Faafetai mo le asiasi ile Nature.com.Ole lomiga ole su'esu'ega o lo'o e fa'aogaina e fa'atapula'aina le lagolago a le CSS.Mo fa'ai'uga sili, matou te fautuaina le fa'aogaina o se fa'afouga fou o lau su'esu'ega (po'o le tapeina o le fa'aogaina i le Internet Explorer).I le taimi nei, ina ia mautinoa le lagolago faifaipea, o loʻo matou faʻaalia le saite e aunoa ma le siiina poʻo le JavaScript.
O le ginseng mumu sa fa'aaogaina i vaila'au masani a Asia mo le faitau selau o tausaga.I lenei suʻesuʻega, na matou iloiloina ai le gafatia o ituaiga e fa o ginseng mumu (Saina red ginseng, Korean red ginseng A, Korean red ginseng B, ma Korean red ginseng C) ola i itulagi eseese e taofia ai le fausiaina ma le tuputupu aʻe o le mama e aʻafia ai carcinogen. tuma.Sa faia se su'ega benzo(a)pyrene (B(a)P) i isumu A/J, ma o le ginseng mumu Korea B na maua e sili ona aoga i le fa'aitiitia o le mamafa o le tumo i ituaiga e fa o ginseng mumu.E le gata i lea, na matou suʻesuʻeina mea o loʻo i totonu o ginsenosides eseese (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ma Rg5) i faʻaputuga mumu mumu e fa ma maua ai le ginseng mumu Korea B. le maualuga maualuga o le ginsenoside Rg3 (G-Rg3), o loʻo fautua mai ai e mafai e le G-Rg3 ona faia se sao taua i lona aoga faʻamalosi.O lenei galuega o loʻo faʻaalia ai o le G-Rg3 e maualalo le bioavailability.Ae ui i lea, ina ua tuʻufaʻatasia le G-Rg3 ma le P-gp inhibitor verapamil, o le faʻafefe o le G-Rg3 i totonu o le Caco-2 na faʻaitiitia, o le fua o le intestinal absorption o le G-Rg3 na faʻateleina i se faʻataʻitaʻiga iole, ma G-Rg3. sa faateleina.I totonu o sela Caco-2, o le tafe mai o le Rg3 e faʻaitiitia, ma le maualuga o le Rg3 faʻaititia.O le G-Rg3 ua faʻateleina i totonu o le iniseti ma le plasma, ma o lona gafatia e puipuia ai tumo e faʻaleleia foi i se faʻataʻitaʻiga o le iole o le B (a) P-induced tumorigenesis.Na matou iloa foi o le G-Rg3 na faʻaitiitia ai le B (a) P-faʻaosoina cytotoxicity ma le faʻapipiʻiina o DNA i totonu o sela o le tino, ma toe faʻafoʻisia le faʻaaliga ma le gaioiga o le vaega II enzymes e ala i le auala Nrf2, lea e mafai ona fesoʻotaʻi ma le faʻaogaina o le gaioiga. o G fa'alavelave -Rg3..E uiga i le tulai mai o tuma mama.O la matou suʻesuʻega o loʻo faʻaalia ai se sao taua mo le G-Rg3 i le tulimataʻiina o le tino mama i faʻataʻitaʻiga o isumu.O le fa'aogaina o le gutu o lenei ginsenoside e fa'aleleia e ala i le fa'atatauina o le P-glycoprotein, fa'atagaina le mole e fa'atino a'afiaga o le kanesa.
O le ituaiga sili ona taatele o le kanesa o le tino o le kanesa o le mama e le o ni sela laiti (NSCLC), o se tasi lea o mafuaʻaga autu o le maliu o le kanesa i Saina ma Amerika i Matu1,2.O le mea autu e fa'atuputeleina ai le lamatiaga o le atia'e o le kanesa o le mama sela e le o ni sela laiti o le ulaula.O le asu sikaleti e sili atu i le 60 mea e maua ai le tino, e aofia ai le benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrosamines, ma radioactive isotopes mai le pala o radon.3 Polycyclic aromatic hydrocarbons B(a)P o le mafuaaga autu o le oona i le sikaleti asu.Pe a faʻaalia i le B (a) P, o le cytochrome P450 e liua i le B (a) P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), lea e tali atu i le DNA e fausia ai le BPDE-DNA faʻaopoopo 4. E le gata i lea, o nei mea. fa'aopoopo e fa'aosoina ai le tumorigenesis o le mama i isumu ma le tulaga o le tumo ma le su'esu'ega e tutusa ma le tino o le tagata5.O lenei vaega e fa'ata'ita'iina ai le kanesa o le mama e fa'aosoina e le B(a)P o se faiga talafeagai mo le su'esu'eina o mea fa'afefiloi ma mea e mafai ona fa'ama'i ai le kanesa.
O se tasi auala e mafai ona puipuia ai le atinaʻeina o le kanesa o le mama i vaega e maualuga le lamatiaga, aemaise lava tagata ulaula, o le faʻaaogaina lea o vailaʻau chemopreventive e taofia ai le atinaʻeina o manua neoplastic intraepithelial ma puipuia ai lo latou alualu i luma mulimuli ane i le maʻi.O su'esu'ega a manu e fa'aalia ai e aoga tele vaila'au fa'ama'i fa'ama'i.O la matou lipoti talu ai7 na faʻaalia ai le lelei o le puipuia o le ginseng mumu ile kanesa o le mama.O lenei vao na fa'aaogaina mo le tele o seneturi i vaila'au masani a Asia e fa'aumi ai le ola ma le soifua maloloina, ma ua fa'amauina e iai a'afiaga o le tumor8.
