Nature.com ကိုလာရောက်လည်ပတ်တဲ့အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါတယ်။သင်အသုံးပြုနေသောဘရောက်ဆာဗားရှင်းတွင် CSS ပံ့ပိုးမှုအကန့်အသတ်ရှိသည်။အကောင်းဆုံးရလဒ်များအတွက်၊ သင့်ဘရောက်ဆာ၏ ဗားရှင်းအသစ် (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီသောမုဒ်ကို ပိတ်ပါ) ကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။တစ်ချိန်တည်းတွင်၊ ဆက်လက်ပံ့ပိုးကူညီမှုသေချာစေရန်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် စတိုင်ပုံစံ သို့မဟုတ် JavaScript မပါဘဲ ဆိုက်ကို ပြသနေပါသည်။
ဂျင်ဆင်းနီကို အာရှတိုင်းရင်းဆေးတွင် နှစ်ရာနှင့်ချီ၍ အသုံးပြုခဲ့သည်။ဤလေ့လာမှုတွင် ဂျင်ဆင်းနီ အမျိုးအစား လေးမျိုး (တရုတ် ဂျင်ဆင်းနီ၊ ကိုးရီးယား ဂျင်ဆင်း A၊ ကိုးရီးယား ဂျင်ဆင်း B၊ နှင့် ကိုးရီးယား ဂျင်ဆင်း C) တို့၏ စွမ်းရည်ကို အကဲဖြတ်ပြီး ဒေသအသီးသီးတွင် ကင်ဆာဖြစ်စေသော အဆုတ်၏ ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားရန်၊ အကျိတ်။benzo(a)pyrene (B(a)P) ကို A/J ကြွက်များတွင် ပြုလုပ်ခဲ့ပြီး ကိုရီးယားဂျင်ဆင်းနီ B သည် ဂျင်ဆင်းနီမျိုးကွဲလေးမျိုးတွင် အကျိတ်ဝန်ထုပ်ဝန်ပိုးကို လျှော့ချရာတွင် အထိရောက်ဆုံးဖြစ်ကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။ထို့အပြင် ဂျင်ဆင်းနီ ထုတ်ယူမှုလေးခုတွင် (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 နှင့် Rg5) ၏ အမျိုးမျိုးသော ginsenosides (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 နှင့် Rg5) ကို ဂျင်ဆင်းနီ ထုတ်ယူမှု လေးခုတွင် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာပြီး ကိုရီးယား ဂျင်ဆင်း B ပါရှိကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။ G-Rg3 သည် ၎င်း၏ ကုထုံးဆိုင်ရာ ထိရောက်မှုတွင် အရေးပါသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်နိုင်သည်ဟု ညွှန်ပြနေသည့် ginsenoside Rg3 (G-Rg3) ၏ အမြင့်ဆုံးအဆင့်ဖြစ်သည်။ဤအလုပ်သည် G-Rg3 တွင် ဇီဝရရှိနိုင်မှုအတော်လေးနည်းကြောင်းပြသသည်။သို့သော်လည်း G-Rg3 ကို P-gp inhibitor verapamil နှင့် ပေါင်းစပ်သောအခါ၊ G-Rg3 ၏ Caco-2 ဆဲလ်များထဲသို့ စီးဆင်းမှု လျော့နည်းသွားသည်၊ G-Rg3 ၏ အူစုပ်ယူမှုနှုန်းမှာ ကြွက်ပုံစံတွင် တိုးလာပြီး G-Rg3၊ တိုးလာခဲ့သည်။Caco-2 ဆဲလ်များတွင် Rg3 ၏အထွက်နှုန်း လျော့ကျသွားပြီး Rg3 ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုအဆင့် လျော့နည်းသွားသည်။G-Rg3 သည် အူနှင့် ပလာစမာတွင် တိုးလာပြီး B(a)P-induced tumorigenesis ၏ ကြွက်ပုံစံတွင် အကျိတ်များကို တားဆီးနိုင်စွမ်းကိုလည်း မြှင့်တင်ထားသည်။G-Rg3 သည် လူ့အဆုတ်ဆဲလ်များရှိ B(a)P-induced cytotoxicity နှင့် DNA adduct ဖွဲ့စည်းမှုကို လျှော့ချပြီး Nrf2 လမ်းကြောင်းမှတစ်ဆင့် အဆင့် II အင်ဇိုင်းများ၏ လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် လုပ်ဆောင်ချက်ကို ပြန်လည်ရရှိစေကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။ G inhibition -Rg3။.အဆုတ်အကျိတ်များပေါ်ပေါက်ခြင်းနှင့် ပတ်သက်.ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုသည် မောက်စ်မော်ဒယ်များတွင် အဆုတ်အကျိတ်များကို ပစ်မှတ်ထားရာတွင် G-Rg3 အတွက် အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍကို သရုပ်ပြသည်။ဤ ginsenoside ၏ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှုအား P-glycoprotein ကိုပစ်မှတ်ထားခြင်းဖြင့် မော်လီကျူးအား ကင်ဆာဆန့်ကျင်မှုအာနိသင်များထုတ်ပေးနိုင်စေခြင်းဖြင့် တိုးတက်စေသည်။
အဖြစ်များဆုံး အဆုတ်ကင်ဆာ အမျိုးအစားမှာ ဆဲလ်ငယ်မဟုတ်သော အဆုတ်ကင်ဆာ (NSCLC) ဖြစ်ပြီး တရုတ်နိုင်ငံနှင့် မြောက်အမေရိကတွင် ကင်ဆာသေဆုံးမှု၏ အဓိကအကြောင်းရင်းများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်သည်။ဆဲလ်ငယ်မဟုတ်သော အဆုတ်ကင်ဆာ ဖြစ်ပွားနိုင်ခြေကို တိုးစေသည့် အဓိက အကြောင်းအရင်းမှာ ဆေးလိပ်သောက်ခြင်း ဖြစ်သည်။စီးကရက်မီးခိုးတွင် benzo(a)pyrene (B(a)P)၊ nitrosamines နှင့် ရေဒီယိုသတ္တိကြွအိုင်ဆိုတုပ်များ အပါအဝင် ရေဒီယိုသတ္တိကြွ အိုင်ဆိုတုပ်များ ပါဝင်သည်။3 Polycyclic aromatic hydrocarbons B(a)P သည် စီးကရက်တွင် အဆိပ်သင့်စေသော အဓိက အကြောင်းရင်းဖြစ်သည်။ မီးခိုး။B(a)P နှင့် ထိတွေ့သောအခါ၊ cytochrome P450 သည် B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE) သို့ BPDE-DNA adduct အဖြစ် DNA နှင့် ဓာတ်ပြုပြီး 4. ထို့အပြင်၊ အကျိတ်အဆင့်နှင့် လူ့အဆုတ်အကျိတ်များကဲ့သို့ လူ့အဆုတ်ဆိုင်ရာ ရောဂါဗေဒဆိုင်ရာ အကျိတ်အဆင့်ရှိသော ကြွက်များတွင် အဆုတ်အကျိတ်ကို လှုံ့ဆော်ပေးသည်။ဤအင်္ဂါရပ်သည် B(a)P-induced အဆုတ်ကင်ဆာပုံစံကို ကင်ဆာဖြစ်နိုင်သော ဂုဏ်သတ္တိရှိသည့် ဒြပ်ပေါင်းများကို အကဲဖြတ်ရန်အတွက် သင့်လျော်သောစနစ်တစ်ခု ဖြစ်စေသည်။
ဖြစ်နိုင်ချေများသောအုပ်စုများ အထူးသဖြင့် ဆေးလိပ်သောက်သူများတွင် အဆုတ်ကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုကို တားဆီးရန် ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော နည်းဗျူဟာတစ်ခုမှာ ကင်ဆာကာကွယ်ပေးသည့်အေးဂျင့်များကို အသုံးပြုခြင်းဖြစ်ပြီး ၎င်းတို့နောက်ဆက်တွဲ ကင်ဆာရောဂါအထိ ကြီးထွားလာခြင်းကို တားဆီးရန် ဖြစ်နိုင်ခြေနည်းဗျူဟာတစ်ခုဖြစ်သည်။၆။ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်အစီရင်ခံစာ 7 သည် အဆုတ်ကင်ဆာအတွက် ဂျင်ဆင်းနီ၏ ကောင်းသောကြိုတင်ကာကွယ်မှုအကျိုးသက်ရောက်မှုကို မီးမောင်းထိုးပြထားသည်။ဤဆေးဖက်ဝင်အပင်ကို အာရှတိုင်းရင်းဆေးပညာတွင် ရာစုနှစ်များစွာကြာအောင် အသုံးပြုခဲ့ပြီး အသက်နှင့်ကျန်းမာရေးကို တာရှည်ခံစေရန်အတွက် antitumor အာနိသင်ရှိကြောင်း မှတ်တမ်းတင်ထားသည်။
