Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद.तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझरच्या आवृत्तीमध्ये मर्यादित CSS सपोर्ट आहे.सर्वोत्तम परिणामांसाठी, आम्ही तुमच्या ब्राउझरची नवीन आवृत्ती वापरण्याची शिफारस करतो (किंवा Internet Explorer मधील सुसंगतता मोड बंद करा).दरम्यान, चालू असलेल्या समर्थनाची खात्री करण्यासाठी, आम्ही स्टाईल किंवा JavaScript शिवाय साइट प्रदर्शित करत आहोत.
रेड जिनसेंगचा वापर शेकडो वर्षांपासून पारंपारिक आशियाई औषधांमध्ये केला जात आहे.या अभ्यासात, आम्ही कार्सिनोजेन-प्रेरित फुफ्फुसाची निर्मिती आणि वाढ रोखण्यासाठी वेगवेगळ्या प्रदेशात वाढलेल्या चार प्रकारच्या लाल जिनसेंग (चायनीज रेड जिनसेंग, कोरियन रेड जिनसेंग ए, कोरियन रेड जिनसेंग बी आणि कोरियन रेड जिनसेंग सी) च्या क्षमतेचे मूल्यांकन केले. ट्यूमरए/जे उंदरांवर बेंजो(ए)पायरीन (बी(ए)पी) चाचणी घेण्यात आली आणि कोरियन रेड जिनसेंग बी हे चार लाल जिनसेंग जातींमध्ये ट्यूमरचा भार कमी करण्यासाठी सर्वात प्रभावी असल्याचे आढळून आले.याव्यतिरिक्त, आम्ही चार लाल जिनसेंग अर्कांमध्ये विविध जिन्सेनोसाइड्स (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 आणि Rg5) च्या सामग्रीचे विश्लेषण केले आणि आढळले की कोरियन लाल जिनसेंग बी मध्ये ginsenoside Rg3 (G-Rg3) ची उच्च पातळी, जी-Rg3 त्याच्या उपचारात्मक परिणामकारकतेमध्ये महत्त्वाची भूमिका बजावू शकते असे सूचित करते.हे कार्य दर्शविते की G-Rg3 ची जैवउपलब्धता तुलनेने कमी आहे.तथापि, जेव्हा G-Rg3 चे P-gp इनहिबिटर व्हेरापामिल सह प्रशासित केले गेले तेव्हा, Caco-2 पेशींमध्ये G-Rg3 चा प्रवाह कमी झाला, G-Rg3 च्या आतड्यांमधून शोषणाचा दर उंदीर मॉडेलमध्ये वाढला आणि G-Rg3 वाढले होते.Caco-2 पेशींमध्ये, Rg3 चा बहिर्वाह कमी होतो आणि Rg3 एकाग्रतेची पातळी कमी होते.G-Rg3 आतडे आणि प्लाझ्मामध्ये वाढले आहे, आणि ट्यूमर रोखण्याची क्षमता देखील B(a)P-प्रेरित ट्यूमरिजेनेसिसच्या उंदीर मॉडेलमध्ये वाढविली जाते.आम्हाला असेही आढळले की G-Rg3 ने मानवी फुफ्फुसाच्या पेशींमध्ये B(a)P-प्रेरित सायटोटॉक्सिसिटी आणि DNA ऍडक्ट निर्मिती कमी केली आणि Nrf2 मार्गाद्वारे फेज II एन्झाईम्सची अभिव्यक्ती आणि क्रियाकलाप पुनर्संचयित केला, जो संभाव्य क्रियांच्या यंत्रणेशी संबंधित असू शकतो. G प्रतिबंध -Rg3..फुफ्फुसाच्या ट्यूमरच्या घटनेबद्दल.आमचा अभ्यास G-Rg3 साठी माऊस मॉडेल्समधील फुफ्फुसाच्या ट्यूमरला लक्ष्य करण्यासाठी संभाव्य महत्त्वाची भूमिका दर्शवितो.P-glycoprotein ला लक्ष्य करून या ginsenoside ची मौखिक जैवउपलब्धता वाढवली जाते, ज्यामुळे रेणूला कर्करोगविरोधी प्रभाव पाडता येतो.
फुफ्फुसाच्या कर्करोगाचा सर्वात सामान्य प्रकार म्हणजे नॉन-स्मॉल सेल फुफ्फुसाचा कर्करोग (NSCLC), जो चीन आणि उत्तर अमेरिका 1,2 मध्ये कर्करोगाच्या मृत्यूच्या प्रमुख कारणांपैकी एक आहे.नॉन-स्मॉल सेल फुफ्फुसाचा कर्करोग होण्याचा धोका वाढवणारा मुख्य घटक म्हणजे धूम्रपान.सिगारेटच्या धुरात ६० पेक्षा जास्त कार्सिनोजेन्स असतात, ज्यात बेंजो(ए)पायरीन (बी(ए)पी), नायट्रोसमाइन्स आणि रेडॉनच्या क्षयातून किरणोत्सर्गी समस्थानिक असतात. पॉलीसायक्लिक सुगंधी हायड्रोकार्बन्स बी(ए)पी हे सिगारेटमधील विषारीपणाचे मुख्य कारण आहेत. धूरB(a)P च्या संपर्कात आल्यानंतर, सायटोक्रोम P450 त्याचे B(a)P-7,8-डायहायड्रोडिओल-9,10-इपॉक्साइड (BPDE) मध्ये रूपांतरित करते, जे DNA सोबत प्रतिक्रिया देऊन BPDE-DNA ॲडक्ट 4 बनवते. याव्यतिरिक्त, हे एडक्ट्स ट्यूमर स्टेज आणि मानवी फुफ्फुसाच्या ट्यूमर प्रमाणेच हिस्टोपॅथॉलॉजी असलेल्या उंदरांमध्ये फुफ्फुसाच्या ट्यूमरिजनेसिसला प्रेरित करते.हे वैशिष्ट्य B(a)P-प्रेरित फुफ्फुसाच्या कर्करोगाच्या मॉडेलला संभाव्य कॅन्सर गुणधर्म असलेल्या संयुगांचे मूल्यांकन करण्यासाठी एक योग्य प्रणाली बनवते.
उच्च-जोखीम गटांमध्ये, विशेषत: धूम्रपान करणाऱ्यांमध्ये फुफ्फुसाच्या कर्करोगाचा विकास रोखण्यासाठी एक संभाव्य रणनीती म्हणजे इंट्राएपिथेलियल निओप्लास्टिक जखमांच्या विकासास दडपण्यासाठी केमोप्रीव्हेंटिव्ह एजंट्सचा वापर करणे आणि त्याद्वारे त्यांच्या नंतरच्या घातकतेच्या प्रगतीस प्रतिबंध करणे.प्राण्यांच्या अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की विविध रसायन प्रतिबंधक एजंट प्रभावी आहेत6.आमच्या मागील अहवाल7 मध्ये फुफ्फुसाच्या कर्करोगावर रेड जिनसेंगचे चांगले प्रतिबंधात्मक प्रभाव हायलाइट केले गेले.या औषधी वनस्पतीचा उपयोग पारंपारिक आशियाई औषधांमध्ये शतकानुशतके आयुष्य आणि आरोग्य वाढवण्यासाठी केला जात आहे आणि ट्यूमर-विरोधी प्रभाव असल्याचे दस्तऐवजीकरण करण्यात आले आहे.
