Nature.com भ्रमण गर्नुभएकोमा धन्यवाद।तपाईंले प्रयोग गरिरहनुभएको ब्राउजरको संस्करणमा सीमित CSS समर्थन छ।उत्कृष्ट परिणामहरूको लागि, हामी तपाइँको ब्राउजरको नयाँ संस्करण प्रयोग गर्न सिफारिस गर्दछौं (वा इन्टरनेट एक्सप्लोररमा अनुकूलता मोड बन्द गर्नुहोस्)।यस बीचमा, निरन्तर समर्थन सुनिश्चित गर्न, हामी स्टाइल वा JavaScript बिना साइट प्रदर्शन गर्दैछौं।
रातो ginseng सयौं वर्ष को लागि परम्परागत एशियाई चिकित्सा मा प्रयोग गरिएको छ।यस अध्ययनमा, हामीले चार प्रकारका रातो जिनसेङ (चिनियाँ रातो जिनसेङ, कोरियाली रातो जिनसेङ ए, कोरियाली रातो जिनसेङ बी, र कोरियाली रातो जिनसेङ सी) विभिन्न क्षेत्रहरूमा उब्जाएको कार्सिनोजेन-प्रेरित फोक्सोको गठन र वृद्धिलाई रोक्ने क्षमताको मूल्याङ्कन गरेका थियौँ। ट्यूमर।ए/जे मुसामा बेन्जो(ए)पाइरेन (बी(ए)पी) परीक्षण गरिएको थियो र चारवटा रातो जिनसेङ प्रजातिहरूमध्ये ट्युमरको बोझ कम गर्न कोरियन रेड जिनसेङ बी सबैभन्दा प्रभावकारी पाइयो।थप रूपमा, हामीले विभिन्न ginsenosides (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 र Rg5) को चारवटा रातो ginseng अर्कहरूमा विश्लेषण गर्यौं र पत्ता लगायौं कि कोरियन रातो ginseng B मा थियो। ginsenoside Rg3 (G-Rg3) को सबैभन्दा उच्च स्तर, G-Rg3 ले यसको चिकित्सकीय प्रभावकारितामा महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्न सक्छ भनी सुझाव दिन्छ।यस कार्यले G-Rg3 अपेक्षाकृत कम जैव उपलब्धता छ भनेर देखाउँछ।यद्यपि, जब G-Rg3 लाई P-gp अवरोधक भेरापामिलसँग सह-प्रशासित गरिएको थियो, Caco-2 कोषहरूमा G-Rg3 को बहाव घटाइएको थियो, G-Rg3 को आन्द्रा अवशोषणको दर मुसा मोडेलमा बढेको थियो, र G-Rg3। बढेको थियो।Caco-2 कक्षहरूमा, Rg3 को बहिर्वाह घट्छ, र Rg3 एकाग्रताको स्तर घट्छ।G-Rg3 आन्द्रा र प्लाज्मामा बढेको छ, र B(a)P-प्रेरित ट्युमोरिजेनेसिसको मुसा मोडेलमा ट्युमर रोक्ने यसको क्षमता पनि बढाइएको छ।हामीले यो पनि फेला पार्यो कि G-Rg3 ले B(a) P-प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी र मानव फोक्सो कोशिकाहरूमा DNA एडक्ट गठन कम गर्यो, र Nrf2 मार्ग मार्फत चरण II इन्जाइमहरूको अभिव्यक्ति र गतिविधिलाई पुनर्स्थापित गर्यो, जुन कार्यको सम्भावित संयन्त्रसँग सम्बन्धित हुन सक्छ। G अवरोध -Rg3।।फोक्सो ट्यूमर को घटना को बारे मा।हाम्रो अध्ययनले माउस मोडेलहरूमा फोक्सो ट्यूमरहरूलाई लक्षित गर्न G-Rg3 को लागि सम्भावित महत्त्वपूर्ण भूमिका देखाउँछ।यस ginsenoside को मौखिक जैवउपलब्धता P-glycoprotein लक्षित गरेर बढाइएको छ, अणुलाई एन्टीक्यान्सर प्रभावहरू प्रयोग गर्न अनुमति दिँदै।
फोक्सोको क्यान्सरको सबैभन्दा सामान्य प्रकार गैर-सानो सेल फोक्सोको क्यान्सर (NSCLC) हो, जुन चीन र उत्तर अमेरिकामा क्यान्सर मृत्युको प्रमुख कारणहरू मध्ये एक हो।गैर-सानो सेल फोक्सोको क्यान्सरको जोखिम बढाउने मुख्य कारक भनेको धुम्रपान हो।चुरोटको धुवाँमा बेन्जो(a) पाइरेन (B(a)P), नाइट्रोमाइन्स र रेडोनको क्षयबाट हुने रेडियोएक्टिभ आइसोटोप सहित ६० भन्दा बढी कार्सिनोजेनहरू हुन्छन्। ३ Polycyclic aromatic हाइड्रोकार्बन B(a)P सिगरेटमा विषाक्तताको मुख्य कारण हुन्। धुवाँ।B(a)P को एक्सपोजरमा, cytochrome P450 ले यसलाई B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE) मा रूपान्तरण गर्छ, जसले DNA सँग प्रतिक्रिया गरेर BPDE-DNA एडक्ट 4 बनाउँछ। साथै, यी एडक्ट्सले ट्यूमर स्टेज र मानव फोक्सोको ट्युमर जस्तै हिस्टोप्याथोलोजी भएका मुसाहरूमा फोक्सोको ट्यूमरिजेनेसिसलाई प्रेरित गर्छ।यो सुविधाले B(a) P-प्रेरित फोक्सोको क्यान्सर मोडेललाई सम्भावित क्यान्सर प्रतिरोधी गुणहरू भएका यौगिकहरूको मूल्याङ्कन गर्न उपयुक्त प्रणाली बनाउँछ।
उच्च जोखिम समूहहरू, विशेष गरी धुम्रपान गर्नेहरूमा फोक्सोको क्यान्सरको विकासलाई रोक्नको लागि एउटा सम्भावित रणनीति भनेको केमोप्रेभेन्टिभ एजेन्टहरूको प्रयोग हो जुन इन्ट्राएपिथेलियल नियोप्लास्टिक घावहरूको विकासलाई दबाउन र यसरी तिनीहरूको पछिल्लो प्रगतिलाई घातक हुनबाट रोक्नको लागि हो।पशु अध्ययनहरूले देखाउँछ कि विभिन्न रसायन रोकथाम एजेन्टहरू प्रभावकारी छन्6।हाम्रो अघिल्लो रिपोर्ट7 ले फोक्सोको क्यान्सरमा रातो ginseng को राम्रो रोकथाम प्रभावहरू हाइलाइट गर्यो।यो जडिबुटी शताब्दीयौंदेखि परम्परागत एसियाली औषधिमा आयु र स्वास्थ्यलाई लम्ब्याउनको लागि प्रयोग गरिएको छ, र एन्टिट्यूमर प्रभावहरू भएको दस्तावेज गरिएको छ।