ဂျင်ဆင်း၏တက်ကြွသောအချက်မှာ ဂျင်ဆင်းထုတ်ယူမှုများ၏အရည်အသွေးကိုအကဲဖြတ်ရန်အတွက်ပေါင်းစပ်အမှတ်အသားအဖြစ်အသုံးပြုသော ginsenoside ဖြစ်သည်။ဂျင်ဆင်းကြမ်းထုတ်ယူမှုများ၏ အရေအတွက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် ပုံမှန်အားဖြင့် RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, နှင့် Rc9,10 အပါအဝင် များစွာသော ginsenosides များကို အသုံးပြုခြင်းပါဝင်သည်။Ginsenosides သည် ၎င်းတို့၏ ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှု အလွန်ညံ့ဖျင်းသောကြောင့် လက်တွေ့အသုံးပြုမှု အနည်းငယ်သာရှိသည်။ဤညံ့ဖျင်းသောဇီဝရရှိနိုင်မှုဆိုင်ရာယန္တရားသည်ရှင်းလင်းခြင်းမရှိသော်လည်း၊ P-glycoprotein (P-gp)12 ကြောင့်ဖြစ်ရသည့် ginsenosides များထွက်လာခြင်းသည်အကြောင်းရင်းဖြစ်နိုင်သည်။P-gp သည် ATP-binding cassette transporter superfamily တွင် အရေးကြီးဆုံး efflux transporter များထဲမှ တစ်ခုဖြစ်ပြီး၊ ATP hydrolysis ၏ စွမ်းအင်ကို အသုံးပြု၍ ပြင်ပပတ်ဝန်းကျင်သို့ ဆဲလ်လူလာဒြပ်စင်များ ထုတ်လွှတ်ရန်။P-gp သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးကိရိယာများသည် အများအားဖြင့် အူလမ်းကြောင်း၊ ကျောက်ကပ်၊ အသည်းနှင့် သွေး-ဦးနှောက်အတားအဆီးများတွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် ဖြန့်ဝေကြသည်။P-gp သည် အူလမ်းကြောင်းမှ စုပ်ယူမှုတွင် အရေးပါသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ပြီး P-gp ကို ဟန့်တားခြင်းသည် ခံတွင်းမှ စုပ်ယူမှုနှင့် အချို့သော ကင်ဆာဆေးများ ရရှိနိုင်မှုကို တိုးစေသည်။စာပေတွင်ယခင်အသုံးပြုခဲ့သော inhibitors များသည် verapamil နှင့် cyclosporine A15 တို့ဖြစ်သည်။ဤလုပ်ငန်းတွင် B(a) P-induced အဆုတ်ကင်ဆာကို လေ့လာရန်အတွက် မောက်စ်စနစ်တစ်ခု တည်ထောင်ခြင်း ပါဝင်သည်။ထုတ်ယူမှုများကို ကင်ဆာရောဂါဖြစ်ပွားမှုကို ထိခိုက်စေနိုင်သော သီးခြား ginsenosides များကို ခွဲခြားသတ်မှတ်ရန် ကောက်နုတ်ချက်များကို တစ်ဦးချင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။Verapamil ကို P-gp ကို ပစ်မှတ်ထားပြီး ကင်ဆာကိုပစ်မှတ်ထားသော ginsenosides များ၏ ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှုနှင့် ကုထုံးဆိုင်ရာ ထိရောက်မှုကို တိုးတက်စေရန်အတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။
ဂျင်ဆင်း saponins သည် ကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုအပေါ် ကုသရေးဆိုင်ရာ အကျိုးသက်ရောက်မှုကို ထုတ်ပေးသည့် ယန္တရားကို မရှင်းလင်းသေးပါ။အမျိုးမျိုးသော ginsenosides များသည် oxidative stress ကိုလျှော့ချပြီး အဆင့် II detoxification အင်ဇိုင်းများကို အသက်ဝင်စေခြင်းဖြင့် ကင်ဆာရောဂါဖြစ်ပွားစေသော DNA ပျက်စီးမှုကို လျှော့ချပေးနိုင်ကြောင်း သုတေသနပြုချက်များအရ သိရသည်။Glutathione S-transferase (GST) သည် carcinogens 17 ကြောင့်ဖြစ်သော DNA ပျက်စီးမှုကိုလျှော့ချရန်အတွက်ပုံမှန်အဆင့် II အင်ဇိုင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။Nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) သည် redox homeostasis ကို ထိန်းညှိပေးပြီး phase II အင်ဇိုင်းများနှင့် cytoprotective antioxidant တုံ့ပြန်မှုများကို အသက်ဝင်စေသည့် အရေးကြီးသော စာသားမှတ်တမ်းအချက်တစ်ချက်ဖြစ်သည်။ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုသည် B(a)P-induced cytotoxicity နှင့် BPDE-DNA adduct ဖွဲ့စည်းခြင်းကို လျှော့ချခြင်းအတွက် ဖော်ထုတ်ထားသော ginsenosides ၏ သက်ရောက်မှုများကို ဆန်းစစ်ခဲ့ပြီး ပုံမှန်အဆုတ်ဆဲလ်များတွင် Nrf2 လမ်းကြောင်းကို ပြုပြင်ခြင်းဖြင့် အဆင့် II အင်ဇိုင်းများကို လှုံ့ဆော်ပေးပါသည်။
B(a)P-induced cancer ၏ mouse model ကို တည်ထောင်ခြင်းသည် ယခင်အလုပ် 5 နှင့် ကိုက်ညီပါသည်။ပုံ 1A တွင် B(a)P၊ water (control)၊ တရုတ်ဂျင်ဆင်းအထွက် (CRG)၊ Korean red ginseng extract A (KRGA) နှင့် Korean red တို့မှ လှုံ့ဆော်ပေးသော ကြွက်ကင်ဆာပုံစံကို သီတင်းပတ် 20 ကြာ ကုသခြင်း၏ စမ်းသပ်ပုံစံကို ပြသည် ဂျင်ဆင်း။Extract B (KRGB) နှင့် Korean Red Ginseng Extract C (KRGC)။ဂျင်ဆင်းနီကို ရက်သတ္တပတ် 20 ပတ်ကြာ ကုသပြီးနောက်၊ ကြွက်များကို CO2 အသက်ရှုကြပ်ခြင်းဖြင့် ယဇ်ပူဇော်ခဲ့သည်။ပုံ 1B သည် ဂျင်ဆင်းနီအမျိုးအစားအမျိုးမျိုးဖြင့် ကုသထားသော တိရိစ္ဆာန်များတွင် macroscopic အဆုတ်အကျိတ်များကို ပြသထားပြီး ပုံ 1C သည် အကျိတ်နမူနာတစ်ခု၏ ကိုယ်စားပြုအလင်းမိုက်ခရိုဂရပ်ဖစ်ကို ပြသထားသည်။ပုံ 1D တွင်ပြသထားသည့်အတိုင်း KRGB ကုသသောတိရစ္ဆာန်များ၏အကျိတ်အကျိတ် (1.5 ± 0.35) သည် ထိန်းချုပ်တိရစ္ဆာန်များထက် (0.82 ± 0.2၊ P < 0.05) ထက် နိမ့်ပါသည်။အကျိတ်၏ ပျမ်းမျှအတိုင်းအတာသည် 45% ကို ဟန့်တားသည်။စမ်းသပ်ထားသော အခြားသော ဂျင်ဆင်းနီ ထုတ်ယူမှုများသည် အကျိတ်အတွက် သိသိသာသာ ပြောင်းလဲမှုများကို မပြသခဲ့ပါ။ (P > 0.05)။ဂျင်ဆင်းနီကုသမှု သီတင်းပတ် 20 ပတ်အတွင်း မောက်စ်မော်ဒယ်တွင် သိသိသာသာ ဘေးထွက်ဆိုးကျိုးများ မတွေ့ရှိရဘဲ၊ ခန္ဓာကိုယ်အလေးချိန် (အချက်အလက်မပြထား) နှင့် အသည်း သို့မဟုတ် ကျောက်ကပ်အဆိပ်သင့်မှု မရှိခြင်း (ပုံ 1E၊F) အပါအဝင်၊
Red ginseng extract သည် A/J ကြွက်များတွင် အဆုတ်အကျိတ်ကြီးထွားမှုကို ကုသပေးသည်။(က) စမ်းသပ်ထားတာ။(ခ) အဆုတ်အကျိတ်အကြီးကြီး မောက်စ်ပုံစံ။အကျိတ်များကို မြှားများဖြင့် ညွှန်ပြသည်။a- တရုတ်ဂျင်ဆင်းအနီရောင်အုပ်စု။b- ကိုးရီးယား ဂျင်ဆင်း အနီရောင် အုပ်စု A။c- ကိုးရီးယား ဂျင်ဆင်း အနီရောင် အုပ်စု B. ဃ- ကိုးရီးယား ဂျင်ဆင်း အနီရောင် အုပ်စု C. ဃ- ထိန်းချုပ်ရေး အုပ်စု။(ဂ) အဆုတ်အကျိတ်ကို ပြသသော သေးငယ်သော မိုက်ခရိုဂရပ်ဖ်။ချဲ့ထွင်မှု- 100. b- 400. (ဃ) ဂျင်ဆင်းနီ ထုတ်ယူအုပ်စုတွင် အကျိတ်များ။(င) ပလာစမာအဆင့်တွင် အသည်းအင်ဇိုင်း ALT၊(စ) ကျောက်ကပ်အင်ဇိုင်း၏ ပလာစမာအဆင့် Cr.ဒေတာကို ပျမ်းမျှ±စံသွေဖည်မှုအဖြစ် ဖော်ပြသည်။*P <0.05။
အောက်ဖော်ပြပါ ginsenosides များကို တွက်ချက်ရန်အတွက် အလွန်စွမ်းဆောင်နိုင်သော အရည် chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) ဖြင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော ဂျင်ဆင်းနီ ထုတ်ယူမှုများ- Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3 ၊ Rh2၊ F1၊ Rk1 နှင့် Rg5။ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို တိုင်းတာရာတွင် အသုံးပြုသည့် UPLC နှင့် MS အခြေအနေများကို ယခင်အစီရင်ခံစာ 19 တွင် ဖော်ပြထားပါသည်။ဂျင်ဆင်းနီထုတ်ယူမှုလေးခု၏ UPLC-MS/MS ခရိုမာတိုဂရမ်များကို ပုံ 2A တွင် ပြထားသည်။CRG (590.27 ± 41.28 μmol/L) (ပုံ 2B) တွင် စုစုပေါင်း ginsenoside ပါဝင်မှု နှင့် စုစုပေါင်း ginsenoside ပါဝင်မှု သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်များ ရှိခဲ့ပါသည်။G-Rg3s အတွက် 58.33 ± 3.81 μmol/L (G-Rg3s အတွက် 58.33 ± 3.81 μmol/L နှင့် G-Rg3r အတွက် 41.56 ± 2.88 μmol/L) KRGB သည် G-Rg3 ၏အမြင့်ဆုံးအဆင့်ကိုပြသခဲ့သည်။ဂျင်ဆင်းနီ အမျိုးအစား (P < 0.001)။G-Rg3 သည် ကာဗွန် 20 တွင် ဟိုက်ဒရော့ဆီအုပ်စု၏ အနေအထားတွင် ကွဲပြားသည့် စတီရီယိုအိုင်ဆိုမာ G-Rg3r နှင့် G-Rg3s အတွဲအဖြစ် ဖြစ်ပေါ်သည်။ရလဒ်များက G-Rg3r သို့မဟုတ် G-Rg3 သည် B(a) P-induced cancer mouse model တွင် အရေးကြီးသော ကင်ဆာဖြစ်နိုင်ချေရှိသည်ကို ညွှန်ပြပါသည်။