जिनसेंगचा सक्रिय घटक म्हणजे जिन्सेनोसाइड, जो जिनसेंग अर्कांच्या गुणवत्तेचे मूल्यांकन करण्यासाठी संयुक्त मार्कर म्हणून वापरला जातो.क्रूड जिनसेंग अर्कांच्या परिमाणात्मक विश्लेषणामध्ये विशेषत: RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, आणि Rc9,10 यासह अनेक जिन्सेनोसाइड्सचा वापर समाविष्ट असतो.जिन्सेनोसाइड्सचा त्यांच्या अत्यंत कमकुवत मौखिक जैवउपलब्धतेमुळे क्लिनिकल वापर कमी आहे.या खराब जैवउपलब्धतेची यंत्रणा स्पष्ट नसली तरी, P-glycoprotein (P-gp)12 मुळे होणारे ginsenosides चे प्रवाह हे कारण असू शकते.एटीपी-बाइंडिंग कॅसेट ट्रान्सपोर्टर सुपरफॅमिलीमध्ये पी-जीपी हे सर्वात महत्वाचे प्रवाह वाहतूक करणारे आहे, जे बाह्य वातावरणात इंट्रासेल्युलर पदार्थ सोडण्यासाठी एटीपी हायड्रोलिसिसची ऊर्जा वापरते.पी-जीपी ट्रान्सपोर्टर्स सामान्यत: आतडे, मूत्रपिंड, यकृत आणि रक्त-मेंदू अडथळा 13 मध्ये मोठ्या प्रमाणावर वितरित केले जातात.आतड्यांतील शोषणामध्ये P-gp महत्वाची भूमिका बजावते आणि P-gp च्या प्रतिबंधामुळे तोंडी शोषण वाढते आणि काही कर्करोगविरोधी औषधांची उपलब्धता वाढते 12,14.पूर्वी साहित्यात वापरल्या गेलेल्या इनहिबिटरची उदाहरणे म्हणजे वेरापामिल आणि सायक्लोस्पोरिन A15.या कार्यामध्ये B(a)P-प्रेरित फुफ्फुसाच्या कर्करोगाचा अभ्यास करण्यासाठी चीन आणि कोरियातील विविध लाल जिनसेंग अर्कांच्या घातकतेवर परिणाम करण्याच्या क्षमतेचे मूल्यमापन करण्यासाठी माउस प्रणाली स्थापित करणे समाविष्ट आहे.कार्सिनोजेनेसिसवर परिणाम करणारे विशिष्ट जिन्सेनोसाइड ओळखण्यासाठी अर्कांचे वैयक्तिकरित्या विश्लेषण केले गेले.Verapamil नंतर P-gp लक्ष्य करण्यासाठी आणि कर्करोग-लक्ष्यीकरण ginsenosides च्या तोंडी जैवउपलब्धता आणि उपचारात्मक परिणामकारकता सुधारण्यासाठी वापरले गेले.
जीनसेंग सॅपोनिन्स ज्या पद्धतीद्वारे कार्सिनोजेनेसिसवर उपचारात्मक प्रभाव पाडतात ते अद्याप अस्पष्ट आहे.संशोधनात असे दिसून आले आहे की विविध जिन्सेनोसाइड्स ऑक्सिडेटिव्ह तणाव कमी करून आणि फेज II डिटॉक्सिफिकेशन एंजाइम सक्रिय करून कार्सिनोजेनमुळे होणारे डीएनए नुकसान कमी करू शकतात, ज्यामुळे पेशींचे नुकसान टाळता येते.Glutathione S-transferase (GST) हे एक सामान्य फेज II एन्झाइम आहे जे कार्सिनोजेन्समुळे होणारे DNA नुकसान कमी करण्यासाठी आवश्यक आहे.न्यूक्लियर एरिथ्रॉइड 2-संबंधित घटक 2 (Nrf2) हा एक महत्त्वाचा ट्रान्सक्रिप्शन घटक आहे जो रेडॉक्स होमिओस्टॅसिसचे नियमन करतो आणि फेज II एन्झाईम्स आणि साइटोप्रोटेक्टिव्ह अँटिऑक्सिडंट प्रतिसाद18 च्या अभिव्यक्तीला सक्रिय करतो.आमच्या अभ्यासाने B(a)P-प्रेरित सायटोटॉक्सिसिटी आणि BPDE-DNA ऍडक्ट निर्मिती कमी करण्यावर ओळखल्या गेलेल्या जिन्सेनोसाइड्सच्या प्रभावांचे तसेच सामान्य फुफ्फुसाच्या पेशींमध्ये Nrf2 मार्ग मोड्युलेट करून फेज II एन्झाईम्स प्रवृत्त करण्यावर देखील तपासले.
B(a)P-प्रेरित कर्करोगाच्या माऊस मॉडेलची स्थापना मागील कार्याशी सुसंगत आहे5.आकृती 1A B(a)P, पाणी (नियंत्रण), चायनीज रेड जिनसेंग एक्स्ट्रॅक्ट (CRG), कोरियन रेड जिनसेंग एक्स्ट्रॅक्ट A (KRGA), आणि कोरियन रेड द्वारे प्रेरित माऊस कॅन्सर मॉडेलच्या 20-आठवड्याच्या उपचाराची प्रायोगिक रचना दाखवते. जिनसेंगएक्सट्रॅक्ट बी (केआरजीबी) आणि कोरियन रेड जिनसेंग एक्स्ट्रॅक्ट सी (केआरजीसी).20 आठवड्यांच्या रेड जिनसेंग उपचारानंतर, उंदरांचा CO2 श्वासोच्छवासाने बळी दिला गेला.आकृती 1B वेगवेगळ्या प्रकारच्या लाल जिनसेंगने उपचार केलेल्या प्राण्यांमध्ये मॅक्रोस्कोपिक फुफ्फुसातील ट्यूमर दर्शविते आणि आकृती 1C ट्यूमरच्या नमुन्याचा प्रतिनिधी प्रकाश मायक्रोग्राफ दर्शवितो.KRGB-उपचार केलेल्या प्राण्यांच्या गाठीचा भार (1.5 ± 0.35) आकृती 1D मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे नियंत्रण प्राण्यांच्या (0.82 ± 0.2, P < 0.05) पेक्षा कमी होता.ट्यूमर लोड प्रतिबंधाची सरासरी पदवी 45% होती.चाचणी केलेल्या इतर लाल जिनसेंग अर्कांमध्ये ट्यूमरच्या ओझ्यामध्ये (P > 0.05) इतके लक्षणीय बदल दिसून आले नाहीत.20 आठवड्यांच्या रेड जिनसेंग उपचारादरम्यान माऊस मॉडेलमध्ये कोणतेही स्पष्ट दुष्परिणाम आढळले नाहीत, ज्यात शरीराच्या वजनात कोणताही बदल (डेटा दर्शविला नाही) आणि यकृत किंवा मूत्रपिंडाची विषाक्तता नाही (आकृती 1E,F).
रेड जिनसेंग अर्क A/J उंदरांमध्ये फुफ्फुसातील ट्यूमरच्या विकासावर उपचार करतो.(अ) प्रायोगिक रचना.(ब) माऊस मॉडेलमध्ये मोठ्या फुफ्फुसाच्या गाठी.ट्यूमर बाणांनी दर्शविले जातात.अ: चिनी लाल जिनसेंग गट.ब: कोरियन रेड जिनसेंगचा गट ए.c: कोरियन रेड जिनसेंग ग्रुप B. d: कोरियन रेड ginseng ग्रुप C. d: कंट्रोल ग्रुप.(C) फुफ्फुसातील ट्यूमर दर्शविणारा प्रकाश मायक्रोग्राफ.मॅग्निफिकेशन: 100. b: 400. (D) लाल जिनसेंग अर्क गटातील ट्यूमरचा भार.(ई) यकृत एंजाइम ALT च्या प्लाझ्मा पातळी.(F) रेनल एन्झाइम Cr चे प्लाझ्मा पातळी.डेटा सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केला जातो.*पी <0.05.
या अभ्यासात ओळखल्या जाणाऱ्या लाल जिनसेंग अर्कांचे अल्ट्रा-परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (UPLC-MS/MS) द्वारे खालील जिन्सेनोसाइड्सचे प्रमाण निश्चित करण्यासाठी विश्लेषण केले गेले: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3 Rh2, F1, Rk1 आणि Rg5.विश्लेषकांचे मोजमाप करण्यासाठी वापरल्या जाणाऱ्या UPLC आणि MS अटींचे वर्णन मागील अहवालात केले गेले होते19.चार लाल जिनसेंग अर्कांचे UPLC-MS/MS क्रोमॅटोग्राम आकृती 2A मध्ये दाखवले आहेत.CRG (590.27 ± 41.28 μmol/L) (आकृती 2B) मध्ये सर्वाधिक एकूण जिन्सेनोसाइड सामग्रीसह, एकूण ginsenoside सामग्रीमध्ये लक्षणीय फरक होते.वैयक्तिक ginsenosides (आकृती 2C) चे मूल्यांकन करताना, KRGB ने इतर ginsenosides (G-Rg3s साठी 58.33 ± 3.81 μmol/L आणि G -Rg3r साठी 41.56 ± 2.88 μmol/L) च्या तुलनेत G-Rg3 ची सर्वोच्च पातळी दर्शविली.लाल जिनसेंग प्रकार (पी <0.001).G-Rg3 हे stereoisomers G-Rg3r आणि G-Rg3s च्या जोडीच्या रूपात उद्भवते, जे कार्बन 20 (Fig. 2D) वर हायड्रॉक्सिल गटाच्या स्थितीत भिन्न असतात.परिणाम दर्शवितात की G-Rg3r किंवा G-Rg3 B(a)P-प्रेरित कर्करोग माऊस मॉडेलमध्ये महत्त्वपूर्ण कॅन्सर क्षमता असू शकते.
