ريڊ ginseng saponin Rg3 Ginsenoside RG3 پائوڊر جو روڪٿام اثر بينزوپيرين-حوصلہ افزائي ڦڦڙن جي ٽامي تي

Nature.com گهمڻ لاءِ توهان جي مهرباني.توھان استعمال ڪري رھيا آھيو برائوزر جو نسخو محدود CSS سپورٽ آھي.بهترين نتيجن لاءِ، اسان توهان جي برائوزر جو نئون ورزن استعمال ڪرڻ جي صلاح ڏيو ٿا (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو).ساڳئي وقت ۾، جاري سهڪار کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسان سائيٽ کي بغير اسٽائل يا جاوا اسڪرپٽ جي ڏيکاري رهيا آهيون.
ڳاڙهو ginseng استعمال ڪيو ويو آهي روايتي ايشيائي دوائن ۾ سوين سالن تائين.هن مطالعي ۾، اسان چار قسم جي ڳاڙهي ginseng جي صلاحيت جو جائزو ورتو (چيني ڳاڙهي ginseng، ڪورين ڳاڙهي ginseng A، ڪورين ڳاڙهي ginseng B، ۽ ڪورين ڳاڙهي ginseng C) مختلف علائقن ۾ وڌيل ڪارڪينجن-حوصلہ افزائي ڦڦڙن جي ٺهڻ ۽ ترقي کي روڪڻ لاء. ڳوڙهاA benzo(a) pyrene (B(a)P) ٽيسٽ A/J چوٿين تي ڪئي وئي، ۽ ڪورين ريڊ ginseng B چار ڳاڙهي ginseng قسمن جي وچ ۾ طومار جي بوجھ کي گهٽائڻ ۾ سڀ کان وڌيڪ اثرائتو ثابت ٿيو.ان کان علاوه، اسان مختلف ginsenosides جي مواد جو تجزيو ڪيو (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ۽ Rg5) چار لال ginseng extracts ۾ ۽ ڏٺائين ته ڪورين ڳاڙهي ginseng B هئا. ginsenoside Rg3 (G-Rg3) جي سڀ کان وڌيڪ اعلي سطح، اهو مشورو ڏئي ٿو ته G-Rg3 ان جي علاج جي اثرائتي ۾ اهم ڪردار ادا ڪري سگهي ٿي.اهو ڪم ڏيکاري ٿو ته G-Rg3 نسبتا گهٽ بايووائيبلٽي آهي.جڏهن ته، جڏهن G-Rg3 کي P-gp inhibitor verapamil سان گڏ ڪيو ويو، ته G-Rg3 جو Caco-2 سيلز ۾ وهڪرو گهٽجي ويو، G-Rg3 جي آنت جي جذب جي شرح هڪ چوٿون ماڊل ۾ وڌي وئي، ۽ G-Rg3. وڌايو ويو.Caco-2 سيلز ۾، آر جي 3 جو نڪرڻ گھٽجي ٿو، ۽ آر جي 3 ڪنسنٽريشن جي سطح گھٽجي ٿي.G-Rg3 آنت ۽ پلازما ۾ وڌايو ويو آهي، ۽ ان جي ٽومر کي روڪڻ جي صلاحيت پڻ B(a)P-Induced tumorigenesis جي چوٿين ماڊل ۾ وڌايو ويو آهي.اسان اهو پڻ ڏٺو آهي ته G-Rg3 گھٽائي B(a)P-حوصلي واري cytotoxicity ۽ انساني ڦڦڙن جي سيلز ۾ ڊي اين اي اضافو ٺهڻ، ۽ Nrf2 رستي ذريعي فيز II اينزيمس جي اظهار ۽ سرگرمي کي بحال ڪيو، جيڪو عمل جي امڪاني ميڪانيزم سان لاڳاپيل ٿي سگهي ٿو. جي جي روڪٿام -Rg3..ڦڦڙن جي tumors جي واقعن جي باري ۾.اسان جو مطالعو G-Rg3 لاءِ ممڪن طور تي اهم ڪردار ظاھر ڪري ٿو ماؤس ماڊل ۾ ڦڦڙن جي ٽامي کي ھدف ڪرڻ ۾.هن ginsenoside جي زباني بايو دستيابي کي P-glycoprotein کي نشانو بڻائيندي وڌايو ويو آهي، انو کي اجازت ڏيڻ جي اجازت ڏئي ٿو ته ڪينسر ضد اثرات کي وڌايو وڃي.
ڦڦڙن جي ڪينسر جو سڀ کان وڌيڪ عام قسم نان سمال سيل ڦڦڙن جو ڪينسر (NSCLC) آهي، جيڪو چين ۽ اتر آمريڪا ۾ ڪينسر جي موتن جي مکيه سببن مان هڪ آهي 1,2.بنيادي عنصر جيڪو غير ننڍڙو سيل ڦڦڙن جي ڪينسر کي وڌائڻ جو خطرو وڌائي ٿو تماڪ نوشي آهي.سگريٽ دونھون 60 کان وڌيڪ ڪارڪينوجن تي مشتمل آھي، جن ۾ بينزو(a) پائرين (B(a)P)، نائٽروسامينز، ۽ ريڊيو ايڪٽيو آئسوٽوپس شامل آھن ريڊون جي زوال کان. تماڪB(a)P جي نمائش تي، سائٽو ڪروم P450 ان کي B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE) ۾ تبديل ڪري ٿو، جيڪو DNA سان رد عمل ڪري BPDE-DNA addduct 4 ٺاهي ٿو. ايڊڊڪٽس چوهڙن ۾ ڦڦڙن جي tumorigenesis کي متاثر ڪري ٿو ٽيومر اسٽيج ۽ هسٽوپيٿولوجي سان انساني ڦڦڙن جي ٽيومر وانگر.هي خصوصيت B(a) P-Induced lung Cancer ماڊل کي هڪ مناسب سسٽم بڻائي ٿي مرکبات جو جائزو وٺڻ لاءِ ممڪن anticancer ملڪيتن سان.
هڪ ممڪن حڪمت عملي اعلي خطرو گروپن ۾ ڦڦڙن جي ڪينسر جي ترقي کي روڪڻ لاء، خاص طور تي سگريٽ نوشي ڪندڙ، ڪيموپريوينٽيو ايجنٽ جو استعمال آهي intraepithelial neoplastic lesions جي ترقي کي دٻائڻ ۽ ان جي نتيجي ۾ انهن جي اڳتي وڌڻ کي روڪڻ.جانورن جي مطالعي مان اهو ظاهر ٿئي ٿو ته مختلف chemopreventive ايجنٽ اثرائتي آهن6.اسان جي پوئين رپورٽ 7 ڦڦڙن جي ڪينسر تي لال ginseng جي سٺي بچاء واري اثرات کي نمايان ڪيو.هي جڙي ٻوٽي صدين کان روايتي ايشيائي دوائن ۾ زندگي ۽ صحت کي ڊگھي ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو آهي، ۽ ان جي تصديق ڪئي وئي آهي ته اينٽيٽيمر اثرات آهن8.