ဂျင်ဆင်းနီ ထုတ်ယူမှုအမျိုးမျိုးတွင် ginsenosides ၏ ပါဝင်မှု။(က) ဂျင်ဆင်းနီထုတ်ယူမှုလေးခု၏ UPLC-MS/MS ခရိုမာတိုဂရမ်များ။(ခ) ဖော်ပြထားသော ကောက်နှုတ်ချက်များတွင် စုစုပေါင်း ginsenoside ပါဝင်မှု ခန့်မှန်းချက်။(ဂ) တံဆိပ်တပ်ထားသော ထုတ်ယူမှုများတွင် တစ်ဦးချင်းစီ၏ ginsenosides ကို ထောက်လှမ်းခြင်း။(ဃ) ginsenoside stereoisomers G-Rg3r နှင့် G-Rg3s ၏ဖွဲ့စည်းပုံများ။ဒေတာကို ပျမ်းမျှ ± စံသွေဖည်မှုအဖြစ် ဖော်ပြပါသည်။***P <0.001။
UPLC-MS/MS လေ့လာမှုသည် ရက်သတ္တပတ် 20 ကုသမှုပြီးနောက် အူလမ်းကြောင်းနှင့် သွေးနမူနာများတွင် ginsenosides ပမာဏကို လိုအပ်သည်။KRGB ဖြင့် ကုသမှုသည် သွေးထဲတွင် 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 သာ ရှိနေကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ကျန်ရှိသော ginsenosides များကို မတွေ့ရှိခဲ့သဖြင့် ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှု ညံ့ဖျင်းမှုကို ညွှန်ပြသောကြောင့် ဤ ginsenosides များနှင့် ထိတွေ့မှုကို လျော့ကျစေသည်။
အူမကြီး adenocarcinoma ဆဲလ်လိုင်း Caco-2 သည် လူ့အူအတွင်းပိုင်းရှိ ဆဲလ်များနှင့် ဇီဝဓာတုဗေဒအရ ဆင်တူပြီး အူလမ်းကြောင်းအတွင်းပိုင်းအတားအဆီးကိုဖြတ်၍ enterocyte ပို့ဆောင်မှုကို အကဲဖြတ်ရာတွင် ၎င်း၏အသုံးဝင်ပုံကို သရုပ်ပြသည်။ဤဆန်းစစ်ချက်သည် အစောပိုင်းလေ့လာမှု 20 ကို အခြေခံထားသည်။ပုံများ 3A,B,C,D,E,F သည် Caco-2 monolayer မော်ဒယ်ကို အသုံးပြု၍ G-Rg3r နှင့် G-Rg3 ၏ transcellular သယ်ယူပို့ဆောင်ရေး၏ ကိုယ်စားလှယ်ပုံများကို ပြသထားသည်။Basolateral မှ apical side (Pb-a) မှ Caco-2 monolayers များကိုဖြတ်၍ G-Rg3r သို့မဟုတ် G-Rg3 ၏ transcellular သယ်ယူပို့ဆောင်မှုသည် apical မှ basolateral side (Pa-b) ထက် သိသိသာသာ မြင့်မားပါသည်။G-Rg3r အတွက်၊ ပျမ်းမျှ Pa-b တန်ဖိုးသည် 0.38 ± 0.06 ဖြစ်ပြီး၊ 50 μmol/L verapamil ဖြင့် ကုသပြီးနောက် 0.73 ± 0.06 သို့ တိုးလာပြီး 100 μmol/L verapamil (p < 0.01 နှင့် 1.14 ± 0.09 အထိ) ပုံ 2) အသီးသီး။3A)။G-Rg3 အတွက် လေ့လာတွေ့ရှိချက်များသည် အလားတူပုံစံ (ပုံ 3B) ကို လိုက်နာခဲ့ပြီး ရလဒ်များအရ verapamil ကုသမှုသည် G-Rg3r နှင့် G-Rg3 ၏သယ်ယူပို့ဆောင်ရေးကို ပိုမိုကောင်းမွန်စေကြောင်းပြသခဲ့သည်။Verapamil ကုသမှုသည် ပျမ်းမျှ Pb-a နှင့် G-Rg3r နှင့် G-Rg3s efflux အချိုးများ (ပုံ 3C,D,E,F) ကိုလည်း သိသိသာသာ ကျဆင်းစေပါသည်။.
Caco-2 monolayers များရှိ G-Rg3 ၏ ဆဲလ်များ သယ်ယူပို့ဆောင်ခြင်းနှင့် ကြွက်ထည့်ဝင်မှု စစ်ဆေးမှုတွင် အူလမ်းကြောင်းမှ စုပ်ယူမှု။(က) Caco-2 monolayer ရှိ G-Rg3r အုပ်စု၏ Pa-b တန်ဖိုး။(ခ) Caco-2 monolayer ရှိ G-Rg3s အုပ်စုများ၏ Pa-b တန်ဖိုး။(ဂ) Caco-2 monolayer ရှိ G-Rg3r အုပ်စု၏ Pb တန်ဖိုး။(ဃ) Caco-2 monolayer ရှိ G-Rg3s အုပ်စုများ၏ Pb တန်ဖိုး။(င) Caco-2 monolayer တွင် G-Rg3r အုပ်စုများ အထွက်နှုန်း။(စ) Caco-2 monolayer ရှိ G-Rg3 အုပ်စုများ၏ အထွက်နှုန်းအချိုး။(ဆ) ကြွက်များတွင် ဖော်စပ်ထားသော စစ်ဆေးမှုတစ်ခုတွင် G-Rg3r ၏ အူလမ်းကြောင်းမှ စုပ်ယူမှု ရာခိုင်နှုန်း။(ဇ) ကြွက်များတွင် ဖော်စပ်ထားသော စစ်ဆေးမှုတစ်ခုတွင် G-Rg3 ကို အူလမ်းကြောင်းမှ စုပ်ယူမှု ရာခိုင်နှုန်း။verapamil မထည့်ဘဲ စိမ့်ဝင်နိုင်မှုနှင့် စုပ်ယူမှုကို နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ဒေတာကို သီးခြားလွတ်လပ်သော စမ်းသပ်မှုငါးခု၏ ပျမ်းမျှ ±စံသွေဖည်မှုအဖြစ် ဖော်ပြသည်။*P <0.05၊ **P <0.01၊ ***P <0.001။
အစောပိုင်းအလုပ် 20 နှင့် ကိုက်ညီသော၊ verapamil ကုသမှုပြီးနောက် အူအတွင်း G-Rg3 စုပ်ယူမှု တိုးလာခြင်းရှိမရှိကို ဆုံးဖြတ်ရန် ကြွက်များ၏ orthotopic အူလမ်းကြောင်း ဖောက်လုပ်ခြင်းကို လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။3G၊H သည် အထက်ပါအချိန်ကာလများအတွင်း ကင်ဆာမော်ဒယ်ကြွက်များတွင် G-Rg3r နှင့် G-Rg3 ၏ အူလမ်းကြောင်းစုပ်ယူမှုရာခိုင်နှုန်းကို အကဲဖြတ်ရန် ကိုယ်စားလှယ် perfusion assays ကိုပြသသည်။50 μM verapamil နှင့် 100 μM verapamil ဖြင့် ကုသပြီးနောက် 10% ၏အားနည်းသော G-Rg3r စားသုံးမှု၏ ကနဦးရာခိုင်နှုန်းသည် 20% ကျော်အထိ တိုးလာပြီး 100 μM verapamil နှင့် ကုသပြီးနောက် 25% ကျော်အထိ တိုးလာသည်။အလားတူပင်၊ 10% ၏ကနဦးစားသုံးမှုရှိသော G-Rg3 သည် 50 μM verapamil နှင့်ကုသမှုပြီးနောက် 20% ကျော်နှင့် 100 μM verapamil ဖြင့်ကုသပြီးနောက် 30% နီးပါးသည် P-gp အား verapamil တားဆီးမှုကို အားကောင်းစေသည်ဟု အကြံပြုထားသည်။ အဆုတ်ကင်ဆာ၏ ကြွက်မော်ဒယ်တွင် အူ G-absorption Rg3။
အထက်ပါနည်းလမ်းအရ B(a)P-induced cancer model ကြွက်များကို ပုံ 4A တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း အုပ်စုခြောက်ခုသို့ ကျပန်းခွဲထားသည်။ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက G-Rg3 ကုသမှုအုပ်စုတွင် သိသိသာသာ ကိုယ်အလေးချိန်ကျခြင်း သို့မဟုတ် အဆိပ်သင့်မှုလက္ခဏာများကို မတွေ့ရှိရပါ (အချက်အလက်မပြပါ)။ရက်သတ္တပတ် 20 ကုသမှုပြီးနောက်, ကြွက်တစ် ဦး ချင်းစီ၏အဆုတ်ကိုစုဆောင်းခဲ့သည်။ပုံ 4B သည် အထက်ဖော်ပြပါ ကုသမှုအုပ်စုများရှိ ကြွက်များတွင် macroscopic အဆုတ်အကျိတ်များကို ပြသပြီး ပုံ 4C သည် ကိုယ်စားပြုအကျိတ်တစ်ခု၏ ကိုယ်စားပြုအလင်းမိုက်ခရိုဂရပ်ဖစ်ကို ပြသသည်။G-Rg3r နှင့် G-Rg3s ဖြင့် ကုသသော ကြွက်များအတွက် တန်ဖိုးများသည် 0.75 ± 0.29 mm3 နှင့် 0.81 ± 0.30 mm3 အသီးသီးရှိကြပြီး G ကြွက်များကို ကုသသည့်တန်ဖိုးများ၊ -Rg3s နှင့် 1.63 အသီးသီး ±0.40 mm3 ရှိခဲ့သည်။G-Rg3 ကုသမှုသည် ကြွက်များတွင် အကျိတ်ဝန်ကို လျှော့ချပေးကြောင်း ညွှန်ပြသော ကြွက်များကို ထိန်းချုပ်ပါ။verapamil ၏စီမံအုပ်ချုပ်မှုသည်ဤလျှော့ချမှုကိုပိုမိုမြှင့်တင်ခဲ့သည်- verapamil+ G-Rg3r ကြွက်များတွင်တန်ဖိုးများသည် 0.75 ± 0.29 mm3 မှ 0.33 ± 0.25 mm3 (p < 0.01) နှင့် verapamil+ အတွက်တန်ဖိုးများ 0.81 ± . 0.9 မှ 0.30 သို့ ကျဆင်းသွားသည် G. -Rg3s ကုသထားသော ကြွက်များတွင် mm3 (p < 0.05) သည် verapamil သည် အကျိတ်တွင် G-Rg3 ၏ inhibitory effect ကို မြှင့်တင်ပေးနိုင်ကြောင်း ညွှန်ပြသည်။အကျိတ်ဝန်ထုပ်ဝန်ပိုးသည် ထိန်းချုပ်အုပ်စုနှင့် verapamil အုပ်စု၊ G-Rg3r အုပ်စုနှင့် G-Rg3s အုပ်စု၊ နှင့် verapamil+G-Rg3r အုပ်စု နှင့် verapamil+G-Rg3s အုပ်စုတို့ကြား သိသာထင်ရှားသော ခြားနားချက်များ မတွေ့ရှိရပါ။ထို့အပြင်၊ အကဲဖြတ်ကုသမှုများနှင့်ဆက်စပ်သော သိသာထင်ရှားသောအသည်း သို့မဟုတ် ကျောက်ကပ်အဆိပ်အတောက်များမရှိပါ (ပုံ 4E၊F)။