विविध लाल ginseng अर्क मध्ये ginsenosides सामग्री.(A) चार लाल जिनसेंग अर्कांचे UPLC-MS/MS क्रोमॅटोग्राम.(ब) सूचित अर्कातील एकूण जिन्सेनोसाइड सामग्रीचा अंदाज.(C) लेबल केलेल्या अर्कांमध्ये वैयक्तिक ginsenosides शोधणे.(D) ginsenoside stereoisomers G-Rg3r आणि G-Rg3s च्या संरचना.डेटा त्रिगुण निर्धारणांच्या सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केला जातो.***पी <0.001.
UPLC-MS/MS अभ्यासामध्ये 20 आठवड्यांच्या उपचारानंतर आतड्यांतील आणि रक्ताच्या नमुन्यांमध्ये जिन्सेनोसाइड्सचे प्रमाण निश्चित करणे आवश्यक होते.KRGB सह उपचाराने रक्तामध्ये फक्त 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 ची उपस्थिती दिसून आली.उरलेले कोणतेही जिन्सेनोसाइड्स आढळले नाहीत, जे खराब तोंडी जैवउपलब्धता दर्शविते आणि त्यामुळे या जिन्सेनोसाइड्सच्या संपर्कात घट झाली.
कोलन एडेनोकार्सिनोमा सेल लाइन Caco-2 ही आकृतिबंध आणि जैवरासायनिकदृष्ट्या मानवी आतड्यांसंबंधी उपकला पेशींसारखीच आहे, जी आतड्यांसंबंधी उपकला अडथळा ओलांडून एन्टरोसाइट वाहतुकीचे मूल्यांकन करण्यासाठी त्याची उपयुक्तता दर्शवते.हे विश्लेषण 20 पूर्वीच्या अभ्यासावर आधारित होते.आकृती 3A,B,C,D,E,F हे Caco-2 मोनोलेयर मॉडेल वापरून G-Rg3r आणि G-Rg3 च्या ट्रान्ससेल्युलर ट्रान्सपोर्टच्या प्रतिनिधी प्रतिमा दर्शवतात.कॅको-2 मोनोलेयर्समध्ये जी-आरजी3आर किंवा जी-आरजी3 चे ट्रान्ससेल्युलर ट्रान्सपोर्ट बेसोलॅटरल ते एपिकल साइड (पीबी-ए) ते एपिकल ते बेसोलॅटरल साइड (Pa-b) पेक्षा लक्षणीयरीत्या जास्त होते.G-Rg3r साठी, सरासरी Pa-b मूल्य 0.38 ± 0.06 होते, जे 50 μmol/L वेरापामिलच्या उपचारानंतर 0.73 ± 0.06 पर्यंत वाढले आणि 100 μmol/L वेरापामिल (p <0.01 आणि 0.01) सह उपचारानंतर 1.14 ± 0.09 झाले. अनुक्रमे आकृती 2).3A).G-Rg3 साठी निरिक्षणांनी समान पॅटर्न (Fig. 3B) चे अनुसरण केले आणि परिणामांवरून असे दिसून आले की वेरापामिल उपचाराने G-Rg3r आणि G-Rg3 ची वाहतूक वाढवली.व्हेरापामिल उपचारामुळे Pb-a आणि G-Rg3r आणि G-Rg3s प्रवाह प्रमाण (आकृती 3C,D,E,F) मध्ये लक्षणीय घट झाली, हे दर्शविते की वेरापामिल उपचाराने Caco-2 प्रवाह पेशींमध्ये जिन्सेनोसाइड सामग्री कमी होते..
Caco-2 monolayers मध्ये G-Rg3 चे ट्रान्ससेल्युलर ट्रान्सपोर्ट आणि रॅट परफ्यूजन परखमध्ये आतड्यांसंबंधी शोषण.(A) Caco-2 monolayer मधील G-Rg3r गटाचे Pa-b मूल्य.(B) Caco-2 monolayer मधील G-Rg3s गटांचे Pa-b मूल्य.(C) Caco-2 monolayer मधील G-Rg3r गटाचे Pb मूल्य.(D) Caco-2 monolayer मधील G-Rg3s गटांचे Pb मूल्य.(E) Caco-2 monolayer मध्ये G-Rg3r गटांचे उत्पन्न गुणोत्तर.(F) Caco-2 monolayer मध्ये G-Rg3 गटांचे उत्पन्न गुणोत्तर.(G) उंदरांमध्ये परफ्यूजन परखणीमध्ये G-Rg3r च्या आतड्यांतील शोषणाची टक्केवारी.(एच) उंदरांमध्ये परफ्यूजन परखणीमध्ये G-Rg3 च्या आतड्यांतील शोषणाची टक्केवारी.वेरापामिल जोडल्याशिवाय पारगम्यता आणि शोषणाची तुलना केली गेली.डेटा पाच स्वतंत्र प्रयोगांचे सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केला जातो.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
पूर्वीच्या कामाशी सुसंगत 20, वेरापामिल उपचारानंतर आतड्यात G-Rg3 शोषण वाढते की नाही हे निर्धारित करण्यासाठी उंदरांचे ऑर्थोटोपिक आतड्यांसंबंधी परफ्यूजन केले गेले.आकडे 3G,H वरील कालावधी दरम्यान कर्करोग मॉडेल उंदीरांमध्ये G-Rg3r आणि G-Rg3 च्या आतड्यांमधून शोषणाच्या टक्केवारीचे मूल्यांकन करण्यासाठी प्रतिनिधी परफ्यूजन ऍसे दर्शविते.50 μM वेरापामिलच्या उपचारानंतर साधारणतः 10% च्या कमकुवत G-Rg3r सेवनाची प्रारंभिक टक्केवारी 20% पेक्षा जास्त आणि 100 μM वेरापामिलच्या उपचारानंतर 25% पेक्षा जास्त झाली.त्याचप्रमाणे, G-Rg3, ज्याचे प्रारंभिक सेवन 10% होते, ते देखील 50 μM वेरापामिलच्या उपचारानंतर 20% पेक्षा जास्त आणि 100 μM वेरापामिलच्या उपचारानंतर जवळपास 30% पेक्षा जास्त असल्याचे दर्शविते, हे सूचित करते की verapamil द्वारे P-gp चे प्रतिबंध वाढवते. फुफ्फुसाच्या कर्करोगाच्या माऊस मॉडेलमध्ये आतड्यांसंबंधी जी-अवशोषण Rg3.