ginseng को सक्रिय कारक ginsenoside हो, जुन ginseng अर्क को गुणस्तर मूल्यांकन गर्न एक समग्र मार्कर को रूप मा प्रयोग गरिन्छ।कच्चा ginseng अर्क को मात्रात्मक विश्लेषण सामान्यतया RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, र Rc9,10 सहित धेरै ginsenosides को प्रयोग समावेश गर्दछ।Ginsenosides तिनीहरूको धेरै कमजोर मौखिक जैवउपलब्धताको कारण थोरै नैदानिक प्रयोग छ।यद्यपि यो कमजोर जैवउपलब्धताको लागि संयन्त्र स्पष्ट छैन, P-glycoprotein (P-gp) 12 द्वारा उत्पन्न ginsenosides को बहाव कारण हुन सक्छ।P-gp एटीपी-बाइन्डिङ क्यासेट ट्रान्सपोर्टर सुपरफैमिलीमा सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण बहाव ट्रान्सपोर्टरहरू मध्ये एक हो, जसले बाह्य वातावरणमा इन्ट्रासेलुलर पदार्थहरू रिलिज गर्न एटीपी हाइड्रोलिसिसको ऊर्जा प्रयोग गर्दछ।P-gp ट्रान्सपोर्टरहरू सामान्यतया आन्द्रा, मृगौला, कलेजो र रक्त-मस्तिष्क बाधामा व्यापक रूपमा वितरित हुन्छन्।P-gp ले आन्द्राको अवशोषणमा महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्छ, र P-gp को अवरोधले मौखिक अवशोषण र केही एन्टीक्यान्सर औषधिहरूको उपलब्धता बढाउँछ 12,14।साहित्यमा पहिले प्रयोग गरिएका अवरोधका उदाहरणहरू भेरापामिल र साइक्लोस्पोरिन A15 हुन्।यस कार्यमा B(a) P-प्रेरित फोक्सोको क्यान्सर अध्ययन गर्नको लागि माउस प्रणाली स्थापना गर्न समावेश छ जुन चीन र कोरियाबाट विभिन्न रेड ginseng अर्कहरू घातक असर पार्ने क्षमताको मूल्याङ्कन गर्न सकिन्छ।कार्सिनोजेनेसिसलाई असर गर्न सक्ने विशिष्ट ginsenosides पहिचान गर्नका लागि अर्कहरूलाई व्यक्तिगत रूपमा विश्लेषण गरिएको थियो।Verapamil त्यसपछि P-gp लाई लक्षित गर्न र क्यान्सर-लक्ष्यीकरण ginsenosides को मौखिक जैव उपलब्धता र चिकित्सकीय प्रभावकारिता सुधार गर्न प्रयोग गरियो।
ginseng saponins ले कार्सिनोजेनेसिस मा चिकित्सीय प्रभाव लागू गर्ने संयन्त्र अस्पष्ट रहन्छ।अनुसन्धानले देखाएको छ कि विभिन्न ginsenosides ले अक्सिडेटिभ तनाव कम गरेर र चरण II डिटक्सिफिकेशन इन्जाइमहरू सक्रिय गरेर कार्सिनोजेन्सको कारण हुने डीएनए क्षतिलाई कम गर्न सक्छ, जसले सेल क्षतिलाई रोक्छ।Glutathione S-transferase (GST) एक विशिष्ट चरण II इन्जाइम हो जुन कार्सिनोजेन्स 17 को कारण DNA क्षति कम गर्न आवश्यक छ।न्यूक्लियर एरिथ्रोइड 2-सम्बन्धित कारक 2 (Nrf2) एक महत्त्वपूर्ण ट्रान्सक्रिप्शन कारक हो जसले रेडक्स होमियोस्टेसिसलाई विनियमित गर्दछ र चरण II इन्जाइमहरू र साइटोप्रोटेक्टिभ एन्टिअक्सिडेन्ट प्रतिक्रियाहरू18 को अभिव्यक्ति सक्रिय गर्दछ।हाम्रो अध्ययनले B(a) P-प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी र BPDE-DNA एडक्ट गठनलाई कम गर्नमा पहिचान गरिएको ginsenosides को प्रभावहरूको पनि जाँच गर्यो, साथै सामान्य फोक्सो कोशिकाहरूमा Nrf2 मार्ग मोड्युलेट गरेर चरण II इन्जाइमहरू उत्प्रेरित गर्दछ।
B(a)P-प्रेरित क्यान्सरको माउस मोडेलको स्थापना अघिल्लो कार्यसँग मिल्दोजुल्दो छ।चित्र 1A ले B(a)P, पानी (नियन्त्रण), चिनियाँ रातो ginseng एक्स्ट्र्याक्ट (CRG), कोरियन रेड ginseng एक्स्ट्र्याक्ट A (KRGA), र कोरियाली रातो द्वारा प्रेरित माउस क्यान्सर मोडेलको 20-हप्ताको उपचारको प्रयोगात्मक डिजाइन देखाउँछ। ginseng।एक्स्ट्र्याक्ट बी (केआरजीबी) र कोरियन रेड जिनसेङ एक्स्ट्र्याक्ट सी (केआरजीसी)।20 हप्ताको रातो ginseng उपचार पछि, मुसाहरू CO2 श्वासप्रश्वास द्वारा बलिदान गरियो।चित्र 1B ले विभिन्न प्रकारका रातो ginseng संग उपचार गरिएका जनावरहरूमा म्याक्रोस्कोपिक फोक्सो ट्यूमर देखाउँछ, र चित्र 1C ले ट्यूमर नमूनाको प्रतिनिधि प्रकाश माइक्रोग्राफ देखाउँछ।KRGB-उपचार गरिएका जनावरहरूको ट्युमर बोझ (1.5 ± 0.35) नियन्त्रण जनावरहरूको भन्दा कम थियो (0.82 ± 0.2, P <0.05), चित्र 1D मा देखाइएको रूपमा।ट्यूमर लोड निषेध को औसत डिग्री 45% थियो।अन्य रातो ginseng अर्क परीक्षण ट्यूमर बोझ (P > 0.05) मा यस्तो महत्त्वपूर्ण परिवर्तन देखाउन सकेन।शरीरको तौलमा कुनै परिवर्तन (डेटा देखाइएको छैन) र कलेजो वा मृगौलाको विषाक्तता (चित्र 1E,F) सहित 20 हप्ताको रातो ginseng उपचारको दौडान माउस मोडेलमा कुनै स्पष्ट साइड इफेक्टहरू देखिएनन्।
रातो ginseng एक्स्ट्र्याक्टले A/J मुसाहरूमा फोक्सोको ट्युमर विकासको उपचार गर्छ।(A) प्रयोगात्मक डिजाइन।(B) माउस मोडेलमा ठूला फोक्सोको ट्युमर।ट्यूमरहरू तीरहरूद्वारा संकेत गरिएका छन्।एक: चिनियाँ रातो ginseng समूह।b: कोरियाली रातो जिनसेङको समूह ए।c: कोरियाली रातो ginseng समूह B. d: कोरियाली रातो ginseng समूह C. d: नियन्त्रण समूह।(C) हल्का माइक्रोग्राफ फोक्सोको ट्युमर देखाउँदै।म्याग्निफिकेशन: 100. b: 400। (D) रातो ginseng एक्स्ट्र्याक्ट समूहमा ट्यूमर लोड।(ई) कलेजो इन्जाइम ALT को प्लाज्मा स्तर।(F) गुर्दे इन्जाइम Cr को प्लाज्मा स्तर।डेटा औसत ± मानक विचलन को रूपमा व्यक्त गरिन्छ।*P <0.05।
यस अध्ययनमा पहिचान गरिएको रातो ginseng अर्कहरू अल्ट्रा-प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफी ट्यान्डम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (UPLC-MS/MS) द्वारा निम्न ginsenosides को मात्रामा विश्लेषण गरिएको थियो: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3। Rh2, F1, Rk1 र Rg5।विश्लेषकहरू मापन गर्न प्रयोग गरिएको UPLC र MS सर्तहरू अघिल्लो रिपोर्ट १९ मा वर्णन गरिएको थियो।UPLC-MS/MS क्रोमेटोग्राम चार रातो ginseng अर्क चित्र 2A मा देखाइएको छ।CRG (590.27 ± 41.28 μmol/L) (चित्र 2B) मा उच्चतम कुल ginsenoside सामग्रीको साथ, कुल ginsenoside सामग्रीमा महत्त्वपूर्ण भिन्नताहरू थिए।व्यक्तिगत ginsenosides (चित्र 2C) को मूल्याङ्कन गर्दा, KRGB ले अन्य ginsenosides (G-Rg3s को लागि 58.33 ± 3.81 μmol/L र G -Rg3r को लागि 41.56 ± 2.88 μmol/L) को तुलनामा G-Rg3 को उच्चतम स्तर देखायो।रातो ginseng प्रकार (P <0.001)।G-Rg3 stereoisomers G-Rg3r र G-Rg3s को एक जोडीको रूपमा देखा पर्दछ, जुन कार्बन 20 (चित्र 2D) मा हाइड्रोक्सिल समूहको स्थितिमा भिन्न हुन्छ।परिणामहरूले संकेत गर्दछ कि G-Rg3r वा G-Rg3 B(a) P-प्रेरित क्यान्सर माउस मोडेलमा महत्त्वपूर्ण एन्टिक्यान्सर क्षमता हुन सक्छ।