ညွှန်ပြထားသောအုပ်စုများတွင် G-Rg3 နှင့် ပလာစမာ သို့မဟုတ် အူလမ်းကြောင်း G-Rg3r နှင့် G-Rg3 အဆင့်များပြီးနောက်အကျိတ်ဝန်ထုပ်ဝန်ပိုး။(က) စမ်းသပ်ထားတာ။(ခ) မောက်စ်မော်ဒယ်တွင် Macroscopic အကျိတ်များ။အကျိတ်များကို မြှားများဖြင့် ညွှန်ပြသည်။a- G-Rg3r။b: G-Rg3s။c- G-Rg3r ကို verapamil နှင့် ပေါင်းစပ်ပါ။d- G-Rg3 ကို verapamil နှင့် ပေါင်းစပ်ခြင်း။ဃ- Verapamil။e: ထိန်းချုပ်မှု။(ဂ) ချဲ့ထွင်သည့်နေရာတွင် အကျိတ်၏ အလင်းအမိုက်စားပုံ။အဖြေ- 100x။b: 400X။(ဃ) G-Rg3 + verapamil ကုသမှု၏ A/J ကြွက်များတွင် အကျိတ်ဝန်ထုပ်ဝန်ပိုးအပေါ် သက်ရောက်မှု။(င) ပလာစမာအဆင့်တွင် အသည်းအင်ဇိုင်း ALT၊(စ) ကျောက်ကပ်အင်ဇိုင်း၏ ပလာစမာအဆင့် Cr.(ဆ) ညွှန်ပြထားသောအုပ်စုများ၏ G-Rg3r သို့မဟုတ် G-Rg3 ပလာစမာအဆင့်များ။(ဇ) ညွှန်ပြထားသောအုပ်စုများ၏ အူအတွင်းရှိ G-Rg3r သို့မဟုတ် G-Rg3s အဆင့်များ။ဒေတာကို ပျမ်းမျှ ± စံသွေဖည်မှုအဖြစ် ဖော်ပြပါသည်။*P <0.05၊ **P <0.01၊ ***P <0.001။
Methods ကဏ္ဍတွင်ဖော်ပြထားသောနည်းလမ်းအတိုင်း ရက်သတ္တပတ် 20 ကြာကုသမှုကာလပြီးနောက် B(a)P-induced ကင်ဆာမော်ဒယ်ကြွက်များတွင် G-Rg3 အဆင့်ကို UPLC-MS/MS မှ အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။4G နှင့် H တို့သည် ပလာစမာနှင့် အူလမ်းကြောင်း G-Rg3 အဆင့်များကို အသီးသီးပြသသည်။ပလာစမာ G-Rg3r အဆင့်သည် 0.44 ± 0.32 μmol/L ဖြစ်ပြီး 1.17 ± 0.47 μmol/L သို့ တိုးလာကာ verapamil (p < 0.001) ကို အူလမ်းကြောင်း G-Rg3r ပမာဏ 0.53 ± 0.08 µg/l.verapamil နှင့် ပေါင်းစပ်သောအခါ၊ g သည် 1.35 ± 0.13 μg/g (p < 0.001) သို့ တိုးလာသည်။G-Rg3 အတွက်၊ ရလဒ်များသည် အလားတူပုံစံအတိုင်း လုပ်ဆောင်ပြီး verapamil ကုသမှုသည် A/J ကြွက်များတွင် G-Rg3 ၏ ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှုကို တိုးမြင့်စေကြောင်း ဖော်ပြသည်။
hEL ဆဲလ်များပေါ်ရှိ B(a)P နှင့် G-Rg3 ၏ cytotoxicity အကဲဖြတ်ရန် ဆဲလ်ရှင်သန်နိုင်မှု ဆန်းစစ်ချက်ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။hEL ဆဲလ်များရှိ B(a)P မှလှုံ့ဆော်ပေးသော cytotoxicity ကို ပုံ 5A တွင်ပြသထားပြီး G-Rg3r နှင့် G-Rg3 ၏အဆိပ်သင့်ဂုဏ်သတ္တိများကိုပုံ 5A နှင့် 5B တွင်ပြသထားသည်။5B, C. G-Rg3 ၏ cytoprotective အကျိုးသက်ရောက်မှုကို အကဲဖြတ်ရန် B(a)P အား HEL ဆဲလ်များအတွင်းသို့ G-Rg3r သို့မဟုတ် G-Rg3 ၏ ပြင်းအားအမျိုးမျိုးဖြင့် အုပ်ချုပ်ခဲ့ပါသည်။ပုံ 5D တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ G-Rg3r သည် 5 μM၊ 10 μM၊ နှင့် 20 μM ပြင်းအားများတွင် G-Rg3r သည် ဆဲလ်များ၏ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို 58.3%, 79.3%, နှင့် 77.3% သို့ အသီးသီးပြန်လည်ရရှိခဲ့သည်။အလားတူရလဒ်များကို G-Rg3s အုပ်စုတွင်လည်း တွေ့မြင်နိုင်ပါသည်။G-Rg3s ၏ပြင်းအားသည် 5 µM၊ 10 µM နှင့် 20 µM ဖြစ်သောအခါ၊ ဆဲလ်ရှင်သန်နိုင်စွမ်းသည် 58.3%, 72.7% နှင့် 76.7% အသီးသီးသို့ ပြန်လည်ရောက်ရှိခဲ့သည် (ပုံ 5E)။)BPDE-DNA adducts များပါဝင်မှုကို ELISA အစုံဖြင့် တိုင်းတာခဲ့သည်။ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များအရ B(a)P-ကုသထားသောအုပ်စုတွင် B(a)P-treated group တွင် တိုးလာကြောင်း၊ သို့သော် G-Rg3 ပူးတွဲကုသမှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက B(a)P အုပ်စုရှိ BPDE-DNA adduct အဆင့်များ ကုသထားသောအုပ်စုတွင် B သည် DNA ၏ထည့်ဝင်မှုအဆင့်ကို သိသိသာသာလျှော့ချခဲ့သည်။B(a)P တစ်ခုတည်းဖြင့် ကုသမှု၏ရလဒ်များကို ပုံ 5F (G-Rg3s အတွက် 1.87 ± 0.33 နှင့် 3.77 ± 0.42၊ G-Rg3r အတွက် 1.93 ± 0.48 နှင့် 3.77 ± 0.42 နှင့် G -Rg3s၊ p < 0.001)။
G-Rg3 နှင့် B(a)P တို့ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များတွင် ရှင်သန်နိုင်စွမ်းနှင့် BPDE-DNA adduct ဖွဲ့စည်းခြင်း(က) B(a)P ဖြင့် ကုသသော hEL ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း။(ခ) G-Rg3r ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း။(ဂ) G-Rg3 ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း။(ဃ) B(a)P နှင့် G-Rg3r ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း။(င) B(a)P နှင့် G-Rg3 ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း။(စ) B(a)P နှင့် G-Rg3 ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များရှိ BPDE-DNA adduct ပမာဏများ။ဒေတာကို ပျမ်းမျှ ± စံသွေဖည်မှုအဖြစ် ဖော်ပြပါသည်။*P <0.05၊ **P <0.01၊ ***P <0.001။
10 μM B(a)P နှင့် 10 μM G-Rg3r သို့မဟုတ် G-Rg3s တို့ဖြင့် ပူးတွဲကုသပြီးနောက် GST အင်ဇိုင်းဖော်ပြမှုကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များက B(a)P သည် GST စကားရပ် (G-Rg3r အုပ်စုတွင် 59.7 ± 8.2% နှင့် G-Rg3s အုပ်စုရှိ 39 ± 4.5%) ကို ဖိနှိပ်ထားပြီး B(a)P သည် G-Rg3r နှင့် ဆက်စပ်နေသည် သို့မဟုတ် G-Rg3r၊ သို့မဟုတ် G-Rg3r ဖြင့်။G-Rg3s ဖြင့် တွဲဖက်ကုသခြင်း GST ဖော်ပြချက်။GST စကားရပ် (G-Rg3r အုပ်စုတွင် 103.7 ± 15.5% နှင့် G-Rg3s အုပ်စုရှိ 110 ± 11.1%၊ p < 0.05 နှင့် p < 0.001၊ အသီးသီး၊ ပုံ။ 6A၊ B နှင့် C)။GST လုပ်ဆောင်ချက်ကို လုပ်ဆောင်ချက် စစ်ဆေးမှု အစုံအလင်ကို အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များက G-Rg3r အုပ်စုရှိ G-Rg3r အုပ်စုရှိ 92.3 ± 6.5 နှင့် 96.3 ± 6.5 နှင့် 96.3 ± 6.5% နှင့် B(a)P တစ်ခုတည်းသောအုပ်စု (96.3 ± 6.6% နှင့် 35.7 ± 7.8%) ပေါင်းစပ်ကုသမှုအုပ်စုတွင် GST လုပ်ဆောင်ချက်ပိုမိုမြင့်မားကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များကပြသခဲ့သည် )G-Rg3s အုပ်စုရှိ % vs 35.7 ± 7.8%၊ p < 0.001၊ ပုံ 6D)။