वरील पद्धतीनुसार, आकृती 4A मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, B(a)P-प्रेरित कर्करोग मॉडेल उंदीर यादृच्छिकपणे सहा गटांमध्ये विभागले गेले.नियंत्रण गटाच्या तुलनेत G-Rg3 उपचार गटामध्ये कोणतेही लक्षणीय वजन कमी होणे किंवा विषाच्या तीव्रतेची क्लिनिकल चिन्हे आढळली नाहीत (डेटा दर्शविला नाही).20 आठवड्यांच्या उपचारानंतर, प्रत्येक उंदराचे फुफ्फुस गोळा केले गेले.आकृती 4B वरील उपचार गटांमधील उंदरांमध्ये मॅक्रोस्कोपिक फुफ्फुसातील ट्यूमर दर्शविते आणि आकृती 4C प्रतिनिधी ट्यूमरचा प्रातिनिधिक प्रकाश मायक्रोग्राफ दर्शवितो.प्रत्येक गटातील ट्यूमरच्या ओझ्याबद्दल (चित्र 4D), G-Rg3r आणि G-Rg3s सह उपचार केलेल्या उंदरांची मूल्ये अनुक्रमे 0.75 ± 0.29 mm3 आणि 0.81 ± 0.30 mm3 होती, तर G उंदरांची मूल्ये उपचारित केली गेली. -Rg3 सह अनुक्रमे 1.63 ±0.40 mm3 होते.उंदरांवर नियंत्रण ठेवा (p <0.001), जी-Rg3 उपचाराने उंदरांमध्ये ट्यूमरचा भार कमी झाल्याचे सूचित करते.वेरापॅमिलच्या प्रशासनाने ही कपात आणखी वाढविली: वेरापॅमिल+ जी-आरजी 3 आर उंदीरमधील मूल्ये 0.75 ± 0.29 मिमी 3 ते 0.33 ± 0.25 मिमी 3 (पी <0.01) पर्यंत कमी झाली आणि वेरापॅमिलची मूल्ये 0.81 ± 0.30 मिमी 3 पर्यंत कमी झाली. G. -Rg3s-उपचारित उंदीर (p <0.05) मध्ये mm3, हे दर्शविते की वेरापामिल ट्यूमरिजेनेसिसवर G-Rg3 चा प्रतिबंधात्मक प्रभाव वाढवू शकतो.ट्यूमरच्या ओझ्याने नियंत्रण गट आणि वेरापामिल गट, G-Rg3r गट आणि G-Rg3s गट आणि वेरापामिल+G-Rg3s गट आणि वेरापामिल+G-Rg3s गट यांच्यात कोणतेही महत्त्वपूर्ण फरक दिसून आले नाहीत.शिवाय, मूल्यमापन केलेल्या उपचारांशी संबंधित कोणतेही महत्त्वपूर्ण यकृत किंवा मूत्रपिंड विषारी आढळले नाहीत (आकृती 4E,F).
G-Rg3 उपचारानंतर ट्यूमरचा भार आणि सूचित गटांमध्ये प्लाझ्मा किंवा आतड्यांतील G-Rg3r आणि G-Rg3 पातळी.(अ) प्रायोगिक रचना.(ब) माऊस मॉडेलमध्ये मॅक्रोस्कोपिक ट्यूमर.ट्यूमर बाणांनी दर्शविले जातात.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r वेरापामिलच्या संयोगाने.d: G-Rg3 वेरापामिलच्या संयोगाने.ड: वेरापामिल.e: नियंत्रण.(C) ट्यूमरचा ऑप्टिकल मायक्रोग्राफ मॅग्निफिकेशनवर.उत्तर: 100x.b: 400X.(डी) A/J उंदरांमध्ये ट्यूमरच्या ओझ्यावर G-Rg3 + वेरापामिल उपचारांचा प्रभाव.(ई) यकृत एंजाइम ALT च्या प्लाझ्मा पातळी.(F) रेनल एन्झाइम Cr चे प्लाझ्मा पातळी.(जी) सूचित गटांचे G-Rg3r किंवा G-Rg3 चे प्लाझ्मा पातळी.(एच) सूचित गटांच्या आतड्यांमधील G-Rg3r किंवा G-Rg3s चे स्तर.डेटा त्रिगुण निर्धारणांच्या सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केला जातो.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
B(a)P-प्रेरित कर्करोग मॉडेल उंदरांमध्ये G-Rg3 पातळीचे मूल्यांकन 20-आठवड्यांच्या उपचार कालावधीनंतर पद्धती विभागात वर्णन केलेल्या पद्धतीनुसार UPLC-MS/MS द्वारे केले गेले.आकडे 4G आणि H अनुक्रमे प्लाझ्मा आणि आतड्यांसंबंधी G-Rg3 पातळी दर्शवतात.प्लाझ्मा G-Rg3r पातळी 0.44 ± 0.32 μmol/L होती आणि 1.17 ± 0.47 μmol/L वर व्हेरापामिल (p < 0.001) सह प्रशासनासह वाढली, तर आतड्यांतील G-Rg3r पातळी 0.53 ± 0.08 μg/L होती.व्हेरापामिल बरोबर एकत्रित केल्यावर, g 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001) पर्यंत वाढले.G-Rg3 साठी, परिणाम समान पद्धतीचे अनुसरण करतात, हे दर्शविते की वेरापामिल उपचाराने A/J उंदरांमध्ये G-Rg3 ची मौखिक जैवउपलब्धता वाढवली.
HEL पेशींवर B(a)P आणि G-Rg3 च्या सायटोटॉक्सिसिटीचे मूल्यांकन करण्यासाठी सेल व्यवहार्यता परख वापरली गेली.HEL पेशींमध्ये B(a)P द्वारे प्रेरित सायटोटॉक्सिसिटी आकृती 5A मध्ये दर्शविली आहे, तर G-Rg3r आणि G-Rg3 चे गैर-विषारी गुणधर्म आकृती 5A आणि 5B मध्ये दर्शविले आहेत.5B, C. G-Rg3 च्या सायटोप्रोटेक्टिव्ह प्रभावाचे मूल्यांकन करण्यासाठी, B(a)P हे HEL पेशींमध्ये G-Rg3r किंवा G-Rg3 च्या विविध एकाग्रतेसह सह-प्रशासित केले गेले.आकृती 5D मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, 5 μM, 10 μM आणि 20 μM च्या एकाग्रतेवर G-Rg3r ने अनुक्रमे 58.3%, 79.3% आणि 77.3% पर्यंत सेल व्यवहार्यता पुनर्संचयित केली.तत्सम परिणाम G-Rg3s गटात देखील दिसू शकतात.जेव्हा G-Rg3 चे प्रमाण 5 µM, 10 µM आणि 20 µM होते, तेव्हा सेल व्यवहार्यता अनुक्रमे 58.3%, 72.7% आणि 76.7% वर पुनर्संचयित केली गेली (आकृती 5E).).BPDE-DNA ऍडक्ट्सची उपस्थिती एलिसा किट वापरून मोजली गेली.आमच्या परिणामांनी दर्शविले की BPDE-DNA ऍडक्ट पातळी B(a)P-उपचार केलेल्या गटामध्ये नियंत्रण गटाच्या तुलनेत वाढली होती, परंतु G-Rg3 सह-उपचार, B(a)P गटातील BPDE-DNA ऍडक्ट पातळीच्या तुलनेत. उपचार केलेल्या गटातील बी, डीएनए ॲडक्ट पातळी लक्षणीयरीत्या कमी झाली.केवळ B(a)P सह उपचारांचे परिणाम आकृती 5F (G-Rg3r साठी 1.87 ± 0.33 वि. 3.77 ± 0.42, G -Rg3s साठी 1.93 ± 0.48 वि. 3.77 ± 0.42, p < 0.001) मध्ये दर्शविले आहेत.
G-Rg3 आणि B(a)P सह उपचार केलेल्या hEL पेशींमध्ये सेल व्यवहार्यता आणि BPDE-DNA ॲडक्ट फॉर्मेशन.(A) B(a)P ने उपचार केलेल्या hEL पेशींची व्यवहार्यता.(B) G-Rg3r ने उपचार केलेल्या hEL पेशींची व्यवहार्यता.(C) G-Rg3 ने उपचार केलेल्या hEL पेशींची व्यवहार्यता.(डी) B(a)P आणि G-Rg3r सह उपचार केलेल्या hEL पेशींची व्यवहार्यता.(ई) B(a)P आणि G-Rg3 सह उपचार केलेल्या hEL पेशींची व्यवहार्यता.(F) B(a)P आणि G-Rg3 सह उपचार केलेल्या hEL पेशींमध्ये BPDE-DNA ॲडक्टचे स्तर.डेटा त्रिगुण निर्धारणांच्या सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केला जातो.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
10 μM B(a)P आणि 10 μM G-Rg3r किंवा G-Rg3s सह उपचारानंतर GST एन्झाइम अभिव्यक्ती आढळली.आमच्या परिणामांनी दर्शविले की B(a)P ने GST अभिव्यक्ती दाबली (G-Rg3r गटात 59.7 ± 8.2% आणि G-Rg3s गटात 39 ± 4.5%), आणि B(a)P एकतर G-Rg3r शी संबंधित होते. , किंवा G-Rg3r सह, किंवा G-Rg3r सह.G-Rg3s सह सह-उपचाराने GST अभिव्यक्ती पुनर्संचयित केली.GST अभिव्यक्ती (G-Rg3r गटात 103.7 ± 15.5% आणि G-Rg3s गटात 110 ± 11.1%, अनुक्रमे p < 0.05 आणि p < 0.001, चित्र 6A, B, आणि C).ॲक्टिव्हिटी परख किट वापरून GST क्रियाकलापाचे मूल्यांकन केले गेले.आमच्या परिणामांवरून असे दिसून आले की B(a)P फक्त गटाच्या तुलनेत संयोजन उपचार गटात उच्च GST क्रियाकलाप होते (96.3 ± 6.6% विरुद्ध. 35.7 ± 7.8% G-Rg3r गटात विरुद्ध. 92.3 ± 6.5 G-Rg3r गटात ).G-Rg3s गटातील % वि 35.7 ± 7.8%, p < 0.001, आकृती 6D).