ginseng جو فعال عنصر ginsenoside آهي، جيڪو ginseng extracts جي معيار کي جانچڻ لاء هڪ جامع مارڪر طور استعمال ڪيو ويندو آهي.خام ginseng extracts جي مقدار جي تجزيي ۾ عام طور تي ڪيترن ئي ginsenosides جو استعمال شامل آهي، بشمول RK1، Rg1، F1، Re، Rb1، Rb2، Rb3، Rd، Rh1، Rh2، Rg3، Rg5، ۽ Rc9,10.Ginsenosides انهن جي تمام خراب زباني بايو دستيابي 11 جي ڪري ٿورڙي ڪلينڪل استعمال آهي.جيتوڻيڪ هن غريب جيو دستيابي جو ميکانيزم واضح ناهي، ginsenosides جو وهڪرو P-glycoprotein (P-gp) 12 سبب ٿي سگهي ٿو.P-gp ATP-binding casset transporter superfamily ۾ سڀ کان وڌيڪ اهم efflux transporters مان هڪ آهي، جيڪو ATP هائيڊولائيزس جي توانائي کي استعمال ڪري ٿو ته اندروني ماحول ۾ خارجي مواد کي ڇڏڻ لاء.P-gp ٽرانسپورٽر عام طور تي وڏي پيماني تي آنت، گردڪ، جگر ۽ رت جي دماغ جي رڪاوٽ ۾ ورهايل آهن.P-gp آنت جي جذب ۾ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو، ۽ P-gp جي روڪٿام زباني جذب ۽ ڪجهه اينٽي ڪينسر دوائن جي دستيابي کي وڌائي ٿو 12,14.اڳ ۾ ادب ۾ استعمال ٿيل رڪاوٽن جا مثال verapamil ۽ cyclosporine A15 آهن.ھن ڪم ۾ B(a)P-Induced lung Cancer جي مطالعي لاءِ ماؤس سسٽم قائم ڪرڻ شامل آھي چين ۽ ڪوريا مان مختلف لال ginseng extracts جي قابليت جو جائزو وٺڻ لاءِ خرابين کي متاثر ڪرڻ لاءِ.مخصوص ginsenosides کي سڃاڻڻ لاءِ نچوڙ انفرادي طور تي تجزيو ڪيو ويو جيڪو شايد ڪارڪينوجنيسس کي متاثر ڪري سگھي ٿو.Verapamil ان کان پوء P-gp کي ھدف ڪرڻ لاء استعمال ڪيو ويو ۽ زباني جيو دستيابي کي بهتر بنائڻ ۽ ڪينسر جي ھدف واري ginsenosides جي علاج جي اثرائتي.
ميکانيزم جنهن جي ذريعي ginseng saponins carcinogenesis تي علاج جو اثر وجھي ٿو واضح ناهي.تحقيق ڏيکاريو ويو آهي ته مختلف ginsenosides آڪسائيڊائٽي دٻاء کي گهٽائڻ ۽ فيز II detoxification enzymes کي چالو ڪندي ڪارڪينوجن جي ڪري ڊي اين اي نقصان کي گھٽائي سگھي ٿو، ان ڪري سيل جي نقصان کي روڪيو وڃي ٿو.Glutathione S-transferase (GST) ھڪڙو عام مرحلو II اينزيم آھي جيڪو ڪارڪينوجنز 17 جي ڪري ڊي اين اي نقصان کي گھٽائڻ جي ضرورت آھي.نيوڪليئر erythroid 2 سان لاڳاپيل عنصر 2 (Nrf2) هڪ اهم ٽرانسپشن فيڪٽر آهي جيڪو ريڊڪس هوميوسٽاسس کي منظم ڪري ٿو ۽ فيز II اينزائمز ۽ سائٽوپروٽيڪٽو اينٽي آڪسائيڊٽ ردعمل18 جي ​​اظهار کي چالو ڪري ٿو.اسان جي مطالعي ۾ B (a) P-Induced cytotoxicity ۽ BPDE-DNA Adduct ٺاھڻ کي گهٽائڻ تي سڃاتل ginsenosides جي اثرات جو پڻ جائزو ورتو ويو، ۽ گڏوگڏ مرحلو II اينزيمس کي عام ڪرڻ سان Nrf2 رستي کي عام ڦڦڙن جي سيلن ۾ تبديل ڪندي.
B(a)P-Induced ڪينسر جي ماؤس ماڊل جو قيام اڳئين ڪم 5 سان مطابقت رکي ٿو.شڪل 1A ڏيکاري ٿو تجرباتي ڊيزائن جي 20-هفتن جي علاج جو ماؤس ڪينسر ماڊل جو B(a)P، پاڻي (ڪنٽرول)، چيني لال ginseng extract (CRG)، ڪورين ريڊ ginseng extract A (KRGA)، ۽ ڪورين لال ginsengExtract B (KRGB) ۽ ڪورين ريڊ Ginseng Extract C (KRGC).لال ginseng علاج جي 20 هفتن کان پوء، چوٿون CO2 asphyxiation پاران قربان ڪيا ويا.شڪل 1B ڏيکاري ٿو macroscopic lung tumors جانورن ۾ مختلف قسم جي ڳاڙھو ginseng سان علاج ڪيو ويو آھي، ۽ شڪل 1C ھڪڙي نمائندي لائٽ مائڪروگراف ڏيکاري ٿو ھڪڙي ٽامي نموني جو.KRGB-علاج ٿيل جانورن جي ٽومر بوجھ (1.5 ± 0.35) ڪنٽرول جانورن جي ڀيٽ ۾ گھٽ هئي (0.82 ± 0.2، P <0.05)، جيئن شڪل 1D ۾ ڏيکاريل آهي.طومار لوڊ inhibition جو سراسري درجو 45٪ هو.ٻيا لال ginseng extracts تجربا نه ڏيکاريا اهڙيون اهم تبديليون tumor بوجھ ۾ (P > 0.05).20 هفتن جي لال ginseng علاج جي دوران ماؤس ماڊل ۾ ڪي به واضح ضمني اثرات نه ڏٺا ويا، بشمول جسم جي وزن ۾ ڪابه تبديلي (ڊيٽا نه ڏيکاريل) ۽ نه جگر يا گردن جي زهر (شڪل 1E،F).
ريڊ ginseng extract A/J چوٿين ۾ ڦڦڙن جي ٽامي جي ترقي جو علاج ڪري ٿو.(الف) تجرباتي ڊيزائن.(ب) مائوس ماڊل ۾ ڦڦڙن جا وڏا ٽامي.طومار تير سان ظاهر ڪيا ويا آهن.هڪ: چيني لال ginseng گروپ.ب: ڪورين ريڊ ginseng جو گروپ A.ج: ڪورين ريڊ ginseng گروپ B. d: ڪورين red ginseng گروپ C. d: ڪنٽرول گروپ.(سي) لائٽ مائڪرو گراف هڪ ڦڦڙن جي طومار ڏيکاريندي.ميگنائيزيشن: 100. ب: 400. (ڊي) ڳاڙهي ginseng ڪڍڻ واري گروپ ۾ تومور لوڊ.(اي) جگر اينزيم ALT جي پلازما جي سطح.(F) رينل اينزيم Cr جي پلازما ليول.ڊيٽا کي بيان ڪيو ويو آهي مطلب ± معياري انحراف.*پي <0.05.
هن مطالعي ۾ سڃاڻپ ڪيل ڳاڙهي ginseng ڪڍيون الٽرا پرفارمنس مائع ڪروميٽوگرافي ٽنڊيم ماس اسپيڪٽروميٽري (UPLC-MS/MS) پاران تجزيو ڪيو ويو هيٺين ginsenosides کي مقدار ڏيڻ لاءِ: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3. Rh2، F1، Rk1 ۽ Rg5.تجزين کي ماپڻ لاءِ استعمال ٿيندڙ UPLC ۽ MS حالتون اڳئين رپورٽ19 ۾ بيان ڪيون ويون آهن.UPLC-MS/MS chromatograms of چار red ginseng extracts تصوير 2A ۾ ڏيکاريل آھن.CRG (590.27 ± 41.28 μmol/L) (شڪل 2B) ۾ ڪل ginsenoside مواد ۾ اهم فرق هئا، جن ۾ سڀ کان وڌيڪ ڪل ginsenoside مواد.جڏهن انفرادي ginsenosides جو جائزو (شڪل 2C)، KRGB ٻين ginsenosides جي مقابلي ۾ G-Rg3 جي بلند ترين سطح ڏيکاريو (58.33 ± 3.81 μmol / L G-Rg3s لاء ۽ 41.56 ± 2.88 μmol / L G-Rg3r لاء).ڳاڙهو ginseng قسم (P <0.001).G-Rg3 stereoisomers G-Rg3r ۽ G-Rg3s جي هڪ جوڙي جي طور تي ٿئي ٿو، جيڪي ڪاربن 20 (Fig. 2D) تي هائيڊروڪسيل گروپ جي پوزيشن ۾ مختلف آهن.نتيجن مان ظاهر ٿئي ٿو ته G-Rg3r يا G-Rg3 شايد B (a) P-Induced ڪينسر ماؤس ماڊل ۾ اهم اينٽي ڪينسر جي صلاحيت رکي ٿي.