B(a)P နှင့် G-Rg3 ဖြင့်ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များတွင် GST နှင့် Nrf2 ၏ဖော်ပြခြင်း။(က) Western blotting ဖြင့် GST စကားရပ်ကို ထောက်လှမ်းခြင်း။(ခ) B(a)P နှင့် G-Rg3r ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များတွင် GST ၏ အရေအတွက်ဖော်ပြချက်။(ဂ) B(a)P နှင့် G-Rg3s တို့ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များတွင် GST ၏ အရေအတွက်ဖော်ပြချက်။(ဃ) B(a)P နှင့် G-Rg3 ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များတွင် GST လုပ်ဆောင်ချက်။(င) Western blotting ဖြင့် Nrf2 စကားရပ်ကို ထောက်လှမ်းခြင်း။(စ) B(a)P နှင့် G-Rg3r တို့ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များတွင် Nrf2 ၏ အရေအတွက်ဖော်ပြချက်။(ဆ) B(a)P နှင့် G-Rg3s တို့ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များတွင် Nrf2 ၏ အရေအတွက်ဖော်ပြချက်။ဒေတာကို ပျမ်းမျှ ± စံသွေဖည်မှုအဖြစ် ဖော်ပြပါသည်။*P <0.05၊ **P <0.01၊ ***P <0.001။
B(a)P-induced tumorigenesis ၏ G-Rg3-mediated ဖိနှိပ်မှုတွင်ပါဝင်သည့်လမ်းကြောင်းများကိုရှင်းလင်းရန်အတွက် Nrf2 ကိုအနောက်တိုင်း blotting ဖြင့်အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။Figures 6E,F,G တွင်ပြသထားသည့်အတိုင်း ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက B(a)P ကုသမှုအုပ်စုရှိ Nrf2 အဆင့်သာ လျော့နည်းသွားပါသည်။သို့သော်လည်း B(a)P ကုသမှုအုပ်စုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက PG-Rg3 အုပ်စုရှိ B(a) Nrf2 အဆင့်သည် G-Rg3r အတွက် 106 ± 9.5% နှင့် 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% အတွက် G-Rg3r နှင့် G-Rg3s အတွက် 41 ± 9.8%၊ p < 0.01)။
သီးခြားဝင်ရောက်စွက်ဖက်သည့် RNA (siRNA) ကို အသုံးပြု၍ Nrf2 စကားရပ်ကို နှိမ်နှင်းခြင်းဖြင့် Nrf2 ၏ ကြိုတင်ကာကွယ်မှုအခန်းကဏ္ဍကို ကျွန်ုပ်တို့ အတည်ပြုခဲ့ပါသည်။Nrf2 knockdown ကို အနောက်တိုင်း blotting (ပုံ. 7A,B) ဖြင့် အတည်ပြုခဲ့သည်။ပုံ 7C၊D တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း B(a)P နှင့် G-Rg3 ဖြင့် hEL ဆဲလ်များကို ပူးတွဲကုသခြင်းကြောင့် BPDE-DNA adducts အရေအတွက် (1.47 ± 0.21) ကို B(a)P ဖြင့် ကုသခြင်းထက် လျော့နည်းသွားပါသည်။ ထိန်းချုပ်မှု siRNA အုပ်စုတွင် တစ်ယောက်တည်း။) G-Rg3r သည် 4.13 ± 0.49၊ G-Rg3s သည် 1.8 ± 0.32 နှင့် 4.1 ± 0.57၊ p < 0.01)။သို့သော်၊ BPDE-DNA ဖွဲ့စည်းမှုအပေါ် G-Rg3 ၏တားစီးအကျိုးသက်ရောက်မှုကို Nrf2 နှောင့်နှေးခြင်းဖြင့်ဖျက်သိမ်းခဲ့သည်။siNrf2 အုပ်စုတွင် B(a)P နှင့် G-Rg3 ပူးတွဲကုသခြင်းနှင့် B(a)P ကုသမှုတစ်ခုတည်း (G-Rg3r နှင့် 3.56 ± 0.32 အကြား BPDE-DNA adduct ဖွဲ့စည်းရာတွင် သိသာထင်ရှားသောကွာခြားချက်မရှိပေ။ )G-Rg3r နှင့် 3.6 အတွက် G-Rg3s နှင့် ±0.45 နှင့် 4.0±0.37၊ p > 0.05)။
HEL ဆဲလ်များရှိ BPDE-DNA ပေါင်းစပ်ဖွဲ့စည်းခြင်းအပေါ် Nrf2 ၏အကျိုးသက်ရောက်မှု။(က) Nrf2 နှောင့်နှေးခြင်းကို အနောက်တိုင်း ပိတ်ဆို့ခြင်းမှ အတည်ပြုခဲ့သည်။(ခ) Nrf2 တီးဝိုင်း ပြင်းထန်မှု ပမာဏကို သတ်မှတ်ခြင်း။(ဂ) B(a)P နှင့် G-Rg3r ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များရှိ BPDE-DNA စုပ်ယူမှုအဆင့်အပေါ် Nrf2 ၏ သက်ရောက်မှု။(ဃ) B(a)P နှင့် G-Rg3 ဖြင့် ကုသထားသော hEL ဆဲလ်များရှိ BPDE-DNA ကုဒ်အဆင့်အပေါ် Nrf2 ၏ အကျိုးသက်ရောက်မှု။ဒေတာကို ပျမ်းမျှ ± စံသွေဖည်မှုအဖြစ် ဖော်ပြပါသည်။*P <0.05၊ **P <0.01၊ ***P <0.001။
ဤလေ့လာမှုသည် B(a)P-induced အဆုတ်ကင်ဆာ၏ mouse model တစ်ခုတွင် ဂျင်ဆင်းနီထုတ်ယူမှုအမျိုးမျိုး၏ ကြိုတင်ကာကွယ်မှုအကျိုးသက်ရောက်မှုကို အကဲဖြတ်ခဲ့ပြီး KRGB ကုသမှုသည် အကျိတ်ဝန်ကို သိသိသာသာလျှော့ချပေးခဲ့သည်။G-Rg3 သည် ဤဂျင်ဆင်းထုတ်ယူမှုတွင် အမြင့်ဆုံးပါဝင်မှုကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားခြင်းဖြင့် အကျိတ်ကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုကို ဟန့်တားရာတွင် ဤ ginsenoside ၏အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍကို လေ့လာခဲ့သည်။G-Rg3r နှင့် G-Rg3 နှစ်ခုလုံး (G-Rg3 ၏ epimers နှစ်ခု) သည် B(a)P-induced ကင်ဆာ၏ mouse model တစ်ခုတွင် အကျိတ်ဝန်ထုပ်ဝန်ပိုးကို သိသိသာသာ လျှော့ချပေးသည်။G-Rg3r နှင့် G-Rg3 သည် အကျိတ်ဆဲလ်များ 21 ကို apoptosis ဖြစ်ပေါ်စေပြီး၊ အကျိတ်ကြီးထွားမှု 22 ကိုဟန့်တားကာ ဆဲလ်လည်ပတ်မှု 23 ကိုဖမ်းဆီးကာ angiogenesis 24 ကိုအကျိုးသက်ရောက်စေခြင်းဖြင့်ကင်ဆာဆန့်ကျင်သောအကျိုးသက်ရောက်မှုကိုပေးသည်။G-Rg3 သည် cellular metastasis25 ကို ဟန့်တားကြောင်းပြသထားပြီး G-Rg3 ၏ ဓာတုကုထုံးနှင့် ဓာတ်ရောင်ခြည်ကုထုံးများ၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုများကို မြှင့်တင်ရန် စွမ်းရည် 26,27 ကို မှတ်တမ်းတင်ထားသည်။Poon et al က G-Rg3 ကုသမှုသည် B(a)P28 ၏ genotoxic သက်ရောက်မှုများကို လျှော့ချပေးနိုင်ကြောင်း သရုပ်ပြခဲ့သည်။ဤလေ့လာမှုသည် ပတ်ဝန်းကျင် ကင်ဆာဖြစ်စေနိုင်သော မော်လီကျူးများကို ပစ်မှတ်ထားပြီး ကင်ဆာရောဂါကို ကာကွယ်ရန်အတွက် G-Rg3 ၏ ကုထုံးဆိုင်ရာ အလားအလာကို သရုပ်ပြသည်။
၎င်းတို့၏ ခုခံကာကွယ်နိုင်စွမ်း ကောင်းမွန်သော်လည်း၊ ginsenosides ၏ ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှု ညံ့ဖျင်းမှုသည် ဤမော်လီကျူးများကို လက်တွေ့အသုံးပြုမှုအတွက် စိန်ခေါ်မှုတစ်ရပ်ဖြစ်သည်။ကြွက်များတွင် ginsenosides ၏ ပါးစပ်ဖြင့် စီမံအုပ်ချုပ်မှု၏ ဆေးဝါးကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအရ ၎င်း၏ဇီဝရရှိနိုင်မှုမှာ 5% 29 ထက်နည်းနေသေးကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ဤစမ်းသပ်မှုများသည် ရက်သတ္တပတ် 20 ကုသမှုကာလပြီးနောက်တွင် Rg5 ၏သွေးပမာဏသာကျဆင်းသွားသည်ကိုပြသခဲ့သည်။ညံ့ဖျင်းသောဇီဝရရှိနိုင်မှု၏အရင်းခံယန္တရားသည်ရှင်းလင်းစွာဖော်ပြရန်ကျန်ရှိနေသေးသော်လည်း P-gp သည် ginsenosides များစီးဆင်းမှုတွင်ပါ ၀ င်သည်ဟုယူဆသည်။P-gp blocker ဖြစ်သော verapamil ၏ စီမံအုပ်ချုပ်မှုသည် G-Rg3r နှင့် G-Rg3s တို့၏ ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှုကို တိုးမြင့်စေကြောင်း ဤအလုပ်က ပထမဆုံးအကြိမ် သရုပ်ပြခဲ့သည်။ထို့ကြောင့်၊ ဤတွေ့ရှိချက်သည် G-Rg3r နှင့် G-Rg3s များသည် ၎င်း၏ စီးဆင်းမှုကို ထိန်းချုပ်ရန်အတွက် P-gp ၏ အလွှာများအဖြစ် လုပ်ဆောင်ကြောင်း အကြံပြုထားသည်။