B(a)P आणि G-Rg3 सह उपचार केलेल्या hEL पेशींमध्ये GST आणि Nrf2 ची अभिव्यक्ती.(अ) वेस्टर्न ब्लॉटिंगद्वारे जीएसटी अभिव्यक्ती शोधणे.(B) B(a)P आणि G-Rg3r सह उपचार केलेल्या hEL पेशींमध्ये GST ची परिमाणात्मक अभिव्यक्ती.(C) B(a)P आणि G-Rg3s सह उपचार केलेल्या hEL पेशींमध्ये GST ची परिमाणात्मक अभिव्यक्ती.(D) B(a)P आणि G-Rg3 सह उपचार केलेल्या hEL पेशींमध्ये GST क्रियाकलाप.(ई) वेस्टर्न ब्लॉटिंगद्वारे Nrf2 अभिव्यक्ती शोधणे.(F) B(a)P आणि G-Rg3r सह उपचार केलेल्या hEL पेशींमध्ये Nrf2 ची परिमाणात्मक अभिव्यक्ती.(G) B(a)P आणि G-Rg3s सह उपचार केलेल्या hEL पेशींमध्ये Nrf2 ची परिमाणात्मक अभिव्यक्ती.डेटा त्रिगुण निर्धारणांच्या सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केला जातो.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
B(a)P-प्रेरित ट्यूमरिजेनेसिसच्या G-Rg3-मध्यस्थ दडपशाहीमध्ये गुंतलेले मार्ग स्पष्ट करण्यासाठी, Nrf2 अभिव्यक्तीचे वेस्टर्न ब्लॉटिंगद्वारे मूल्यांकन केले गेले.आकृती 6E,F,G मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, नियंत्रण गटाच्या तुलनेत, B(a)P उपचार गटातील फक्त Nrf2 ची पातळी कमी झाली आहे;तथापि, B(a)P उपचार गटाच्या तुलनेत, PG-Rg3 गटातील B(a) Nrf2 पातळी वाढली (G-Rg3r साठी 106 ± 9.5% वि. 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% G-Rg3r वि. G-Rg3s साठी 41 ± 9.8%, p < 0.01).
आम्ही विशिष्ट लहान हस्तक्षेप RNA (siRNA) वापरून Nrf2 अभिव्यक्ती दाबून Nrf2 च्या प्रतिबंधात्मक भूमिकेची पुष्टी केली.Nrf2 नॉकडाउनची पुष्टी वेस्टर्न ब्लॉटिंग (Fig. 7A,B) द्वारे झाली.आकृती 7C,D मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, B(a)P आणि G-Rg3 सह hEL पेशींच्या सह-उपचारामुळे B(a)P उपचारांच्या तुलनेत BPDE-DNA ऍडक्ट्सची संख्या (1.47 ± 0.21) कमी झाली. नियंत्रण siRNA गटात एकटे.) G-Rg3r 4.13 ± 0.49, G-Rg3s 1.8 ± 0.32 आणि 4.1 ± 0.57, p < 0.01) होते.तथापि, BPDE-DNA निर्मितीवर G-Rg3 चा प्रतिबंधात्मक प्रभाव Nrf2 नॉकडाउनने रद्द केला.siNrf2 गटामध्ये, B(a)P आणि G-Rg3 सह-उपचार आणि B(a)P उपचार (G-Rg3r विरुद्ध 3.56 ± 0.32 साठी 3.0 ± 0.21) यांच्यातील BPDE-DNA ॲडक्ट निर्मितीमध्ये कोणताही महत्त्वाचा फरक नव्हता ).G-Rg3r विरुद्ध 3.6 साठी G-Rg3s विरुद्ध ±0.45 विरुद्ध 4.0±0.37, p > 0.05).
HEL पेशींमध्ये BPDE-DNA ॲडक्ट निर्मितीवर Nrf2 नॉकडाउनचा प्रभाव.(A) Nrf2 नॉकडाउनची पुष्टी वेस्टर्न ब्लॉटिंगद्वारे झाली.(ब) Nrf2 बँड तीव्रतेचे प्रमाणीकरण.(C) B(a)P आणि G-Rg3r ने उपचार केलेल्या HEL पेशींमध्ये BPDE-DNA ॲडक्ट स्तरांवर Nrf2 नॉकडाउनचा प्रभाव.(D) B(a)P आणि G-Rg3 सह उपचार केलेल्या HEL पेशींमध्ये BPDE-DNA ॲडक्ट स्तरांवर Nrf2 नॉकडाउनचा प्रभाव.डेटा त्रिगुण निर्धारणांच्या सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केला जातो.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
या अभ्यासाने B(a)P-प्रेरित फुफ्फुसाच्या कर्करोगाच्या माऊस मॉडेलवर विविध लाल जिनसेंग अर्कांच्या प्रतिबंधात्मक प्रभावांचे मूल्यांकन केले आणि KRGB उपचाराने ट्यूमरचा भार लक्षणीयरीत्या कमी केला.या जिनसेंग अर्कामध्ये G-Rg3 चे प्रमाण सर्वाधिक आहे हे लक्षात घेऊन, ट्यूमरिजेनेसिस रोखण्यात या जिनसेनोसाइडची महत्त्वाची भूमिका अभ्यासण्यात आली आहे.दोन्ही G-Rg3r आणि G-Rg3 (G-Rg3 चे दोन एपिमर) B(a)P-प्रेरित कर्करोगाच्या माऊस मॉडेलमध्ये ट्यूमरचा भार लक्षणीयरीत्या कमी करतात.G-Rg3r आणि G-Rg3 ट्यूमर पेशींच्या ऍपोप्टोसिसला प्रवृत्त करून, ट्यूमरच्या वाढीस प्रतिबंध करून, सेल चक्र23 रोखून आणि एंजिओजेनेसिस24 वर परिणाम करून कर्करोगविरोधी प्रभाव पाडतात.G-Rg3 सेल्युलर मेटास्टॅसिस 25 प्रतिबंधित करते हे देखील दर्शविले गेले आहे आणि केमोथेरपी आणि रेडिओथेरपीचे प्रभाव वाढविण्यासाठी G-Rg3 ची क्षमता 26,27 दस्तऐवजीकरण करण्यात आली आहे.पून एट अल यांनी दाखवून दिले की G-Rg3 उपचार B(a) P28 चे जीनोटॉक्सिक प्रभाव कमी करू शकतात.हा अभ्यास पर्यावरणीय कार्सिनोजेनिक रेणूंना लक्ष्य करण्यासाठी आणि कर्करोग रोखण्यासाठी G-Rg3 ची उपचारात्मक क्षमता प्रदर्शित करतो.
त्यांची चांगली रोगप्रतिबंधक क्षमता असूनही, जिन्सेनोसाइड्सची खराब मौखिक जैवउपलब्धता या रेणूंच्या नैदानिक वापरासाठी एक आव्हान आहे.उंदरांमध्ये जिन्सेनोसाईड्सच्या तोंडी प्रशासनाच्या फार्माकोकिनेटिक विश्लेषणात असे दिसून आले की त्याची जैवउपलब्धता अजूनही 5%29 पेक्षा कमी आहे.या चाचण्यांमध्ये असे दिसून आले की 20 आठवड्यांच्या उपचार कालावधीनंतर, फक्त Rg5 चे रक्त स्तर कमी झाले.जरी खराब जैवउपलब्धतेची मूलभूत यंत्रणा स्पष्ट करणे बाकी आहे, तरीही पी-जीपी जीन्सेनोसाइड्सच्या प्रवाहात सामील असल्याचे मानले जाते.या कार्याने प्रथमच हे दाखवून दिले की वेरापामिल, एक P-gp ब्लॉकर, G-Rg3r आणि G-Rg3s ची मौखिक जैवउपलब्धता वाढवते.अशाप्रकारे, हा शोध असे सुचवितो की G-Rg3r आणि G-Rg3s त्याच्या प्रवाहाचे नियमन करण्यासाठी P-gp च्या सबस्ट्रेट म्हणून कार्य करतात.