مختلف لال ginseng extracts ۾ ginsenosides جو مواد.(الف) UPLC-MS/MS chromatograms of چار red ginseng extracts.(ب) ظاهر ڪيل نڪتن ۾ ڪل ginsenoside مواد جو اندازو.(سي) انفرادي ginsenosides جو پتو لڳائڻ ۾ ليبل ٿيل extracts.(D) ginsenoside stereoisomers جي جوڙجڪ G-Rg3r ۽ G-Rg3s.ڊيٽا کي بيان ڪيو ويو آهي مطلب ± معياري انحراف جي ٽنهي تعين جي.*** پي <0.001.
UPLC-MS/MS مطالعي جي 20 هفتن جي علاج کان پوء آنت ۽ رت جي نموني ۾ ginsenosides جي مقدار جي ضرورت آهي.KRGB سان علاج رت ۾ صرف 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 جي موجودگي ڏيکاري ٿي.ڪو به باقي ginsenosides معلوم نه ڪيو ويو، غريب زباني بايو دستيابي کي ظاهر ڪري ٿو ۽ تنهن ڪري انهن ginsenosides جي نمائش کي گهٽايو.
کولن ايڊينو ڪارڪينوما سيل لائن Caco-2 مورفولوجيڪل ۽ بايو ڪيميڪل طور تي انساني آنڊن جي اپيٿيليل سيلز سان ملندڙ جلندڙ آهي، ان جي افاديت کي ظاهر ڪري ٿو انٽروڪيٽ ٽرانسپورٽ جو جائزو وٺڻ ۾ انٽيسٽينل اپيٿيليل رڪاوٽ جي پار.اهو تجزيو هڪ اڳوڻي مطالعي جي بنياد تي ڪيو ويو 20.انگ اکر 3A,B,C,D,E,F ڏيکارين ٿا نمائندن جون تصويرون G-Rg3r ۽ G-Rg3 جي ٽرانسسيلولر ٽرانسپورٽ جي هڪ Caco-2 monolayer ماڊل استعمال ڪندي.G-Rg3r يا G-Rg3 جي Transcellular ٽرانسپورٽ Caco-2 monolayers جي وچ ۾ بيسولٽرل کان apical پاسي (Pb-a) apical کان basolateral پاسي (Pa-b) جي ڀيٽ ۾ تمام گهڻي هئي.G-Rg3r لاءِ، معنيٰ Pa-b جي قيمت 0.38 ± 0.06 هئي، جيڪا 50 μmol/L verapamil سان علاج ڪرڻ کان پوءِ 0.73 ± 0.06 تائين وڌي وئي ۽ 100 μmol/L verapamil (p <0.01، ۽ 0.01) سان علاج کان پوءِ 1.14 ± 0.09 ٿي وئي. ترتيب سان شڪل 2).3A).G-Rg3 لاءِ مشاهدو ساڳئي نموني جي پيروي ڪئي (Fig. 3B)، ۽ نتيجن مان ظاهر ٿيو ته ويراپيمل علاج G-Rg3r ۽ G-Rg3 جي ٽرانسپورٽ کي وڌايو.Verapamil علاج جي نتيجي ۾ Pb-a ۽ G-Rg3r ۽ G-Rg3s efflux تناسب (Figure 3C,D,E,F) ۾ هڪ اهم گهٽتائي جي نتيجي ۾ ظاهر ٿئي ٿو ته verapamil علاج Caco-2 efflux سيلز ۾ ginsenoside مواد کي گھٽائي ٿو..
Caco-2 monolayers ۾ G-Rg3 جي Transcellular ٽرانسپورٽ ۽ هڪ rat perfusion assay ۾ آنت جي جذب.(الف) Caco-2 monolayer ۾ G-Rg3r گروپ جو Pa-b قدر.(ب) Pa-b قدر Caco-2 monolayer ۾ G-Rg3s گروپن جي.(سي) ڪيڪو-2 monolayer ۾ G-Rg3r گروپ جو Pb قدر.(ڊي) ڪيڪو-2 monolayer ۾ G-Rg3s گروپن جو Pb قدر.(E) هڪ Caco-2 monolayer ۾ G-Rg3r گروپن جي پيداوار جو تناسب.(F) هڪ Caco-2 monolayer ۾ G-Rg3 گروپن جي پيداوار جو تناسب.(G) G-Rg3r جي آنت جي جذب جو سيڪڙو چوڪن ۾ هڪ پرفيوشن انسائيڪلوپيڊيا ۾.(H) G-Rg3 جي آنت جي جذب جو سيڪڙو چوڪن ۾ پرفيوشن انسائيڪلوپيڊيا ۾.ويراپامل جي اضافي کان سواء پارمميتا ۽ جذب جو مقابلو ڪيو ويو.ڊيٽا بيان ڪيا ويا آهن مطلب ± معياري انحراف جي پنجن آزاد تجربن جي.*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001.
اڳئين ڪم 20 سان لاڳيتو، چوهڙن جي آرٿوپيڪ آنٽي پرفيوشن کي انجام ڏنو ويو ته اهو طئي ڪرڻ لاءِ ته ڇا ويراپامل علاج کان پوءِ آنت ۾ G-Rg3 جذب وڌي ٿو.انگ اکر 3G,H ڏيکاريو نمائندو پرفيوشن اسيسز جو جائزو وٺڻ لاءِ G-Rg3r ۽ G-Rg3 جي آنت جي جذب جي فيصد کي ڪينسر جي ماڊل جي چوٽن ۾ مٿي ڏنل وقتن دوران.50 μM verapamil سان علاج ڪرڻ کان پوءِ تقريبن 10٪ جي ڪمزور G-Rg3r جي اپٽيڪ جو ابتدائي سيڪڙو 20٪ کان وڌيڪ ۽ 100 μM ويراپامل سان علاج کان پوءِ 25٪ کان وڌيڪ ٿي ويو.اهڙي طرح، G-Rg3، جنهن ۾ 10٪ جي شروعاتي اپٽيڪ هئي، پڻ 50 μM verapamil سان علاج ڪرڻ کان پوء 20٪ کان مٿي ۽ 100 μM verapamil سان علاج ڪرڻ کان پوء تقريبا 30٪ جي چوٽي ڏيکاري ٿي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته verapamil ذريعي P-gp جي روڪٿام کي وڌائي ٿو. ڦڦڙن جي ڪينسر جي ماؤس ماڊل ۾ آنت جي G-جذب Rg3.
مٿي ڏنل طريقي موجب، B(a) P-Induced ڪينسر ماڊل چوٿون بي ترتيب طور ڇهن گروپن ۾ ورهايل هئا، جيئن شڪل 4A ۾ ڏيکاريل آهي.ڪنٽرول گروپ جي مقابلي ۾ G-Rg3 علاج گروپ ۾ ڪو به اهم وزن گھٽائڻ يا زهر جي ڪلينڪ نشانين جو مشاهدو نه ڪيو ويو (ڊيٽا نه ڏيکاريل آهي).علاج جي 20 هفتن کان پوء، هر مائوس جي ڦڦڙن کي گڏ ڪيو ويو.شڪل 4B مٿين علاج جي گروپن ۾ چوٿين ۾ macroscopic lung tumors ڏيکاري ٿو، ۽ شڪل 4C ھڪڙي نمائندي ٽيومر جو ھڪڙو نمائندو لائٽ مائڪرو گراف ڏيکاري ٿو.هر گروهه ۾ ٽامي جي بوجھ جي حوالي سان (تصوير 4D)، G-Rg3r ۽ G-Rg3s سان علاج ڪيل چوٿين لاء قيمتون 0.75 ± 0.29 mm3 ۽ 0.81 ± 0.30 mm3 هئا، جڏهن ته G-Rg3r لاء قدر علاج ڪيو ويو. سان -Rg3s هئا 1.63 ترتيب سان ±0.40 mm3.ڪنٽرول چوٿون (p <0.001)، اشارو ڪري ٿو ته G-Rg3 علاج چوٿين ۾ طومار بوجھ گھٽائي ٿو.ويراپم جي انتظاميه کي وڌيڪ گهٽائي وڌايو ويو آهي: ويراپميل + 0 0.30 ايم ايم 3 کان 0.230 ايم ايم 3 کان 0.230 ايم ايم 3 کان 0.230 ايم ايم 3 تائين گهٽجي ويا آهن mm3 ۾ G. -Rg3s-علاج ٿيل چوٿون (p <0.05)، اشارو ڪري ٿو ته verapamil شايد tumorigenesis تي G-Rg3 جي روڪڻ واري اثر کي وڌائي سگھي ٿي.طومار جو بار ڪنٽرول گروپ ۽ ويراپامل گروپ، G-Rg3r گروپ ۽ G-Rg3s گروپ، ۽ verapamil + G-Rg3r گروپ ۽ verapamil + G-Rg3s گروپ جي وچ ۾ ڪو خاص فرق نه ڏيکاريو ويو.ان کان علاوه، تشخيص ٿيل علاج سان لاڳاپيل ڪو به اهم جگر يا گردڪ زهر نه هئا (شڪل 4E، F).
