас 3-аас бага болж мэдэгдэхүйц буурч, эсийн доторх түвшин 40 дахин нэмэгдсэн30 байна.Верапамил байгаа үед хархны уушигны хучуур эдийн эсэд Rg1-ийн түвшин нэмэгдсэн нь хүнзенозидын гадагшлах урсгалд P-gp үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг Meng et al.31 харуулсан.Гэсэн хэдий ч верапамил нь зарим хүн орхоодойн (Rg1, F1, Rh1 ба Re гэх мэт) гадагшлах урсгалд ижил нөлөө үзүүлээгүй бөгөөд энэ нь Лианг нар харуулсанчлан P-gp субстратуудад нөлөөлдөггүйг харуулж байна.32 .Энэхүү ажиглалт нь бусад тээвэрлэгчид болон өөр хүн орхоодой бүтэцтэй холбоотой байж болох юм.
G-Rg3-ийн хорт хавдраас урьдчилан сэргийлэх нөлөөний механизм тодорхойгүй байна.Өмнөх судалгаанууд нь G-Rg3 нь исэлдэлтийн стресс, үрэвслийг бууруулах замаар ДНХ-ийн гэмтэл, апоптозоос сэргийлдэг болохыг харуулсан16,33 нь B(a)P-ийн өдөөгдсөн хавдар үүсэхээс урьдчилан сэргийлэх үндсэн механизм байж болох юм.Зарим тайланд B(a)P-ээр өдөөгдсөн генотоксик чанарыг II фазын ферментийг модуляцуулж BPDE-DNA34 үүсгэх замаар бууруулж болохыг харуулж байна.GST нь GSH-ийг BPDE-тэй холбохыг дэмжиж, B(a)P35-аас үүдэлтэй ДНХ-ийн гэмтлийг бууруулдаг BPDE-ДНХ-ийн нэмэлт үүсэхийг дарангуйлдаг ердийн фазын II фермент юм.Бидний үр дүнгээс харахад G-Rg3 эмчилгээ нь B(a)P-ийн өдөөгдсөн цитотоксик байдал болон hEL эсүүдэд BPDE-DNA adduct үүсэхийг бууруулж, GST-ийн илэрхийлэл, идэвхийг in vitro сэргээдэг.Гэсэн хэдий ч Nrf2 байхгүй үед эдгээр нөлөө байхгүй байсан нь G-Rg3 нь Nrf2 замаар цитопротектор нөлөө үзүүлдэг болохыг харуулж байна.Nrf2 нь ксенобиотикийн цэвэрлэгээг дэмждэг II фазын хоргүйжүүлэх ферментийн гол транскрипцийн хүчин зүйл юм36.Nrf2 замыг идэвхжүүлснээр цитопротекторыг өдөөж, эд эсийн гэмтлийг бууруулдаг37.Нэмж дурдахад Nrf2-ийн хорт хавдар үүсэхэд хавдар дарагч болох үүргийг хэд хэдэн тайланд нотолсон байдаг38.Бидний судалгаагаар G-Rg3-ээр Nrf2 замыг өдөөх нь II фазын ферментийг идэвхжүүлж B(a)P-ийн хоргүйжүүлэх, улмаар хавдар үүсэх процессыг саатуулах замаар B(a)P-ээр үүсгэгдсэн генотоксикийг зохицуулах чухал үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг харуулж байна.
Бидний хийсэн ажил нь улаан хүн орхоодой нь хүн орхоодой G-Rg3-ийн чухал оролцоотойгоор хулганад B(a)P-ээр үүсгэгдсэн уушигны хорт хавдраас урьдчилан сэргийлэх боломжтойг харуулж байна.Энэ молекулын амны хөндийн биологийн хүртээмж муу байгаа нь эмнэлзүйн хэрэглээнд саад учруулж байна.Гэсэн хэдий ч энэхүү судалгаагаар G-Rg3 нь P-gp-ийн субстрат болохыг анх удаа харуулж байгаа бөгөөд P-gp дарангуйлагчийг хэрэглэх нь G-Rg3-ийн био хүртээмжийг in vitro болон in vivo нэмэгдүүлдэг.G-Rg3 нь Nrf2 замыг зохицуулах замаар B(a)P-ийн өдөөгдсөн эсийн хордлогыг бууруулдаг бөгөөд энэ нь түүний урьдчилан сэргийлэх үйл ажиллагааны боломжит механизм байж болох юм.Бидний судалгаагаар хүн орхоодой G-Rg3 нь уушгины хорт хавдраас урьдчилан сэргийлэх, эмчлэх боломжийг баталж байна.