ဤအလုပ်သည် အဆုတ်ကင်ဆာ၏ mouse model တစ်ခုတွင် G-Rg3 ၏ ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှုကို တိုးမြင့်စေကြောင်း ဤအလုပ်က သရုပ်ပြသည်။ဤတွေ့ရှိချက်ကို P-gp ပိတ်ဆို့ထားချိန်တွင် G-Rg3 ၏ စုပ်ယူမှုကို တိုးမြင့်စေခြင်းဖြင့် အူလမ်းကြောင်းဆိုင်ရာ ဆဲလ်များ ပို့ဆောင်မှု တိုးမြှင့်ခြင်းဖြင့် ထောက်ခံပါသည်။Caco2 ဆဲလ်များတွင် ဆန်းစစ်ချက်များအရ verapamil ကုသမှုသည် အမြှေးပါးစိမ့်ဝင်နိုင်မှုကို ပိုမိုကောင်းမွန်စေပြီး G-Rg3r နှင့် G-Rg3s တို့၏ စီးဆင်းမှုကို လျှော့ချပေးကြောင်း ပြသခဲ့သည်။Yang et al ၏လေ့လာမှု။လေ့လာမှုများအရ cyclosporine A (အခြား P-gp blocker) ဖြင့် ကုသခြင်းသည် ginsenoside Rh2 ၏ bioavailability ကို 1% 20% မှ 30% ကျော်အထိ တိုးမြှင့်ပေးကြောင်း လေ့လာမှုများက ဖော်ပြသည်။Ginsenosides ဒြပ်ပေါင်း K နှင့် Rg1 သည်လည်း အလားတူရလဒ်များကို 30,31 တွင်ပြသခဲ့သည်။verapamil နှင့် cyclosporin A ကို ပူးတွဲအုပ်ချုပ်သောအခါ၊ Caco-2 ဆဲလ်များတွင် ဒြပ်ပေါင်း K ၏ စီးဆင်းမှုသည် 26.6 မှ 3 အောက်သို့ သိသိသာသာ လျော့ကျသွားပြီး ၎င်း၏ အတွင်းဆဲလ်အဆင့် 40-fold30 တိုးလာသည်။verapamil ၏ရှေ့မှောက်တွင်၊ Meng et al.31 မှပြသထားသည့်အတိုင်း ginsenoside efflux တွင် P-gp အတွက်အခန်းကဏ္ဍကိုအကြံပြုသည့်ကြွက်အဆုတ် epithelial ဆဲလ်များတွင် Rg1 ပမာဏတိုးလာသည်။သို့သော်၊ Liang et al မှပြသထားသည့်အတိုင်း P-gp ဆပ်ပြာအလွှာများမှမထိခိုက်ကြောင်းဖော်ပြသောအချို့ ginsenosides (ဥပမာ Rg1, F1, Rh1 နှင့် Re) ၏အချို့သော ginsenosides ၏စီးဆင်းမှုအပေါ် verapamil သည်တူညီသောအကျိုးသက်ရောက်မှုမရှိပါ။၃၂။ဤလေ့လာတွေ့ရှိချက်သည် အခြားသယ်ယူပို့ဆောင်ရေးကိရိယာများနှင့် အစားထိုး ginsenoside တည်ဆောက်ပုံများ ပါဝင်ပတ်သက်မှုနှင့် ဆက်စပ်နေနိုင်သည်။
ကင်ဆာအပေါ် G-Rg3 ၏ကြိုတင်ကာကွယ်မှုအကျိုးသက်ရောက်မှုယန္တရားကိုမရှင်းလင်းပါ။ယခင်လေ့လာမှုများက G-Rg3 သည် B(a) P-induced tumorigenesis ကိုကာကွယ်ရန်အတွက် oxidative stress နှင့် ရောင်ရမ်းမှု 16,33 ကိုလျှော့ချခြင်းဖြင့် DNA ပျက်စီးမှုနှင့် apoptosis ကိုကာကွယ်ပေးကြောင်းပြသခဲ့သည်။B(a)P မှ ဖြစ်ပေါ်စေသော မျိုးရိုးဗီဇအဆိပ်သင့်မှုကို BPDE-DNA34 အဖြစ် အဆင့် II အင်ဇိုင်းများကို ချိန်ညှိခြင်းဖြင့် လျှော့ချနိုင်သည်ဟု အချို့သော အစီရင်ခံစာများက ဖော်ပြသည်။GST သည် B(a)P35 မှ ဖြစ်ပေါ်စေသော DNA ပျက်စီးမှုကို လျှော့ချခြင်းဖြင့် GSH နှင့် BPDE ၏ ပေါင်းစပ်မှုကို မြှင့်တင်ခြင်းဖြင့် BPDE-DNA adduct ဖွဲ့စည်းမှုကို ဟန့်တားသည့် ပုံမှန်အဆင့် II အင်ဇိုင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။G-Rg3 ကုသမှုသည် B(a)P-induced cytotoxicity နှင့် hEL ဆဲလ်များရှိ BPDE-DNA adduct ဖွဲ့စည်းမှုကို လျော့နည်းစေပြီး GST ဖော်ပြမှုနှင့် vitro တွင် ပြန်လည်လုပ်ဆောင်ကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့၏ရလဒ်များက ပြသသည်။သို့သော်၊ G-Rg3 သည် Nrf2 လမ်းကြောင်းမှတဆင့် cytoprotective အကျိုးသက်ရောက်မှုများကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်ဟု Nrf2 မရှိခြင်းတွင် ဤသက်ရောက်မှုများ မရှိပါ။Nrf2 သည် xenobiotics36 ၏ရှင်းလင်းမှုကိုအားပေးသည့်အဆင့် II detoxification အင်ဇိုင်းများအတွက်အဓိကအချက်တစ်ချက်ဖြစ်သည်။Nrf2 လမ်းကြောင်းကို အသက်သွင်းခြင်းသည် cytoprotection ကို ဖြစ်ပေါ်စေပြီး တစ်သျှူးများ ပျက်စီးခြင်းကို လျှော့ချပေးသည်။ထို့အပြင်၊ များစွာသောအစီရင်ခံစာများသည် carcinogenesis38 တွင် Nrf2 ၏အကျိတ်ကိုနှိမ်နင်းပေးသည့်အခန်းကဏ္ဍကိုထောက်ခံထားသည်။ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုအရ G-Rg3 မှ Nrf2 လမ်းကြောင်းကို induction သည် B(a) P-induced genotoxicity တွင် အရေးပါသော စည်းမျဉ်းအခန်းကဏ္ဍတွင်ပါဝင်ပြီး B(a)P detoxification ကို phase II အင်ဇိုင်းများအသက်သွင်းခြင်းဖြင့် အကျိတ်ဖြစ်စဉ်ကို ဟန့်တားပေးကြောင်းပြသသည်။
ကျွန်ုပ်တို့၏အလုပ်သည် ginsenoside G-Rg3 ၏အရေးကြီးသောပါဝင်မှုအားဖြင့် ကြွက်များတွင် B(a)P-induced အဆုတ်ကင်ဆာကိုကာကွယ်ရန် ဂျင်ဆင်းနီ၏အလားအလာကိုဖော်ပြသည်။ဤမော်လီကျူး၏ ခံတွင်းဇီဝရရှိနိုင်မှု ညံ့ဖျင်းမှုသည် ၎င်း၏ လက်တွေ့အသုံးချမှုကို ဟန့်တားစေသည်။သို့သော်၊ ဤလေ့လာမှုသည် G-Rg3 သည် P-gp ၏အလွှာတစ်ခုဖြစ်ကြောင်းပထမဆုံးအကြိမ်ပြသခဲ့ပြီး P-gp inhibitor ၏စီမံအုပ်ချုပ်မှုသည် G-Rg3 တွင်ဗီတိုနှင့် vivo ၏ဇီဝရရှိနိုင်မှုကိုတိုးပွားစေသည်။G-Rg3 သည် ၎င်း၏ကြိုတင်ကာကွယ်မှုလုပ်ငန်းဆောင်တာအတွက် ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော ယန္တရားတစ်ခုဖြစ်နိုင်သည့် Nrf2 လမ်းကြောင်းကို ထိန်းညှိခြင်းဖြင့် B(a)P-induced cytotoxicity ကို လျှော့ချပေးသည်။ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုသည် အဆုတ်ကင်ဆာကိုကာကွယ်ရန်နှင့်ကုသရန်အတွက် ginsenoside G-Rg3 ၏အလားအလာကိုအတည်ပြုသည်။
ခြောက်ပတ်သားအရွယ် A/J ကြွက်များ (20 ± 1 ဂရမ်) နှင့် 7 ပတ်အရွယ် Wistar ကြွက်ထီး (250 ± 20 ဂရမ်) ကို The Jackson Laboratory (Bar Harbor, USA) နှင့် Wuhan Institute of Zoology တို့မှ ရယူခဲ့သည်။တက္ကသိုလ် (ဝူဟန်၊ တရုတ်)။တရုတ်အမျိုးအစားယဉ်ကျေးမှု စုဆောင်းရေးစင်တာ (Wuhan၊ China) သည် ကျွန်ုပ်တို့အား Caco-2 နှင့် hEL ဆဲလ်များ ပံ့ပိုးပေးပါသည်။Sigma-Aldrich (စိန့်လူးဝစ်၊ USA) သည် B(a)P နှင့် tricaprine ၏အရင်းအမြစ်ဖြစ်သည်။သန့်စင်ထားသော ginsenosides G-Rg3r နှင့် G-Rg3s၊ dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 proliferation assay kit (MTS), verapamil, minimal essential medium (MEM) နှင့် fetal bovine serum (FBS) တို့ကို Chengdu Must Bio-Technology မှ ဝယ်ယူခဲ့သည် .