G-Rg3 علاج ۽ پلازما يا آنت جي G-Rg3r ۽ G-Rg3 جي سطحن جي نشاندهي گروپن ۾ ٽومر بوجھ.(الف) تجرباتي ڊيزائن.(ب) مائوس جي ماڊل ۾ ميڪرو اسڪوپي ٽامي.طومار تير سان ظاهر ڪيا ويا آهن.ج: جي آر جي 3 آر.b: G-Rg3s.ج: G-Rg3r verapamil سان گڏ.d: G-Rg3 verapamil سان ميلاپ ۾.ڊي: ويراپامل.e: ڪنٽرول.(سي) ميگنائيزيشن تي ٽامي جو آپٽيڪل مائڪرو گراف.جواب: 100x.ب: 400X.(D) G-Rg3 + verapamil علاج جو اثر A/J چوٿين ۾ طومار جي بوجھ تي.(اي) جگر اينزيم ALT جي پلازما جي سطح.(F) رينل اينزيم Cr جي پلازما جي سطح.(G) G-Rg3r يا G-Rg3 جي پلازما جي سطح اشارو ڪيل گروپن جي.(H) G-Rg3r يا G-Rg3s جي سطح اشاري گروپن جي اندرين ۾.ڊيٽا کي بيان ڪيو ويو آهي مطلب ± معياري انحراف جي ٽنهي تعين جي.*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001.
B(a)P-Induced ڪينسر ماڊل چوٿون ۾ G-Rg3 ليولز UPLC-MS/MS پاران 20-هفتي جي علاج واري عرصي کان پوءِ طريقن جي سيڪشن ۾ بيان ڪيل طريقي مطابق.انگ اکر 4G ۽ H ڏيکاريو پلازما ۽ آنت جي G-Rg3 سطح، ترتيب سان.پلازما G-Rg3r ليولز 0.44 ± 0.32 μmol/L ۽ وڌا ويا 1.17 ± 0.47 μmol/L سان گڏ ويراپامل (p <0.001) جي انتظاميه سان، جڏهن ته آنڊن جي G-Rg3r ليولز 0.53 ± 0.08/0.08جڏهن verapamil سان ملائي، g وڌي 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001).G-Rg3 لاءِ، نتيجا ساڳي نموني جي پٺيان لڳا، جنهن مان ظاهر ٿئي ٿو ته verapamil علاج A/J چوٿين ۾ G-Rg3 جي زباني جيو دستيابي کي وڌايو.
HEL سيلز تي B (a) P ۽ G-Rg3 جي cytotoxicity جو جائزو وٺڻ لاء سيل وابستگي جو جائزو استعمال ڪيو ويو.HEL سيلز ۾ B (a) P پاران پيدا ڪيل سائٽوٽوڪسائيٽي شڪل 5A ۾ ڏيکاريل آهي، جڏهن ته G-Rg3r ۽ G-Rg3 جي غير زهرجي ملڪيت 5A ۽ 5B ۾ ڏيکاريل آهن.5B، C. G-Rg3 جي cytoprotective اثر جو جائزو وٺڻ لاء، B(a)P کي HEL سيلز ۾ G-Rg3r يا G-Rg3 جي مختلف ڪنسنٽريشن سان گڏ ڪيو ويو.جيئن ته شڪل 5D ۾ ڏيکاريل آهي، G-Rg3r 5 μM، 10 μM، ۽ 20 μM جي ڪنسنٽريشن تي سيل جي قابليت بحال ڪئي وئي 58.3٪، 79.3٪، ۽ 77.3٪، ترتيب سان.ساڳئي نتيجن کي G-Rg3s گروپ ۾ پڻ ڏسي سگھجي ٿو.جڏهن G-Rg3s جي ڪنسنٽريشن 5 µM، 10 µM ۽ 20 µM هئي، سيل وابستگي کي بحال ڪيو ويو 58.3٪، 72.7٪ ۽ 76.7٪، ترتيب سان (شڪل 5E).).BPDE-DNA اضافو جي موجودگي ايليسا کٽ استعمال ڪندي ماپ ڪئي وئي.اسان جا نتيجا ڏيکاريا ويا ته BPDE-DNA اضافو سطحون وڌايو ويو B (a) P-علاج ٿيل گروپ ۾ ڪنٽرول گروپ جي مقابلي ۾، پر G-Rg3 ڪو-علاج جي مقابلي ۾، BPDE-DNA اضافو سطح B (a) P گروپ ۾. علاج ٿيل گروپ ۾ بي، ڊي اين جي اضافو سطح خاص طور تي گھٽجي ويو.صرف B(a)P سان علاج جا نتيجا شڪل 5F ۾ ڏيکاريا ويا آهن (1.87 ± 0.33 بمقابله 3.77 ± 0.42 G-Rg3r لاءِ، 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 لاءِ G-Rg3s، p <0.001).
G-Rg3 ۽ B(a)P سان علاج ڪيل HEL سيلز ۾ سيل جي قابليت ۽ BPDE-DNA اضافو ٺهڻ.(الف) بي (ا) پي سان علاج ڪيل HEL سيلز جي قابليت.(ب) G-Rg3r سان علاج ڪيل HEL سيلز جي قابليت.(سي) G-Rg3 سان علاج ڪيل HEL سيلز جي قابليت.(ڊي) بي (اي) پي ۽ G-Rg3r سان علاج ڪيل HEL سيلز جي قابليت.(اي) بي (اي) پي ۽ G-Rg3 سان علاج ڪيل HEL سيلز جي قابليت.(F) HEL سيلز ۾ BPDE-DNA اضافو جي سطح B (a) P ۽ G-Rg3 سان علاج ڪيو ويو.ڊيٽا کي بيان ڪيو ويو آهي مطلب ± معياري انحراف جي ٽنهي تعين جي.*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001.
GST اينزيم جو اظهار 10 μM B (a) P ۽ 10 μM G-Rg3r يا G-Rg3s سان گڏ علاج کان پوء معلوم ڪيو ويو.اسان جا نتيجا ڏيکاريا ويا ته B(a) P GST اظهار کي دٻايو (59.7 ± 8.2٪ G-Rg3r گروپ ۾ ۽ 39 ± 4.5٪ G-Rg3s گروپ ۾)، ۽ B (a) P يا ته G-Rg3r سان لاڳاپيل هو. ، يا G-Rg3r سان، يا G-Rg3r سان.G-Rg3s سان گڏيل علاج GST اظهار کي بحال ڪيو.GST اظهار (103.7 ± 15.5٪ G-Rg3r گروپ ۾ ۽ 110 ± 11.1٪ G-Rg3s گروپ ۾، p <0.05 ۽ p <0.001، ترتيب سان، تصوير 6A، B، ۽ C).GST سرگرمي جو جائزو ورتو ويو سرگرمي جي ڪٽ استعمال ڪندي.اسان جا نتيجا ڏيکاريا ويا ته ميلاپ جي علاج واري گروپ ۾ B (a) P صرف گروپ جي مقابلي ۾ اعلي GST سرگرمي هئي (96.3 ± 6.6٪ بمقابله 35.7 ± 7.8٪ G-Rg3r گروپ ۾ 92.3 ± 6.5 G-Rg3r گروپ ۾. ).% بمقابله 35.7 ± 7.8٪ G-Rg3s گروپ ۾، p <0.001، شڪل 6D).