O le vaega malosi o le ginseng o le ginsenoside, lea e faʻaaogaina e avea o se faʻailoga tuʻufaʻatasia e iloilo ai le lelei o faʻasologa o ginseng.Ole su'esu'ega fa'atatau ole fa'amama ginseng e masani ona aofia ai le fa'aogaina o le tele o ginsenosides, e aofia ai RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, ma Rc9,10.Ginsenosides e itiiti le fa'aogaina ile falema'i ona o le le lelei ole tu'ugutu ole avanoa11.E ui lava e le o manino le masini mo lenei bioavailability le lelei, o le faʻafefe o ginsenosides e mafua mai i le P-glycoprotein (P-gp)12 atonu o le mafuaʻaga lea.P-gp o se tasi o felauaiga efflux sili ona taua i le ATP-binding casette transporter superfamily, lea e faʻaaogaina ai le malosi o le ATP hydrolysis e faʻasaʻo ai mea intracellular i totonu o le siosiomaga i fafo.P-gp fe'avea'i e masani ona fa'asalalau lautele i totonu o le inumaga, fatuga'o, ate ma le fai'ai toto13.O le P-gp e taua tele i le faʻaogaina o le intestinal, ma o le faʻasaina o le P-gp e faʻateleina ai le faʻaogaina o le gutu ma le maua o nisi vailaʻau faʻamaʻi12,14.O faʻataʻitaʻiga o inhibitors na faʻaaogaina muamua i tusitusiga o le verapamil ma le cyclosporine A15.O lenei galuega e aofia ai le faʻavaeina o se faiga o isumu mo le suʻesuʻeina o le kanesa o le mama e faʻaosoina B(a)P e iloilo ai le gafatia o eseʻeseʻese mumu ginseng extracts mai Saina ma Korea e aʻafia ai maʻi leaga.O fa'amaumauga sa su'esu'eina ta'ito'atasi e iloa ai ginsenosides fa'apitoa e ono a'afia ai le tino.Na fa'aaoga Verapamil e fa'atatau i le P-gp ma fa'aleleia atili le fa'aogaina o le tu'ugutu ma le aoga o togafitiga ole ginsenosides e fa'atatau i le kanesa.
O le auala e faʻaogaina ai e le ginseng saponins aʻafiaga i le carcinogenesis e tumau pea le le manino.O suʻesuʻega ua faʻaalia ai o ginsenosides eseese e mafai ona faʻaitiitia le faʻaleagaina o DNA e mafua mai i le tino e ala i le faʻaitiitia o le faʻamaʻi faʻamaʻi ma le faʻagaoioia o enzymes detoxification vaega II, ma puipuia ai le faaleagaina o sela.Glutathione S-transferase (GST) ose vaega masani II enzyme e manaʻomia e faʻaitiitia ai le faʻaleagaina o DNA e mafua mai i carcinogens17.Nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) o se faʻamatalaga taua tele e faʻatonutonu ai le redox homeostasis ma faʻagaoioia le faʻaaliga o le vaega II enzymes ma cytoprotective antioxidant responses18.O a matou suʻesuʻega na suʻesuʻeina ai foʻi aʻafiaga o ginsenosides faʻamaonia i le faʻaitiitia o le B (a) P-induced cytotoxicity ma le BPDE-DNA adduct formation, faʻapea foʻi ma le faʻaosoina o le vaega II enzymes e ala i le faʻaogaina o le auala Nrf2 i sela masani mama.
O le fa'atuina o se fa'ata'ita'iga o le isumu o le kanesa fa'aoso B(a)P e tutusa ma galuega muamua5.Ata 1A o loʻo faʻaalia ai le faʻataʻitaʻiga o le 20-vaiaso togafitiga o se faʻataʻitaʻiga o le kanesa o le isumu na faʻaosoina e le B(a)P, vai (pulea), Chinese red ginseng extract (CRG), Korean red ginseng extract A (KRGA), ma Korea mumu. ginseng.Aveese B (KRGB) ma Korean Red Ginseng Extract C (KRGC).Ina ua maeʻa le 20 vaiaso o togafitiga o le ginseng mumu, na ositaulagaina isumu ile CO2 asphyxiation.O le Ata 1B o lo'o fa'aalia ai tuma o le mama macroscopic i manu o lo'o togafitia i ituaiga eseese o ginseng mumu, ma o le Ata 1C o lo'o fa'aalia ai se fa'ata'ita'iga mama mama o se fa'ata'ita'iga tumo.O le mamafa o le tumo o manu na togafitia e KRGB (1.5 ± 0.35) na maualalo ifo nai lo manu faʻatonutonu (0.82 ± 0.2, P <0.05), e pei ona faʻaalia i le Ata 1D.O le averesi tikeri o le taofiofia uta o le tumo sa 45%.O isi vaega o le ginseng mumu na fa'ata'ita'iina e le'i fa'aalia ai ni suiga taua i le mamafa o le tuma (P > 0.05).E leai ni a'afiaga iloga na matauina i le fa'ata'ita'iga o le isumu i le 20 vaiaso o togafitiga o le ginseng mumu, e aofia ai le leai o se suiga i le mamafa o le tino (fa'amatalaga e le o fa'aalia) ma leai se ate po'o fatuga'o oona (Ata 1E, F).
O le vaega o le ginseng mumu e togafitia ai le tuputupu a'e o le tuma o le mama i isumu A/J.(A) Fuafuaga fa'ata'ita'i.(B) Tula mama tetele i se fa'ata'ita'iga o isumu.O le toto e faʻaalia i aū.a: vaega ginseng mumu Saina.b: vaega A o ginseng mumu Korea.c: Korean red ginseng group B. d: Korean red ginseng group C. d: Pulea vaega.(C) Malamalama fa'aitiotini fa'aalia se tuma mama.Faʻateleina: 100. b: 400. (D) Tumor uta i le vaega mumu ginseng extract.(E) Tulaga plasma o le ate enzyme ALT.(F) Tulaga o le toto ole enzyme Cr.O faʻamaumauga o loʻo faʻaalia o le uiga ± masani masani.*P <0.05.
O faʻamatalaga o le ginseng mumu na faʻaalia i lenei suʻesuʻega na suʻesuʻeina e le ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) e faʻatusatusa ai ginsenosides nei: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3 , Rh2, F1, Rk1 ma Rg5.O tulaga UPLC ma MS na fa'aaogaina e fua ai su'esu'ega sa fa'amatalaina i se lipoti talu ai19.UPLC-MS/MS chromatograms o fa'aputuga mumu ginseng mumu o lo'o fa'aalia i le Ata 2A.Sa i ai ni eseesega taua i le aofaʻi o ginsenoside, faʻatasi ai ma le maualuga o le aofaʻi o ginsenoside i le CRG (590.27 ± 41.28 μmol / L) (Ata 2B).Pe a suʻesuʻeina ginsenosides taʻitasi (Ata 2C), KRGB na faʻaalia le maualuga maualuga o le G-Rg3 faʻatusatusa i isi ginsenosides (58.33 ± 3.81 μmol / L mo G-Rg3s ma le 41.56 ± 2.88 μmol / L mo G -Rg3r).L).ituaiga ginseng mumu (P <0.001).G-Rg3 e tupu o se paipa o stereoisomers G-Rg3r ma G-Rg3s, lea e ese i le tulaga o le vaega hydroxyl i carbon 20 (Fig. 2D).O fa'ai'uga o lo'o fa'ailoa mai ai o le G-Rg3r po'o le G-Rg3 atonu e iai sona malosi fa'ama'i fa'ama'i i se fa'ata'ita'iga o le isumu o le kanesa e fa'aosoina B(a)P.