ကုမ္ပဏီလီမိတက်။(Chengdu, China)။QIAamp DNA mini kit နှင့် BPDE-DNA adduct ELISA kit ကို Qiagen (Stanford, CA, USA) နှင့် Cell Biolabs (San Diego, CA, USA) တို့မှ ဝယ်ယူခဲ့ပါသည်။GST လုပ်ဆောင်ချက်စမ်းသပ်ကိရိယာနှင့် စုစုပေါင်းပရိုတင်းစစ်ဆေးမှုကိရိယာ (စံ BCA နည်းလမ်း) ကို Solarbio (ဘေကျင်း၊ တရုတ်) မှ ဝယ်ယူခဲ့သည်။ဂျင်ဆင်းနီထုတ်ယူမှုအားလုံးကို Mingyu ဓာတ်ခွဲခန်း 7 တွင် သိမ်းဆည်းထားသည်။ ဟောင်ကောင်နှစ်ခြင်းတက္ကသိုလ် (ဟောင်ကောင်၊ တရုတ်) နှင့် Korea Cancer Center (ဆိုးလ်၊ ကိုရီးယား) တို့သည် CRG ထုတ်ယူမှုနှင့် ကိုရီးယားမူရင်းအမျိုးမျိုး (KRGA၊ KRGB အပါအဝင်) အမျိုးမျိုးသော ဂျင်ဆင်းနီထုတ်ယူခြင်း၏ စီးပွားဖြစ်ရင်းမြစ်များဖြစ်သည်။ နှင့် KRGC)။ဂျင်ဆင်းနီကို ၆ နှစ်သား လတ်ဆတ်သော ဂျင်ဆင်း၏ အမြစ်များမှ ပြုလုပ်သည်။Red ginseng extract ကို ရေဖြင့် သုံးကြိမ်ဆေးကြောပြီးနောက် ရေမှထုတ်ယူထားသော ဂျင်ဆင်းကို အာရုံစိုက်ကာ နောက်ဆုံးတွင် ဂျင်ဆင်းအမှုန့်ရရှိရန် အပူချိန်နိမ့်သောအချိန်တွင် အခြောက်ခံခြင်းဖြင့် ရရှိပါသည်။ပဋိပစ္စည်းများ (anti-Nrf2၊ anti-GST၊ နှင့် β-actin)၊ horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit immunoglobulin G (IgG)၊ transfection reagent၊ control siRNA နှင့် Nrf2 siRNA ကို Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) မှ ဝယ်ယူခဲ့သည် .), ယူအက်စ်အေ)။
Caco2 နှင့် hEL ဆဲလ်များကို 100 mm2 ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုဟင်းလျာများတွင် 37°C တွင် 10% FBS ပါဝင်သော MEM ဖြင့် မွေးမြူထားကာ စိုစွတ်သောလေထုတွင် CO2 5% ရှိသည်။ကုသမှုအခြေအနေများ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကိုဆုံးဖြတ်ရန်အတွက် hEL ဆဲလ်များကို MEM တွင် B(a)P နှင့် G-Rg3 ကွဲပြားသောပြင်းအားများဖြင့် ၄၈ နာရီကြာ ပေါက်ဖွားခဲ့သည်။ဆဲလ်ကင်းစင်သော ထုတ်ယူမှုများကို ပြင်ဆင်ရန်အတွက် ဆဲလ်များကို ထပ်မံခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနိုင်သည် သို့မဟုတ် စုဆောင်းနိုင်သည်။
စမ်းသပ်မှုအားလုံးကို Tongji ဆေးဘက်ဆိုင်ရာကောလိပ်၊ Huazhong သိပ္ပံနှင့်နည်းပညာတက္ကသိုလ် (အတည်ပြုချက်အမှတ် 2019၊ မှတ်ပုံတင်အမှတ် 4587TH) မှ အတည်ပြုခဲ့သည်။စမ်းသပ်မှုအားလုံးကို သက်ဆိုင်ရာ လမ်းညွှန်ချက်များနှင့် စည်းမျဉ်းများနှင့်အညီ လုပ်ဆောင်ခဲ့ပြီး လေ့လာမှုအား တိရစ္ဆာန်သုတေသန- Vivo Experiments (ARRIVE) လမ်းညွှန်ချက်များနှင့်အညီ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။အသက် 8 ပတ်အရွယ် A/J ကြွက်များကို tricaprine solution (100 mg/kg, 0.2 ml) တွင် B(a)P ဖြင့် ဝမ်းတွင်းအတွင်းသွင်းသည်။တစ်ပတ်အကြာတွင် ကြွက်များကို ထိန်းချုပ်အုပ်စုများနှင့် မတူညီသော ကုသရေးအုပ်စုများအဖြစ် ကျပန်းခွဲကာ အုပ်စုတစ်ခုစီတွင် ကြွက် ၁၅ ကောင်ကို တစ်နေ့တစ်ကြိမ် ခွဲကျွေးသည်။ရက်သတ္တပတ် 20 ကုသမှုပြီးနောက်, တိရစ္ဆာန်များကို CO2 အသက်ရှုကြပ်ခြင်းမှယဇ်ပူဇော်ခဲ့သည်။အဆုတ်များကို စုဆောင်းပြီး ၂၄ နာရီကြာ ပြုပြင်ပေးခဲ့သည်။အပေါ်ယံအကျိတ်အရေအတွက်နှင့် အကျိတ်တစ်ခုချင်းစီ၏ အရွယ်အစားကို ခွဲခြမ်းစိပ်ဖြာထားသော အဏုကြည့်မှန်ဘီလူးဖြင့် အဆုတ်တစ်ခုစီအတွက် အရေအတွက် တွက်ချက်ထားသည်။အကျိတ်ထုထည်ခန့်မှန်းချက် (V) ကို အောက်ပါအချက်များကို အသုံးပြု၍ တွက်ချက်ခဲ့သည်- V (mm3) = 4/3πr3၊ r သည် အကျိတ်အချင်းဖြစ်သည်။ကြွက်များ၏ အဆုတ်ရှိ အကျိတ်ပမာဏအားလုံး၏ အသားတင်ပေါင်းစုသည် စုစုပေါင်းအကျိတ်ပမာဏကို ကိုယ်စားပြုပြီး အုပ်စုတစ်ခုစီရှိ ပျမ်းမျှအကျိတ်ပမာဏသည် အကျိတ်ပမာဏကို ကိုယ်စားပြုသည်။UPLC-MS/MS ဆုံးဖြတ်ချက်အတွက် သွေးနှင့် အူလမ်းကြောင်းတစ်ခုလုံးကို −80°C တွင် စုဆောင်းသိမ်းဆည်းထားပါသည်။သွေးရည်ကြည်ကို စုဆောင်းပြီး အသည်းနှင့် ကျောက်ကပ်လုပ်ဆောင်ချက်ကို အကဲဖြတ်ရန် alanine aminotransferase (ALT) နှင့် serum creatinine (Cr) အဆင့်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် အလိုအလျောက် ဓာတုဗေဒ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို အသုံးပြုခဲ့သည်။
စုဆောင်းထားသောနမူနာများကို အအေးခန်းမှ ဖယ်ရှားကာ ဖျော်ပြီး ချိန်တွယ်ကာ အထက်တွင် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ပြွန်များထဲသို့ ထည့်ထားသည်။၎င်းအတွက် 0.5 μM phlorizin (အတွင်းပိုင်းစံ) ကို 0.8 ml မီသနောဖြေရှင်းချက်တွင် ထည့်ခဲ့သည်။ထို့နောက် တစ်ရှူးကို Tissue-Tearor ဖြင့် တစ်သားတည်းဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ပြီး တူညီသည့်အရာအား 1.5 ml microcentrifuge tube သို့ လွှဲပြောင်းပေးခဲ့သည်။အဆိုပါအရောအနှောကို 155 မိနစ် 15500 rpm တွင်ဗဟိုပြုခဲ့သည်။supernatant 1.0 ml ကို ဖယ်ရှားပြီးနောက် နိုက်ထရိုဂျင်ဖြင့် အခြောက်ခံပါ။ပြန်လည်ထူထောင်ရေးအတွက် မီသနော နှစ်ရာ မိုက်ခရိုလီတာ အသုံးပြုခဲ့သည်။သွေးကို တစ်ကြောင်းတည်းဖြင့် စုဆောင်းပြီး စီမံဆောင်ရွက်ပြီး တိုင်းတာမှုအားလုံးအတွက် ရည်ညွှန်းချက်အဖြစ် အသုံးပြုသည်။
verapamil ဖြည့်စွက်ခြင်းဖြင့် G-Rg3 သယ်ယူပို့ဆောင်ရေး၏အလားအလာကို အကဲဖြတ်ရန် ရေတွင်းတစ်ခုလျှင် 1.0 × 105 Caco-2 ဆဲလ်များ 24 တွင်းရှိသော Transwell ပြားများကို အစေ့ထုတ်ထားပါသည်။3 ပတ်ကြာယဉ်ကျေးမှုပြီးနောက်၊ ဆဲလ်များကို HBSS ဖြင့်ဆေးကြောပြီး 37 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်ကြိုတင်ကာကွယ်ထားသည်။10 μM G-Rg3 ၏ 400 μL (G-Rg3r၊ G-Rg3s၊ သို့မဟုတ် 50 သို့မဟုတ် 100 μM verapamil ပါသော အရောအနှော) ကို monolayer ၏ အောက်ခြေ သို့မဟုတ် apical ဘက်သို့ ထိုးသွင်းခဲ့ပြီး၊ HBSS ဖြေရှင်းချက် 600 μL ကို အခြားတစ်ခုသို့ ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။ ဖွတ်။သတ်မှတ်ထားသောအချိန်များတွင် ယဉ်ကျေးမှုအလတ်စား 100 µl ကိုစုဆောင်းပြီး (0, 15, 30, 45, 60, 90 နှင့် 120 မိနစ်) နှင့် ဤပမာဏအတွက် HBSS 100 µl ကိုထည့်ပါ။နမူနာများကို UPLC-MS/MS မှ သိရှိသည်အထိ −4°C တွင် သိမ်းဆည်းထားသည်။Papp = dQ/(dT × A × C0) ဟူသောအသုံးအနှုန်းကို ထင်ရှားသော unidirectional apical နှင့် basolateral permeability နှင့် အပြန်အလှန်အားဖြင့် (Pa-b နှင့် Pb-a အသီးသီး);dQ/dT သည် အာရုံစူးစိုက်မှုပြောင်းလဲမှု၊ A (0.6 cm2) သည် monolayer ၏ မျက်နှာပြင်ဧရိယာဖြစ်ပြီး C0 သည် ကနဦးအလှူရှင်၏ အာရုံစူးစိုက်မှုဖြစ်သည်။efflux အချိုးကို Pb-a/Pa-b အဖြစ် တွက်ချက်သည်၊ ၎င်းသည် လေ့လာမှု ဆေးဝါး၏ ထွက်နှုန်းကို ကိုယ်စားပြုသည်။