HEL سيلز ۾ GST ۽ Nrf2 جو اظهار B (a) P ۽ G-Rg3 سان علاج ڪيو ويو.(الف) مغربي بلٽنگ پاران GST جي اظهار جو پتو لڳائڻ.(B) HEL سيلز ۾ GST جو مقداري اظهار B (a) P ۽ G-Rg3r سان علاج ڪيو ويو.(سي) HEL سيلز ۾ GST جو مقداري اظهار B (a) P ۽ G-Rg3s سان علاج ڪيو ويو.(D) HEL سيلز ۾ GST سرگرمي B (a) P ۽ G-Rg3 سان علاج ڪيو ويو.(اي) مغربي بلٽنگ پاران Nrf2 اظهار جو پتو لڳائڻ.(F) HEL سيلز ۾ Nrf2 جو مقداري اظهار B (a) P ۽ G-Rg3r سان علاج ڪيو ويو.(G) HEL سيلز ۾ Nrf2 جو مقداري اظهار B (a) P ۽ G-Rg3s سان علاج ڪيو ويو.ڊيٽا کي بيان ڪيو ويو آهي مطلب ± معياري انحراف جي ٽنهي تعين جي.*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001.
B (a) P-induced tumorigenesis جي G-Rg3-ثالثي دٻائڻ ۾ شامل رستن کي واضح ڪرڻ لاء، Nrf2 اظهار جو جائزو ورتو ويو مغربي بلوٽنگ.جيئن ڏيکاريل انگن اکرن ۾ 6E،F،G، ڪنٽرول گروپ جي مقابلي ۾، صرف B(a)P علاج گروپ ۾ Nrf2 جي سطح گھٽجي وئي.جڏهن ته، B(a)P علاج گروپ جي مقابلي ۾، B(a) Nrf2 ليول PG-Rg3 گروپ ۾ وڌيا ويا (106 ± 9.5٪ G-Rg3r لاءِ 51.3 ± 6.8٪، 117 ± 6. 2٪ لاءِ. G-Rg3r بمقابلہ 41 ± 9.8٪ G-Rg3s لاءِ، p <0.01).
اسان Nrf2 جي حفاظتي ڪردار جي تصديق ڪئي Nrf2 اظهار کي دٻائڻ سان مخصوص نن interfering RNA (siRNA) استعمال ڪندي.Nrf2 knockdown جي تصديق ڪئي وئي مغربي بلاڪنگ (Fig. 7A، B).جيئن ته شڪل 7C،D ۾ ڏيکاريل آهي، B(a)P ۽ G-Rg3 سان HEL سيلز جي گڏيل علاج جي نتيجي ۾ B(a)P سان علاج جي مقابلي ۾ BPDE-DNA اضافو (1.47 ± 0.21) جي تعداد ۾ گهٽتائي ٿي. اڪيلو ڪنٽرول siRNA گروپ ۾.) G-Rg3r 4.13 ± 0.49 هو، G-Rg3s 1.8 ± 0.32 ۽ 4.1 ± 0.57، p <0.01).بهرحال، BPDE-DNA ٺهڻ تي G-Rg3 جي رڪاوٽ اثر Nrf2 دستڪ ڊائون ذريعي ختم ڪيو ويو.siNrf2 گروپ ۾، BPDE-DNA اضافو ٺاھڻ ۾ ڪو خاص فرق نه ھو B(a)P ۽ G-Rg3 ڪو-علاج ۽ B(a)P علاج اڪيلو (3.0 ± 0.21 G-Rg3r بمقابلہ 3.56 ± 0.32 لاءِ. ).G-Rg3r بمقابلہ 3.6 لاءِ G-Rg3s بمقابلہ ±0.45 بمقابلہ 4.0±0.37، p > 0.05).
HEL سيلز ۾ BPDE-DNA اضافو ٺهڻ تي Nrf2 دستڪ جو اثر.(A) Nrf2 knockdown جي تصديق ڪئي وئي مغربي بلٽنگ طرفان.(ب) Nrf2 بينڊ شدت جي مقدار.(سي) BPDE-DNA اضافو سطح تي Nrf2 جو اثر HEL سيلز ۾ B (a) P ۽ G-Rg3r سان علاج ڪيو ويو.(D) BPDE-DNA اضافو سطح تي Nrf2 جو اثر HEL سيلز ۾ B (a) P ۽ G-Rg3 سان علاج ڪيو ويو.ڊيٽا کي بيان ڪيو ويو آهي مطلب ± معياري انحراف جي ٽنهي تعين جي.*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001.
ھن مطالعي جو جائزو ورتو ويو مختلف ڳاڙھو ginseng ڪڍڻ جي بچاء واري اثرات جي ھڪڙي ماؤس ماڊل تي B (a) P-Induced lung Cancer، ۽ KRGB علاج خاص طور تي طومار جي بوجھ کي گھٽائي ڇڏيو.انهي ڳالهه تي غور ڪندي ته G-Rg3 هن ginseng extract ۾ سڀ کان وڌيڪ مواد آهي، tumorigenesis کي روڪڻ ۾ هن ginsenoside جو اهم ڪردار مطالعو ڪيو ويو آهي.ٻئي G-Rg3r ۽ G-Rg3 (G-Rg3 جا ٻه ايپيمر) خاص طور تي B(a) P-Induced ڪينسر جي ماؤس ماڊل ۾ طومار جي بوجھ کي گھٽائي ڇڏيو.G-Rg3r ۽ G-Rg3 ٽومر سيلز 21 جي اپوپوٽوسس کي متاثر ڪندي، ٽيومر جي واڌ کي روڪيندي، سيل جي چڪر 23 کي گرفتار ڪندي ۽ اينجيوجنسي 24 کي متاثر ڪندي اينٽي ڪينسر اثر پيدا ڪري ٿي.G-Rg3 کي پڻ ڏيکاريو ويو آهي سيلولر ميٽاساسس 25 کي روڪيو، ۽ G-Rg3 جي صلاحيت ڪيموٿراپي ۽ ريڊيوٿراپي جي اثرن کي وڌائڻ لاءِ 26,27 کي دستاويز ڪيو ويو آهي.Poon et al ظاهر ڪيو ته G-Rg3 علاج B (a) P28 جي جينٽوڪسڪ اثرات کي گھٽائي سگھي ٿو.هي مطالعو G-Rg3 جي علاج واري صلاحيت کي ماحولياتي ڪارڪينجنڪ ماليڪيولز کي نشانو بڻائڻ ۽ سرطان کي روڪڻ ۾ ڏيکاري ٿو.
انهن جي سٺي حفاظتي صلاحيت جي باوجود، ginsenosides جي ناقص زباني بايو دستيابي انهن ماليڪيولز جي ڪلينڪ استعمال لاءِ هڪ چئلينج بڻجي ٿي.rats ۾ ginsenosides جي زباني انتظاميه جي pharmacokinetic تجزيي ڏيکاري ٿي ته ان جي بايو دستيابي اڃا تائين 5٪ 29 کان گهٽ آهي.انهن تجربن مان ظاهر ٿيو ته 20 هفتن جي علاج واري عرصي کان پوء، صرف Rg5 جي رت جي سطح گهٽجي وئي.جيتوڻيڪ غريب جيو دستيابي جو بنيادي ميڪانيزم اڃا تائين واضح ڪيو وڃي ٿو، P-gp کي ginsenosides جي وهڪري ۾ ملوث سمجهيو ويندو آهي.اهو ڪم پهريون ڀيرو ظاهر ڪيو ويو آهي ته verapamil جي انتظاميه، هڪ P-gp بلاڪر، G-Rg3r ۽ G-Rg3s جي زباني بايو دستيابي کي وڌائي ٿو.اهڙيءَ طرح، هي نتيجو اهو ظاهر ڪري ٿو ته G-Rg3r ۽ G-Rg3s ان جي وهڪري کي منظم ڪرڻ لاءِ P-gp جي ذيلي ذخيري طور ڪم ڪن ٿا.