विभिन्न रातो ginseng अर्क मा ginsenosides को सामग्री।(A) UPLC-MS/MS क्रोमेटोग्राम चार रातो ginseng अर्कको।(B) संकेत गरिएका अर्कहरूमा कुल ginsenoside सामग्रीको अनुमान।(C) लेबल गरिएका अर्कहरूमा व्यक्तिगत ginsenosides को पत्ता लगाउने।(D) ginsenoside stereoisomers G-Rg3r र G-Rg3s को संरचना।डेटालाई त्रिविध निर्धारणहरूको औसत ± मानक विचलनको रूपमा व्यक्त गरिन्छ।***P <0.001।
UPLC-MS/MS अध्ययनले 20 हप्ताको उपचार पछि आन्द्रा र रगतको नमूनाहरूमा ginsenosides को मात्रा निर्धारण गर्न आवश्यक छ।KRGB को उपचारले रगतमा मात्र 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 को उपस्थिति देखायो।कुनै पनि बाँकी ginsenosides फेला परेन, कमजोर मौखिक जैवउपलब्धता संकेत गर्दछ र त्यसैले यी ginsenosides को कम जोखिम।
बृहदान्त्र एडेनोकार्सिनोमा सेल लाइन Caco-2 आकारविज्ञान र जैव रसायनिक रूपमा मानव आन्द्राको उपकला कोशिकाहरूसँग मिल्दोजुल्दो छ, यसले आन्द्राको उपकला अवरोधमा इन्टरोसाइट यातायातको मूल्याङ्कन गर्न यसको उपयोगिता प्रदर्शन गर्दछ।यो विश्लेषण पहिलेको अध्ययन २० मा आधारित थियो।फिगर 3A,B,C,D,E,F ले Caco-2 monolayer मोडेल प्रयोग गरेर G-Rg3r र G-Rg3 को ट्रान्ससेलुलर यातायातको प्रतिनिधि छविहरू देखाउँछ।Basolateral देखि apical side (Pb-a) सम्म Caco-2 monolayers मा G-Rg3r वा G-Rg3 को ट्रान्ससेलुलर यातायात एपिकल देखि बेसोलेटरल साइड (Pa-b) भन्दा उल्लेखनीय रूपमा उच्च थियो।G-Rg3r को लागि, औसत Pa-b मान 0.38 ± 0.06 थियो, जुन 50 μmol/L भेरापामिलको उपचार पछि 0.73 ± 0.06 र 100 μmol/L भेरापामिल (p <0.01 र p <0.01) को उपचार पछि 1.14 ± 0.09 मा बढ्यो। क्रमशः चित्र २)।3A)।G-Rg3 को लागि अवलोकनहरूले समान ढाँचा (चित्र 3B) पछ्यायो, र परिणामहरूले देखायो कि भेरापामिल उपचारले G-Rg3r र G-Rg3 को यातायात बढाएको छ।भेरापामिल उपचारले पनि Pb-a र G-Rg3r र G-Rg3s बहाव अनुपात (चित्र 3C,D,E,F) मा उल्लेखनीय कमी ल्यायो, यसले संकेत गर्दछ कि भेरापामिल उपचारले Caco-2 efflux कोशिकाहरूमा ginsenoside सामग्री कम गर्छ।।
Caco-2 monolayers मा G-Rg3 को ट्रान्ससेलुलर यातायात र मुसा परफ्यूजन परख मा आन्द्रा अवशोषण।(A) Caco-2 monolayer मा G-Rg3r समूहको Pa-b मान।(B) Caco-2 monolayer मा G-Rg3s समूहहरूको Pa-b मान।(C) Caco-2 monolayer मा G-Rg3r समूहको Pb मान।(D) Caco-2 monolayer मा G-Rg3s समूहहरूको Pb मान।(E) Caco-2 monolayer मा G-Rg3r समूहहरूको उपज अनुपात।(F) Caco-2 मोनोलेयरमा G-Rg3 समूहहरूको उपज अनुपात।(G) मुसामा परफ्युजन परखमा G-Rg3r को आन्द्रा अवशोषणको प्रतिशत।(H) मुसामा परफ्युजन परखमा G-Rg3 को आन्द्रा अवशोषणको प्रतिशत।पारगम्यता र अवशोषण verapamil को थप बिना तुलना गरिएको थियो।डेटा पाँच स्वतन्त्र प्रयोगहरूको औसत ± मानक विचलनको रूपमा व्यक्त गरिन्छ।*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001।
पहिलेको काम 20 सँग मिल्दोजुल्दो, भेरापामिल उपचार पछि आन्द्रामा G-Rg3 अवशोषण बढ्छ कि गर्दैन भनेर निर्धारण गर्न मुसाको अर्थोटोपिक आन्द्राको पर्फ्युजन गरिएको थियो।आंकडा 3G, H ले माथिको समय अवधिमा क्यान्सर मोडेल मुसाहरूमा G-Rg3r र G-Rg3 को आन्द्रा अवशोषणको प्रतिशत मूल्याङ्कन गर्न प्रतिनिधि पर्फ्युजन एसेस देखाउँछ।लगभग 10% को कमजोर G-Rg3r अपटेकको प्रारम्भिक प्रतिशत 50 μM भेरापामिलको साथ उपचार पछि 20% भन्दा बढि र 100 μM भेरापामिल संग उपचार पछि 25% भन्दा बढीमा बढ्यो।त्यस्तै गरी, 10% को प्रारम्भिक अपटेक भएको G-Rg3 ले पनि 50 μM भेरापामिलको साथ उपचार पछि 20% भन्दा बढी र 100 μM भेरापामिलको साथ उपचार पछि लगभग 30% को शिखर देखायो, जसले verapamil द्वारा P-gp को अवरोध बढाउन सुझाव दिन्छ। फोक्सोको क्यान्सरको माउस मोडेलमा आन्द्रा जी-अवशोषण Rg3।
माथिको विधि अनुसार, B(a) P-प्रेरित क्यान्सर मोडेल मुसाहरूलाई अनियमित रूपमा छ समूहमा विभाजन गरिएको थियो, जस्तै चित्र 4A मा देखाइएको छ।G-Rg3 उपचार समूहमा नियन्त्रण समूहको तुलनामा कुनै महत्त्वपूर्ण तौल घटाउने वा विषाक्तताको क्लिनिकल लक्षणहरू देखिएनन् (डेटा देखाइएको छैन)।20 हप्ताको उपचार पछि, प्रत्येक मुसाको फोक्सो जम्मा गरियो।चित्र 4B ले माथिको उपचार समूहहरूमा मुसाहरूमा म्याक्रोस्कोपिक फोक्सो ट्यूमरहरू देखाउँछ, र चित्र 4C एक प्रतिनिधि ट्यूमरको प्रतिनिधि प्रकाश माइक्रोग्राफ देखाउँछ।प्रत्येक समूह (चित्र 4D) मा ट्युमर बोझको सन्दर्भमा, G-Rg3r र G-Rg3s सँग उपचार गरिएको मुसाहरूको मानहरू क्रमशः 0.75 ± 0.29 mm3 र 0.81 ± 0.30 mm3 थिए, जबकि G माइसका लागि मानहरू उपचार गरियो। -Rg3s क्रमशः ±0.40 mm3 1.63 थिए।नियन्त्रण मुसा (p <0.001), G-Rg3 उपचारले मुसाहरूमा ट्यूमरको बोझ कम गरेको संकेत गर्दछ।भेरापामीको प्रशासनले यस कटौती बढायो: भेरापमिल + G-RG3R मा 0.25 0.25 0.2300 MM3 को लागि मानहरू 0.2 ± 0.21 मा घट्यो mm3 G. -Rg3s-उपचार गरिएको चूहों (p <0.05) मा, भेरापामिलले ट्युमोरीजेनेसिसमा G-Rg3 को अवरोधकारी प्रभाव बढाउन सक्छ भनी संकेत गर्दछ।ट्युमर बोझले नियन्त्रण समूह र भेरापामिल समूह, G-Rg3r समूह र G-Rg3s समूह, र भेरापामिल+G-Rg3r समूह र भेरापामिल+G-Rg3s समूह बीच कुनै महत्त्वपूर्ण भिन्नता देखाएको छैन।यसबाहेक, मूल्याङ्कन गरिएका उपचारहरूसँग सम्बन्धित कुनै महत्त्वपूर्ण कलेजो वा मृगौला विषाक्तताहरू थिएनन् (चित्र 4E, F)।