हे कार्य दर्शविते की वेरापामिल सह एकत्रित उपचार फुफ्फुसाच्या कर्करोगाच्या माऊस मॉडेलमध्ये G-Rg3 ची मौखिक जैवउपलब्धता वाढवते.या शोधाला P-gp नाकाबंदीवर G-Rg3 च्या वाढलेल्या आतड्यांसंबंधी ट्रान्ससेल्युलर वाहतुकीद्वारे समर्थित आहे, ज्यामुळे त्याचे शोषण वाढते.Caco2 पेशींमध्ये केलेल्या तपासणीने असे दिसून आले की व्हेरापामिल उपचाराने पडदा पारगम्यता सुधारताना G-Rg3r आणि G-Rg3 चे प्रवाह कमी केले.यांग एट अल यांनी केलेला अभ्यास.अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की सायक्लोस्पोरिन ए (दुसरा पी-जीपी ब्लॉकर) सह उपचार केल्याने जिनसेनोसाइड Rh2 ची जैवउपलब्धता 1%20 च्या बेसलाइन मूल्यावरून 30% पेक्षा जास्त होते.Ginsenosides संयुगे के आणि Rg1 देखील समान परिणाम 30,31 दाखवले.जेव्हा व्हेरापामिल आणि सायक्लोस्पोरिन ए सह-प्रशासित केले गेले, तेव्हा Caco-2 पेशींमध्ये के कंपाऊंडचा प्रवाह लक्षणीयरीत्या 26.6 वरून 3 पेक्षा कमी झाला, तर त्याची अंतःकोशिकीय पातळी 40-पट 30 वाढली.वेरापामिलच्या उपस्थितीत, उंदराच्या फुफ्फुसाच्या उपकला पेशींमध्ये Rg1 पातळी वाढली, जी मेंग एट अल.३१ द्वारे दर्शविल्याप्रमाणे, जिन्सेनोसाइड इफ्लक्समध्ये पी-जीपीची भूमिका सुचवते.तथापि, काही जिन्सेनोसाइड्स (जसे की Rg1, F1, Rh1 आणि Re) च्या उत्सर्जनावर व्हेरापामिलचा समान परिणाम झाला नाही, हे दर्शविते की ते P-gp सब्सट्रेट्सने प्रभावित होत नाहीत, जसे लिआंग एट अल यांनी दाखवले आहे.३२ .हे निरीक्षण इतर वाहतूकदार आणि पर्यायी जिन्सेनोसाइड संरचनांच्या सहभागाशी संबंधित असू शकते.
कर्करोगावरील G-Rg3 च्या प्रतिबंधात्मक प्रभावाची यंत्रणा अस्पष्ट आहे.मागील अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की G-Rg3 ऑक्सिडेटिव्ह तणाव आणि जळजळ कमी करून DNA नुकसान आणि ऍपोप्टोसिस प्रतिबंधित करते, जे B(a)P-प्रेरित ट्यूमरिजेनेसिस रोखण्यासाठी अंतर्निहित यंत्रणा असू शकते.काही अहवाल असे सूचित करतात की B(a)P द्वारे प्रेरित जीनोटॉक्सिसिटी BPDE-DNA34 तयार करण्यासाठी फेज II एन्झाइम्सचे मॉड्युलेट करून कमी केली जाऊ शकते.GST हा एक सामान्य टप्पा II एन्झाइम आहे जो BPDE-DNA ॲडक्ट निर्मितीला GSH ला BPDE ला प्रोत्साहन देऊन प्रतिबंधित करतो, ज्यामुळे B(a) P35 द्वारे प्रेरित DNA नुकसान कमी होते.आमचे परिणाम दाखवतात की G-Rg3 उपचार HEL पेशींमध्ये B(a)P-प्रेरित सायटोटॉक्सिसिटी आणि BPDE-DNA ऍडक्ट फॉर्मेशन कमी करते आणि GST अभिव्यक्ती आणि विट्रोमध्ये क्रियाकलाप पुनर्संचयित करते.तथापि, हे परिणाम Nrf2 च्या अनुपस्थितीत अनुपस्थित होते, जे सूचित करते की G-Rg3 Nrf2 मार्गाद्वारे साइटोप्रोटेक्टिव्ह प्रभावांना प्रेरित करते.Nrf2 हा फेज II डिटॉक्सिफिकेशन एन्झाइमसाठी एक प्रमुख ट्रान्सक्रिप्शन घटक आहे जो xenobiotics 36 च्या क्लिअरन्सला प्रोत्साहन देतो.Nrf2 मार्ग सक्रिय केल्याने सायटोप्रोटेक्शन प्रेरित होते आणि ऊतींचे नुकसान कमी होते37.शिवाय, अनेक अहवालांनी Nrf2 च्या कार्सिनोजेनेसिसमध्ये ट्यूमर सप्रेसर म्हणून 38 च्या भूमिकेचे समर्थन केले आहे.आमचा अभ्यास असे दर्शवितो की G-Rg3 द्वारे Nrf2 मार्गाचा समावेश करणे B(a)P-प्रेरित जीनोटॉक्सिसिटीमध्ये महत्त्वपूर्ण नियामक भूमिका बजावते ज्यामुळे B(a)P चे डिटॉक्सिफिकेशन फेज II एंजाइम सक्रिय करून, ज्यामुळे ट्यूमरिजेनेसिस प्रक्रियेस प्रतिबंध होतो.
आमचे कार्य ginsenoside G-Rg3 च्या महत्त्वपूर्ण सहभागाद्वारे उंदरांमध्ये B(a)P-प्रेरित फुफ्फुसाचा कर्करोग रोखण्यासाठी लाल जिनसेंगची क्षमता प्रकट करते.या रेणूची खराब मौखिक जैवउपलब्धता त्याच्या क्लिनिकल अनुप्रयोगास अडथळा आणते.तथापि, हा अभ्यास प्रथमच दर्शवितो की G-Rg3 हा P-gp चा सब्सट्रेट आहे आणि P-gp इनहिबिटरच्या वापरामुळे व्हिट्रो आणि व्हिव्होमध्ये G-Rg3 ची जैवउपलब्धता वाढते.G-Rg3 Nrf2 मार्गाचे नियमन करून B(a)P-प्रेरित सायटोटॉक्सिसिटी कमी करते, जी त्याच्या प्रतिबंधात्मक कार्यासाठी संभाव्य यंत्रणा असू शकते.आमचा अभ्यास फुफ्फुसाच्या कर्करोगाच्या प्रतिबंध आणि उपचारांसाठी ginsenoside G-Rg3 च्या संभाव्यतेची पुष्टी करतो.