O mea o lo'o i totonu o ginsenosides i vaega eseese o le ginseng mumu.(A) UPLC-MS/MS chromatograms o fa'aputuga mumu ginseng mumu.(B) Fuafuaga ole aofa'i ole ginsenoside i totonu o fa'amatalaga fa'ailoa.(C) Su'esu'eina o ginsenosides ta'itasi i fa'ailoga fa'ailoga.(D) Fa'atulagaina o ginsenoside stereoisomers G-Rg3r ma G-Rg3s.O fa'amaumauga o lo'o fa'aalia o le uiga ± fa'avasegaina o fa'ailoga fa'atolu.***P <0.001.
O le suʻesuʻega a le UPLC-MS/MS e manaʻomia ai le faʻatusatusaina o ginsenosides i totonu ole intestinal ma toto faʻataʻitaʻiga pe a uma le 20 vaiaso o togafitiga.Togafitiga ma le KRGB na faʻaalia ai naʻo le 0.0063 ± 0.0005 μg / ml Rg5 i totonu o le toto.E leai ni ginsenosides totoe na maua, e faʻaalia ai le le lelei o le tuʻu tautala ma o lea na faʻaitiitia ai le faʻaalia i nei ginsenosides.
Ole colon adenocarcinoma cell line Caco-2 e morphologically ma biochemically tutusa ma sela epithelial intestinal tagata, faʻaalia lona aoga i le iloiloina o felauaiga enterocyte i luga o le pa puipui epithelial intestinal.O lenei suʻesuʻega na faʻavae i luga o se suʻesuʻega muamua 20 .O ata 3A,B,C,D,E,F o loʻo faʻaalia ai ata faʻatusa o felauaiga transcellular o G-Rg3r ma G-Rg3 e faʻaaoga ai le Caco-2 monolayer model.O felauaiga Transcellular o le G-Rg3r poʻo le G-Rg3 i luga o Caco-2 monolayers mai le basolateral i le apical itu (Pb-a) na matua maualuga atu nai lo le apical i le basolateral itu (Pa-b).Mo G-Rg3r, o le uiga o le Pa-b o le 0.38 ± 0.06, lea na faʻatuputeleina i le 0.73 ± 0.06 pe a maeʻa togafitiga ma le 50 μmol / L verapamil ma le 1.14 ± 0.09 pe a maeʻa togafitiga ma 100 μmol / L verapamil (p <0.01, 0.01, 0.01 ma 1. fa'asologa; Ata 2).3A).O suʻesuʻega mo le G-Rg3 na mulimulitaʻia se faʻataʻitaʻiga tutusa (Fig. 3B), ma o faʻaiʻuga na faʻaalia ai o togafitiga verapamil na faʻaleleia ai le felauaiga o G-Rg3r ma G-Rg3.O le togafitiga o Verapamil na mafua ai foi le faʻaitiitia o le fua faatatau o le Pb-a ma le G-Rg3r ma le G-Rg3s efflux (Ata 3C,D,E,F), e faʻaalia ai o le togafitiga o le verapamil e faʻaitiitia ai le ginsenoside i totonu o le Caco-2 efflux cell..
O felauaiga Transcellular o le G-Rg3 i Caco-2 monolayers ma le intestinal absorption i se suʻesuʻega faʻafefe o isumu.(A) Pa-b tau o le vaega G-Rg3r i Caco-2 monolayer.(B) Pa-b tau o vaega G-Rg3s i Caco-2 monolayer.(C) Pb tau o le vaega G-Rg3r i Caco-2 monolayer.(D) Pb tau o vaega G-Rg3s i Caco-2 monolayer.(E) Fuafuaga fua o vaega G-Rg3r i se Caco-2 monolayer.(F) Fuafuaga fua o vaega G-Rg3 i se Caco-2 monolayer.(G) Pasene o le intestinal absorption o le G-Rg3r i se su'esu'ega fa'apa'u i isumu.(H) Pasene o le intestinal absorption o le G-Rg3 i se su'esu'ega fa'afefe i isumu.Na fa'atusatusaina le fa'aogaina ma le fa'aogaina e aunoa ma le fa'aopoopoina o le verapamil.O faʻamaumauga o loʻo faʻaalia o le uiga ± faʻasologa masani o suʻega tutoatasi e lima.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
E ogatasi ma le galuega muamua20, na faia ai le fa'aogaina o le intestinal orthotopic o isumu e iloa ai pe fa'atuputeleina le fa'aogaina o le G-Rg3 i le inumaga pe a mae'a togafitiga verapamil.O ata 3G,H o lo'o fa'aalia ai su'esu'ega fa'aulu e iloilo ai le pasene o le intestinal absorption o le G-Rg3r ma le G-Rg3 i isumu fa'ata'ita'iga o le kanesa i taimi o lo'o i luga.O le pasene muamua o le faʻaogaina o le G-Rg3r vaivai e tusa ma le 10% na faʻateleina i le sili atu i le 20% pe a maeʻa togafitiga faʻatasi ma le 50 μM verapamil ma sili atu i le 25% pe a maeʻa togafitiga ma 100 μM verapamil.E faʻapea foʻi, G-Rg3, lea na maua muamua le 10%, na faʻaalia ai foi le maualuga o le sili atu i le 20% pe a maeʻa togafitiga ma le 50 μM verapamil ma toetoe lava 30% pe a maeʻa togafitiga ma le 100 μM verapamil, o loʻo fautua mai ai o le taofia o le P-gp e verapamil e faʻaleleia atili. intestinal G-absorption Rg3 i se faʻataʻitaʻiga o isumu o le kanesa o le mama.