G-Rg3 उपचार पछि ट्यूमर बोझ र संकेतित समूहहरूमा प्लाज्मा वा आन्द्रा G-Rg3r र G-Rg3 स्तरहरू।(A) प्रयोगात्मक डिजाइन।(B) माउस मोडेलमा म्याक्रोस्कोपिक ट्यूमर।ट्यूमरहरू तीरहरू द्वारा संकेत गरिएका छन्।a: G-Rg3r।b: G-Rg3s।c: G-Rg3r verapamil संग संयोजन मा।d: G-Rg3 verapamil संग संयोजन मा।d: भेरापामिल।e: नियन्त्रण।(C) म्याग्निफिकेसनमा ट्यूमरको अप्टिकल माइक्रोग्राफ।उत्तर: 100x।b: 400X।(D) A/J चूहों मा ट्यूमर बोझ मा G-Rg3 + verapamil उपचार को प्रभाव।(ई) कलेजो इन्जाइम ALT को प्लाज्मा स्तर।(F) गुर्दे इन्जाइम Cr को प्लाज्मा स्तर।(G) संकेत गरिएका समूहहरूको G-Rg3r वा G-Rg3 को प्लाज्मा स्तरहरू।(H) G-Rg3r वा G-Rg3 को स्तरहरू संकेत गरिएका समूहहरूको आन्द्रामा।डेटालाई त्रिविध निर्धारणहरूको औसत ± मानक विचलनको रूपमा व्यक्त गरिन्छ।*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001।
B(a)P-प्रेरित क्यान्सर मोडेल मुसाहरूमा G-Rg3 स्तरहरू UPLC-MS/MS द्वारा विधिहरू खण्डमा वर्णन गरिएको विधि अनुसार २०-हप्ता उपचार अवधि पछि मूल्याङ्कन गरिएको थियो।आंकडा 4G र H क्रमशः प्लाज्मा र आन्द्रा G-Rg3 स्तर देखाउँछ।प्लाज्मा G-Rg3r स्तरहरू 0.44 ± 0.32 μmol/L थिए र भेरापामिल (p <0.001) को सहवर्ती प्रशासनको साथ 1.17 ± 0.47 μmol/L मा बढ्यो, जबकि आन्द्राको G-Rg3r स्तरहरू 0.53 ± 0.08/0.08 थियो।भेरापामिलसँग जोड्दा, g 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001) मा बढ्यो।G-Rg3 को लागि, नतिजाहरूले समान ढाँचा पछ्याए, भेरापामिल उपचारले A/J मुसाहरूमा G-Rg3 को मौखिक जैवउपलब्धता बढाएको संकेत गर्दछ।
सेल व्यवहार्यता परख HEL कक्षहरूमा B(a) P र G-Rg3 को साइटोटोक्सिसिटी मूल्याङ्कन गर्न प्रयोग गरिएको थियो।HEL कोशिकाहरूमा B(a)P द्वारा प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी चित्र 5A मा देखाइएको छ, जबकि G-Rg3r र G-Rg3 को गैर-विषाक्त गुणहरू चित्र 5A र 5B मा देखाइएको छ।5B, C. G-Rg3 को cytoprotective प्रभावको मूल्याङ्कन गर्न, B(a)P लाई HEL कक्षहरूमा G-Rg3r वा G-Rg3 को विभिन्न सांद्रताहरूसँग सह-प्रशासित गरिएको थियो।चित्र 5D मा देखाइए अनुसार, 5 μM, 10 μM, र 20 μM को सांद्रतामा G-Rg3r क्रमशः 58.3%, 79.3%, र 77.3% मा सेल व्यवहार्यता पुनर्स्थापित भयो।समान परिणामहरू G-Rg3s समूहमा पनि देख्न सकिन्छ।जब G-Rg3s को सांद्रता 5 µM, 10 µM र 20 µM थियो, सेल व्यवहार्यता क्रमशः 58.3%, 72.7% र 76.7% मा पुनर्स्थापित गरियो (चित्र 5E)।)।BPDE-DNA एडक्ट्सको उपस्थिति एलिसा किट प्रयोग गरेर मापन गरिएको थियो।हाम्रो नतिजाहरूले देखाए कि BPDE-DNA एडक्ट स्तरहरू B(a) P-उपचार गरिएको समूहमा नियन्त्रण समूहको तुलनामा बढेको थियो, तर G-Rg3 सह-उपचारको तुलनामा, B(a) P समूहमा BPDE-DNA एडक्ट स्तरहरू। बी उपचार गरिएको समूहमा, डीएनए एडक्ट स्तरहरू उल्लेखनीय रूपमा कम भएका थिए।B(a)P सँग मात्र उपचारको नतिजा चित्र 5F मा देखाइएको छ (1.87 ± 0.33 vs. 3.77 ± 0.42 G-Rg3r को लागि, 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 G -Rg3s को लागि, p <0.001)।
G-Rg3 र B(a) P सँग उपचार गरिएको HEL कोशिकाहरूमा सेल व्यवहार्यता र BPDE-DNA एडक्ट गठन।(A) B(a) P बाट उपचार गरिएको HEL कोशिकाहरूको व्यवहार्यता।(B) G-Rg3r सँग उपचार गरिएको hEL कोशिकाहरूको व्यवहार्यता।(C) G-Rg3 द्वारा उपचार गरिएको hEL कोशिकाहरूको व्यवहार्यता।(D) HEL कोशिकाहरूको व्यवहार्यता B(a)P र G-Rg3r सँग उपचार गरिएको।(E) B(a)P र G-Rg3 सँग उपचार गरिएको hEL कोशिकाहरूको व्यवहार्यता।(F) B(a)P र G-Rg3 सँग उपचार गरिएको HEL कोशिकाहरूमा BPDE-DNA एडक्टको स्तर।डेटालाई त्रिविध निर्धारणहरूको औसत ± मानक विचलनको रूपमा व्यक्त गरिन्छ।*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001।
GST इन्जाइम अभिव्यक्ति 10 μM B(a) P र 10 μM G-Rg3r वा G-Rg3s सँग सह-उपचार पछि पत्ता लगाइएको थियो।हाम्रो नतिजाहरूले देखाएको छ कि B(a) P ले GST अभिव्यक्तिलाई दबाएको छ (G-Rg3r समूहमा 59.7 ± 8.2% र G-Rg3s समूहमा 39 ± 4.5%), र B(a) P या त G-Rg3r सँग सम्बन्धित थियो। , वा G-Rg3r सँग, वा G-Rg3r सँग।G-Rg3s को साथ सह-उपचारले GST अभिव्यक्ति पुनर्स्थापित गर्यो।GST अभिव्यक्ति (G-Rg3r समूहमा 103.7 ± 15.5% र G-Rg3s समूहमा 110 ± 11.1%, p < 0.05 र p < 0.001, क्रमशः, चित्र 6A, B, र C)।GST गतिविधि गतिविधि परख किट प्रयोग गरी मूल्याङ्कन गरिएको थियो।हाम्रो नतिजाहरूले देखाए कि संयोजन उपचार समूहमा B(a) P मात्र समूहको तुलनामा उच्च GST गतिविधि थियो (96.3 ± 6.6% बनाम 35.7 ± 7.8% G-Rg3r समूहमा 92.3 ± 6.5 G-Rg3r समूहमा। )।G-Rg3s समूहमा % vs 35.7 ± 7.8%, p < 0.001, चित्र 6D)।