जॅक्सन लॅबोरेटरी (बार हार्बर, यूएसए) आणि वुहान इन्स्टिट्यूट ऑफ प्राणीशास्त्र यांच्याकडून सहा आठवड्यांचे मादी A/J उंदीर (20 ± 1 ग्रॅम) आणि 7 आठवड्यांचे नर विस्टार उंदीर (250 ± 20 ग्रॅम) मिळवले गेले.विद्यापीठ (वुहान, चीन).चायनीज टाईप कल्चर कलेक्शन सेंटर (वुहान, चीन) ने आम्हाला Caco-2 आणि hEL सेल प्रदान केले.सिग्मा-अल्ड्रिच (सेंट लुईस, यूएसए) हा बी(ए)पी आणि ट्रायकाप्रिनचा स्रोत आहे.शुद्ध जिनसेनोसाइड्स G-Rg3r आणि G-Rg3s, डायमिथाइल सल्फोक्साईड (DMSO), सेलटायटर-96 प्रसार परख किट (MTS), वेरापामिल, मिनिमल अत्यावश्यक माध्यम (MEM), आणि भ्रूण बोवाइन सीरम (FBS) चेंगडू मस्ट बायो-टीच्नॉलॉजीमधून खरेदी केले गेले. .सहकारी, मर्यादित.(चेंगदू, चीन).QIAamp DNA मिनी किट आणि BPDE-DNA ऍडक्ट ELISA किट Qiagen (Stanford, CA, USA) आणि Cell Biolabs (San Diego, CA, USA) कडून खरेदी केले गेले.GST क्रियाकलाप परख किट आणि एकूण प्रोटीन परख किट (मानक BCA पद्धत) सोलार्बियो (बीजिंग, चीन) कडून खरेदी करण्यात आली.सर्व लाल जिनसेंग अर्क मिंग्यू प्रयोगशाळेत साठवले जातात 7. हाँगकाँग बॅप्टिस्ट युनिव्हर्सिटी (हाँगकाँग, चीन) आणि कोरिया कॅन्सर सेंटर (सोल, कोरिया) हे सीआरजी अर्क आणि कोरियन उत्पत्तीचे विविध लाल जिनसेंग अर्क (केआरजीए, केआरजीबीसह) चे व्यावसायिक स्रोत आहेत. आणि KRGC).लाल जिनसेंग 6 वर्षांच्या ताज्या जिनसेंगच्या मुळांपासून बनवले जाते.जिनसेंग अर्क तीन वेळा पाण्याने धुऊन, नंतर जलीय अर्क एकाग्र करून आणि शेवटी जिनसेंग अर्क पावडर मिळविण्यासाठी कमी तापमानात कोरडे करून लाल जिनसेंग अर्क मिळवला जातो.अँटीबॉडीज (अँटी-Nrf2, अँटी-जीएसटी, आणि β-ॲक्टिन), तिखट मूळ असलेले एक रोपटे पेरोक्सिडेज-संयुग्मित अँटी-रॅबिट इम्युनोग्लोबुलिन G (IgG), ट्रान्सफेक्शन अभिकर्मक, नियंत्रण siRNA, आणि Nrf2 siRNA सांताक्रूझ बायोटेक्नॉलॉजी (सांता क्रूझ) कडून खरेदी केले गेले. .), संयुक्त राज्य).
Caco2 आणि hEL पेशींचे संवर्धन 100 mm2 सेल कल्चर डिशमध्ये MEM सह 10% FBS असलेल्या 37 °C वर 5% CO2 च्या आर्द्र वातावरणात केले गेले.उपचार परिस्थितीचा परिणाम निश्चित करण्यासाठी, एचईएल पेशी 48 तासांसाठी MEM मध्ये B(a)P आणि G-Rg3 च्या वेगवेगळ्या एकाग्रतेसह उष्मायन केल्या गेल्या.सेल-फ्री अर्क तयार करण्यासाठी पेशींचे पुढील विश्लेषण किंवा गोळा केले जाऊ शकते.
सर्व प्रयोगांना Tongji मेडिकल कॉलेज, Huazhong University of Science and Technology (मंजुरी क्रमांक 2019; नोंदणी क्रमांक 4587TH) च्या प्रायोगिक प्राणी नीतिशास्त्र समितीने मान्यता दिली.सर्व प्रयोग संबंधित मार्गदर्शक तत्त्वे आणि नियमांनुसार केले गेले आणि हा अभ्यास प्राणी संशोधन: रिपोर्टिंग ऑफ इन विवो प्रयोग (ARRIVE) मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार करण्यात आला.आठ आठवड्यांच्या A/J उंदरांना प्रथम इंट्रापेरिटोनली B(a)P सह ट्रायप्रिन द्रावणात (100 mg/kg, 0.2 ml) इंजेक्ट करण्यात आले.एका आठवड्यानंतर, उंदरांना यादृच्छिकपणे नियंत्रण गट आणि विविध उपचार गटांमध्ये विभागले गेले, प्रत्येक गटातील 15 उंदीर आणि दिवसातून एकदा गळण्यात आले.20 आठवड्यांच्या उपचारानंतर, सीओ2 श्वासोच्छवासामुळे प्राण्यांचा बळी दिला गेला.फुफ्फुस गोळा केले आणि 24 तासांसाठी निश्चित केले.विच्छेदन सूक्ष्मदर्शकाखाली प्रत्येक फुफ्फुसासाठी वरवरच्या ट्यूमरची संख्या आणि वैयक्तिक ट्यूमरचे आकार मोजले गेले.ट्यूमर व्हॉल्यूम अंदाज (V) खालील अभिव्यक्ती वापरून मोजले गेले: V (mm3) = 4/3πr3, जेथे r हा ट्यूमरचा व्यास आहे.उंदरांच्या फुफ्फुसातील सर्व ट्यूमर व्हॉल्यूमची निव्वळ बेरीज ट्यूमरची एकूण मात्रा दर्शवते आणि प्रत्येक गटातील सरासरी एकूण ट्यूमर व्हॉल्यूम ट्यूमर लोड दर्शवते.UPLC-MS/MS निर्धारासाठी संपूर्ण रक्त आणि आतड्यांचे नमुने −80°C वर गोळा आणि साठवले गेले.सीरम गोळा करण्यात आला आणि यकृत आणि मूत्रपिंडाच्या कार्याचे मूल्यांकन करण्यासाठी ॲलानाइन एमिनोट्रान्सफेरेस (ALT) आणि सीरम क्रिएटिनिन (Cr) पातळीचे विश्लेषण करण्यासाठी स्वयंचलित रसायनशास्त्र विश्लेषक वापरला गेला.
गोळा केलेले नमुने कोल्ड स्टोरेजमधून काढले गेले, वितळले गेले, वजन केले गेले आणि वर वर्णन केल्याप्रमाणे ट्यूबमध्ये ठेवले गेले.यामध्ये 0.8 मिली मिथेनॉल द्रावणात 0.5 μM फ्लोरिझिन (अंतर्गत मानक) जोडले गेले.टिश्यू-टीयररचा वापर करून टिश्यूचे एकसंधीकरण केले गेले आणि नंतर होमोजेनेट 1.5 मिली मायक्रोसेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये हस्तांतरित केले गेले.मिश्रण 15500 rpm वर 15 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केले गेले.1.0 मिली सुपरनॅटंट काढून टाकल्यानंतर, नायट्रोजनसह कोरडे करा.वसुलीसाठी दोनशे मायक्रोलिटर मिथेनॉल वापरण्यात आले.रक्त एकत्रित केले जाते आणि एका ओळीवर प्रक्रिया केली जाते आणि सर्व मोजमापांसाठी संदर्भ म्हणून वापरली जाते.
24-वेल ट्रान्सवेल प्लेट्समध्ये 1.0 × 105 Caco-2 पेशी प्रति विहिरीमध्ये वेरापामिलच्या जोडणीद्वारे G-Rg3 वाहतुकीच्या संभाव्य वाढीचे मूल्यमापन करण्यासाठी सीड केले गेले.3 आठवड्यांच्या संवर्धनानंतर, पेशी HBSS ने धुतल्या गेल्या आणि 37 डिग्री सेल्सिअस तपमानावर प्री-इन्क्यूबेट केले गेले.10 μM G-Rg3 चे 400 μL (G-Rg3r, G-Rg3s, किंवा 50 किंवा 100 μM वेरापामिल असलेले मिश्रण) मोनोलेयरच्या बेसोलेटरल किंवा एपिकल बाजूवर इंजेक्ट केले गेले आणि 600 μL HBSS द्रावण इतर जोडले गेले. बाजूनियुक्त केलेल्या वेळी (0, 15, 30, 45, 60, 90 आणि 120 मिनिटे) 100 μl संस्कृती माध्यम गोळा करा आणि हा खंड तयार करण्यासाठी 100 μl HBSS जोडा.UPLC-MS/MS द्वारे शोध लागेपर्यंत नमुने −4 °C वर साठवले गेले.Papp = dQ/(dT × A × C0) ही अभिव्यक्ती स्पष्ट एकदिशात्मक शिखर आणि बेसोलॅटरल पारगम्यता आणि त्याउलट (अनुक्रमे Pa-b आणि Pb-a) मोजण्यासाठी वापरली जाते;dQ/dT हा एकाग्रतेतील बदल आहे, A (0.6 cm2) हे मोनोलेयरचे पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ आहे आणि C0 हे प्रारंभिक दाता एकाग्रता आहे.प्रवाह प्रमाण Pb-a/Pa-b म्हणून मोजले जाते, जे अभ्यास औषधाच्या प्रवाह दराचे प्रतिनिधित्व करते.