Зургаан долоо хоногтой эм A/J хулгана (20 ± 1 гр), 7 долоо хоногтой эрэгтэй Wistar хархыг (250 ± 20 гр) Жексоны лаборатори (АНУ-ын Бар Харбор) болон Уханы Амьтан судлалын хүрээлэнгээс авсан.Их сургууль (Ухань, Хятад).Хятадын төрлийн соёлын цуглуулгын төв (БНХАУ, Ухань) бидэнд Caco-2 болон hEL эсүүдийг өгсөн.Sigma-Oldrich (Санкт Луис, АНУ) нь B(a)P болон трикаприны эх үүсвэр юм.Цэвэршүүлсэн женьсенозид G-Rg3r ба G-Rg3s, диметил сульфоксид (DMSO), CellTiter-96 пролиферацийн шинжилгээний иж бүрдэл (MTS), верапамил, хамгийн бага эфирийн орчин (MEM), ургийн үхрийн ийлдэс (FBS) Chengdu Must Bio-Technology компаниас худалдаж авсан. .Ltd. Co.(Чэнду, Хятад).QIAamp ДНХ-ийн мини иж бүрдэл болон BPDE-ДНХ нэмэлт ELISA иж бүрдлийг Qiagen (Стэнфорд, АНУ) болон Cell Biolabs (Сан Диего, Калифорниа, АНУ)-аас худалдаж авсан.GST идэвхжилийн шинжилгээний иж бүрдэл болон нийт уургийн шинжилгээний иж бүрдэл (стандарт BCA арга) Solarbio (Бээжин, Хятад) -аас худалдаж авсан.Бүх улаан хүн орхоодойн хандыг Мингю лаборатори 7-д хадгалдаг. Хонг Конгийн Баптист Их Сургууль (Хонконг, Хятад) болон Солонгосын Хавдар судлалын төв (Сөүл, Солонгос) нь CRG ханд болон солонгос гаралтай янз бүрийн улаан хүн орхоодойн ханд (КРГА, KRGB гэх мэт) арилжааны эх үүсвэр юм. болон KRGC).Улаан хүн орхоодойг 6 настай шинэ хүн орхоодойны үндэсээр хийдэг.Хүн орхоодойг гурван удаа усаар угааж, усан хандыг баяжуулж, эцэст нь бага температурт хатааж хүн орхоодойн хандны нунтаг гаргаж авдаг.Эсрэгбие (anti-Nrf2, anti-GST ба β-актин), тунхууны пероксидазын эсрэг туулайн иммуноглобулин G (IgG), трансфекцийн урвалж, хяналтын siRNA болон Nrf2 siRNA-г Санта Круз биотехнологи (Санта Круз, Калифорниа)-аас худалдаж авсан. .), АНУ).
Caco2 болон hEL эсийг 100 мм2 эсийн өсгөвөрлөх саванд 10% FBS агуулсан MEM-тэй 37 ° C температурт 5% CO2 чийгшүүлсэн орчинд өсгөвөрлөв.Эмчилгээний нөхцлийн үр нөлөөг тодорхойлохын тулд hEL эсийг B(a)P ба G-Rg3-ийн янз бүрийн концентрацитай MEM-д 48 цагийн турш өсгөвөрлөсөн.Эсгүй ханд бэлтгэхийн тулд эсийг цаашид шинжилж эсвэл цуглуулж болно.