B(a)P र G-Rg3 सँग उपचार गरिएको HEL कक्षहरूमा GST र Nrf2 को अभिव्यक्ति।(A) पश्चिमी ब्लोटिंग द्वारा GST अभिव्यक्तिको पत्ता लगाउने।(B) B(a)P र G-Rg3r सँग उपचार गरिएको hEL कक्षहरूमा GST को मात्रात्मक अभिव्यक्ति।(C) B(a)P र G-Rg3s सँग उपचार गरिएको HEL कक्षहरूमा GST को मात्रात्मक अभिव्यक्ति।(D) B(a)P र G-Rg3 सँग उपचार गरिएको HEL कक्षहरूमा GST गतिविधि।(ई) पश्चिमी ब्लोटिंग द्वारा Nrf2 अभिव्यक्तिको पत्ता लगाउने।(F) B(a)P र G-Rg3r सँग उपचार गरिएको HEL कोशिकाहरूमा Nrf2 को मात्रात्मक अभिव्यक्ति।(G) B(a)P र G-Rg3s सँग उपचार गरिएको HEL कक्षहरूमा Nrf2 को मात्रात्मक अभिव्यक्ति।डेटालाई त्रिविध निर्धारणहरूको औसत ± मानक विचलनको रूपमा व्यक्त गरिन्छ।*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001।
B(a) P-प्रेरित ट्युमोरिजेनेसिसको G-Rg3-मध्यस्थता दमनमा संलग्न मार्गहरू स्पष्ट गर्न, Nrf2 अभिव्यक्ति पश्चिमी ब्लटिंग द्वारा मूल्याङ्कन गरिएको थियो।आंकडा 6E,F,G मा देखाइएको रूपमा, नियन्त्रण समूहको तुलनामा, B(a)P उपचार समूहमा Nrf2 को स्तर मात्र घटेको थियो;यद्यपि, B(a)P उपचार समूहको तुलनामा, PG-Rg3 समूहमा B(a) Nrf2 स्तरहरू बढाइएको थियो (106 ± 9.5% G-Rg3r vs. 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% को लागि। G-Rg3r vs. 41 ± 9.8% G-Rg3s को लागि, p <0.01)।
हामीले विशिष्ट सानो हस्तक्षेप गर्ने RNA (siRNA) को प्रयोग गरेर Nrf2 अभिव्यक्तिलाई दबाएर Nrf2 को निवारक भूमिका पुष्टि गर्यौं।Nrf2 नकडाउन पश्चिमी ब्लटिंग (चित्र 7A, B) द्वारा पुष्टि भयो।चित्र 7C,D मा देखाइए अनुसार, B(a)P र G-Rg3 सँग hEL कोषहरूको सह-उपचारले B(a)P को उपचारको तुलनामा BPDE-DNA एडक्ट्स (1.47 ± 0.21) को संख्यामा कमी आएको छ। नियन्त्रण siRNA समूहमा एक्लै।) G-Rg3r 4.13 ± 0.49 थियो, G-Rg3s 1.8 ± 0.32 र 4.1 ± 0.57, p <0.01) थियो।यद्यपि, BPDE-DNA गठनमा G-Rg3 को निरोधात्मक प्रभाव Nrf2 नकडाउन द्वारा समाप्त भयो।siNrf2 समूहमा, B(a)P र G-Rg3 सह-उपचार र B(a)P एक्लै उपचार (G-Rg3r vs. 3.56 ± 0.32 को लागि 3.0 ± 0.21) बीच BPDE-DNA एडक्ट गठनमा कुनै महत्त्वपूर्ण भिन्नता थिएन। )।G-Rg3r विरुद्ध 3.6 को लागि G-Rg3s विरुद्ध ±0.45 बनाम 4.0±0.37, p > 0.05)।
HEL कक्षहरूमा BPDE-DNA एडक्ट गठनमा Nrf2 नकडाउनको प्रभाव।(A) Nrf2 नकडाउन पश्चिमी ब्लोटिंग द्वारा पुष्टि भएको थियो।(B) Nrf2 ब्यान्ड तीव्रता को मात्रा।(C) B(a)P र G-Rg3r सँग उपचार गरिएको HEL कोशिकाहरूमा BPDE-DNA एडक्ट स्तरहरूमा Nrf2 नकडाउनको प्रभाव।(D) B(a)P र G-Rg3 सँग उपचार गरिएको HEL कक्षहरूमा BPDE-DNA एडक्ट स्तरहरूमा Nrf2 नकडाउनको प्रभाव।डेटालाई त्रिविध निर्धारणहरूको औसत ± मानक विचलनको रूपमा व्यक्त गरिन्छ।*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001।
यस अध्ययनले B(a) P-प्रेरित फोक्सोको क्यान्सरको माउस मोडेलमा विभिन्न रातो ginseng अर्कहरूको रोकथाम प्रभावहरूको मूल्याङ्कन गर्यो, र KRGB उपचारले ट्युमरको बोझलाई उल्लेखनीय रूपमा कम गर्यो।यस ginseng एक्स्ट्र्याक्टमा G-Rg3 को उच्चतम सामग्री रहेको कुरालाई ध्यानमा राख्दै, ट्युमोरिजेनेसिसलाई रोक्नमा यस ginsenoside को महत्त्वपूर्ण भूमिका अध्ययन गरिएको छ।दुबै G-Rg3r र G-Rg3 (G-Rg3 को दुई एपिमरहरू) ले B(a) P-प्रेरित क्यान्सरको माउस मोडेलमा ट्युमरको बोझलाई उल्लेखनीय रूपमा कम गर्यो।G-Rg3r र G-Rg3 ले ट्युमर कोशिकाहरू21 को एपोप्टोसिस उत्प्रेरित गरेर, ट्यूमरको वृद्धि 22 लाई रोकेर, कोशिका चक्र23 लाई रोकेर र एन्जियोजेनेसिस24 लाई असर गरेर एन्टीक्यान्सर प्रभावहरू प्रयोग गर्दछ।G-Rg3 ले सेलुलर मेटास्टेसिस25 लाई रोकेको पनि देखाइएको छ, र G-Rg3 को केमोथेरापी र रेडियोथेरापीको प्रभावहरू बढाउने क्षमता 26,27 दस्तावेज गरिएको छ।पून एट अलले G-Rg3 उपचारले B(a) P28 को जीनोटक्सिक प्रभावहरू कम गर्न सक्छ भनी प्रदर्शन गरे।यस अध्ययनले वातावरणीय कार्सिनोजेनिक अणुहरूलाई लक्षित गर्न र क्यान्सर रोक्न G-Rg3 को चिकित्सीय क्षमता देखाउँछ।
तिनीहरूको राम्रो प्रोफिलेक्टिक क्षमताको बावजुद, जिनसेनोसाइड्सको कमजोर मौखिक जैव उपलब्धताले यी अणुहरूको क्लिनिकल प्रयोगको लागि चुनौती खडा गर्छ।मुसामा ginsenosides को मौखिक प्रशासन को फार्माकोकाइनेटिक विश्लेषणले देखायो कि यसको जैवउपलब्धता अझै पनि 5% 29 भन्दा कम छ।यी परीक्षणहरूले 20-हप्ताको उपचार अवधि पछि, केवल Rg5 को रगतको स्तर घटेको देखाएको छ।यद्यपि कमजोर जैवउपलब्धताको अन्तर्निहित संयन्त्रलाई स्पष्ट गर्न बाँकी छ, P-gp लाई ginsenosides को बहावमा संलग्न भएको मानिन्छ।यो कामले पहिलो पटक देखाएको छ कि भेरापामिल, एक P-gp अवरोधकको प्रशासनले G-Rg3r र G-Rg3s को मौखिक जैव उपलब्धता बढाउँछ।यसैले, यो खोजले सुझाव दिन्छ कि G-Rg3r र G-Rg3s ले यसको बहावलाई विनियमित गर्न P-gp को सब्सट्रेटको रूपमा कार्य गर्दछ।
