Grazzi talli żort Nature.com.Il-verżjoni tal-browser li qed tuża għandha appoġġ limitat għal CSS.Għall-aħjar riżultati, nirrakkomandaw li tuża verżjoni aktar ġdida tal-browser tiegħek (jew li titfi l-mod ta' kompatibilità fl-Internet Explorer).Sadanittant, biex niżguraw appoġġ kontinwu, qed nuru s-sit mingħajr stil jew JavaScript.
Il-ġinseng aħmar ilu jintuża fil-mediċina tradizzjonali Ażjatika għal mijiet ta 'snin.F'dan l-istudju, aħna evalwaw il-kapaċità ta 'erba' tipi ta 'ġinseng aħmar (ġinseng aħmar Ċiniż, ġinseng aħmar Korean A, ġinseng aħmar Korean B, u ġinseng aħmar Korean C) imkabbra f'reġjuni differenti biex jinibixxu l-formazzjoni u t-tkabbir tal-pulmun indott minn karċinoġenu tumuri.Twettaq test tal-benzo(a)pyrene (B(a)P) fuq ġrieden A/J, u l-ġinseng aħmar Korean B instab li kien l-aktar effettiv fit-tnaqqis tal-piż tat-tumur fost l-erba 'varjetajiet ta' ġinseng aħmar.Barra minn hekk, analizzajna l-kontenut ta’ diversi ġinsenosidi (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 u Rg5) f’erba’ estratti ta’ ġinseng aħmar u sibna li l-ġinseng aħmar Korean B kellu l-aktar livelli għoljin ta 'ginsenoside Rg3 (G-Rg3), li jissuġġerixxi li G-Rg3 jista' jkollu rwol importanti fl-effikaċja terapewtika tiegħu.Dan ix-xogħol juri li G-Rg3 għandu bijodisponibilità relattivament baxxa.Madankollu, meta G-Rg3 ġie koamministrat mal-inibitur P-gp verapamil, l-effluss ta 'G-Rg3 fiċ-ċelloli Caco-2 naqas, ir-rata ta' assorbiment intestinali ta 'G-Rg3 żdiedet f'mudell ta' far, u G-Rg3 żdiedet.Fiċ-ċelloli Caco-2, il-ħruġ ta 'Rg3 jonqos, u l-livell ta' konċentrazzjoni Rg3 jonqos.G-Rg3 jiżdied fl-imsaren u fil-plażma, u l-kapaċità tiegħu li jipprevjeni t-tumuri hija msaħħa wkoll f'mudell tal-firien ta 'tumoġenesi indotta minn B(a)P.Sibna wkoll li G-Rg3 naqqas iċ-ċitotossiċità indotta minn B(a)P u l-formazzjoni tal-adduct tad-DNA fiċ-ċelloli tal-pulmun tal-bniedem, u rrestawra l-espressjoni u l-attività tal-enzimi tal-fażi II permezz tal-mogħdija Nrf2, li tista 'tkun relatata mal-mekkaniżmu potenzjali ta' azzjoni ta 'G inibizzjoni -Rg3..Dwar l-okkorrenza ta 'tumuri tal-pulmun.L-istudju tagħna juri rwol potenzjalment importanti għal G-Rg3 fil-mira ta 'tumuri tal-pulmun f'mudelli tal-ġrieden.Il-bijodisponibilità orali ta 'dan il-ginsenoside hija msaħħa billi timmira P-glycoprotein, li tippermetti lill-molekula teżerċita effetti kontra l-kanċer.
L-aktar tip komuni ta' kanċer tal-pulmun huwa kanċer tal-pulmun ta' ċelluli mhux żgħar (NSCLC), li hija waħda mill-kawżi ewlenin ta' mwiet mill-kanċer fiċ-Ċina u l-Amerika ta' Fuq1,2.Il-fattur ewlieni li jżid ir-riskju li tiżviluppa kanċer tal-pulmun mhux taċ-ċelluli żgħar huwa t-tipjip.Id-duħħan tas-sigaretti fih aktar minn 60 karċinoġenu, inkluż benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrosamines, u iżotopi radjuattivi mit-tħassir tar-radon.3 Idrokarburi aromatiċi poliċikliċi B(a)P huma l-kawża ewlenija tat-tossiċità fis-sigaretti duħħan.Mal-espożizzjoni għal B(a)P, iċ-ċitokromu P450 jikkonvertih f'B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), li jirreaġixxi mad-DNA biex jifforma BPDE-DNA adduct 4. Barra minn hekk, dawn adducts jinduċu tumoġenesi tal-pulmun fil-ġrieden bi stadju tat-tumur u istopatoloġija simili għal tumuri tal-pulmun tal-bniedem5.Din il-karatteristika tagħmel il-mudell tal-kanċer tal-pulmun indott minn B(a)P sistema adattata għall-evalwazzjoni ta 'komposti bi proprjetajiet possibbli kontra l-kanċer.
Strateġija waħda possibbli biex tipprevjeni l-iżvilupp ta 'kanċer tal-pulmun fi gruppi ta' riskju għoli, speċjalment dawk li jpejpu, hija l-użu ta 'aġenti kimopreventtivi biex jrażżnu l-iżvilupp ta' leżjonijiet neoplastiċi intraepiteliali u b'hekk jipprevjenu l-progressjoni sussegwenti tagħhom għal tumuri malinni.Studji fuq l-annimali juru li diversi aġenti kimopreventtivi huma effettivi6.Ir-rapport preċedenti tagħna7 enfasizza l-effetti preventivi tajbin tal-ġinseng aħmar fuq il-kanċer tal-pulmun.Din il-ħaxix ilha tintuża għal sekli sħaħ fil-mediċina tradizzjonali Ażjatika biex ittawwal il-ħajja u s-saħħa, u ġiet iddokumentata li għandha effetti kontra t-tumur8.