Бүх туршилтыг Хуажун Шинжлэх Ухаан Технологийн Их Сургуулийн Тунжи Анагаах Ухааны Коллежийн Туршилтын Амьтны Ёс Зүйн Хорооноос баталсан (Баталгаа No2019; Бүртгэл No4587TH).Бүх туршилтыг холбогдох заавар, журмын дагуу хийсэн бөгөөд судалгааг Амьтны судалгаа: In Vivo туршилтын тайлан (ARRIVE) удирдамжийн дагуу явуулсан.Найман долоо хоногтой А/Ж хулгануудад трикаприны уусмалд (100 мг/кг, 0,2 мл) B(a)P-ийг хэвлийд анх тарьсан.Долоо хоногийн дараа хулгануудыг санамсаргүй байдлаар хяналтын бүлэг болон өөр өөр эмчилгээний бүлгүүдэд хувааж, бүлэг тус бүрт 15 хулгана авч, өдөрт нэг удаа амны хөндийгөөр идээлж байна.20 долоо хоног эмчилгээ хийсний дараа амьтдыг CO2-ийн асфиксиар золиосолжээ.Уушиг цуглуулж, 24 цагийн турш бэхэлсэн.Уушиг тус бүрээр өнгөц хавдрын тоо болон хавдрын хэмжээг задлах микроскопоор тодорхойлсон.Хавдрын эзэлхүүний тооцооллыг (V) дараах илэрхийлэл ашиглан тооцоолсон: V (мм3) = 4/3πr3, энд r нь хавдрын диаметр юм.Хулганы уушгин дахь хавдрын нийт эзлэхүүний цэвэр нийлбэр нь хавдрын нийт хэмжээг, бүлэг тус бүрийн хавдрын дундаж хэмжээ нь хавдрын ачааллыг илэрхийлэв.UPLC-MS/MS тодорхойлохын тулд бүхэл цус, гэдэсний дээжийг цуглуулж -80°С хэмд хадгалсан.Ийлдэс цуглуулж, элэг, бөөрний үйл ажиллагааг үнэлэхийн тулд аланин аминотрансфераза (ALT) болон ийлдэс дэх креатинины (Cr) түвшинг шинжлэхэд автомат химийн анализатор ашигласан.
Цуглуулсан дээжийг хүйтэн агуулахаас гаргаж, гэсгээж, жигнэж, дээр дурдсанчлан хоолойд хийнэ.Үүн дээр 0.8 мл метанолын уусмалд 0.5 мкм флоризин (дотоод стандарт) нэмсэн.Дараа нь эдийг Tissue-Tearor ашиглан нэгэн төрлийн болгож, дараа нь гомогенатыг 1.5 мл микроцентрифугийн хоолойд шилжүүлэв.Хольцыг 15 минутын турш 15500 эрг / мин-д центрифуг хийнэ.1.0 мл дээд давхаргыг зайлуулсны дараа азотоор хатаана.Хоёр зуун микролитр метанолыг нөхөн сэргээхэд ашигласан.Цусыг нэг мөрөнд цуглуулж, боловсруулж, бүх хэмжилтийн лавлагаа болгон ашигладаг.
Верапамил нэмснээр G-Rg3 тээвэрлэлт сайжирч байгааг үнэлэхийн тулд 24 цооногтой Трансвелл хавтангуудыг нүхэнд 1.0 × 105 Caco-2 эсээр суулгасан.3 долоо хоног өсгөвөрлөсний дараа эсийг HBSS-ээр угааж, 37 ° C-т урьдчилан өсгөвөрлөнө.400 мкл 10 мкМ G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s эсвэл 50 эсвэл 100 мкм верапамилтай холимог) нэг давхаргын суурь буюу оройн хэсэгт тарьж, нөгөө давхаргад 600 мкл HBSS уусмал нэмсэн. тал.100 мкл өсгөвөрлөгчийг тогтоосон цагт (0, 15, 30, 45, 60, 90, 120 минут) цуглуулж, энэ хэмжээг бүрдүүлэхийн тулд 100 мкл HBSS нэмнэ.Дээжийг UPLC-MS/MS-ээр илрүүлэх хүртэл -4 °C хэмд хадгалсан.Papp = dQ/(dT × A × C0) илэрхийлэл нь харагдахуйц нэг чиглэлтэй орой ба суурь хажуугийн нэвчилт болон эсрэгээр (Pa-b ба Pb-a тус тус);dQ/dT нь концентрацийн өөрчлөлт, A (0.6 см2) нь нэг давхаргын гадаргуугийн талбай, C0 нь донорын анхны концентраци юм.Урсгалын харьцааг Pb-a/Pa-b гэж тооцдог бөгөөд энэ нь судлагдсан эмийн урсацын хэмжээг илэрхийлдэг.