اهو ڪم ظاھر ڪري ٿو ته verapamil سان ميلاپ جو علاج ڦڦڙن جي ڪينسر جي ماؤس ماڊل ۾ G-Rg3 جي زباني بايو دستيابي کي وڌائي ٿو.هن ڳولا جي حمايت ڪئي وئي آهي G-Rg3 جي آنت جي ٽرانسسيولر ٽرانسپورٽ کي وڌائي P-gp بلاڪ تي، انهي ڪري ان جي جذب کي وڌايو.Caco2 سيلز ۾ Assays ڏيکاريا ويا ته verapamil علاج G-Rg3r ۽ G-Rg3s جي وهڪري کي گھٽائي ٿو جڏهن ته جھلي جي پارگميتا کي بهتر بڻائي ٿو.Yang et al پاران هڪ مطالعو.اڀياس ڏيکاريا آهن ته cyclosporine A (ٻيو P-gp blocker) سان علاج ginsenoside Rh2 جي جيو دستيابي کي 1٪ 20 جي بنيادي قيمت کان 30٪ کان وڌيڪ وڌائي ٿو.Ginsenosides مرکبات K ۽ Rg1 پڻ ڏيکاريا ساڳيا نتيجا 30,31.جڏهن verapamil ۽ cyclosporin A کي گڏ ڪيو ويو، Caco-2 سيلز ۾ مرڪب K جو وهڪرو خاص طور تي 26.6 کان گهٽجي ويو 3 کان گهٽ، جڏهن ته ان جي اندروني سطح 40-گنا 30 وڌي وئي.verapamil جي موجودگي ۾، Rg1 جي سطح rat lung epithelial cell ۾ وڌي وئي، ginsenoside efflux ۾ P-gp لاءِ ڪردار جو مشورو ڏئي ٿو، جيئن Meng et al.31 پاران ڏيکاريل آهي.بهرحال، verapamil ڪجهه ginsenosides (جهڙوڪ Rg1، F1، Rh1 ۽ Re) جي وهڪري تي ساڳيو اثر نه ڪيو آهي، اهو ظاهر ڪري ٿو ته اهي P-gp ذيلي ذخيري کان متاثر نه آهن، جيئن ليانگ ايٽ ال پاران ڏيکاريل آهي.32 .اهو مشاهدو ٻين ٽرانسپورٽرن جي شموليت سان لاڳاپيل ٿي سگهي ٿو ۽ متبادل ginsenoside جوڙجڪ.
ڪينسر تي G-Rg3 جي بچاءُ واري اثر جو ميکانيزم واضح ناهي.اڳوڻي اڀياس ڏيکاريا آهن ته G-Rg3 آڪسائيڊائٽي دٻاء ۽ سوزش کي گهٽائڻ سان ڊي اين اي جي نقصان ۽ اپوپٽوسس کي روڪي ٿو 16,33، جيڪو B (a) P-Induced tumorigenesis کي روڪڻ لاء بنيادي ميڪانيزم ٿي سگهي ٿو.ڪجهه رپورٽون ظاهر ڪن ٿيون ته B (a) P پاران پيدا ٿيندڙ جينوٽڪسائيٽي کي گهٽائي سگهجي ٿو فيز II اينزيمز کي ماڊل ڪرڻ سان BPDE-DNA34 ٺاهڻ لاءِ.GST هڪ عام مرحلو II اينزيم آهي جيڪو BPDE-DNA شامل ٿيڻ جي ٺهڻ کي روڪيندو آهي GSH جي BPDE جي پابند کي وڌائڻ سان، اهڙي طرح B(a) P35 پاران پيدا ٿيندڙ ڊي اين اي نقصان کي گھٽائي ٿو.اسان جا نتيجا ڏيکارين ٿا ته G-Rg3 علاج B(a)P-Induced cytotoxicity کي گھٽائي ٿو ۽ BPDE-DNA شامل ڪري ٿو HEL سيلز ۾ ٺهڻ ۽ ويٽرو ۾ GST اظهار ۽ سرگرمي کي بحال ڪري ٿو.جڏهن ته، اهي اثرات Nrf2 جي غير موجودگي ۾ غير حاضر هئا، اهو مشورو ڏئي ٿو ته G-Rg3 Nrf2 رستي ذريعي سائٽوپروٽيڪڪ اثرات پيدا ڪري ٿو.Nrf2 مرحلو II detoxification enzymes لاءِ ھڪڙو وڏو ٽرانسڪرپشن عنصر آھي جيڪو xenobiotics 36 جي ڪليئرنس کي فروغ ڏئي ٿو.Nrf2 رستي جي چالو ڪري ٿو cytoprotection ۽ گھٽائي ٿو ٽشو نقصان 37.ان کان علاوه، ڪيترن ئي رپورٽن جي حمايت ڪئي آهي Nrf2 جي ڪردار جي طور تي ڪارڪينوجنسيس ۾ ٽامر دٻائيندڙ 38.اسان جي مطالعي مان معلوم ٿئي ٿو ته G-Rg3 پاران Nrf2 رستي جي شموليت B(a)P-Induced genotoxicity ۾ B(a)P detoxification جي ڪري مرحلو II اينزائمز کي چالو ڪندي هڪ اهم ريگيوليٽري ڪردار ادا ڪري ٿي، ان ڪري tumorigenesis جي عمل کي روڪي ٿي.
اسان جو ڪم ginsenoside G-Rg3 جي اهم شموليت ذريعي چوٿين ۾ B (a) P-Induced lung Cancer کي روڪڻ ۾ ڳاڙهي ginseng جي صلاحيت کي ظاهر ڪري ٿو.هن ماليڪيول جي ناقص زباني بايو دستيابي ان جي ڪلينڪ ايپليڪيشن کي روڪي ٿي.بهرحال، هي مطالعو پهريون ڀيرو ڏيکاري ٿو ته G-Rg3 P-gp جو هڪ ذيلي ذخيرو آهي، ۽ هڪ P-gp انابيٽر جي انتظاميه G-Rg3 جي حياتياتي دستيابي کي وڌائي ٿو ويٽرو ۽ وييو ۾.G-Rg3 B(a)P-حوصلہ افزائي سائٽوٽوڪسائيٽي کي گھٽائي ٿو Nrf2 رستي کي منظم ڪندي، جيڪو شايد ان جي بچاء واري ڪارڪردگي لاء امڪاني ميڪانيزم ٿي سگھي ٿو.اسان جو مطالعو ڦڦڙن جي ڪينسر جي روڪٿام ۽ علاج لاءِ ginsenoside G-Rg3 جي صلاحيت جي تصديق ڪري ٿو.
ڇهه هفتا پراڻا عورت A/J چوها (20 ± 1 g) ۽ 7-هفتي پراڻا نر Wistar rats (250 ± 20 g) جيڪسن ليبارٽري (بار هاربر، يو ايس اي) ۽ ووهان انسٽيٽيوٽ آف زولاجي مان حاصل ڪيا ويا.يونيورسٽي (ووهان، چين).چائنيز ٽائپ ڪلچر ڪليڪشن سينٽر (ووهان، چين) اسان کي Caco-2 ۽ hEL سيلز فراهم ڪيو.Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) B(a)P ۽ tricaprine جو ھڪڙو ذريعو آھي.صاف ٿيل ginsenosides G-Rg3r ۽ G-Rg3s، dimethyl sulfoxide (DMSO)، CellTiter-96 proliferation assay kit (MTS)، verapamil، Minimal Essential Medium (MEM)، ۽ fetal bovine serum (FBS) Chengdu Must Bio-Technology مان خريد ڪيا ويا. .Co., Ltd.(چينگدو، چين).QIAamp DNA مني کٽ ۽ BPDE-DNA ايڊڊڪٽ ELISA ڪٽ Qiagen (Stanford, CA, USA) ۽ Cell Biolabs (San Diego, CA, USA) کان خريد ڪيا ويا.GST سرگرمي پرکي کٽ ۽ ڪل پروٽين جي آسي کٽ (معياري BCA طريقو) Solarbio (بيجنگ، چين) کان خريد ڪيو ويو.سڀ لال ginseng extracts Mingyu ليبارٽري 7 ۾ ذخيرو ٿيل آهن. هانگ ڪانگ بيپٽسٽ يونيورسٽي (هانگ ڪانگ، چين) ۽ ڪوريا ڪينسر سينٽر (سيئول، ڪوريا) سي آر جي ڪڍڻ جا تجارتي ذريعا آهن ۽ مختلف ڪورين اصل (KRGA، KRGB سميت) جي مختلف لال ginseng اقتباس. ۽ KRGC).ڳاڙهو ginseng 6 سالن جي تازي ginseng جي پاڙ مان ٺهيل آهي.ريڊ ginseng Extract ginseng کي پاڻي سان ٽي دفعا ڌوئڻ سان حاصل ڪيو ويندو آهي، پوءِ آبي نچوڙ کي مرڪوز ڪري، ۽ آخر ۾ ginseng extract پائوڊر حاصل ڪرڻ لاءِ گهٽ درجه حرارت تي سڪي ويندو آهي.اينٽي باڊيز (اينٽي اين آر ايف 2، اينٽي GST، ۽ β-ايڪٽين)، هارسريڊش پيرو آڪسائيڊس-ڪنججٽيڊ اينٽي ريبيٽ امونگلوبولين G (IgG)، ٽرانسفيشن ريگينٽ، ڪنٽرول siRNA، ۽ Nrf2 siRNA سانتا کروز بايو ٽيڪنالاجي (سانتا کروز) کان خريد ڪيا ويا. .)، آمريڪا).