Il-fattur attiv tal-ġinseng huwa ginsenoside, li jintuża bħala markatur kompost biex jevalwa l-kwalità tal-estratti tal-ġinseng.Analiżi kwantitattiva ta 'estratti ta' ġinseng mhux raffinat tipikament tinvolvi l-użu ta 'diversi ġinsenosidi, inklużi RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, u Rc9,10.Il-ġinsenosidi għandhom ftit użu kliniku minħabba l-bijodisponibilità orali fqira ħafna tagħhom11.Għalkemm il-mekkaniżmu għal din il-bijodisponibilità fqira mhuwiex ċar, l-effluss ta 'ginsenosides ikkawżat minn P-glycoprotein (P-gp)12 jista' jkun il-kawża.P-gp huwa wieħed mit-trasportaturi tal-effluss l-aktar importanti fis-superfamilja tat-trasportatur tal-cassette li torbot l-ATP, li tuża l-enerġija tal-idroliżi tal-ATP biex tirrilaxxa sustanzi intraċellulari fl-ambjent estern.It-trasportaturi P-gp huma tipikament distribwiti b'mod wiesa' fil-barriera tal-imsaren, tal-kliewi, tal-fwied u tad-demm-moħħ13.P-gp għandu rwol kritiku fl-assorbiment intestinali, u l-inibizzjoni ta 'P-gp iżid l-assorbiment orali u d-disponibbiltà ta' xi mediċini kontra l-kanċer12,14.Eżempji ta' inibituri użati qabel fil-letteratura huma verapamil u cyclosporine A15.Dan ix-xogħol jinvolvi l-istabbiliment ta 'sistema tal-ġurdien għall-istudju tal-kanċer tal-pulmun indott minn B(a)P biex tevalwa l-abbiltà ta' estratti differenti ta 'ġinseng aħmar miċ-Ċina u l-Korea li jaffettwaw tumuri malinni.L-estratti ġew analizzati individwalment biex jidentifikaw ginsenosides speċifiċi li jistgħu jaffettwaw il-karċinoġenesi.Verapamil imbagħad intuża biex jimmira P-gp u jtejjeb il-bijodisponibilità orali u l-effikaċja terapewtika tal-ginsenosides li jimmiraw il-kanċer.
Il-mekkaniżmu li bih il-ġinseng saponins jeżerċitaw effetti terapewtiċi fuq il-karċinoġenesi għadu mhux ċar.Ir-riċerka wriet li diversi ginsenosides jistgħu jnaqqsu l-ħsara tad-DNA kkawżata minn karċinoġeni billi jnaqqsu l-istress ossidattiv u jattivaw l-enzimi ta 'diżintosifikazzjoni tal-fażi II, u b'hekk jipprevjenu l-ħsara taċ-ċelluli.Glutathione S-transferase (GST) hija enzima tipika tal-fażi II li hija meħtieġa biex tnaqqas il-ħsara fid-DNA kkawżata minn karċinoġeni17.Fattur 2 relatat ma' erythroid nukleari 2 (Nrf2) huwa fattur ta 'traskrizzjoni importanti li jirregola l-omeostażi redox u jattiva l-espressjoni ta' enzimi tal-fażi II u risponsi antiossidanti ċitoprotettivi18.L-istudju tagħna eżamina wkoll l-effetti ta 'ginsenosides identifikati fuq it-tnaqqis taċ-ċitotossiċità indotta minn B(a)P u l-formazzjoni tal-adduct BPDE-DNA, kif ukoll li jinduċu l-enzimi tal-fażi II billi jimmodulaw il-mogħdija Nrf2 fiċ-ċelloli normali tal-pulmun.
L-istabbiliment ta 'mudell tal-ġrieden ta' kanċer indott minn B(a)P huwa konsistenti ma 'xogħol preċedenti5.Il-Figura 1A turi d-disinn sperimentali ta’ trattament ta’ 20 ġimgħa ta’ mudell ta’ kanċer tal-ġrieden indott minn B(a)P, ilma (kontroll), estratt tal-ġinseng aħmar Ċiniż (CRG), estratt tal-ġinseng aħmar Korean A (KRGA), u aħmar Korean ġinseng.Estratt B (KRGB) u Estratt Korean Red Ginseng C (KRGC).Wara 20 ġimgħa ta 'trattament ta' ġinseng aħmar, ġrieden ġew sagrifikati permezz ta 'asfissija tas-CO2.Figura 1B turi tumuri makroskopiċi tal-pulmun f'annimali ttrattati b'tipi differenti ta 'ġinseng aħmar, u Figura 1C turi mikrografu tad-dawl rappreżentattiv ta' kampjun ta 'tumur.Il-piż tat-tumur ta 'annimali kkurati b'KRGB (1.5 ± 0.35) kien inqas minn dak ta' annimali ta 'kontroll (0.82 ± 0.2, P <0.05), kif muri fil-Figura 1D.Il-grad medju ta 'inibizzjoni tat-tagħbija tat-tumur kien ta' 45%.Estratti oħra tal-ġinseng aħmar ittestjati ma wrewx bidliet sinifikanti bħal dawn fil-piż tat-tumur (P> 0.05).L-ebda effetti sekondarji ovvji ma ġew osservati fil-mudell tal-ġurdien matul 20 ġimgħa ta 'trattament ta' ġinseng aħmar, inkluż l-ebda bidla fil-piż tal-ġisem (dejta mhux murija) u l-ebda tossiċità tal-fwied jew tal-kliewi (Figura 1E, F).
L-estratt tal-ġinseng aħmar jittratta l-iżvilupp tat-tumur tal-pulmun fil-ġrieden A/J.(A) Disinn sperimentali.(B) Tumuri kbar tal-pulmun f'mudell tal-ġurdien.It-tumuri huma indikati bi vleġeġ.a: Grupp tal-ġinseng aħmar Ċiniż.b: grupp A tal-ġinseng aħmar Korean.c: Grupp tal-ġinseng aħmar Korean B. d: Grupp tal-ġinseng aħmar Korean C. d: Grupp ta 'kontroll.(C) Mikrografu ħafif li juri tumur tal-pulmun.Tkabbir: 100. b: 400. (D) Tagħbija tat-tumur fil-grupp tal-estratt tal-ġinseng aħmar.(E) Livelli fil-plażma tal-enzima tal-fwied ALT.(F) Livelli fil-plażma tal-enzima renali Cr.Id-dejta hija espressa bħala medja ± devjazzjoni standard.*P <0.05.
L-estratti tal-ġinseng aħmar identifikati f'dan l-istudju ġew analizzati bi spettrometrija tal-massa tandem ta' kromatografija likwida ultra-prestazzjoni (UPLC-MS/MS) biex tikkwantifika l-ġinsenosidi li ġejjin: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3 , Rh2, F1, Rk1 u Rg5.Il-kundizzjonijiet UPLC u MS użati biex jitkejlu l-analiti ġew deskritti f'rapport preċedenti19.Il-kromatogrammi UPLC-MS/MS ta 'erba' estratti tal-ġinseng aħmar huma murija fil-Figura 2A.Kien hemm differenzi sinifikanti fil-kontenut totali ta 'ginsenoside, bl-ogħla kontenut totali ta' ginsenoside f'CRG (590.27 ± 41.28 μmol / L) (Figura 2B).Meta evalwaw ginsenosides individwali (Figura 2C), KRGB wera l-ogħla livell ta 'G-Rg3 meta mqabbel ma' ginsenosides oħra (58.33 ± 3.81 μmol / L għal G-Rg3s u 41.56 ± 2.88 μmol / L għal G -Rg3r).L).tip ta 'ġinseng aħmar (P <0.001).G-Rg3 iseħħ bħala par ta 'sterjoisomeri G-Rg3r u G-Rg3s, li huma differenti fil-pożizzjoni tal-grupp hydroxyl fil-karbonju 20 (Fig. 2D).Ir-riżultati jindikaw li G-Rg3r jew G-Rg3 jista 'jkollhom potenzjal importanti kontra l-kanċer f'mudell ta' ġrieden tal-kanċer indott minn B(a)P.