यो कार्यले भेरापामिलसँग संयोजन उपचारले फोक्सोको क्यान्सरको माउस मोडेलमा G-Rg3 को मौखिक जैव उपलब्धता बढाउँछ भनेर देखाउँछ।यो खोजलाई P-gp नाकाबन्दीमा G-Rg3 को बढेको आन्द्रा ट्रान्ससेलुलर यातायातद्वारा समर्थित छ, जसले गर्दा यसको अवशोषण बढ्छ।Caco2 कोशिकाहरूमा गरिएको परीक्षणले भेरापामिल उपचारले झिल्ली पारगम्यता सुधार गर्दा G-Rg3r र G-Rg3s को बहाव कम गरेको देखाएको छ।यांग एट अल द्वारा एक अध्ययन।अध्ययनहरूले देखाएको छ कि साइक्लोस्पोरिन ए (अर्को P-gp अवरोधक) को उपचारले ginsenoside Rh2 को 1%20 को आधारभूत मूल्यबाट 30% भन्दा बढि जैव उपलब्धता बढाउँछ।Ginsenosides यौगिकहरू K र Rg1 ले पनि समान परिणामहरू 30,31 देखाए।जब भेरापामिल र साइक्लोस्पोरिन ए सह-प्रशासित गरिएको थियो, Caco-2 कोषहरूमा कम्पाउन्ड K को बहाव उल्लेखनीय रूपमा 26.6 बाट 3 भन्दा कममा घटाइएको थियो, जबकि यसको इन्टरसेलुलर स्तर 40-गुना 30 बढ्यो।भेरापामिलको उपस्थितिमा, मुसाको फोक्सोको एपिथेलियल कोशिकाहरूमा Rg1 स्तर बढ्यो, जसमा ginsenoside efflux मा P-gp को भूमिका हुन्छ, जस्तै Meng et al.31 द्वारा देखाइएको छ।जे होस्, भेरापामिलले केही जिन्सेनोसाइडहरू (जस्तै Rg1, F1, Rh1 र Re) को बहावमा उस्तै प्रभाव पारेन, तिनीहरू P-gp सब्सट्रेटहरूबाट प्रभावित छैनन् भन्ने सङ्केत गर्छ, जसरी Liang et al द्वारा देखाइएको छ।३२।यो अवलोकन अन्य ट्रान्सपोर्टरहरू र वैकल्पिक ginsenoside संरचनाहरूको संलग्नतासँग सम्बन्धित हुन सक्छ।
क्यान्सर मा G-Rg3 को रोकथाम प्रभाव को संयन्त्र अस्पष्ट छ।अघिल्लो अध्ययनहरूले देखाएको छ कि G-Rg3 ले अक्सिडेटिभ तनाव र सूजन कम गरेर DNA क्षति र एपोप्टोसिस रोक्छ 16,33, जुन B(a) P-प्रेरित ट्युमोरिजेनेसिस रोक्नको लागि अन्तर्निहित संयन्त्र हुन सक्छ।केही रिपोर्टहरूले संकेत गर्दछ कि B(a)P द्वारा प्रेरित जीनोटक्सिसिटीलाई BPDE-DNA34 बनाउन चरण II इन्जाइमहरू परिमार्जन गरेर घटाउन सकिन्छ।GST एक विशिष्ट चरण II इन्जाइम हो जसले BPDE-DNA एडक्ट गठनलाई GSH लाई BPDE मा बन्धनलाई बढावा दिई रोक्छ, जसले B(a) P35 द्वारा प्रेरित DNA क्षतिलाई कम गर्छ।हाम्रो परिणामहरूले देखाउँछ कि G-Rg3 उपचारले B(a) P-प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी र BPDE-DNA एडक्ट गठनलाई HEL कोशिकाहरूमा कम गर्छ र GST अभिव्यक्ति र भिट्रोमा गतिविधि पुनर्स्थापित गर्छ।यद्यपि, यी प्रभावहरू Nrf2 को अनुपस्थितिमा अनुपस्थित थिए, सुझाव दिन्छ कि G-Rg3 ले Nrf2 मार्ग मार्फत साइटोप्रोटेक्टिभ प्रभावहरू प्रेरित गर्दछ।Nrf2 चरण II डिटोक्सिफिकेशन इन्जाइमहरूको लागि एक प्रमुख ट्रान्सक्रिप्शन कारक हो जसले xenobiotics36 को क्लियरेन्सलाई बढावा दिन्छ।Nrf2 मार्गको सक्रियताले साइटोप्रोटेक्शनलाई प्रेरित गर्दछ र ऊतक क्षतिलाई कम गर्दछ।यसबाहेक, धेरै रिपोर्टहरूले Nrf2 को carcinogenesis मा ट्युमर दमनकर्ताको रूपमा भूमिकालाई समर्थन गरेको छ।हाम्रो अध्ययनले देखाउँछ कि G-Rg3 द्वारा Nrf2 मार्गको इन्डक्शनले B(a) P-प्रेरित जीनोटक्सिसिटीमा B(a) P detoxification को कारणले चरण II इन्जाइमहरू सक्रिय गरेर ट्यूमरिजेनेसिस प्रक्रियालाई रोकेर महत्त्वपूर्ण नियामक भूमिका खेल्छ।
हाम्रो कामले ginsenoside G-Rg3 को महत्त्वपूर्ण संलग्नता मार्फत मुसाहरूमा B(a) P-प्रेरित फोक्सोको क्यान्सर रोक्न रातो ginseng को सम्भाव्यता प्रकट गर्दछ।यस अणुको कमजोर मौखिक जैव उपलब्धताले यसको क्लिनिकल अनुप्रयोगलाई बाधा पुर्याउँछ।यद्यपि, यस अध्ययनले पहिलो पटक देखाउँछ कि G-Rg3 P-gp को सब्सट्रेट हो, र P-gp अवरोधकको प्रशासनले G-Rg3 को भिट्रो र भिभोमा जैवउपलब्धता बढाउँछ।G-Rg3 ले Nrf2 मार्गलाई विनियमित गरेर B(a) P-प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी कम गर्छ, जुन यसको रोकथाम कार्यको लागि सम्भावित संयन्त्र हुन सक्छ।हाम्रो अध्ययनले फोक्सोको क्यान्सरको रोकथाम र उपचारको लागि ginsenoside G-Rg3 को सम्भावना पुष्टि गर्दछ।
ज्याक्सन प्रयोगशाला (बार हार्बर, संयुक्त राज्य अमेरिका) र वुहान इन्स्टिच्युट अफ जियोलोजीबाट छ हप्ता पुरानो ए/जे मुसा (20 ± 1 ग्राम) र 7-हप्ता पुरानो पुरुष विस्टार मुसा (250 ± 20 ग्राम) प्राप्त गरिएको थियो।विश्वविद्यालय (वुहान, चीन)।चिनियाँ प्रकार संस्कृति संग्रह केन्द्र (वुहान, चीन) ले हामीलाई Caco-2 र hEL कोशिकाहरू उपलब्ध गराएको छ।सिग्मा-एल्ड्रिच (सेन्ट लुइस, संयुक्त राज्य अमेरिका) B(a)P र tricaprine को स्रोत हो।शुद्ध ginsenosides G-Rg3r र G-Rg3s, डाइमिथाइल सल्फोक्साइड (DMSO), CellTiter-96 प्रसार परख किट (MTS), भेरापामिल, न्यूनतम आवश्यक माध्यम (MEM), र fetal bovine serum (FBS) Chengdu Must Bio-Technology बाट खरिद गरिएको थियो। ।कम्पनि लिमिटेड।(चेङ्दु, चीन)।QIAamp DNA मिनी किट र BPDE-DNA एडक्ट ELISA किट Qiagen (Stanford, CA, USA) र Cell Biolabs (San Diego, CA, USA) बाट खरिद गरिएको थियो।GST गतिविधि परख किट र कुल प्रोटीन परख किट (मानक BCA विधि) Solarbio (बेइजिङ, चीन) बाट खरिद गरिएको थियो।