Caco2 ۽ hEL سيلز کي 100 mm2 سيل ڪلچر ڊشز ۾ ڪلچر ڪيو ويو MEM سان گڏ 10% FBS 37 °C تي 5% CO2 جي نمي واري ماحول ۾.علاج جي حالتن جي اثر کي طئي ڪرڻ لاء، HEL سيلز B(a) P ۽ G-Rg3 جي مختلف ڪنسنٽريشن سان MEM ۾ 48 h لاءِ پکڙيل هئا.سيلز وڌيڪ تجزيو يا گڏ ڪري سگھجن ٿا سيلن کان خالي نڪتل تيار ڪرڻ لاءِ.
سڀ تجربا Tongji ميڊيڪل ڪاليج، Huazhong يونيورسٽي آف سائنس ۽ ٽيڪنالاجي جي تجرباتي جانورن جي اخلاقيات ڪميٽي پاران منظور ڪيا ويا (منظوري نمبر 2019؛ رجسٽريشن نمبر 4587TH).سڀئي تجربا لاڳاپيل هدايتن ۽ ضابطن جي مطابق ڪيا ويا، ۽ مطالعو جانورن جي تحقيق جي مطابق ڪيو ويو: رپورٽنگ آف ان وييو تجربو (ARRIVE) هدايتون.اٺ هفتا پراڻا A/J چوٿون پهريون ڀيرو intraperitoneally B(a)P سان tricaprine محلول (100 mg/kg, 0.2 ml) ۾ داخل ڪيا ويا.هڪ هفتي کان پوء، چوٿون بي ترتيب طور تي ڪنٽرول گروپن ۽ مختلف علاج گروپن ۾ ورهايل هئا، هر گروپ ۾ 15 چوٿون، ۽ هڪ ڏينهن ۾ هڪ ڀيرو گڏ ڪيو ويو.علاج جي 20 هفتن کان پوء، جانورن کي CO2 asphyxia جي ذريعي قربان ڪيو ويو.ڦڦڙن کي گڏ ڪيو ويو ۽ 24 ڪلاڪن لاء مقرر ڪيو ويو.هر ڦڦڙن لاءِ هر هڪ خوردبيني خوردبيني جي هيٺان سطحي ٽيمر ۽ انفرادي ٽيمر جي ماپ جو تعداد مقرر ڪيو ويو.تومور جي مقدار جو تخمينو (V) ھيٺ ڏنل بيان کي استعمال ڪندي ڳڻيو ويو: V (mm3) = 4/3πr3، جتي r ٽمور قطر آھي.چوٿون جي ڦڦڙن ۾ سڀني طومار جي مقدار جو خالص مجموعو مجموعي ٽيمر جي مقدار جي نمائندگي ڪري ٿو، ۽ هر گروپ ۾ سراسري مجموعي ٽومر حجم طومار لوڊ جي نمائندگي ڪري ٿو.سڄو رت ۽ آنت جا نمونا گڏ ڪيا ويا ۽ −80 ° C تي UPLC-MS/MS جي تعين لاءِ محفوظ ڪيا ويا.سيرم گڏ ڪيو ويو ۽ هڪ خودڪار ڪيمسٽري تجزيي کي استعمال ڪيو ويو alanine aminotransferase (ALT) ۽ سيرم creatinine (Cr) ليول جو تجزيو ڪرڻ لاءِ جگر ۽ گردئن جي ڪم جو جائزو وٺڻ لاءِ.
گڏ ڪيل نمونا کولڊ اسٽوريج مان ڪڍيا ويا، ڳريل، وزن، ۽ ٽيوب ۾ رکيا ويا جيئن مٿي بيان ڪيو ويو آهي.ان ۾ شامل ڪيو ويو 0.5 μM phlorizin (اندروني معيار) 0.8 ml ميٿانول حل ۾.پوءِ ٽشو کي ٽائيسو-ٽيئر استعمال ڪندي هڪجهڙائي ڪئي وئي ۽ هوموجنيٽ کي بعد ۾ 1.5 ملي ميٽر مائڪرو سينٽريفيوج ٽيوب ۾ منتقل ڪيو ويو.مرکب کي 15500 rpm تي 15 منٽن لاء سينٽرفيوج ڪيو ويو.1.0 ml supernatant کي هٽائڻ کان پوء، نائيٽروجن سان سڪي.وصولي لاءِ ميٿانول جا ٻه سئو مائڪليٽر استعمال ڪيا ويا.رت گڏ ڪيو ويندو آهي ۽ هڪ لڪير تي پروسيس ڪيو ويندو آهي ۽ سڀني ماپن جي حوالي سان استعمال ڪيو ويندو آهي.
ويراپامل جي اضافي سان G-Rg3 ٽرانسپورٽ جي امڪاني واڌ جو اندازو لڳائڻ لاءِ 24-سٺي ٽرانس ويل پليٽس کي 1.0 × 105 Caco-2 سيلز في کوھ سان سيڊ ڪيو ويو.ڪلچر جي 3 هفتن کان پوء، سيلز HBSS سان ڌوئي ويا ۽ 37 ° C تي اڳ ۾ رکيا ويا.400 μL جو 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r، G-Rg3s، يا 50 يا 100 μM verapamil سان گڏ هڪ مرکب) monolayer جي basolateral يا apical پاسي تي لڳايو ويو، ۽ HBSS حل جو 600 μL ٻئي ۾ شامل ڪيو ويو. طرف.100 µl ڪلچر ميڊيم مقرر ڪيل وقتن تي گڏ ڪريو (0، 15، 30، 45، 60، 90 ۽ 120 منٽ) ۽ شامل ڪريو 100 µl HBSS جو مقدار ٺاهڻ لاءِ.UPLC-MS/MS پاران دريافت ٿيڻ تائين نمونا −4 °C تي محفوظ ڪيا ويا.اظهار Papp = dQ/(dT × A × C0) استعمال ڪيو ويندو آهي ظاھر unidirectional apical ۽ basolateral permeability ۽ ان جي برعڪس (Pa-b ۽ Pb-a، ترتيب سان)؛dQ/dT ڪنسنٽريشن ۾ تبديلي آهي، A (0.6 cm2) monolayer جي مٿاڇري واري ايراضي آهي، ۽ C0 ابتدائي ڊونر ڪنسنٽريشن آهي.وهڪري جو تناسب Pb-a/Pa-b جي حساب سان ڳڻيو ويندو آهي، جيڪو مطالعي جي دوا جي وهڪري جي شرح جي نمائندگي ڪري ٿو.