Wistar ကြွက်အထီးများသည် 24 နာရီကြာ အစာရှောင်ခဲ့ပြီး ရေကိုသာ သောက်ကာ 3.5% pentobarbital solution ၏ အကြောထိုးဆေးဖြင့် မေ့ဆေးပေးခဲ့သည်။ပိုက်ထည့်ထားသော ဆီလီကွန်ပြွန်သည် အဝင်ပေါက်အဖြစ် duodenum ၏အဆုံးနှင့် ileum ၏အဆုံးသည် ထွက်ပေါက်ဖြစ်သည်။isotonic HBSS တွင် 10 µM G-Rg3r သို့မဟုတ် G-Rg3s ပါ၀င်သော ဝင်ပေါက်ကို စုပ်ထုတ်ရန် peristaltic pump ကို အသုံးပြုပါ။verapamil ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို ဒြပ်ပေါင်း၏ 50 μM သို့မဟုတ် 100 μM ကို 10 μM G-Rg3r သို့မဟုတ် G-Rg3s သို့ထည့်ခြင်းဖြင့် အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။UPLC-MS/MS ကို ဖော်စပ်မှုစတင်ပြီးနောက် မိနစ် 60၊ 90၊ 120၊ နှင့် 150 မိနစ်များတွင် စုဆောင်းထားသော perfusion ထုတ်ယူမှုများကို လုပ်ဆောင်သည်။စုပ်ယူမှုရာခိုင်နှုန်းကို ဖော်မြူလာ % စုပ်ယူမှု = (1 – Cout/Cin) × 100% ဖြင့် တွက်ချက်သည်။ထွက်ပေါက်နှင့်ဝင်ပေါက်တွင် G-Rg3 ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကို Cout နှင့် Cin အသီးသီးဖော်ပြသည်။
hEL ဆဲလ်များကို ရေတွင်းတစ်ခုလျှင် 1 × 104 ဆဲလ်သိပ်သည်းဆဖြင့် B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) သို့မဟုတ် G-Rg3 ဖြင့် ကုသသည် .ထို့နောက် ဆေးဝါးများကို 48 နာရီအတွင်း ပြင်းအားမျိုးစုံ (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) ဖြင့် ရောစပ်ထားသည်။စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော MTS စစ်ဆေးမှုကိရိယာကို အသုံးပြု၍ ဆဲလ်များကို စံပရိုတိုကောအဖြစ် ထားရှိပြီးနောက် 490 nm တွင် မိုက်ခရိုပလိတ်ဖတ်စက်ကို အသုံးပြု၍ တိုင်းတာသည်။B(a)P (10 μM) နှင့် G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) ဖြင့် ပူးတွဲကုသသောအုပ်စုများ၏ ဆဲလ်ရှင်သန်နိုင်စွမ်းအဆင့်ကို အထက်ဖော်ပြပါနည်းလမ်းအတိုင်း အကဲဖြတ်ပြီး မကုသရသေးသောအုပ်စုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါသည်။
hEL ဆဲလ်များကို 1 × 105 ဆဲလ်များ/တွင်းသိပ်သည်းဆတွင် 6-တွင်းပြားများတွင် အစေ့ထုတ်ပြီး 10 μM G-Rg3 တွင် 10 μMB(a)P ဖြင့် ကုသထားသည်။၄၈ နာရီကြာ ကုသမှုခံယူပြီးနောက်၊ ထုတ်လုပ်သူ၏ပရိုတိုကောအရ QIAamp DNA Mini Kit ကို အသုံးပြု၍ hEL ဆဲလ်များမှ DNA ကို ထုတ်ယူခဲ့သည်။BPDE-DNA adduct ELISA အစုံကို အသုံးပြု၍ BPDE-DNA adducts များဖွဲ့စည်းခြင်းကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။BPDE-DNA adduct ၏ နှိုင်းရအဆင့်များကို စုပ်ယူနိုင်မှုကို 450 nm တွင် တိုင်းတာခြင်းဖြင့် microplate reader ကို အသုံးပြု၍ တိုင်းတာခဲ့သည်။
hEL ဆဲလ်များကို ရေတွင်းတစ်ခုလျှင် 1 × 104 ဆဲလ်များသိပ်သည်းဆဖြင့် 96-တွင်းပြားများတွင် မျိုးစေ့ချခဲ့ပြီး မရှိခြင်း သို့မဟုတ် 10 μM G-Rg3 တွင် 10 μMB(a)P ဖြင့် ကုသခဲ့သည်။ထုတ်လုပ်သူ၏ ပရိုတိုကောအရ စီးပွားဖြစ် GST လုပ်ဆောင်ချက် စစ်ဆေးမှုကိရိယာကို အသုံးပြု၍ GST လုပ်ဆောင်ချက်ကို တိုင်းတာသည်။Relative GST activation ကို microplate reader သုံးပြီး 450 nm တွင် absorbance ဖြင့် တိုင်းတာသည်။
hEL ဆဲလ်များကိုရေခဲ-အအေးခံ PBS ဖြင့်ဆေးကြောပြီးနောက် ပရိုတီစီယမ်တားဆေးများနှင့် ဖော့စဖာတက်တားဆေးများပါရှိသော radioimmunoprecipitation assay ကြားခံကိုအသုံးပြု၍ lyse လုပ်သည်။စုစုပေါင်းပရိုတိန်းစမ်းသပ်မှုကိရိယာကိုအသုံးပြု၍ ပရိုတင်းပမာဏကို တိုင်းတာပြီးနောက်၊ နမူနာတစ်ခုစီတွင် ပရိုတင်း 30 μg ကို 12% SDS-PAGE ဖြင့် ပိုင်းခြားပြီး electrophoresis ဖြင့် PVDF အမြှေးပါးသို့ လွှဲပြောင်းခဲ့သည်။အမြှေးပါးများကို အဆီထုတ်ထားသောနို့ 5% ဖြင့် ပိတ်ဆို့ပြီး 4°C တွင် ညတွင်းချင်းပင် မူလပဋိပစ္စည်းများဖြင့် ပေါက်ဖွားခဲ့သည်။horseradish peroxidase-conjugated secondary antibodies များဖြင့် ပေါက်ဖွားပြီးနောက်၊ ပေါင်းစပ်ထားသော အချက်ပြမှုကို မြင်ယောင်နိုင်ရန် တိုးမြှင့်ထားသော ဓာတုဓာတ်ရောင်ခြည်သုံး ဓာတ်ပစ္စည်းများကို ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။ImageJ ဆော့ဖ်ဝဲလ်ကို အသုံးပြု၍ ပရိုတင်းကြိုးတစ်ခုစီ၏ ပြင်းထန်မှုကို တိုင်းတာသည်။
GraphPad Prism 7.0 ဆော့ဖ်ဝဲလ်ကို ပျမ်းမျှ ± စံသွေဖည်မှုအဖြစ် ဖော်ပြထားသည့် အချက်အလက်အားလုံးကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ကုသမှုအုပ်စုများကြားကွဲလွဲမှုကို Student's t test သို့မဟုတ် one-way analysis of varianance ကို အသုံးပြု၍ P value <0.05 ဖြင့် ကိန်းဂဏန်းအရေးပါမှုကို ညွှန်ပြသော အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။
ဤလေ့လာမှုအတွင်း ရရှိသော သို့မဟုတ် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာထားသော အချက်အလက်အားလုံးကို ဤထုတ်ဝေထားသော ဆောင်းပါးနှင့် ဖြည့်စွက်အချက်အလက်ဖိုင်များတွင် ထည့်သွင်းထားပါသည်။
Torre, LA, Siegel, RL နှင့် Jemal, A. အဆုတ်ကင်ဆာ စာရင်းဇယားများ။ကြိယာဝိသေသန။သက်တမ်းကုန်သွားပြီ။ဆေးဝါး။ဇီဝဗေဒ။893၊ 1-19 (2016)။
Hecht၊ S. Tobacco carcinogens၊ ၎င်းတို့၏ ဇီဝအမှတ်အသားများနှင့် ဆေးရွက်ကြီးမှ ဖြစ်ပေါ်စေသော ကင်ဆာများ။နတ်။ကင်ဆာဆရာကြီး။၃၊ ၇၃၃–၇၄၄ (၂၀၀၃)။
Phillips၊ DH နှင့် Venitt၊ S. DNA နှင့် ဆေးရွက်ကြီး မီးခိုးငွေ့ ရှူရှိုက်မိခြင်းမှ ထွက်ပေါ်လာသော လူ့တစ်ရှူးများတွင် ပရိုတင်းဓာတ်များ။နိုင်ငံတကာ။J. ကင်ဆာ။131၊ 2733–2753 (2012)။
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA နှင့် Yu M. တို့သည် A/J ကြွက်များတွင် benzo(a)pyrene-induced အဆုတ်အကျိတ်များပေါ်ရှိ Houttuynia cordata နှင့် silibinin ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုများ။ကင်ဆာ ၇၊ ၁၀၅၃–၁၀၅၇ (၂၀၀၅)။
Tang, W. et al.တရုတ်ဆေးဖက်ဝင်ပစ္စည်းများမှ ခွဲထုတ်ထားသော ကင်ဆာရောဂါဆိုင်ရာ သဘာဝထုတ်ကုန်။မေးရိုး။ဆေးဝါး။၆ (၂၀၁၁) ၂၇။
Yang, Y. et al.A/J ကြွက်များတွင် benzo(a)pyrene-induced အဆုတ်အကျိတ်တွင် polyphenon E၊ ဂျင်ဆင်းနီနှင့် rapamycin ၏ ထိရောက်မှု။ကင်ဆာ ၈၊ ၅၂-၅၈ (၂၀၀၆)။
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS နှင့် Yuan, KS Red, ကင်ဆာကုထုံးတွင် ပါဝင်ပတ်သက်မှု။မေးရိုး။J. Nuttဆေးဝါး။၁၄၊ ၇–၁၆ (၂၀၁၆)။
အမေရိကန်ဂျင်ဆင်း၏အမြစ်နှင့်အရွက်များတွင် Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS နှင့် Gao, L. Ginsenosides။J. Agricအစားအသောက်ဓာတုဗေဒ။၄၄၊ ၇၁၇–၇၂၀ (၁၉၉၆)။
ဂျင်ဆင်း၏ Attele AS၊ Wu JA နှင့် Yuan KS ဆေးဝါးဗေဒ- အစိတ်အပိုင်းများစွာနှင့် သက်ရောက်မှုများစွာ။ဇီဝဓာတုဗေဒ။ဆေးဝါးဗေဒ။၅၈၊ ၁၆၈၅–၁၆၉၃ (၁၉၉၉)။
တင်ချိန်- စက်တင်ဘာ ၁၇-၂၀၂၃