सबै रातो ginseng अर्क Mingyu प्रयोगशाला 7 मा भण्डारण गरिएको छ। हङकङ ब्याप्टिस्ट विश्वविद्यालय (हङकङ, चीन) र कोरिया क्यान्सर केन्द्र (सियोल, कोरिया) CRG निकासी र विभिन्न कोरियाली मूल (KRGA, KRGB सहित) को विभिन्न रेड ginseng अर्क को व्यावसायिक स्रोत हो। र KRGC)।रातो ginseng 6 वर्ष पुरानो ताजा ginseng को जरा देखि बनाइन्छ।रातो ginseng एक्स्ट्र्याक्ट ginseng को तीन पटक पानीले धुने, त्यसपछि जलीय निकासी केन्द्रित गरेर, र अन्तमा ginseng एक्स्ट्र्याक्ट पाउडर प्राप्त गर्न कम तापक्रममा सुकाएर प्राप्त गरिन्छ।एन्टिबडीहरू (एन्टि-Nrf2, एन्टि-जीएसटी, र β-एक्टिन), हर्सराडिश पेरोक्सिडेज-कन्जुगेटेड एन्टि-रेबिट इम्युनोग्लोबुलिन G (IgG), ट्रान्सफेक्सन अभिकर्मक, नियन्त्रण siRNA, र Nrf2 siRNA सान्ता क्रुज बायोटेक्नोलोजी (सान्ता क्रुज) बाट खरिद गरिएको थियो। ।), संयुक्त राज्य अमेरिका)।
Caco2 र hEL कोशिकाहरू 100 mm2 सेल कल्चर डिशहरूमा MEM भएको 10% FBS 37 °C मा 5% CO2 को आर्द्र वातावरणमा कल्चर गरिएको थियो।उपचार सर्तहरूको प्रभाव निर्धारण गर्न, HEL कोशिकाहरू 48 घण्टाको लागि MEM मा B(a) P र G-Rg3 को विभिन्न सांद्रताहरूसँग इन्क्युबेटेड थिए।कक्षहरू थप विश्लेषण वा सेल-मुक्त अर्कहरू तयार गर्न सङ्कलन गर्न सकिन्छ।
सबै प्रयोगहरू Tongji मेडिकल कलेज, Huazhong विश्वविद्यालय अफ साइन्स एण्ड टेक्नोलोजी (अनुमोदन नम्बर 2019; दर्ता नम्बर 4587TH) को प्रायोगिक पशु नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदन गरिएको थियो।सबै प्रयोगहरू सान्दर्भिक दिशानिर्देशहरू र नियमहरू अनुसार प्रदर्शन गरिएका थिए, र अध्ययन पशु अनुसन्धान: इन भिभो प्रयोगहरू (ARRIVE) दिशानिर्देशहरूको रिपोर्टिङ अनुसार सञ्चालन गरिएको थियो।आठ-हप्ता-पुरानो A/J मुसाहरूलाई पहिलो पटक ट्राइकाप्रिन घोल (100 mg/kg, 0.2 ml) मा B(a)P को साथ इन्ट्रापेरिटोनली इन्जेक्सन गरिएको थियो।एक हप्ता पछि, मुसाहरूलाई अनियमित रूपमा नियन्त्रण समूह र विभिन्न उपचार समूहहरूमा विभाजित गरियो, प्रत्येक समूहमा 15 मुसाहरू, र दिनमा एक पटक ग्याभ गरियो।20 हप्ताको उपचार पछि, जनावरहरूलाई CO2 श्वासप्रश्वासबाट बलि दिइयो।फोक्सो जम्मा गरी 24 घण्टाको लागि तय गरियो।विच्छेदन माइक्रोस्कोप अन्तर्गत प्रत्येक फोक्सोको लागि सतही ट्यूमर र व्यक्तिगत ट्यूमर आकारहरूको संख्या मापन गरिएको थियो।ट्यूमर मात्रा अनुमान (V) निम्न अभिव्यक्ति प्रयोग गरेर गणना गरिएको थियो: V (mm3) = 4/3πr3, जहाँ r ट्युमर व्यास हो।चूहों को फोक्सो मा सबै ट्यूमर भोल्युम को शुद्ध योग कुल ट्यूमर मात्रा को प्रतिनिधित्व गर्दछ, र प्रत्येक समूह मा औसत कुल ट्यूमर मात्रा ट्यूमर लोड को प्रतिनिधित्व गर्दछ।UPLC-MS/MS निर्धारणको लागि सम्पूर्ण रगत र आन्द्राका नमूनाहरू −80°C मा सङ्कलन गरी भण्डारण गरियो।सीरम सङ्कलन गरिएको थियो र कलेजो र मृगौला कार्य मूल्याङ्कन गर्न alanine aminotransferase (ALT) र सीरम क्रिएटिनिन (Cr) स्तरहरू विश्लेषण गर्न एक स्वचालित रसायन विश्लेषक प्रयोग गरिएको थियो।
सङ्कलन गरिएका नमूनाहरू चिसो भण्डारबाट हटाइयो, पगालियो, तौलियो, र माथि वर्णन गरिए अनुसार ट्युबहरूमा राखियो।यसमा ०.८ एमएल मिथानोल घोलमा ०.५ μM फ्लोरिजिन (आन्तरिक मानक) थपियो।टिस्यु-टियरर प्रयोग गरेर टिस्युलाई एकरूप बनाइयो र होमोजेनेटलाई पछि १.५ एमएल माइक्रोसेन्ट्रिफ्यूज ट्यूबमा स्थानान्तरण गरियो।मिश्रणलाई १५ मिनेटको लागि १५५०० आरपीएममा सेन्ट्रीफ्युज गरिएको थियो।1.0 ml supernatant हटाए पछि, नाइट्रोजन संग सुकाउनुहोस्।रिकभरीका लागि दुई सय माइक्रोलिटर मिथानोल प्रयोग गरिएको थियो।रगत संकलन गरी एक लाइनमा प्रशोधन गरिन्छ र सबै मापनको लागि सन्दर्भको रूपमा प्रयोग गरिन्छ।
भेरापामिल थपेर G-Rg3 यातायातको सम्भावित बृद्धिको मूल्याङ्कन गर्न 24-वेल ट्रान्सवेल प्लेटहरूलाई 1.0 × 105 Caco-2 कोशिकाहरू प्रति कुवामा राखिएको थियो।3 हप्ताको संस्कृति पछि, कोशिकाहरूलाई HBSS ले धोइयो र 37 डिग्री सेल्सियसमा पूर्व इन्क्युबेटेड गरियो।10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, वा 50 वा 100 μM भेरापामिलको मिश्रण) को 400 μL मोनोलेयरको बेसोलेटरल वा एपिकल साइडमा इन्जेक्ट गरियो, र 600 μL HBSS समाधान थपियो। पक्ष।तोकिएको समयमा (0, 15, 30, 45, 60, 90 र 120 मिनेट) मा 100 μl संस्कृति माध्यम सङ्कलन गर्नुहोस् र यो मात्रा बनाउनको लागि HBSS को 100 μl थप्नुहोस्।UPLC-MS/MS द्वारा पत्ता नलागेसम्म नमूनाहरू −4 °C मा भण्डारण गरिएको थियो।अभिव्यक्ति Papp = dQ/(dT × A × C0) स्पष्ट यूनिडायरेक्शनल एपिकल र बेसोलेटरल पारगम्यता र यसको विपरीत (क्रमशः Pa-b र Pb-a) मापन गर्न प्रयोग गरिन्छ;dQ/dT एकाग्रतामा परिवर्तन हो, A (0.6 cm2) monolayer को सतह क्षेत्र हो, र C0 प्रारम्भिक दाता एकाग्रता हो।बहाव अनुपात Pb-a/Pa-b को रूपमा गणना गरिन्छ, जसले अध्ययन औषधिको प्रवाह दर प्रतिनिधित्व गर्दछ।