E tusa ai ma le auala o loʻo taʻua i luga, o isumu faʻataʻitaʻiga o le kanesa B (a) P na faʻaosoina na vaevaeina i ni vaega se ono, e pei ona faʻaalia i le Ata 4A.Leai se pa'u mamafa tele po'o fa'ailoga fa'ama'i o le oona na matauina i le vaega o togafitiga G-Rg3 fa'atusatusa i le vaega fa'atonutonu (fa'amatalaga e le o fa'aalia).A maeʻa le 20 vaiaso o togafitiga, na aoina mama o isumu taʻitasi.O le Ata 4B o lo'o fa'aalia ai tuma o le mama macroscopic i isumu i vaega o togafitiga o lo'o i luga, ma o le Ata 4C o lo'o fa'aalia ai se fa'ata'ita'iga mama mama o se tuma sui.E tusa ai ma le mamafa o le tumo i vaega taʻitasi (Fig. 4D), o tau mo isumu na togafitia i le G-Rg3r ma le G-Rg3s e 0.75 ± 0.29 mm3 ma le 0.81 ± 0.30 mm3, i le faasologa, ae o tau mo G Mice na togafitia. ma -Rg3s e 1.63 fa'asologa ± 0.40 mm3.pulea isumu (p <0.001), o loʻo faʻaalia ai o le togafitiga G-Rg3 na faʻaitiitia ai le mamafa o le toto i isumu.O le faʻaaogaina o le verapamil na faʻaleleia atili ai lenei faʻaititia: o tau i le verapamil + G-Rg3r mice na faʻaititia mai le 0.75 ± 0.29 mm3 i le 0.33 ± 0.25 mm3 (p <0.01), ma le tau mo le verapamil + mai le 0.81 ± 0.30 mm3 faʻaititia i le 0.81 ± 0.30 mm3 mm3 i G. -Rg3s-togafitiga isumu (p <0.05), e faʻaalia ai e mafai e le verapamil ona faʻaleleia le aʻafiaga o le G-Rg3 ile tumorigenesis.O le mamafa o le Tumor na faʻaalia ai le leai o se eseesega tele i le va o le vaega e pulea ma le verapamil group, le G-Rg3r group ma le G-Rg3s group, ma le verapamil + G-Rg3r group ma le verapamil + G-Rg3s group.E le gata i lea, e le'i iai ni o'ona taua ole ate po'o fatuga'o e feso'ota'i ma togafitiga na iloiloina (Ata 4E,F).
Tumor avega pe a maeʻa togafitiga G-Rg3 ma plasma poʻo le intestinal G-Rg3r ma G-Rg3 maualuga i vaega faʻaalia.(A) Fuafuaga fa'ata'ita'i.(B) Tumu macroscopic i se faʻataʻitaʻiga o isumu.O le toto e faʻaalia i aū.a: G-Rg3r.e: G-Rg3s.c: G-Rg3r fa'atasi ma verapamil.d: G-Rg3 fa'atasi ma verapamil.d: Verapamil.u: pulea.(C) Oviokalafi mata o le tuma i le faʻalauteleina.Tali: 100x.e: 400X.(D) Aafiaga o le G-Rg3 + verapamil togafitiga i luga o le mamafa o le tuma i isumu A / J.(E) Tulaga plasma o le ate enzyme ALT.(F) Tulaga o le toto ole enzyme Cr.(G) Laʻasaga Plasma o G-Rg3r poʻo G-Rg3 o vaega faʻaalia.(H) Tulaga o G-Rg3r poʻo G-Rg3s i totonu o le manava o vaega faʻaalia.O fa'amaumauga o lo'o fa'aalia o le uiga ± fa'avasegaina o fa'ailoga fa'atolu.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
G-Rg3 maualuga i le B (a) P-induced cancer model mice na iloiloina e UPLC-MS / MS ina ua maeʻa le 20-vaiaso togafitiga e tusa ai ma le metotia o loʻo faʻamatalaina i le vaega Metotia.O ata 4G ma le H o loʻo faʻaalia ai le plasma ma le intestinal G-Rg3 maualuga, i le faasologa.Plasma G-Rg3r maualuga o le 0.44 ± 0.32 μmol / L ma faʻateleina i le 1.17 ± 0.47 μmol / L faʻatasi ai ma le faʻaogaina faʻatasi o le verapamil (p <0.001), ae o le intestinal G-Rg3r maualuga o le 0.53 ± 0.08 μg.Pe a tuʻufaʻatasia ma verapamil, g faʻateleina i le 1.35 ± 0.13 μg / g (p <0.001).Mo G-Rg3, o taunuʻuga na mulimulitaʻia se faʻataʻitaʻiga tutusa, e faʻaalia ai o le verapamil togafitiga na faʻateleina ai le bioavailability o le G-Rg3 i A / J mice.
Sa fa'aogaina le su'esu'ega o le olaola e iloilo ai le cytotoxicity o le B(a)P ma le G-Rg3 i luga ole sela hEL.O le cytotoxicity fa'aosoina e le B(a)P i sela hEL o lo'o fa'aalia i le Ata 5A, ae o mea e le oona o le G-Rg3r ma le G-Rg3 o lo'o fa'aalia i Ata 5A ma le 5B.5B, C. Ina ia iloilo le aafiaga cytoprotective o le G-Rg3, B (a) P sa faʻatautaia faʻatasi ma faʻasalalauga eseese o G-Rg3r poʻo G-Rg3 i totonu o sela hEL.E pei ona faʻaalia i le Ata 5D, G-Rg3r i faʻasalalauga o 5 μM, 10 μM, ma 20 μM toe faʻafoʻisia le olaola i le 58.3%, 79.3%, ma le 77.3%, i le faasologa.E mafai fo'i ona va'aia fa'ai'uga fa'apei i le vaega G-Rg3s.A oʻo i le faʻatonuga o G-Rg3s o le 5 μM, 10 μM ma le 20 μM, na toe faʻafoʻisia le olaola i le 58.3%, 72.7% ma le 76.7%, i le faasologa (Ata 5E).).O le i ai o faʻaopoopoga BPDE-DNA na fuaina e faʻaaoga ai se pusa ELISA.O a matou faʻaiʻuga na faʻaalia ai o le BPDE-DNA faʻaopoopoga maualuga na faʻateleina i le B (a) P-togafitiga vaega faʻatusatusa i le kulupu faʻatonutonu, ae faʻatusatusa i le G-Rg3 co-togafitiga, BPDE-DNA faʻaopoopoga vaega i le B (a) P vaega. B i le vaega o loʻo togafitia, o le DNA faʻaopoopoina maualuga na faʻaititia tele.O taunuʻuga o togafitiga faʻatasi ma B (a) P naʻo loʻo faʻaalia i le Ata 5F (1.87 ± 0.33 vs. 3.77 ± 0.42 mo G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 mo G -Rg3s, p <0.001).