नर विस्टार उंदरांना 24 तास उपवास करण्यात आला, फक्त पाणी प्यायले आणि 3.5% पेंटोबार्बिटल द्रावणाच्या इंट्राव्हेनस इंजेक्शनने भूल दिली.इंट्यूबेटेड सिलिकॉन ट्यूबमध्ये ड्युओडेनमचा शेवट प्रवेशद्वार असतो आणि इलियमचा शेवट बाहेर पडतो.0.1 ml/min च्या प्रवाह दराने isotonic HBSS मध्ये 10 µM G-Rg3r किंवा G-Rg3s सह इनलेट पंप करण्यासाठी पेरिस्टाल्टिक पंप वापरा.10 μM G-Rg3r किंवा G-Rg3s मध्ये 50 μM किंवा 100 μM कंपाऊंड जोडून वेरापामिलच्या प्रभावाचे मूल्यांकन केले गेले.UPLC-MS/MS परफ्यूजन सुरू झाल्यानंतर 60, 90, 120 आणि 150 मिनिटांच्या वेळी गोळा केलेल्या परफ्यूजन अर्कांवर केले गेले.शोषणाची टक्केवारी सूत्रानुसार परिमाणित केली जाते % शोषण = (1 – Cout/Cin) × 100%;आउटलेट आणि इनलेटवर G-Rg3 ची एकाग्रता अनुक्रमे Cout आणि Cin द्वारे व्यक्त केली जाते.
hEL पेशी 96-वेल प्लेट्समध्ये 1 × 104 पेशी प्रति विहिरीच्या घनतेवर सीड केल्या गेल्या आणि B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) किंवा DMSO मध्ये विरघळलेल्या G-Rg3 ने उपचार केले. .औषधे नंतर 48 तासांमध्ये विविध एकाग्रता (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) संस्कृती माध्यमाने पातळ केली गेली.व्यावसायिकरित्या उपलब्ध MTS परख किट वापरून, पेशींना मानक प्रोटोकॉलच्या अधीन केले गेले आणि नंतर 490 nm वर मायक्रोप्लेट रीडर वापरून मोजले गेले.B(a)P (10 μM) आणि G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) सह उपचार केलेल्या गटांच्या सेल व्यवहार्यता पातळीचे वरील पद्धतीनुसार मूल्यांकन केले गेले आणि उपचार न केलेल्या गटाशी तुलना केली गेली.
hEL पेशी 1 × 105 पेशी/विहिरीच्या घनतेवर 6-वेल प्लेटमध्ये सीड केल्या गेल्या आणि 10 μM G-Rg3 च्या उपस्थितीत किंवा अनुपस्थितीत 10 μMB(a)P ने उपचार केले.४८ तासांच्या उपचारानंतर, निर्मात्याच्या प्रोटोकॉलनुसार QIAamp DNA Mini Kit वापरून HEL पेशींमधून DNA काढण्यात आला.BPDE-DNA ॲडक्ट्सची निर्मिती BPDE-DNA ॲडक्ट ELISA किट वापरून शोधण्यात आली.बीपीडीई-डीएनए ॲडक्टची सापेक्ष पातळी 450 एनएम वर शोषक मोजून मायक्रोप्लेट रीडर वापरून मोजली गेली.
hEL पेशी 96-वेल प्लेट्समध्ये 1 × 104 पेशी प्रति विहिरीच्या घनतेमध्ये सीड केल्या गेल्या आणि 48 तासांसाठी 10 μM G-Rg3 च्या अनुपस्थितीत किंवा उपस्थितीत 10 μMB(a)P सह उपचार केले गेले.उत्पादकाच्या प्रोटोकॉलनुसार व्यावसायिक GST क्रियाकलाप परख किट वापरून GST क्रियाकलाप मोजले गेले.सापेक्ष GST सक्रियकरण मायक्रोप्लेट रीडर वापरून 450 nm वर शोषून मोजले गेले.
hEL पेशी बर्फ-थंड पीबीएसने धुतल्या गेल्या आणि नंतर प्रोटीज इनहिबिटर आणि फॉस्फेट इनहिबिटर असलेले रेडिओइम्युनोप्रीसिपिटेशन परख बफर वापरून लाइज केले गेले.एकूण प्रोटीन परख किट वापरून प्रथिने प्रमाणीकरण केल्यानंतर, प्रत्येक नमुन्यातील 30 μg प्रथिने 12% SDS-PAGE द्वारे वेगळे केले गेले आणि इलेक्ट्रोफोरेसीसद्वारे PVDF झिल्लीमध्ये हस्तांतरित केले गेले.5% स्किम मिल्कसह पडदा अवरोधित केले गेले आणि रात्रभर 4°C तापमानावर प्राथमिक प्रतिपिंडांसह उष्मायन केले गेले.तिखट मूळ असलेले एक रोपटे पेरोक्सिडेज-संयुग्मित दुय्यम प्रतिपिंडांसह उष्मायनानंतर, बंधनकारक सिग्नलची कल्पना करण्यासाठी वर्धित केमिल्युमिनेसेन्स अभिकर्मक जोडले गेले.इमेजजे सॉफ्टवेअर वापरून प्रत्येक प्रोटीन बँडची तीव्रता मोजली गेली.
ग्राफपॅड प्रिझम 7.0 सॉफ्टवेअर सर्व डेटाचे विश्लेषण करण्यासाठी वापरले गेले, सरासरी ± मानक विचलन म्हणून व्यक्त केले गेले.विद्यार्थ्याच्या टी चाचणी किंवा भिन्नतेचे एकमार्गी विश्लेषण वापरून उपचार गटांमधील फरकाचे मूल्यमापन केले गेले, P मूल्य <0.05 हे सांख्यिकीय महत्त्व दर्शवते.
या अभ्यासादरम्यान मिळालेला किंवा विश्लेषित केलेला सर्व डेटा या प्रकाशित लेखात आणि पूरक माहिती फाइल्समध्ये समाविष्ट केला आहे.
टोरे, एलए, सिगेल, आरएल आणि जेमल, ए. फुफ्फुसाच्या कर्करोगाची आकडेवारी.क्रियाविशेषणकालबाह्य.औषध.जीवशास्त्र८९३, १–१९ (२०१६).
Hecht, S. तंबाखूचे कार्सिनोजेन्स, त्यांचे बायोमार्कर आणि तंबाखू-प्रेरित कर्करोग.नॅट.कर्करोग पादरी.३, ७३३–७४४ (२००३).
फिलिप्स, DH आणि Venitt, S. DNA आणि तंबाखूच्या धुराच्या संपर्कात आल्याने मानवी ऊतींमध्ये प्रथिने जोडतात.आंतरराष्ट्रीयत्वजे. कर्करोग.१३१, २७३३–२७५३ (२०१२).
यांग वाय., वांग वाय., तांग के., ल्युबेट आरए आणि यू एम. ए/जे उंदरांमध्ये बेंझो(ए)पायरीन-प्रेरित फुफ्फुसाच्या ट्यूमरिजेनेसिसवर हौट्युनिया कॉर्डाटा आणि सिलिबिनिनचा प्रभाव.कर्करोग 7, 1053-1057 (2005).
तांग, डब्ल्यू. आणि इतर.चिनी औषधी पदार्थांपासून वेगळे केलेले कर्करोगविरोधी नैसर्गिक उत्पादन.जबडा.औषध.6, 27 (2011).
यांग, वाय. वगैरे.पॉलीफेनॉन ई, रेड जिनसेंग आणि रेपामायसिनची बेंझो(ए)पायरीन-प्रेरित फुफ्फुसातील ट्यूमरिजनेसिस A/J उंदरांवर परिणामकारकता.कर्करोग 8, 52-58 (2006).
वांग, सीझेड, अँडरसन, एस., डु, डब्ल्यू., हे, टीएस आणि युआन, केएस रेड, कॅन्सर थेरपीमध्ये सहभाग.जबडा.जे. नट.औषध.14, 7-16 (2016).
ली, टीएस, माझा, जी., कॉट्रेल, एएस आणि गाओ, एल. अमेरिकन जिनसेंगच्या मुळे आणि पानांमधील जिनसेनोसाइड्स.जे. ॲग्रिक.अन्न रसायनशास्त्र.४४, ७१७–७२० (१९९६).
Attele AS, Wu JA आणि Yuan KS फार्माकोलॉजी ऑफ जिनसेंग: अनेक घटक आणि अनेक प्रभाव.बायोकेमिस्ट्रीऔषधनिर्माणशास्त्र.५८, १६८५–१६९३ (१९९९).
पोस्ट वेळ: सप्टेंबर-17-2023