भाले विस्टार मुसालाई २४ घण्टा उपवास बसेर पानी मात्र पिउँथ्यो र ३.५ प्रतिशत पेन्टोबार्बिटल घोलको इन्ट्राभेनस इन्जेक्सनले एनेस्थेटाइज गरिएको थियो।इन्ट्युटेड सिलिकॉन ट्यूबमा ड्युओडेनमको अन्त्य प्रवेशद्वारको रूपमा र इलियमको अन्त्य बाहिर निस्कने रूपमा हुन्छ।0.1 ml/min को प्रवाह दरमा आइसोटोनिक HBSS मा 10 µM G-Rg3r वा G-Rg3s को साथ इनलेट पम्प गर्न पेरिस्टाल्टिक पम्प प्रयोग गर्नुहोस्।50 μM वा 100 μM कम्पाउन्डलाई 10 μM G-Rg3r वा G-Rg3s मा जोडेर भेरापामिलको प्रभावको मूल्याङ्कन गरिएको थियो।UPLC-MS/MS पर्फ्युजन सुरु भएको समय बिन्दु 60, 90, 120, र 150 मिनेटमा सङ्कलन गरिएका पर्फ्युजन एक्स्ट्र्याक्टहरूमा प्रदर्शन गरिएको थियो।अवशोषणको प्रतिशत सूत्र % अवशोषण = (1 – Cout/Cin) × 100% द्वारा परिमाणित हुन्छ;आउटलेट र इनलेटमा G-Rg3 को एकाग्रता क्रमशः Cout र Cin द्वारा व्यक्त गरिएको छ।
hEL कोशिकाहरू 96-वेल प्लेटहरूमा 1 × 104 कोशिकाहरू प्रति कुवाको घनत्वमा सीड गरियो र B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) वा G-Rg3 DMSO मा भंग गरियो। ।त्यसपछि औषधिहरूलाई कल्चर माध्यमबाट विभिन्न सांद्रता (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) 48 घण्टामा पातलो गरियो।व्यावसायिक रूपमा उपलब्ध MTS परख किट प्रयोग गरेर, कक्षहरूलाई मानक प्रोटोकलको अधीनमा राखिएको थियो र त्यसपछि 490 एनएममा माइक्रोप्लेट रिडर प्रयोग गरेर मापन गरियो।B(a)P (10 μM) र G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) सँग सह-उपचार गरिएका समूहहरूको सेल व्यवहार्यता स्तर माथिको विधि अनुसार मूल्याङ्कन गरिएको थियो र उपचार नगरिएको समूहसँग तुलना गरिएको थियो।
hEL कोशिकाहरूलाई 1 × 105 कोशिकाहरूको घनत्वमा 6-वेल प्लेटहरूमा सीड गरियो र 10 μM G-Rg3 को उपस्थिति वा अनुपस्थितिमा 10 μMB(a) P सँग उपचार गरियो।४८ घण्टाको उपचार पछि, निर्माताको प्रोटोकल अनुसार QIAamp DNA Mini Kit को प्रयोग गरेर HEL कोषहरूबाट DNA निकालियो।BPDE-DNA एडक्ट्सको गठन BPDE-DNA एडक्ट एलिसा किट प्रयोग गरेर पत्ता लगाइएको थियो।BPDE-DNA एडक्टको सापेक्ष स्तरहरू 450 nm मा अवशोषण मापन गरेर माइक्रोप्लेट रिडर प्रयोग गरेर मापन गरियो।
hEL कोशिकाहरू 96-वेल प्लेटहरूमा 1 × 104 कक्षहरू प्रति कुवाको घनत्वमा सीड गरिएको थियो र 10 μMB(a)P सँग 10 μM G-Rg3 को अनुपस्थिति वा उपस्थितिमा 48 घण्टाको लागि उपचार गरियो।GST गतिविधि निर्माताको प्रोटोकल अनुसार व्यावसायिक GST गतिविधि परख किट प्रयोग गरेर मापन गरिएको थियो।सापेक्ष GST सक्रियता एक माइक्रोप्लेट रिडर प्रयोग गरेर 450 nm मा absorbance मापन गरिएको थियो।
एचईएल कोशिकाहरू आइस-कोल्ड पीबीएसले धोइयो र त्यसपछि प्रोटीज इनहिबिटरहरू र फस्फेटेज इनहिबिटरहरू भएको रेडियोइम्युनोप्रीसिपिटेशन परख बफर प्रयोग गरेर लाइज गरियो।कुल प्रोटीन परख किट प्रयोग गरेर प्रोटीन परिमाण पछि, प्रत्येक नमूनामा 30 μg प्रोटीन 12% SDS-PAGE द्वारा छुट्याइयो र इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा PVDF झिल्लीमा स्थानान्तरण गरियो।झिल्लीहरू 5% स्किम दूधको साथ अवरुद्ध गरियो र 4 डिग्री सेल्सियसमा रातभर प्राथमिक एन्टिबडीहरू इन्क्युबेटेड गरियो।हर्सराडिश पेरोक्सिडेज-कन्जुगेटेड सेकेन्डरी एन्टिबडीहरूको साथ इन्क्युबेशन पछि, बाइन्डिङ सिग्नलको कल्पना गर्न परिष्कृत केमिल्युमिनेसेन्स अभिकर्मकहरू थपियो।प्रत्येक प्रोटीन ब्यान्डको तीव्रता ImageJ सफ्टवेयर प्रयोग गरेर परिमाण गरिएको थियो।
ग्राफप्याड प्रिज्म 7.0 सफ्टवेयर सबै डेटा विश्लेषण गर्न प्रयोग गरिएको थियो, मतलब ± मानक विचलनको रूपमा व्यक्त गरियो।उपचार समूहहरू बीचको भिन्नतालाई विद्यार्थीको t परीक्षण वा भिन्नताको एक-तर्फी विश्लेषण प्रयोग गरेर मूल्याङ्कन गरिएको थियो, P मान <0.05 ले सांख्यिकीय महत्त्वलाई संकेत गर्दछ।
यस अध्ययनको क्रममा प्राप्त वा विश्लेषण गरिएका सबै डाटाहरू यस प्रकाशित लेख र पूरक जानकारी फाइलहरूमा समावेश गरिएका छन्।
Torre, LA, Siegel, RL र Jemal, A. फोक्सोको क्यान्सर तथ्याङ्क।क्रियाविशेषण।म्याद सकियो।औषधी।जीवविज्ञान।८९३, १–१९ (२०१६)।
Hecht, S. Tobacco carcinogens, तिनीहरूको बायोमार्कर र तंबाकू-प्रेरित क्यान्सर।नाट।क्यान्सर पादरी।३, ७३३–७४४ (२००३)।
Phillips, DH र Venitt, S. DNA र प्रोटिनले मानव तन्तुहरूमा सुर्तिजन्य धुवाँको सम्पर्कबाट उत्पन्न हुने असरहरू।अन्तर्राष्ट्रियता।जे. क्यान्सर।१३१, २७३३–२७५३ (२०१२)।
याङ वाई।, वाङ वाई।, ताङ के।, लुबेट आरए र यू एम। ए/जे चूहोंमा बेन्जो(ए)पाइरेन-प्रेरित फोक्सोको ट्युमोरिजेनेसिसमा हाउट्युनिया कार्डाटा र सिलिबिनिनको प्रभाव।क्यान्सर ७, १०५३–१०५७ (२००५)।
Tang, W. et al।चिनियाँ औषधीय सामग्रीबाट पृथक क्यान्सर प्रतिरोधी प्राकृतिक उत्पादन।जबडा।औषधी।६, २७ (२०११)।
याङ, वाई एट अल।ए/जे चूहोंमा बेन्जो(ए) पाइरेन-प्रेरित फोक्सोको ट्युमोरिजेनेसिसमा पोलिफेनन ई, रातो जिनसेङ, र रापामाइसिनको प्रभावकारिता।क्यान्सर ८, ५२–५८ (२००६)।
वाङ, सीजेड, एन्डरसन, एस, डु, डब्ल्यू, हे, टीएस र युआन, केएस रेड, क्यान्सर थेरापीमा संलग्नता।जबडा।जे नट।औषधी।14, 7-16 (2016)।
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS र Gao, L. Ginsenosides in the जरा र American ginseng.जे कृषिखाद्य रसायन।४४, ७१७–७२० (१९९६)।
Attele AS, Wu JA र Yuan KS ginseng को फार्माकोलजी: धेरै घटक र धेरै प्रभावहरू।जैव रसायन।औषधि विज्ञान।५८, १६८५–१६९३ (१९९९)।
पोस्ट समय: सेप्टेम्बर-17-2023