Kontenut ta 'ġinsenosidi f'diversi estratti ta' ġinseng aħmar.(A) Kromatogrammi UPLC-MS/MS ta 'erba' estratti tal-ġinseng aħmar.(B) Stima tal-kontenut totali ta' ginsenoside fl-estratti indikati.(C) Sejbien ta 'ginsenosides individwali f'estratti ttikkettjati.(D) Strutturi ta 'sterjoisomeri tal-ginsenoside G-Rg3r u G-Rg3s.Id-dejta hija espressa bħala l-medja ± devjazzjoni standard ta' determinazzjonijiet triplikati.***P <0.001.
L-istudju UPLC-MS/MS kien jeħtieġ il-kwantifikazzjoni tal-ginsenosides f'kampjuni intestinali u tad-demm wara 20 ġimgħa ta 'trattament.It-trattament b'KRGB wera l-preżenza ta '0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 biss fid-demm.Ma nstabu l-ebda ġinsenosidi li kien fadal, li jindika bijodisponibilità orali fqira u għalhekk espożizzjoni mnaqqsa għal dawn il-ġinsenosidi.
Il-linja taċ-ċelluli tal-adenokarċinoma tal-kolon Caco-2 hija morfoloġikament u bijokimikament simili għaċ-ċelloli epiteljali intestinali umani, u turi l-utilità tagħha fil-valutazzjoni tat-trasport tal-enteroċiti tul il-barriera epiteljali intestinali.Din l-analiżi kienet ibbażata fuq studju preċedenti 20 .Figuri 3A,B,C,D,E,F juru immaġini rappreżentattivi tat-trasport transċellulari ta 'G-Rg3r u G-Rg3 bl-użu ta' mudell ta 'monosaff Caco-2.It-trasport transċellulari ta 'G-Rg3r jew G-Rg3 tul is-saffi ta' Caco-2 min-naħa basolaterali għal apikali (Pb-a) kien ogħla b'mod sinifikanti minn min-naħa apikali għal basolaterali (Pa-b).Għal G-Rg3r, il-valur medju Pa-b kien 0.38 ± 0.06, li żdied għal 0.73 ± 0.06 wara trattament b'50 μmol/L verapamil u għal 1.14 ± 0.09 wara trattament b'100 μmol/L verapamil (p < 0.001, 0.001 u 0.09). rispettivament; Figura 2).3A).Osservazzjonijiet għal G-Rg3 segwew mudell simili (Fig. 3B), u r-riżultati wrew li t-trattament b'verapamil tejjeb it-trasport ta 'G-Rg3r u G-Rg3.It-trattament b'verapamil irriżulta wkoll fi tnaqqis sinifikanti fil-proporzjonijiet medji ta 'effluss Pb-a u G-Rg3r u G-Rg3s (Figura 3C,D,E,F), li jindika li t-trattament b'verapamil inaqqas il-kontenut ta' ginsenoside fiċ-ċelloli tal-effluss Caco-2..
Trasport transċellulari ta 'G-Rg3 f'monosaffi Caco-2 u assorbiment intestinali f'assaġġ ta' perfużjoni tal-firien.(A) Valur Pa-b tal-grupp G-Rg3r f'monosaff ta 'Caco-2.(B) Valur Pa-b ta 'gruppi G-Rg3s f'monosaff ta' Caco-2.(C) Valur Pb tal-grupp G-Rg3r f'monosaff ta 'Caco-2.(D) Valur Pb ta 'gruppi G-Rg3s f'monosaff ta' Caco-2.(E) Proporzjon ta 'rendiment ta' gruppi G-Rg3r f'monosaff ta 'Caco-2.(F) Proporzjon ta 'rendiment ta' gruppi G-Rg3 f'monosaff ta 'Caco-2.(G) Perċentwal ta 'assorbiment intestinali ta' G-Rg3r f'assaġġ ta 'perfużjoni fil-firien.(H) Perċentwal ta 'assorbiment intestinali ta' G-Rg3 f'assaġġ ta 'perfużjoni fil-firien.Il-permeabilità u l-assorbiment tqabblu mingħajr iż-żieda ta 'verapamil.Id-dejta hija espressa bħala l-medja ± devjazzjoni standard ta' ħames esperimenti indipendenti.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Konsistenti ma 'xogħol preċedenti20, saret perfużjoni intestinali ortotopika tal-firien biex jiġi ddeterminat jekk l-assorbiment ta' G-Rg3 fl-imsaren jiżdiedx wara t-trattament b'verapamil.Figuri 3G, H juru analiżi ta 'perfużjoni rappreżentattiva biex jevalwaw il-perċentwali ta' assorbiment intestinali ta 'G-Rg3r u G-Rg3 fil-firien mudell tal-kanċer matul il-perjodi ta' żmien ta 'hawn fuq.Il-perċentwal inizjali ta 'assorbiment dgħajjef ta' G-Rg3r ta 'madwar 10% żdied għal aktar minn 20% wara trattament b'50 μM verapamil u għal aktar minn 25% wara kura b'100 μM verapamil.Bl-istess mod, G-Rg3, li kellu teħid inizjali ta '10%, wera wkoll quċċata ta' aktar minn 20% wara trattament b'50 μM verapamil u kważi 30% wara trattament b'100 μM verapamil, li jissuġġerixxi li l-inibizzjoni ta 'P-gp minn verapamil ittejjeb. intestinali G-assorbiment Rg3 f'mudell tal-ġurdien ta 'kanċer tal-pulmun.
Skont il-metodu ta 'hawn fuq, il-ġrieden tal-mudell tal-kanċer indotti minn B(a)P ġew maqsuma b'mod każwali f'sitt gruppi, kif muri fil-Figura 4A.L-ebda telf ta’ piż sinifikanti jew sinjali kliniċi ta’ tossiċità ma ġew osservati fil-grupp ta’ trattament G-Rg3 meta mqabbel mal-grupp ta’ kontroll (dejta mhux murija).Wara 20 ġimgħa ta' kura, inġabru l-pulmuni ta' kull ġurdien.Il-Figura 4B turi tumuri makroskopiċi tal-pulmun fil-ġrieden fil-gruppi ta 'trattament ta' hawn fuq, u l-Figura 4C turi mikrografu tad-dawl rappreżentattiv ta 'tumur rappreżentattiv.Rigward il-piż tat-tumur f'kull grupp (Fig. 4D), il-valuri għall-ġrieden ittrattati b'G-Rg3r u G-Rg3s kienu 0.75 ± 0.29 mm3 u 0.81 ± 0.30 mm3, rispettivament, filwaqt li l-valuri għal Ġrieden G trattati b'-Rg3s kienu 1.63 rispettivament ±0.40 mm3.ġrieden ta 'kontroll (p <0.001), li jindika li t-trattament G-Rg3 naqqas il-piż tat-tumur fil-ġrieden.L-amministrazzjoni ta' verapamil kompliet tejbet dan it-tnaqqis: il-valuri fil-ġrieden verapamil + G-Rg3r naqsu minn 0.75 ± 0.29 mm3 għal 0.33 ± 0.25 mm3 (p < 0.01), u l-valuri għal verapamil + minn 0.81 ± 0.30 mm3 naqsu għal 0.30 ± 0.291 ± 0.25 mm3. mm3 fil-ġrieden ittrattati b'G. -Rg3s (p <0.05), li jindika li verapamil jista 'jtejjeb l-effett inibitorju ta' G-Rg3 fuq tumorigenesis.Il-piż tat-tumur ma wera l-ebda differenzi sinifikanti bejn il-grupp ta 'kontroll u l-grupp ta' verapamil, il-grupp G-Rg3r u l-grupp G-Rg3s, u l-grupp ta 'verapamil + G-Rg3r u l-grupp ta' verapamil + G-Rg3s.Barra minn hekk, ma kien hemm l-ebda tossiċità sinifikanti tal-fwied jew tal-kliewi assoċjati mat-trattamenti evalwati (Figura 4E, F).