Ole fa'aogaina ole sela ma le BPDE-DNA fa'aopoopoina le fa'avaeina i sela hEL ua togafitia ile G-Rg3 ma le B(a)P.(A) Fa'aogaina o sela hEL ua togafitia ile B(a)P.(B) Fa'aogaina o sela hEL ua togafitia ile G-Rg3r.(C) Fa'aogaina o sela hEL ua togafitia ile G-Rg3.(D) Fa'aogaina o sela hEL ua togafitia ile B(a)P ma le G-Rg3r.(E) Fa'aogaina o sela hEL ua togafitia ile B(a)P ma le G-Rg3.(F) Tulaga o le BPDE-DNA faʻaopoopo i sela o le hel ua togafitia ile B(a)P ma le G-Rg3.O fa'amaumauga o lo'o fa'aalia o le uiga ± fa'avasegaina o fa'ailoga fa'atolu.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
GST fa'aaliga enzyme na maua ina ua mae'a togafitiga fa'atasi ma le 10 μM B(a)P ma le 10 μM G-Rg3r po'o le G-Rg3s.O a matou faʻaiʻuga na faʻaalia ai o le B (a) P na taofia le GST faʻamatalaga (59.7 ± 8.2% i le G-Rg3r group ma le 39 ± 4.5% i le G-Rg3s group), ma le B (a) P na fesoʻotaʻi ma le G-Rg3r. , po'o le G-Rg3r, po'o le G-Rg3r.Togafitiga fa'atasi ma le G-Rg3s toe fa'afo'i fa'aaliga GST.Fa'aaliga GST (103.7 ± 15.5% i le vaega G-Rg3r ma le 110 ± 11.1% i le vaega G-Rg3s, p <0.05 ma p <0.001, fa'asologa, Ata 6A, B, ma C).Sa su'esu'eina le GST i le fa'aaogaina o se pusa su'esu'e.O a matou taunuʻuga na faʻaalia ai o le vaega o togafitiga tuʻufaʻatasia e maualuga atu le GST faʻatusatusa i le B (a) P naʻo le vaega (96.3 ± 6.6% vs. 35.7 ± 7.8% i le G-Rg3r group vs. 92.3 ± 6.5 i le G-Rg3r group. ).% vs 35.7 ± 7.8% i le vaega G-Rg3s, p <0.001, Ata 6D).
Fa'aaliga o le GST ma le Nrf2 i sela hEL ua togafitia ile B(a)P ma le G-Rg3.(A) Su'esu'eina o le fa'aaliga o le GST e ala ile fa'apapalagi i Sisifo.(B) Fa'amatalaga fa'afuainumera o le GST i sela hel ua togafitia ile B(a)P ma le G-Rg3r.(C) Fa'amatalaga fa'afuainumera o le GST i sela hel ua togafitia i le B(a)P ma le G-Rg3s.(D) GST gaioioiga i sela hEL ua togafitia ile B(a)P ma le G-Rg3.(E) Suʻesuʻeina o le Nrf2 faʻamatalaga e ala i Western blotting.(F) Faʻamatalaga faʻatusatusaga o le Nrf2 i sela o le hEL ua togafitia i le B (a) P ma le G-Rg3r.(G) Faʻamatalaga faʻatusatusaga o le Nrf2 i sela o le hEL ua togafitia ma B (a) P ma G-Rg3s.O fa'amaumauga o lo'o fa'aalia o le uiga ± fa'avasegaina o fa'ailoga fa'atolu.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Ina ia faʻamalamalamaina auala o loʻo aʻafia i le G-Rg3-mediated suppressing o B (a) P-induced tumorigenesis, Nrf2 faʻamatalaga na iloiloina e Western blotting.E pei ona faʻaalia i Ata 6E, F, G, faʻatusatusa i le vaega o loʻo pulea, naʻo le maualuga o le Nrf2 i le B (a) P vaega togafitiga na faʻaititia;ae ui i lea, faʻatusatusa i le B (a) P vaega togafitiga, B (a) Nrf2 maualuga i le PG-Rg3 vaega na faʻateleina (106 ± 9.5% mo G-Rg3r vs. 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% mo G-Rg3r vs. 41 ± 9.8% mo G-Rg3s, p <0.01).
Na matou faʻamaonia le puipuiga o le Nrf2 e ala i le taofiofia o le Nrf2 faʻamatalaga e faʻaaoga ai le RNA faʻalavelave faʻapitoa (siRNA).Nrf2 knockdown na faʻamaonia e Western blotting (Fig. 7A, B).E pei ona faʻaalia i Ata 7C, D, faʻatasi-togafitiga o sela hEL ma le B (a) P ma le G-Rg3 na mafua ai le faʻaitiitia o le numera o faʻaopoopoga BPDE-DNA (1.47 ± 0.21) faʻatusatusa i togafitiga ma B (a) P na o ia i le vaega pule siRNA.) G-Rg3r o 4.13 ± 0.49, G-Rg3s o 1.8 ± 0.32 ma 4.1 ± 0.57, p <0.01).Ae ui i lea, o le faʻaogaina o le G-Rg3 i luga o le BPDE-DNA na faʻaumatia e le Nrf2 knockdown.I le siNrf2 vaega, e leai se eseesega tele i le BPDE-DNA faʻapipiʻi faʻavae i le va o le B (a) P ma le G-Rg3 togafitiga faʻatasi ma le B (a) P togafitiga naʻo (3.0 ± 0.21 mo G-Rg3r vs. 3.56 ± 0.32). ).mo G-Rg3r versus 3.6 mo G-Rg3s versus ±0.45 versus 4.0±0.37, p> 0.05).
Aafiaga o le Nrf2 knockdown i luga ole BPDE-DNA faʻapipiʻi faʻapipiʻiina i totonu o sela hEL.(A) Nrf2 knockdown na faʻamaonia e Western blotting.(B) Fuafuaga o le malosi o le band Nrf2.(C) Aʻafiaga o le paʻu o le Nrf2 i luga ole BPDE-DNA faʻapipiʻi maualuga i sela o le hEL ua togafitia ile B (a) P ma le G-Rg3r.(D) Aʻafiaga o le paʻu o le Nrf2 i luga o le BPDE-DNA faʻapipiʻi maualuga i sela o le hEL ua togafitia i le B (a) P ma le G-Rg3.O fa'amaumauga o lo'o fa'aalia o le uiga ± fa'avasegaina o fa'ailoga fa'atolu.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
O lenei su'esu'ega na su'esu'eina ai a'afiaga a'afiaga o vaila'au o le ginseng mumu i se fa'ata'ita'iga o le isumu o le kanesa o le mama e a'afia i le B(a)P, ma o le togafitiga o le KRGB na matua fa'aitiitia ai le mamafa o le tuma.Mafaufau o le G-Rg3 o loʻo i ai le maualuga o mea i totonu o lenei ginseng extract, o le taua tele o lenei ginsenoside i le taofia o le tumorigenesis ua suʻesuʻeina.O le G-Rg3r ma le G-Rg3 (lua epimers o le G-Rg3) na matua faʻaitiitia ai le mamafa o le tuma i se faʻataʻitaʻiga o le isumu o le kanesa o le B (a) P.O le G-Rg3r ma le G-Rg3 o loʻo faʻaaogaina aʻafiaga o le kanesa e ala i le faʻaosoina o apoptosis o sela tumo21, faʻalavelaveina le tuputupu aʻe o le tuma22, puʻeina le taamilosaga o le cell23 ma aʻafia ai le angiogenesis24.G-Rg3 ua faʻaalia foi e taofia ai le metastasis cellular25, ma o le gafatia o le G-Rg3 e faʻaleleia ai aʻafiaga o le chemotherapy ma le radiotherapy ua faʻamaonia26,27.Na fa'aalia e Poon et al e mafai e le G-Rg3 ona fa'aitiitia le fa'ama'i fa'ama'i ole B(a)P28.O lenei suʻesuʻega o loʻo faʻaalia ai le faʻaogaina o le G-Rg3 i le tulimataʻiina o molelaʻau carcinogenic siosiomaga ma puipuia ai le kanesa.