نر ويسٽار چوهڙن کي 24 ڪلاڪن تائين روزو رکيو ويو، صرف پاڻي پيتو، ۽ 3.5٪ پينٽوباربيٽل محلول جي انٽري وينس انجيڪشن سان بي هوش ڪيو ويو.intubated سلڪون ٽيوب ۾ duodenum جي آخر ۾ داخل ٿيڻ جي طور تي ۽ ileum جي آخر ۾ نڪرڻ جي طور تي آهي.0.1 ml/min جي وهڪري جي شرح تي isotonic HBSS ۾ 10 µM G-Rg3r يا G-Rg3s سان انليٽ کي پمپ ڪرڻ لاءِ پرسٽالٽڪ پمپ استعمال ڪريو.50 μM يا 100 μM جي مرڪب کي 10 μM G-Rg3r يا G-Rg3s ۾ شامل ڪندي verapamil جي اثر جو اندازو لڳايو ويو.UPLC-MS/MS پرفيوشن جي شروعات کان پوءِ 60، 90، 120، ۽ 150 منٽن تي وقت جي پوائنٽن تي گڏ ڪيل پرفيوشن نڪتن تي ڪيو ويو.جذب جو سيڪڙو فارمولا % absorption = (1 - Cout/Cin) × 100٪؛آئوٽ ليٽ ۽ انليٽ تي G-Rg3 جو ڪنسنٽريشن Cout ۽ Cin جي ترتيب سان ظاهر ڪيو ويو آهي.
hEL سيلز کي 96-سٺي پليٽن ۾ 1 × 104 سيلز جي کثافت تي هر چڱيءَ ۾ ٻج ڪيو ويو ۽ B (a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) يا G-Rg3 سان علاج ڪيو ويو DMSO ۾. .ان کان پوء دوائن کي ڪلچر وچولي سان مختلف ڪنسنٽريشن (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) کي 48 ڪلاڪن دوران گھٽايو ويو.تجارتي طور تي دستياب MTS اسي کٽ استعمال ڪندي، سيلز کي معياري پروٽوڪول جي تابع ڪيو ويو ۽ پوء 490 nm تي مائڪروپليٽ ريڊر استعمال ڪندي ماپ ڪيو ويو.B(a)P (10 μM) ۽ G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) سان گڏ علاج ڪيل گروپن جي سيل وابستگي جي سطح جو جائزو ورتو ويو مٿين طريقي جي مطابق ۽ غير علاج ٿيل گروپ جي مقابلي ۾.
hEL سيلز 1 × 105 سيلز جي کثافت تي 6-سٺي پليٽن ۾ ٻج ڪيا ويا ۽ 10 μM G-Rg3 جي موجودگي يا غير موجودگي ۾ 10 μMB(a)P سان علاج ڪيو ويو.48 ڪلاڪن جي علاج کان پوءِ، ٺاهيندڙ جي پروٽوڪول موجب QIAamp DNA Mini Kit استعمال ڪندي HEL سيلز مان ڊي اين اي ڪڍيو ويو.BPDE-DNA اضافو جي ٺهڻ کي BPDE-DNA اضافو ELISA کٽ استعمال ڪندي معلوم ڪيو ويو.450 nm تي جذب کي ماپڻ سان BPDE-DNA اضافن جي لاڳاپي سطحن کي ماپ ڪيو ويو مائڪروپليٽ ريڊر استعمال ڪندي.
hEL سيلز کي 96-سٺي پليٽن ۾ 1 × 104 سيلز جي کثافت تي هر چڱيءَ طرح ٻج ڪيو ويو ۽ 10 μM (a)P سان 48 h لاءِ 10 μM G-Rg3 جي غير موجودگي يا موجودگي ۾ علاج ڪيو ويو.ٺاهيندڙ جي پروٽوڪول جي مطابق GST سرگرمي تجارتي GST سرگرمي assay کٽ استعمال ڪندي ماپ ڪئي وئي.450 nm تي هڪ مائڪروپليٽ ريڊر استعمال ڪندي جذب سان لاڳاپيل GST چالو ڪيو ويو.
HEL سيلز کي برفاني سرد ​​PBS سان ڌوئي ويو ۽ پوءِ ريڊيائيميونوپريسيپيٽيشن ايسي بفر استعمال ڪندي پروٽيز انابيٽرز ۽ فاسفيٽس انابيٽرز تي مشتمل ڪيو ويو.پروٽين جي مقدار جي تصديق ڪرڻ کان پوء، مجموعي پروٽين جي پراڊڪٽ کٽ استعمال ڪندي، هر نموني ۾ 30 μg پروٽين کي 12٪ SDS-PAGE پاران الڳ ڪيو ويو ۽ اليڪٽرروفورسس ذريعي PVDF جھلي ڏانهن منتقل ڪيو ويو.جھلين کي 5٪ اسڪيم کير سان بند ڪيو ويو ۽ رات جو 4 ° C تي پرائمري اينٽي باڊيز سان گڏ ڪيو ويو.هارسريڊش پيرو آڪسائيڊس-ڪنجوگيٽ ٿيل ثانوي اينٽي باڊيز سان انڪيوبيشن کان پوءِ، بائنڊنگ سگنل کي ڏسڻ لاءِ وڌايل ڪيميلومينينس ريجنٽ شامل ڪيا ويا.ImageJ سافٽ ويئر استعمال ڪندي هر پروٽين بينڊ جي شدت کي مقدار ۾ وڌايو ويو.
GraphPad Prism 7.0 سافٽ ويئر استعمال ڪيو ويو سڀني ڊيٽا کي تجزيو ڪرڻ لاء، بيان ڪيو ويو مطلب ± معياري انحراف.علاج جي گروپن جي وچ ۾ تبديلي جو جائزو ورتو ويو شاگردن جي ٽي ٽيسٽ يا ويرينس جي هڪ طرفي تجزيي کي استعمال ڪندي، P قدر سان <0.05 انگن اکرن جي اهميت کي ظاهر ڪري ٿو.
هن مطالعي دوران حاصل ڪيل يا تجزيو ڪيل سڀئي ڊيٽا هن شايع ٿيل آرٽيڪل ۽ اضافي معلومات فائلن ۾ شامل آهن.
Torre، LA، Siegel، RL ۽ Jemal، A. ڦڦڙن جي ڪينسر جا انگ اکر.فعلختم ٿيل.دوا.حياتيات.893، 1-19 (2016).
Hecht، S. تمباکو ڪارڪينوجن، انهن جي بايو مارڪرز ۽ تمباکو-حوصلہ افزائي ڪينسر.نيٽ.ڪينسر پادري.3، 733-744 (2003).
فلپس، ڊي ايڇ ۽ وينٽ، ايس ڊي اين اي ۽ پروٽين کي انساني بافتن ۾ شامل ڪري ٿو جيڪو تمباکو جي تماڪ جي نمائش جي نتيجي ۾.بين الاقواميت.جي ڪينسر.131، 2733-2753 (2012).
Yang Y.، Wang Y.، Tang K.، Lubet RA ۽ Yu M. Effect of Houttuynia cordata and silibinin on benzo(a) pyrene-induced lung tumorigenesis in A/J.ڪينسر 7، 1053-1057 (2005).
تانگ، W. et al.Anticancer قدرتي پيداوار چيني دوائن جي مواد کان ڌار.جبڙودوا.6، 27 (2011).
يانگ، Y. وغيره.پوليفينون اي، ريڊ ginseng، ۽ ريپامائسن جي افاديت بينزو (a) پيرين-حوصلہ افزائي ڦڦڙن جي ٽومرجنيسس تي A / J چوٿين ۾.ڪينسر 8، 52-58 (2006).
وانگ، سي زي، اينڊرسن، ايس، دو، ڊبليو، هي، ٽي ايس ۽ يوان، ڪي ايس ريڊ، ڪينسر جي علاج ۾ شموليت.جبڙوجي نٽدوا.14، 7-16 (2016).
آمريڪي ginseng جي پاڙن ۽ پنن ۾ لي، ٽي ايس، مززا، جي، ڪوٽريل، اي ايس ۽ گاو، ايل Ginsenosides.جي زرعيکاڌي جي ڪيمسٽري.44، 717-720 (1996).
Attele AS، Wu JA ۽ Yuan KS فارماسولوجي آف ginseng: ڪيترائي اجزاء ۽ ڪيترائي اثر.حياتياتي ڪيمسٽري.فارماسولوجي.58، 1685-1693 (1999).


پوسٽ ٽائيم: سيپٽمبر-17-2023