Piż tat-tumur wara trattament G-Rg3 u livelli fil-plażma jew G-Rg3r u G-Rg3 intestinali fil-gruppi indikati.(A) Disinn sperimentali.(B) Tumuri makroskopiċi f'mudell tal-ġurdien.It-tumuri huma indikati bi vleġeġ.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r flimkien ma 'verapamil.d: G-Rg3 flimkien ma' verapamil.d: Verapamil.e: kontroll.(C) Mikrografu ottiku tat-tumur waqt it-tkabbir.Tweġiba: 100x.b: 400X.(D) Effett tat-trattament ta 'G-Rg3 + verapamil fuq il-piż tat-tumur fil-ġrieden A/J.(E) Livelli fil-plażma tal-enzima tal-fwied ALT.(F) Livelli fil-plażma tal-enzima renali Cr.(G) Livelli tal-plażma ta 'G-Rg3r jew G-Rg3 tal-gruppi indikati.(H) Livelli ta 'G-Rg3r jew G-Rg3s fl-imsaren tal-gruppi indikati.Id-dejta hija espressa bħala l-medja ± devjazzjoni standard ta' determinazzjonijiet triplikati.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Il-livelli ta 'G-Rg3 fil-ġrieden tal-mudell tal-kanċer indotti minn B(a)P ġew evalwati minn UPLC-MS/MS wara perjodu ta' trattament ta '20 ġimgħa skond il-metodu deskritt fit-taqsima Metodi.Figuri 4G u H juru livelli ta 'plażma u intestinali G-Rg3, rispettivament.Il-livelli ta' G-Rg3r fil-plażma kienu 0.44 ± 0.32 μmol/L u żdiedu għal 1.17 ± 0.47 μmol/L b'amministrazzjoni konkomitanti ta' verapamil (p <0.001), filwaqt li l-livelli intestinali ta' G-Rg3r kienu 0.53 ± 0.08 μg/l.Meta kkombinat ma 'verapamil, g żdied għal 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001).Għal G-Rg3, ir-riżultati segwew mudell simili, li jindika li t-trattament b'verapamil żied il-bijodisponibilità orali ta 'G-Rg3 fil-ġrieden A/J.
Intuża l-assaġġ tal-vijabbiltà taċ-ċelluli biex jevalwa ċ-ċitotossiċità ta 'B(a)P u G-Rg3 fuq ċelluli hEL.Iċ-ċitotossiċità indotta minn B(a)P fiċ-ċelloli hEL hija murija fil-Figura 5A, filwaqt li l-proprjetajiet mhux tossiċi ta 'G-Rg3r u G-Rg3 huma murija fil-Figuri 5A u 5B.5B, C. Biex jiġi evalwat l-effett ċitoprotettiv ta 'G-Rg3, B(a)P ġie ko-amministrat b'diversi konċentrazzjonijiet ta' G-Rg3r jew G-Rg3 f'ċelloli hEL.Kif muri fil-Figura 5D, G-Rg3r f'konċentrazzjonijiet ta '5 μM, 10 μM, u 20 μM irrestawra l-vijabbiltà taċ-ċelluli għal 58.3%, 79.3%, u 77.3%, rispettivament.Riżultati simili jistgħu jidhru wkoll fil-grupp G-Rg3s.Meta l-konċentrazzjonijiet ta 'G-Rg3s kienu 5 µM, 10 µM u 20 µM, il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet restawrata għal 58.3%, 72.7% u 76.7%, rispettivament (Figura 5E).).Il-preżenza ta 'adducts BPDE-DNA ġiet imkejla bl-użu ta' kit ELISA.Ir-riżultati tagħna wrew li l-livelli tal-adduct BPDE-DNA żdiedu fil-grupp ittrattat b'B(a)P meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll, iżda meta mqabbel mal-ko-trattament G-Rg3, il-livelli tal-adduct BPDE-DNA fil-grupp B(a)P B fil-grupp ittrattat, il-livelli tal-adduct tad-DNA tnaqqsu b'mod sinifikanti.Ir-riżultati tat-trattament b'B(a)P waħdu huma murija fil-Figura 5F (1.87 ± 0.33 vs 3.77 ± 0.42 għal G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 vs 3.77 ± 0.42 għal G -Rg3s, p < 0.001).
Il-vijabbiltà taċ-ċelluli u l-formazzjoni tal-adduct BPDE-DNA f'ċelloli hEL ittrattati b'G-Rg3 u B(a)P.(A) Vijabilità ta 'ċelluli hEL ittrattati b'B(a)P.(B) Vijabilità ta 'ċelluli hEL ittrattati b'G-Rg3r.(C) Vijabilità ta 'ċelluli hEL ittrattati b'G-Rg3.(D) Vijabilità ta 'ċelluli hEL ittrattati b'B (a) P u G-Rg3r.(E) Vijabilità ta 'ċelluli hEL ittrattati b'B(a)P u G-Rg3.(F) Livelli ta 'adduct BPDE-DNA f'ċelloli hEL ittrattati b'B(a)P u G-Rg3.Id-dejta hija espressa bħala l-medja ± devjazzjoni standard ta' determinazzjonijiet triplikati.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
L-espressjoni tal-enżima GST ġiet skoperta wara ko-trattament b'10 μM B(a)P u 10 μM G-Rg3r jew G-Rg3s.Ir-riżultati tagħna wrew li B(a)P soppressa l-espressjoni GST (59.7 ± 8.2% fil-grupp G-Rg3r u 39 ± 4.5% fil-grupp G-Rg3s), u B(a)P kien assoċjat ma 'jew ma' G-Rg3r , jew b'G-Rg3r, jew b'G-Rg3r.Ko-trattament ma 'G-Rg3s restawrata espressjoni GST.Espressjoni GST (103.7 ± 15.5% fil-grupp G-Rg3r u 110 ± 11.1% fil-grupp G-Rg3s, p < 0.05 u p < 0.001, rispettivament, Fig. 6A, B, u C).L-attività tal-GST ġiet evalwata bl-użu ta' kit ta' analiżi tal-attività.Ir-riżultati tagħna wrew li l-grupp ta 'trattament kombinat kellu attività GST ogħla meta mqabbel mal-grupp B(a)P biss (96.3 ± 6.6% vs 35.7 ± 7.8% fil-grupp G-Rg3r vs 92.3 ± 6.5 fil-grupp G-Rg3r ).% vs 35.7 ± 7.8% fil-grupp G-Rg3s, p <0.001, Figura 6D).