E ui lava i le lelei o le puipuiga, o le le lelei o le faʻaogaina o le gutu o ginsenosides o loʻo avea ma luʻitau mo le faʻaogaina o nei molela.O su'esu'ega a le Pharmacokinetic o le tautala tautala o ginsenosides i isumu na fa'aalia ai o lona bioavailability e itiiti ifo i le 5%29.O nei suʻega na faʻaalia ai ina ua maeʻa le 20-vaiaso o togafitiga, naʻo le toto o le Rg5 na faʻaititia.E ui lava o le faiga autu o le le lelei o le bioavailability o loʻo tumau pea ona faʻamalamalamaina, o le P-gp e manatu o loʻo aʻafia i le efflux o ginsenosides.O lenei galuega na faʻaalia mo le taimi muamua o le faʻaaogaina o le verapamil, o le P-gp blocker, e faʻateleina ai le faʻaogaina o le gutu o le G-Rg3r ma le G-Rg3s.O le mea lea, o lenei suʻesuʻega o loʻo fautua mai ai o G-Rg3r ma G-Rg3s e fai ma sui o le P-gp e faʻatonutonu ai lona faʻafefe.
O lenei galuega o loʻo faʻaalia ai o togafitiga faʻatasi ma le verapamil e faʻateleina ai le bioavailability o le G-Rg3 i le faʻataʻitaʻiga o le isumu o le kanesa mama.O lenei sailiga e lagolagoina e le faʻateleina o felauaiga transcellular intestinal o le G-Rg3 i luga o le poloka P-gp, ma faʻateleina ai lona faʻaogaina.O suʻesuʻega i sela Caco2 na faʻaalia ai o togafitiga verapamil na faʻaitiitia ai le faʻafefe o G-Rg3r ma G-Rg3s aʻo faʻaleleia le faʻaogaina o le membrane.O se suʻesuʻega a Yang et al.O suʻesuʻega ua faʻaalia ai o togafitiga faʻatasi ma le cyclosporine A (seisi P-gp blocker) e faʻateleina ai le bioavailability o le ginsenoside Rh2 mai le tau faʻavae o le 1%20 i le sili atu i le 30%.Ginsenosides compounds K ma Rg1 na faʻaalia foi iʻuga tutusa30,31.Ina ua tuʻufaʻatasia le verapamil ma le cyclosporin A, o le faʻaogaina o le K i totonu o le Caco-2 na faʻaititia tele mai le 26.6 i lalo ifo o le 3, ae o lona intracellular maualuga maualuga 40-fold30.I le i ai o le verapamil, o le maualuga o le Rg1 na faʻateleina i sela epithelial rat lung, e faʻaalia ai se matafaioi mo le P-gp i le ginsenoside efflux, e pei ona faʻaalia e Meng et al.31.Ae ui i lea, o le verapamil e leai se aafiaga tutusa i luga o le faʻafefe o nisi ginsenosides (e pei o Rg1, F1, Rh1 ma Re), e faʻaalia ai e le o aʻafia i latou i le P-gp substrates, e pei ona faʻaalia e Liang et al.32 .O lenei faʻamatalaga atonu e fesoʻotaʻi ma le aʻafia o isi felauaiga ma isi fausaga ginsenoside.
E le o manino le faiga ole puipuiga ole G-Rg3 ile kanesa.O suʻesuʻega muamua na faʻaalia ai o le G-Rg3 e puipuia ai le faaleagaina o DNA ma le apoptosis e ala i le faʻaitiitia o le faʻamaʻi faʻamaʻi ma le mumū16,33, lea e ono avea ma faiga faʻavae mo le puipuia o le B (a) P-induced tumorigenesis.O nisi lipoti o loʻo faʻaalia ai o le genotoxicity e mafua mai i le B (a) P e mafai ona faʻaititia e ala i le faʻaogaina o enzymes vaega II e fausia ai le BPDE-DNA34.O le GST ose vaega masani II enzyme e fa'alavelaveina le fa'aopoopoina o le BPDE-DNA e ala i le fa'alauiloaina o le fusifusia o le GSH i le BPDE, ma fa'aitiitia ai le fa'aleagaina o le DNA na a'afia e B(a)P35.O a matou faʻaiʻuga o loʻo faʻaalia ai o le togafitiga G-Rg3 e faʻaitiitia ai le B (a) P-iduced cytotoxicity ma le BPDE-DNA faʻapipiʻi faʻavae i totonu o sela o le hEL ma toe faʻafoʻisia le GST faʻamatalaga ma gaioiga i vitro.Ae ui i lea, o nei aʻafiaga na le maua i le leai o Nrf2, faʻapea o le G-Rg3 e faʻaosofia ai aʻafiaga o le cytoprotective e ala i le auala Nrf2.O le Nrf2 o se vaega tele o tusitusiga mo le vaega II faʻamaʻi faʻamaʻi enzymes e faʻamalosia ai le kilia o xenobiotics36.O le faʻagaoioia o le auala Nrf2 e faʻaosofia ai le cytoprotection ma faʻaitiitia ai le faaleagaina o le tino37.E le gata i lea, o le tele o lipoti na lagolagoina le matafaioi a le Nrf2 o se faʻamaʻi tumo i le carcinogenesis38.O a matou suʻesuʻega o loʻo faʻaalia ai o le faʻaaogaina o le Nrf2 ala e le G-Rg3 o loʻo i ai se matafaioi faʻatulafonoina taua i le B (a) P-induced genotoxicity e ala i le faʻatupuina o le B (a) P detoxification e ala i le faʻagaoioia o enzymes vaega II, ma faʻafefe ai le faagasologa o le tumorigenesis.