Эрэгтэй Wistar хархыг 24 цагийн турш өлсгөлөн, зөвхөн ус ууж, судсаар 3.5% пентобарбитал уусмалаар мэдээ алдуулалт хийсэн.Интубажуулсан силикон хоолой нь арван хоёр нугасны төгсгөлийг орц, бүдүүн гэдэсний төгсгөлийг гадагшлуулдаг.Гүрвэлзэх хөдөлгөөнт насос ашиглан 0.1 мл/мин урсгалын хурдтайгаар изотоник HBSS-д 10 μM G-Rg3r эсвэл G-Rg3s-ийн оролтыг шахна.Верапамилын нөлөөг 10 μM G-Rg3r эсвэл G-Rg3-д 50 мкм эсвэл 100 мкм нэгдэл нэмснээр үнэлэв.UPLC-MS/MS-ийг сэлбэж эхэлснээс хойш 60, 90, 120, 150 минутын дараа цуглуулсан шингэний ханд дээр хийсэн.Шингээлтийн хувийг % шингээлт = (1 – Cout/Cin) × 100% томъёогоор тодорхойлно;гаралт ба оролт дахь G-Rg3-ийн концентрацийг Cout болон Cin-ээр тус тус илэрхийлнэ.
hEL эсүүдийг 96 цооногтой ялтсуудад 1х104 эсийн нягтралтайгаар суулгаж, B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) эсвэл DMSO-д ууссан G-Rg3-аар эмчилсэн. .Дараа нь эмийг 48 цагийн турш янз бүрийн концентраци (0, 1, 2, 5, 10, 20 мкм) хүртэл өсгөвөрлөгчөөр шингэлэв.Худалдааны боломжтой MTS шинжилгээний иж бүрдлийг ашиглан эсийг стандарт протоколд хамруулж, дараа нь 490 нм долгионы долгионы микропластин уншигч ашиглан хэмжсэн.B(a)P (10 μM) болон G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM)-тай хамтран эмчилсэн бүлгүүдийн эсийн амьдрах чадварын түвшинг дээрх аргын дагуу үнэлж, эмчилгээ хийгээгүй бүлэгтэй харьцуулсан.
hEL эсүүдийг 1 × 105 эс/худаг нягттай 6 цооногийн ялтсуудад суулгаж, 10 μM G-Rg3 байгаа эсвэл байхгүй үед 10 μMB(a)P-ээр эмчилсэн.48 цагийн эмчилгээ хийсний дараа үйлдвэрлэгчийн протоколын дагуу QIAamp DNA Mini Kit ашиглан hEL эсүүдээс ДНХ гаргаж авсан.BPDE-DNA adducts үүсэхийг BPDE-DNA addduct ELISA иж бүрдэл ашиглан илрүүлсэн.BPDE-DNA adduct-ийн харьцангуй түвшинг микроплит уншигч ашиглан 450 нм долгионы долгионы долгионы шингээлтийг хэмжих замаар хэмжсэн.
hEL эсүүдийг 96 цооногийн ялтсуудад 1х104 эсийн нягтралтайгаар суулгаж, 10 μM G-Rg3 байхгүй эсвэл байхгүй үед 10 μMB(a)P-ээр 48 цагийн турш эмчилсэн.GST үйл ажиллагааг үйлдвэрлэгчийн протоколын дагуу арилжааны GST үйл ажиллагааны шинжилгээний иж бүрдэл ашиглан хэмжсэн.Харьцангуй GST идэвхжүүлэлтийг микропластин уншигч ашиглан 450 нм-ийн шингээлтээр хэмжсэн.