Espressjoni ta 'GST u Nrf2 f'ċelloli hEL ittrattati b'B(a)P u G-Rg3.(A) Sejbien ta 'espressjoni GST permezz ta' Western blotting.(B) Espressjoni kwantitattiva ta 'GST f'ċelloli hEL ittrattati b'B(a)P u G-Rg3r.(C) Espressjoni kwantitattiva ta 'GST f'ċelloli hEL ittrattati b'B(a)P u G-Rg3s.(D) Attività GST fiċ-ċelloli hEL ittrattati b'B(a)P u G-Rg3.(E) Sejbien ta 'espressjoni Nrf2 permezz ta' Western blotting.(F) Espressjoni kwantitattiva ta 'Nrf2 f'ċelloli hEL ittrattati b'B (a) P u G-Rg3r.(G) Espressjoni kwantitattiva ta 'Nrf2 f'ċelloli hEL ittrattati b'B(a)P u G-Rg3s.Id-dejta hija espressa bħala l-medja ± devjazzjoni standard ta' determinazzjonijiet triplikati.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Biex jiġu eluċidati l-mogħdijiet involuti fis-soppressjoni medjata minn G-Rg3 ta 'tumoreġenesi indotta minn B(a)P, l-espressjoni ta' Nrf2 ġiet evalwata permezz ta 'Western blotting.Kif muri fil-Figuri 6E,F,G, meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-livell ta' Nrf2 biss fil-grupp ta 'trattament B(a)P naqas;madankollu, meta mqabbla mal-grupp ta 'trattament B(a)P, il-livelli ta' B(a) Nrf2 fil-grupp PG-Rg3 żdiedu (106 ± 9.5% għal G-Rg3r vs 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6.2% għal G-Rg3r vs 41 ± 9.8% għal G-Rg3s, p <0.01).
Aħna kkonfermajna r-rwol preventiv ta 'Nrf2 billi soppressjoni l-espressjoni ta' Nrf2 bl-użu ta 'RNA ta' interferenza żgħir speċifiku (siRNA).Knockdown Nrf2 ġie kkonfermat minn Western blotting (Fig. 7A, B).Kif muri fil-Figuri 7C, D, il-ko-trattament taċ-ċelluli hEL b'B(a)P u G-Rg3 irriżulta fi tnaqqis fin-numru ta 'adducts BPDE-DNA (1.47 ± 0.21) meta mqabbel mat-trattament b'B(a)P waħdu fil-grupp siRNA ta 'kontroll.) G-Rg3r kien 4.13 ± 0.49, G-Rg3s kien 1.8 ± 0.32 u 4.1 ± 0.57, p <0.01).Madankollu, l-effett inibitorju ta 'G-Rg3 fuq il-formazzjoni ta' BPDE-DNA ġie abolit minn knockdown Nrf2.Fil-grupp siNrf2, ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti fil-formazzjoni tal-adduct BPDE-DNA bejn il-ko-trattament B(a)P u G-Rg3 u t-trattament b'B(a)P waħdu (3.0 ± 0.21 għal G-Rg3r vs 3.56 ± 0.32 ).għal G-Rg3r kontra 3.6 għal G-Rg3s kontra ± 0.45 kontra 4.0±0.37, p> 0.05).
Effett ta 'knockdown ta' Nrf2 fuq il-formazzjoni ta 'adduct BPDE-DNA fiċ-ċelloli hEL.(A) Knockdown Nrf2 ġie kkonfermat minn Western blotting.(B) Kwantifikazzjoni tal-intensità tal-faxxa Nrf2.(C) Effett ta 'knockdown ta' Nrf2 fuq livelli ta 'adduct BPDE-DNA f'ċelloli hEL ittrattati b'B (a) P u G-Rg3r.(D) Effett ta 'knockdown ta' Nrf2 fuq il-livelli ta 'adduct BPDE-DNA f'ċelloli hEL ittrattati b'B(a)P u G-Rg3.Id-dejta hija espressa bħala l-medja ± devjazzjoni standard ta' determinazzjonijiet triplikati.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Dan l-istudju evalwa l-effetti preventivi ta 'diversi estratti tal-ġinseng aħmar fuq mudell tal-ġurdien ta' kanċer tal-pulmun indott minn B(a)P, u t-trattament KRGB naqqas b'mod sinifikanti l-piż tat-tumur.Meta wieħed iqis li G-Rg3 għandu l-ogħla kontenut f'dan l-estratt tal-ġinseng, ġie studjat ir-rwol importanti ta 'dan il-ġinsenoside fl-inibizzjoni tat-tumoreġenesi.Kemm G-Rg3r kif ukoll G-Rg3 (żewġ epimeri ta 'G-Rg3) naqqsu b'mod sinifikanti l-piż tat-tumur f'mudell tal-ġurdien ta' kanċer indott minn B(a)P.G-Rg3r u G-Rg3 jeżerċitaw effetti kontra l-kanċer billi jinduċu apoptosi taċ-ċelluli tat-tumur21, jinibixxu t-tkabbir tat-tumur22, jwaqqfu ċ-ċiklu taċ-ċelluli23 u jaffettwaw l-anġjoġenesi24.G-Rg3 intwera wkoll li jinibixxi l-metastasi ċellulari25, u l-abbiltà ta 'G-Rg3 li jsaħħaħ l-effetti tal-kimoterapija u r-radjuterapija ġiet dokumentata26,27.Poon et al wrew li t-trattament G-Rg3 jista 'jnaqqas l-effetti ġenotossiċi ta' B(a)P28.Dan l-istudju juri l-potenzjal terapewtiku ta 'G-Rg3 fil-mira ta' molekuli karċinoġeniċi ambjentali u fil-prevenzjoni tal-kanċer.