O la matou galuega o loʻo faʻaalia ai le gafatia o le ginseng mumu i le puipuia o le kanesa o le mama o le B (a) P i isumu e ala i le taua tele o le ginsenoside G-Rg3.O le le lelei o le fa'aogaina o le gutu o lenei mole e fa'alavelaveina ai lona fa'aogaina ile falema'i.Ae ui i lea, o lenei suʻesuʻega o loʻo faʻaalia mo le taimi muamua o le G-Rg3 o se mea faʻapipiʻi o le P-gp, ma o le puleaina o se inhibitor P-gp e faʻateleina ai le bioavailability o G-Rg3 in vitro ma in vivo.G-Rg3 faʻaitiitia le B (a) P-faʻaosoina cytotoxicity e ala i le faʻatonutonuina o le auala Nrf2, lea e ono avea ma se faiga faʻapitoa mo lana galuega puipuia.O a matou suʻesuʻega e faʻamaonia ai le gafatia o le ginsenoside G-Rg3 mo le puipuia ma le togafitia o le kanesa o le mama.
O isumu A/J fafine e ono vaiaso le matutua (20 ± 1 g) ma le 7-vaiaso le matua Wistar rats (250 ± 20 g) na maua mai le Fale Su'esu'e a Jackson (Bar Harbor, ISA) ma le Wuhan Institute of Zoology.Iunivesite (Wuhan, Saina).O le Chinese Type Culture Collection Center (Wuhan, Saina) na matou maua ai le Caco-2 ma le hEL sela.Sigma-Aldrich (St. Louis, ISA) o se puna o B (a) P ma tricaprine.Ginsenosides mama G-Rg3r ma G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 proliferation assay kit (MTS), verapamil, laʻititi mea taua (MEM), ma fetal bovine serum (FBS) na faʻatau mai Chengdu Must Bio-Technology .Co.,Ltd.(Chengdu, Saina).O le QIAamp DNA mini kit ma le BPDE-DNA adduct ELISA kit na faʻatau mai Qiagen (Stanford, CA, ISA) ma Cell Biolabs (San Diego, CA, ISA).Pusa su'esu'e gaioioiga GST ma pusa su'esu'e atoa porotini (metotia masani BCA) na fa'atau mai Solarbio (Beijing, Saina).O lo'o fa'aputu uma fa'aputuga mūmū mūmū i le Mingyu Laboratory 7. Hong Kong Baptist University (Hong Kong, Saina) ma Korea Cancer Center (Seoul, Korea) o fa'atauga fa'apisinisi o le CRG extract ma le tele o ginseng mumu o lo'o maua mai Korea eseese (e aofia ai KRGA, KRGB. ma KRGC).O le ginseng mumu e faia mai a'a o le ginseng fou e 6-tausaga le matua.O le fuala'au o le ginseng mumu e maua e ala i le fufuluina o le ginseng i le vai fa'atolu, ona fa'apipi'i lea o le vai, ma fa'amago i le maualalo o le vevela e maua ai le pa'u o le ginseng extract.Antibodies (anti-Nrf2, anti-GST, ma β-actin), horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit immunoglobulin G (IgG), transfection reagent, control siRNA, ma Nrf2 siRNA na faʻatau mai Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) .), ISA).
O le Caco2 ma le hEL na faʻatupuina i totonu o le 100 mm2 ipu faʻaleaganuʻu faʻatasi ma le MEM o loʻo i ai le 10% FBS i le 37 ° C i totonu o le ea malulu o le 5% CO2.Ina ia iloa le aʻafiaga o togafitiga, na faʻapipiʻiina sela o le hEL i faʻasalalauga eseese o B (a) P ma G-Rg3 i le MEM mo le 48 h.E mafai ona su'esu'e atili pe aoina mai sela e saunia ai vaega e leai se sela.
O faʻataʻitaʻiga uma na faʻamaonia e le Komiti o Amioga Faʻataʻitaʻi Faʻataʻitaʻi a Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology (Faamaonia Numera 2019; Resitala Numera 4587TH).O faʻataʻitaʻiga uma na faia e tusa ai ma taʻiala talafeagai ma tulafono faatonutonu, ma o le suʻesuʻega na faia e tusa ai ma taʻiala o Suʻesuʻega Manu: Lipoti o In Vivo Experiments (ARRIVE).O isumu A / J e valu vaiaso le matua na tui muamua ile intraperitoneally ile B (a) P ile tricaprine solution (100 mg / kg, 0.2 ml).A maeʻa le vaiaso, ona vaevaeina faʻafuaseʻi le isumu i vaega faʻatonutonu ma vaega eseese o togafitiga, 15 mice i vaega taʻitasi, ma gavaged tasi i le aso.A maeʻa le 20 vaiaso o togafitiga, na ositaulagaina manu ile CO2 asphyxia.Na aoina mama ma faʻapipiʻi mo le 24 itula.Ole aofa'i ole tuma papa'u ma le lapopo'a ole tuma ta'ito'atasi sa fa'atatauina mo mama ta'itasi i lalo ole va'aiga fa'ata'oto.O fua faatatau o le voluma (V) na fa'atatauina e fa'aaoga ai le fa'amatalaga nei: V (mm3) = 4/3πr3, lea o le r o le lautele o le tuma.O le aofa'i atoa o voluma tuma uma i totonu o māmā o isumu o lo'o fa'atusalia ai le aofa'iga o le tumo, ma o le averesi o le aofa'i o le tuma i vaega ta'itasi o lo'o fa'atusalia ai le uta o le tuma.O le toto atoa ma faʻataʻitaʻiga o le intestinal na aoina ma teuina i le -80 ° C mo le UPLC-MS / MS fuafuaina.Sa aoina le toto ma sa fa'aogaina se su'esu'ega otometi kemisi e su'esu'e ai le alanine aminotransferase (ALT) ma le creatinine serum (Cr) maualuga e iloilo ai le ate ma fatuga'o.
O fa'ata'ita'iga ua aoina na aveese mai le malulu, fa'afefeteina, fuaina, ma tu'u i totonu o fa'agaau e pei ona fa'amatalaina i luga.I lenei mea na faaopoopo i ai le 0.5 μM phlorizin (faʻatonu i totonu) i le 0.8 ml methanol solution.Ona faʻafefiloi lea o le tino e faʻaaoga ai Tissue-Tearor ma faʻafeiloaʻi mulimuli ane le homogenate i se 1.5 ml microcentrifuge tube.O le faʻafefiloi na faʻapipiʻiina i le 15500 rpm mo le 15 minute.A maeʻa ona aveese le 1.0 ml o le supernatant, faʻamago i le nitrogen.E lua selau microliters o le methanol na faʻaaogaina mo le toe faʻaleleia.O le toto e aoina ma faʻagasolo i luga o le laina e tasi ma faʻaaogaina e fai ma faʻamatalaga mo fua uma.