hEL эсийг мөсөн хүйтэн PBS-ээр угааж, дараа нь протеазын дарангуйлагч ба фосфатазын дарангуйлагч агуулсан радиоиммун тунадасжилтын шинжилгээний буфер ашиглан задалсан.Нийт уургийн шинжилгээний иж бүрдэл ашиглан уургийн хэмжээг тодорхойлсны дараа дээж тус бүрт 30 мкг уургийг 12% SDS-PAGE-ээр ялгаж электрофорезоор PVDF мембран руу шилжүүлэв.Мембраныг 5% тосгүй сүүгээр хааж, анхдагч эсрэгбиемүүдээр шөнийн турш 4 ° C-т өсгөвөрлөнө.Тунхууны пероксидазтай хавсарсан хоёрдогч эсрэгбиемүүдийг инкубацийн дараа холбогч дохиог дүрслэн харуулахын тулд сайжруулсан химилюминесценцийн урвалжуудыг нэмсэн.ImageJ программыг ашиглан уургийн зурвас бүрийн эрчмийг хэмжсэн.
GraphPad Prism 7.0 программ хангамжийг дундаж ± стандарт хазайлтаар илэрхийлсэн бүх өгөгдлийг шинжлэхэд ашигласан.Эмчилгээний бүлгүүдийн хоорондын өөрчлөлтийг Оюутны t тест эсвэл нэг талын дисперсийн шинжилгээ ашиглан үнэлж, P утга <0.05 нь статистикийн ач холбогдлыг илтгэнэ.
Энэхүү судалгааны явцад олж авсан эсвэл дүн шинжилгээ хийсэн бүх өгөгдлийг энэхүү нийтлэгдсэн нийтлэл болон нэмэлт мэдээллийн файлд оруулсан болно.
Торре, LA, Siegel, RL болон Jemal, A. Уушигны хорт хавдрын статистик.үйл үг.Хугацаа дууссан.эм.биологи.893, 1–19 (2016).
Хэхт, С. Тамхины хорт хавдар үүсгэгч бодисууд, тэдгээрийн биомаркерууд ба тамхинаас үүдэлтэй хорт хавдар.Нат.Хорт хавдрын лам.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH and Venitt, S. Тамхины утаанд өртсөний үр дүнд хүний эд эс дэх ДНХ ба уургийн нэмэлтүүд.олон улсын байдал.J. Хорт хавдар.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA and Yu M. A/J хулгана дахь бензо (а) пиренээр өдөөгдсөн уушгины хавдар үүсэхэд Houttuynia cordata ба силибинины нөлөө.Хорт хавдар 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et al.Хятадын эмийн материалаас тусгаарлагдсан хорт хавдрын эсрэг байгалийн гаралтай бүтээгдэхүүн.эрүү.эм.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Полифенон Е, улаан хүн орхоодой, рапамицины A/J хулгана дахь бензо (а) пиренээр өдөөгдсөн уушигны хавдар үүсэхэд үзүүлэх үр нөлөө.Хорт хавдар 8, 52–58 (2006).
Ван, CZ, Андерсон, С., Ду, В., Тэр, TS болон Юань, KS Улаан, хорт хавдрын эмчилгээнд оролцдог.эрүү.Ж.Натт.эм.14, 7–16 (2016).
Ли, TS, Mazza, G., Cottrell, AS болон Gao, L. Америкийн хүн орхоодойн үндэс, навчны Ginsenosides.Ж.Агрик.Хүнсний хими.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA болон Yuan KS Хүн орхоодойн фармакологи: олон бүрэлдэхүүн хэсэг, олон нөлөө.биохими.фармакологи.58, 1685–1693 (1999).
Шуудангийн цаг: 2023 оны 9-р сарын 17