Minkejja l-potenzjal profilattiku tajjeb tagħhom, il-bijodisponibilità orali fqira tal-ġinsenosidi toħloq sfida għall-użu kliniku ta 'dawn il-molekuli.Analiżi farmakokinetika ta 'amministrazzjoni orali ta' ginsenosides fil-firien uriet li l-bijodisponibilità tagħha għadha inqas minn 5%29.Dawn it-testijiet urew li wara l-perjodu ta 'trattament ta' 20 ġimgħa, il-livelli tad-demm ta 'Rg5 biss naqsu.Għalkemm il-mekkaniżmu sottostanti ta 'bijodisponibilità fqira għad irid jiġi eluċidat, P-gp huwa maħsub li huwa involut fl-effluss ta' ginsenosides.Dan ix-xogħol wera għall-ewwel darba li l-għoti ta 'verapamil, imblokkatur P-gp, iżid il-bijodisponibilità orali ta' G-Rg3r u G-Rg3s.Għalhekk, din is-sejba tissuġġerixxi li G-Rg3r u G-Rg3s jaġixxu bħala sottostrati ta 'P-gp biex jirregolaw l-effluss tiegħu.
Dan ix-xogħol juri li t-trattament kombinat ma 'verapamil iżid il-bijodisponibilità orali ta' G-Rg3 f'mudell tal-ġrieden ta 'kanċer tal-pulmun.Din is-sejba hija sostnuta minn żieda fit-trasport transċellulari intestinali ta 'G-Rg3 fuq imblokk ta' P-gp, u b'hekk jiżdied l-assorbiment tiegħu.Analiżi fiċ-ċelloli Caco2 wrew li t-trattament b'verapamil naqqas l-effluss ta 'G-Rg3r u G-Rg3s filwaqt li tejjeb il-permeabilità tal-membrana.Studju minn Yang et al.Studji wrew li t-trattament b'cyclosporine A (imblokkatur P-gp ieħor) iżid il-bijodisponibilità ta' ginsenoside Rh2 minn valur bażi ta' 1%20 għal aktar minn 30%.Il-komposti tal-ġinsenosidi K u Rg1 wrew ukoll riżultati simili30,31.Meta verapamil u cyclosporin A ġew ko-amministrati, l-effluss tal-kompost K fiċ-ċelloli Caco-2 tnaqqas b'mod sinifikanti minn 26.6 għal inqas minn 3, filwaqt li l-livelli intraċellulari tiegħu żdiedu b'40 darba30.Fil-preżenza ta 'verapamil, il-livelli Rg1 żdiedu fiċ-ċelloli epiteljali tal-pulmun tal-firien, li jissuġġerixxu rwol għal P-gp fl-effluss ta' ginsenoside, kif muri minn Meng et al.31.Madankollu, verapamil ma kellux l-istess effett fuq l-effluss ta 'xi ginsenosides (bħal Rg1, F1, Rh1 u Re), li jindika li mhumiex affettwati minn sottostrati P-gp, kif muri minn Liang et al.32 .Din l-osservazzjoni tista 'tkun relatata mal-involviment ta' trasportaturi oħra u strutturi alternattivi ta 'ginsenoside.
Il-mekkaniżmu tal-effett preventiv ta 'G-Rg3 fuq il-kanċer mhuwiex ċar.Studji preċedenti wrew li G-Rg3 jipprevjeni l-ħsara tad-DNA u l-apoptożi billi jnaqqas l-istress ossidattiv u l-infjammazzjoni16,33, li jista 'jkun il-mekkaniżmu sottostanti għall-prevenzjoni tat-tumoġenesi indotta minn B(a)P.Xi rapporti jindikaw li l-ġenotossiċità indotta minn B(a)P tista' titnaqqas billi timmodula l-enzimi tal-fażi II biex jiffurmaw BPDE-DNA34.GST hija enzima tipika tal-fażi II li tinibixxi l-formazzjoni tal-adduct BPDE-DNA billi tippromwovi l-irbit ta 'GSH ma' BPDE, u b'hekk tnaqqas il-ħsara fid-DNA indotta minn B(a)P35.Ir-riżultati tagħna juru li t-trattament G-Rg3 inaqqas iċ-ċitotossiċità indotta minn B(a)P u l-formazzjoni tal-adduct BPDE-DNA fiċ-ċelloli hEL u jerġa 'jġib l-espressjoni u l-attività GST in vitro.Madankollu, dawn l-effetti kienu assenti fin-nuqqas ta 'Nrf2, li jissuġġerixxu li G-Rg3 jinduċi effetti ċitoprotettivi permezz tal-mogħdija Nrf2.Nrf2 huwa fattur ta 'traskrizzjoni ewlieni għall-enzimi ta' ditossifikazzjoni tal-fażi II li jippromwovi t-tneħħija tal-ksenobijotiċi36.L-attivazzjoni tal-mogħdija Nrf2 tinduċi ċitoprotezzjoni u tnaqqas il-ħsara fit-tessuti37.Barra minn hekk, bosta rapporti appoġġaw ir-rwol ta 'Nrf2 bħala suppressor tat-tumur fil-karċinoġenesi38.L-istudju tagħna juri li l-induzzjoni tal-mogħdija Nrf2 minn G-Rg3 għandha rwol regolatorju importanti fil-ġenotossiċità indotta minn B(a)P billi tikkawża ditossifikazzjoni ta 'B(a)P billi tattiva l-enzimi tal-fażi II, u b'hekk jinibixxi l-proċess ta' tumorigenesis.
Ix-xogħol tagħna jiżvela l-potenzjal tal-ġinseng aħmar fil-prevenzjoni tal-kanċer tal-pulmun indott minn B(a)P fil-ġrieden permezz tal-involviment importanti tal-ginsenoside G-Rg3.Il-bijodisponibilità orali fqira ta 'din il-molekula tfixkel l-applikazzjoni klinika tagħha.Madankollu, dan l-istudju juri għall-ewwel darba li G-Rg3 huwa sottostrat ta 'P-gp, u l-amministrazzjoni ta' inibitur P-gp iżid il-bijodisponibilità ta 'G-Rg3 in vitro u in vivo.G-Rg3 inaqqas iċ-ċitotossiċità indotta minn B(a)P billi jirregola l-passaġġ Nrf2, li jista 'jkun mekkaniżmu potenzjali għall-funzjoni preventiva tiegħu.L-istudju tagħna jikkonferma l-potenzjal tal-ginsenoside G-Rg3 għall-prevenzjoni u t-trattament tal-kanċer tal-pulmun.