24-well Transwell plates sa fa'asusuina ma 1.0 × 105 Caco-2 sela i le vaieli e iloilo ai le fa'aleleia atili o le G-Rg3 felauaiga e ala i le fa'aopoopoina o le verapamil.A maeʻa le 3 vaiaso ole aganuʻu, ona fufuluina lea o sela ile HBSS ma faʻapipiʻi ile 37°C.400 μL o le 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, poʻo se faʻafefiloi ma 50 poʻo 100 μM verapamil) na tui i luga o le itu basolateral poʻo apical o le monolayer, ma 600 μL o le HBSS solution na faʻaopoopo i le isi. itu.Aoina le 100 µl o le aganu'u ala ile taimi atofaina (0, 15, 30, 45, 60, 90 ma le 120 minute) ma fa'aopoopo le 100 μl ole HBSS e fa'atupu ai lea voluma.O faʻataʻitaʻiga na teuina i le -4 ° C seia oʻo ina iloa e UPLC-MS / MS.O le faʻamatalaga Papp = dQ / (dT × A × C0) o loʻo faʻaaogaina e faʻatusatusa ai le faʻaalia o le apical ma le basolateral permeability ma le vice versa (Pa-b ma Pb-a, faasologa);dQ / dT o le suiga i le faʻatonuga, A (0.6 cm2) o le pito i luga o le monolayer, ma C0 o le faʻatonuga muamua o le foaʻi.O le fua faatatau o le efflux ua fuafuaina e pei o le Pb-a / Pa-b, lea e fai ma sui o le fua o le efflux o le vailaʻau suʻesuʻe.
O tama'i iole Wistar na anapopogi mo le 24 itula, inu na'o le vai, ma fa'ama'i ile tui ole 3.5% pentobarbital solution.O le paipa silicone intubated o loʻo i ai le pito o le duodenum e fai ma faitotoʻa ma le pito o le ileum e pei o le ulufafo.Fa'aaoga se pamu peristaltic e pamu ai le pito i totonu ma le 10 µM G-Rg3r po'o le G-Rg3s ile isotonic HBSS ile fua ole tafe ole 0.1 ml/min.O le aʻafiaga o le verapamil na suʻesuʻeina e ala i le faʻaopopoina o le 50 μM poʻo le 100 μM o le faʻaogaina i le 10 μM G-Rg3r poʻo le G-Rg3s.UPLC-MS / MS na faia i luga o faʻamaʻi faʻapipiʻi na aoina i taimi 60, 90, 120, ma 150 minute talu ona amata le faʻamaʻi.Ole pasene ole absorption e fa'atatau ile fua % absorption = (1 – Cout/Cin) × 100%;o le faʻatonuga o le G-Rg3 i le pusa ma le inlet o loʻo faʻaalia e Cout ma Cin, i le faasologa.
O sela o le hEL na totoina i le 96-well plates i le mamafa o le 1 × 104 sela i le vaieli ma togafitia i le B (a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) poʻo le G-Rg3 faʻamavae i DMSO .O vailaʻau na faʻafefeteina i le aganuu i faʻasalalauga eseese (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) i luga ole 48 itula.I le fa'aaogaina o se pusa su'esu'e MTS fa'atau pisinisi, na fa'auluina sela i se fa'asologa masani ona fua lea i le fa'aogaina o le microplate reader i le 490 nm.Ole maualuga ole cell viability o vaega faʻatasi ma le B (a) P (10 μM) ma le G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) na iloiloina e tusa ai ma le auala o loʻo i luga ma faʻatusatusa i le vaega e leʻi togafitia.
O sela o le hEL na totoina i totonu o le 6-well plates i le mamafa o le 1 × 105 sela / vaieli ma togafitia i le 10 μMB (a) P i le i ai poʻo le leai o le 10 μM G-Rg3.Ina ua maeʻa le 48 itula o togafitiga, na aveese mai le DNA mai sela o le hEL e faʻaaoga ai le QIAamp DNA Mini Kit e tusa ai ma le faʻasologa o le gaosiga.O le faʻavaeina o faʻaopoopoga BPDE-DNA na maua i le faʻaaogaina o le BPDE-DNA addduct ELISA kit.O tulaga faʻatusatusa o le BPDE-DNA faʻaopoopoga na fuaina i le faʻaaogaina o le microplate reader e ala i le fuaina o le absorbance ile 450 nm.
O sela o le hEL na totoina i 96-well plates i le mamafa o le 1 × 104 sela i le vaieli ma togafitia i le 10 μMB (a) P i le leai poʻo le i ai o le 10 μM G-Rg3 mo le 48 itula.Na fuaina le gaioiga o le GST i le fa'aaogaina o se pusa su'esu'e o le GST fa'apisinisi e tusa ai ma le tulafono a le kamupani gaosi oloa.Na fuaina le fa'agaioiina o le GST i le mitiia ile 450 nm e fa'aaoga ai le microplate reader.
O sela o le hEL na fufulu ile PBS malulu aisa ona faʻamama lea ile faʻaogaina ole radioimmunoprecipitation assay buffer o loʻo i ai le protease inhibitors ma le phosphatase inhibitors.A maeʻa le faʻatusatusaina o le porotini e faʻaaoga ai se pusa suʻesuʻe atoa o le protein, 30 μg o porotini i faʻataʻitaʻiga taʻitasi na vavae ese e le 12% SDS-PAGE ma faʻafeiloaʻi i se PVDF membrane e ala i le electrophoresis.Na poloka le membrane i le 5% o le susu susu ma faʻafefe i faʻamaʻi muamua i le po i le 4°C.A maeʻa ona faʻapipiʻiina i le horseradish peroxidase-conjugated antibodies lona lua, faʻaleleia le chemiluminescence reagents na faʻaopoopoina e vaʻaia ai le faʻailoga faʻamau.Ole malosi ole pa'u porotini ta'itasi na fa'atatau ile fa'aogaina ole polokalame ImageJ.
GraphPad Prism 7.0 software na faʻaaogaina e suʻesuʻe ai faʻamaumauga uma, faʻaalia o le mean ± standard deviation.O le fesuiaiga i le va o vaega o togafitiga na suʻesuʻeina e faʻaaoga ai le suʻega a Tamaiti aʻoga poʻo se tasi-auala suʻesuʻega o eseesega, faʻatasi ai ma le tau P <0.05 e faʻaalia ai le taua o fuainumera.
O faʻamaumauga uma na maua pe suʻesuʻeina i le taimi o lenei suʻesuʻega o loʻo aofia i totonu o lenei tusiga faʻasalalau ma faila faʻamatalaga faaopoopo.
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Taimi meli: Sep-17-2023