Ġrieden A/J femminili ta 'sitt ġimgħat (20 ± 1 g) u firien Wistar maskili ta' 7 ġimgħat (250 ± 20 g) inkisbu minn The Jackson Laboratory (Bar Harbor, USA) u l-Istitut taż-Żooloġija ta 'Wuhan.Università (Wuhan, iċ-Ċina).Iċ-Ċentru tal-Ġbir tal-Kultura tat-Tip Ċiniż (Wuhan, iċ-Ċina) ipprovdilna ċelloli Caco-2 u hEL.Sigma-Aldrich (St. Louis, l-Istati Uniti) hija sors ta' B(a)P u tricaprine.Ġinsenosidi purifikati G-Rg3r u G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), kit ta 'assaġġ ta' proliferazzjoni CellTiter-96 (MTS), verapamil, medju essenzjali minimu (MEM), u serum tal-fetu bovin (FBS) inxtraw minn Chengdu Must Bio-Technology .Co., Ltd.(Chengdu, iċ-Ċina).Il-QIAamp DNA mini kit u BPDE-DNA adduct ELISA kit inxtraw minn Qiagen (Stanford, CA, USA) u Cell Biolabs (San Diego, CA, USA).Il-kit tal-assaġġ tal-attività GST u l-kit tal-assaġġ tal-proteina totali (metodu standard BCA) inxtraw minn Solarbio (Beijing, iċ-Ċina).L-estratti kollha tal-ġinseng aħmar jinħażnu fil-Laboratorju Mingyu 7. L-Università Battista ta’ Ħong Kong (Ħong Kong, iċ-Ċina) u ċ-Ċentru tal-Kanċer tal-Korea (Seoul, Korea) huma sorsi kummerċjali ta’ estratt CRG u diversi estratti ta’ ġinseng aħmar ta’ oriġini Koreana varji (inkluż KRGA, KRGB u KRGC).Il-ġinseng aħmar huwa magħmul mill-għeruq ta 'ġinseng frisk ta' 6 snin.L-estratt tal-ġinseng aħmar jinkiseb billi taħsel il-ġinseng bl-ilma tliet darbiet, imbagħad tikkonċentra l-estratt milwiema, u finalment tnixxif f'temperatura baxxa biex tikseb trab tal-estratt tal-ġinseng.Antikorpi (anti-Nrf2, anti-GST, u β-actin), immunoglobulina G tal-fenek (IgG) kontra l-fniek konjugat ma' horseradish peroxidase, reaġent ta' trasfezzjoni, siRNA ta' kontroll, u siRNA Nrf2 inxtraw minn Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) .), L-ISTATI UNITI).
Iċ-ċelloli Caco2 u hEL ġew ikkultivati f'platti tal-kultura taċ-ċelluli ta '100 mm2 b'MEM li kien fih 10% FBS f'37 °C f'atmosfera umidifikata ta' 5% CO2.Biex jiġi ddeterminat l-effett tal-kundizzjonijiet tat-trattament, iċ-ċelloli hEL ġew inkubati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'B(a)P u G-Rg3 f'MEM għal 48 siegħa.Iċ-ċelloli jistgħu jiġu analizzati jew miġbura aktar biex jippreparaw estratti mingħajr ċelluli.
L-esperimenti kollha ġew approvati mill-Kumitat Sperimentali tal-Etika tal-Annimali tal-Kulleġġ Mediku Tongji, l-Università tax-Xjenza u t-Teknoloġija ta 'Huazhong (Nru ta' Approvazzjoni 2019; Nru ta 'Reġistrazzjoni 4587TH).L-esperimenti kollha twettqu skont il-linji gwida u r-regolamenti rilevanti, u l-istudju sar skont il-linji gwida tar-Riċerka tal-Annimali: Rappurtar ta 'Esperimenti In Vivo (JASLA).Ġrieden A/J ta’ tmien ġimgħat ġew l-ewwel injettati intraperitonealment b’B(a)P f’soluzzjoni ta’ tricaprine (100 mg/kg, 0.2 ml).Wara ġimgħa, il-ġrieden kienu maqsuma b'mod każwali fi gruppi ta 'kontroll u gruppi ta' trattament differenti, 15-il ġrieden f'kull grupp, u gavaged darba kuljum.Wara 20 ġimgħa ta 'trattament, l-annimali ġew sagrifikati bl-asfissija tas-CO2.Il-pulmun inġabru u ġew iffissati għal 24 siegħa.In-numru ta 'tumuri superfiċjali u daqsijiet individwali tat-tumur ġew ikkwantifikati għal kull pulmun taħt mikroskopju dissecting.L-istimi tal-volum tat-tumur (V) ġew ikkalkulati bl-użu tal-espressjoni li ġejja: V (mm3) = 4/3πr3, fejn r huwa d-dijametru tat-tumur.Is-somma netta tal-volumi kollha tat-tumur fil-pulmuni tal-ġrieden irrappreżenta l-volum totali tat-tumur, u l-volum totali tat-tumur medju f'kull grupp irrappreżenta t-tagħbija tat-tumur.Inġabru kampjuni tad-demm sħiħ u intestinali u nħażnu f'-80 ° C għad-determinazzjoni UPLC-MS/MS.Inġabar is-serum u ntuża analizzatur tal-kimika awtomatizzat biex janalizza l-livelli tal-alanine aminotransferase (ALT) u tal-krejatinina tas-serum (Cr) biex jevalwa l-funzjoni tal-fwied u tal-kliewi.
Il-kampjuni miġbura tneħħew mill-ħażna kiesħa, iddewweb, miżun, u mqiegħda f'tubi kif deskritt hawn fuq.Ma 'dan ġie miżjud 0.5 μM phlorizin (standard intern) f'soluzzjoni ta' metanol 0.8 ml.It-tessut imbagħad ġie omoġenizzat bl-użu ta' Tissue-Tearor u l-omoġenat ġie sussegwentement trasferit għal tubu mikroċentrifugu ta' 1.5 ml.It-taħlita ġiet ċentrifugata f'15500 rpm għal 15-il minuta.Wara li tneħħi 1.0 ml ta' supernatant, nixxef bin-nitroġenu.Mitejn mikrolitru ta 'metanol intuża għall-irkupru.Id-demm jinġabar u jiġi pproċessat fuq linja waħda u jintuża bħala referenza għall-kejl kollu.
Pjanċi Transwell ta '24-bir ġew miżrugħa b'ċelluli Caco-2 1.0 × 105 għal kull bir biex jevalwaw it-titjib potenzjali tat-trasport G-Rg3 biż-żieda ta' verapamil.Wara 3 ġimgħat ta 'kultura, iċ-ċelloli ġew maħsula b'HBSS u preinkubati f'37 ° C.400 μL ta' 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, jew taħlita b'50 jew 100 μM verapamil) ġew injettati fuq in-naħa basolaterali jew apikali tal-monosaff, u 600 μL ta' soluzzjoni HBSS ġew miżjuda mal-oħra ġenb.Iġbor 100 µl ta’ medja tal-kultura fil-ħinijiet magħżula (0, 15, 30, 45, 60, 90 u 120 minuta) u żid 100 µl ta’ HBSS biex tpatti għal dan il-volum.Il-kampjuni ġew maħżuna f'-4 °C sakemm ġew skoperti minn UPLC-MS/MS.L-espressjoni Papp = dQ/(dT × A × C0) tintuża biex tikkwantifika l-permeabilità apikali u basolaterali unidirezzjonali apparenti u viċi versa (Pa-b u Pb-a, rispettivament);dQ/dT hija l-bidla fil-konċentrazzjoni, A (0.6 cm2) hija l-erja tal-wiċċ tal-monosaff, u C0 hija l-konċentrazzjoni inizjali tad-donatur.Il-proporzjon tal-effluss huwa kkalkulat bħala Pb-a/Pa-b, li jirrappreżenta r-rata tal-effluss tal-mediċina tal-istudju.
Firien Wistar maskili kienu sajmu għal 24 siegħa, xorbu ilma biss, u anestetizzati b'injezzjoni ġol-vini ta 'soluzzjoni ta' 3.5% pentobarbital.It-tubu tas-silikonju intubat għandu t-tarf tad-duwodenu bħala l-entratura u t-tarf tal-ileum bħala l-ħruġ.Uża pompa peristaltika biex tippompja d-daħla b'10 µM G-Rg3r jew G-Rg3s f'HBSS iżotoniku b'rata ta' fluss ta' 0.1 ml/min.L-effett ta 'verapamil ġie vvalutat billi żżid 50 μM jew 100 μM tal-kompost ma' 10 μM G-Rg3r jew G-Rg3s.UPLC-MS/MS twettqet fuq estratti tal-perfużjoni miġbura fil-punti tal-ħin 60, 90, 120, u 150 minuta wara l-bidu tal-perfużjoni.Il-perċentwal ta' assorbiment huwa kkwantifikat bil-formula % assorbiment = (1 – Cout/Cin) × 100%;il-konċentrazzjoni ta 'G-Rg3 fl-iżbokk u d-daħla hija espressa minn Cout u Cin, rispettivament.
Iċ-ċelloli hEL ġew miżrugħa fi pjanċi ta’ 96 bir f’densità ta’ 1 × 104 ċelluli għal kull bir u ttrattati b’B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) jew G-Rg3 maħlul f’DMSO .Il-mediċini mbagħad ġew dilwiti b'mezz ta 'kultura għal konċentrazzjonijiet varji (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) fuq 48 siegħa.Bl-użu ta 'kit ta' analiżi MTS disponibbli kummerċjalment, iċ-ċelloli ġew soġġetti għal protokoll standard u mbagħad imkejla bl-użu ta 'qarrej tal-mikroplate f'490 nm.Il-livell ta 'vijabbiltà taċ-ċelluli tal-gruppi kotrattati b'B(a)P (10 μM) u G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) ġie vvalutat skont il-metodu ta' hawn fuq u mqabbel mal-grupp mhux trattat.
Iċ-ċelloli hEL ġew miżrugħa fi pjanċi ta '6-well f'densità ta' 1 × 105 ċelluli/bir u ttrattati b'10 μMB(a)P fil-preżenza jew in-nuqqas ta '10 μM G-Rg3.Wara 48 siegħa ta 'trattament, id-DNA ġie estratt miċ-ċelloli hEL bl-użu tal-QIAamp DNA Mini Kit skont il-protokoll tal-manifattur.Il-formazzjoni ta 'adducts BPDE-DNA ġiet skoperta bl-użu ta' kit ELISA ta 'adduct BPDE-DNA.Livelli relattivi ta 'adduct BPDE-DNA ġew imkejla bl-użu ta' qarrej tal-mikroplate billi tkejjel l-assorbiment f'450 nm.
Iċ-ċelloli hEL ġew miżrugħa fi pjanċi ta '96-well f'densità ta' 1 × 104 ċelluli għal kull bir u ttrattati b'10 μMB(a)P fin-nuqqas jew il-preżenza ta '10 μM G-Rg3 għal 48 siegħa.L-attività GST ġiet imkejla bl-użu ta 'kit ta' analiżi ta 'attività kummerċjali GST skont il-protokoll tal-manifattur.L-attivazzjoni relattiva tal-GST ġiet imkejla bl-assorbiment f'450 nm bl-użu ta 'qarrej tal-mikroplate.
Iċ-ċelloli hEL ġew maħsula b'PBS kiesaħ bis-silġ u mbagħad lysed bl-użu ta 'buffer ta' l-assaġġ ta 'radjuimmunoprecipitation li kien fih inibituri tal-protease u inibituri tal-fosfatażi.Wara l-kwantifikazzjoni tal-proteina bl-użu ta 'kit ta' analiżi tal-proteina totali, 30 μg ta 'proteina f'kull kampjun ġew separati bi 12% SDS-PAGE u trasferiti għal membrana PVDF permezz ta' elettroforeżi.Il-membrani ġew imblukkati b'5% ħalib xkumat u inkubati b'antikorpi primarji matul il-lejl f'4 ° C.Wara l-inkubazzjoni b'antikorpi sekondarji konjugati bil-perossidażi taż-żiemel, ġew miżjuda reaġenti ta' kimiluminixxenza msaħħa biex jivviżwalizzaw is-sinjal li jorbot.L-intensità ta 'kull faxxa ta' proteina ġiet kwantifikata bl-użu ta 'softwer ImageJ.
Is-softwer GraphPad Prism 7.0 intuża biex janalizza d-dejta kollha, espressa bħala medja ± devjazzjoni standard.Il-varjazzjoni bejn il-gruppi ta 'trattament ġiet evalwata bl-użu tat-test t ta' Student jew analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda, b'valur P <0.05 li jindika sinifikat statistiku.
Id-dejta kollha miksuba jew analizzata matul dan l-istudju hija inkluża f'dan l-artikolu ppubblikat u fajls ta 'informazzjoni supplimentari.
Torre, LA, Siegel, RL u Jemal, A. Statistika tal-kanċer tal-pulmun.avverbju.Skaduta.mediċina.bijoloġija.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Karċinoġeni tat-tabakk, il-bijomarkaturi tagħhom u l-kanċer indott mit-tabakk.Nat.Kappillan tal-kanċer.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH u Venitt, S. Adducts tad-DNA u tal-proteini fit-tessuti umani li jirriżultaw minn espożizzjoni għad-duħħan tat-tabakk.internazzjonalità.J. Kanċer.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA u Yu M. Effett ta 'Houttuynia cordata u silibinin fuq tumorigenesis tal-pulmun indotta minn benzo(a)pyrene fil-ġrieden A/J.Kanċer 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et al.Prodott naturali kontra l-kanċer iżolat minn materjali mediċinali Ċiniżi.xedaq.mediċina.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Effikaċja tal-polifenon E, ġinseng aħmar, u rapamycin fuq tumorigenesis tal-pulmun indotta minn benzo(a)pyrene fil-ġrieden A/J.Kanċer 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS u Yuan, KS Red, involviment fit-terapija tal-kanċer.xedaq.J. Nutt.mediċina.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS u Gao, L. Ginsenosides fl-għeruq u l-weraq tal-ġinseng Amerikan.J. Agri.Kimika tal-ikel.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA u Yuan KS Farmakoloġija tal-ġinseng: ħafna komponenti u ħafna effetti.bijokimika.farmakoloġija.58, 1685–1693 (1999).
Ħin tal-post: 17-Settembru 2023