Faleminderit që vizituat Nature.com.Versioni i shfletuesit që po përdorni ka mbështetje të kufizuar CSS.Për rezultate më të mira, ju rekomandojmë të përdorni një version më të ri të shfletuesit tuaj (ose të çaktivizoni modalitetin e përputhshmërisë në Internet Explorer).Ndërkohë, për të siguruar mbështetje të vazhdueshme, ne po e shfaqim sajtin pa stilim ose JavaScript.
Xhensen i kuq është përdorur në mjekësinë tradicionale aziatike për qindra vjet.Në këtë studim, ne vlerësuam aftësinë e katër llojeve të xhensenit të kuq (xhinsen i kuq kinez, xhensen i kuq korean A, xhensen i kuq korean B dhe xhensen i kuq koreano C) të rritura në rajone të ndryshme për të penguar formimin dhe rritjen e mushkërive të shkaktuara nga kancerogjeni. tumoret.Një test benzo(a)pirene (B(a)P) u krye te minjtë A/J dhe xhensen B-ja e kuqe koreane u zbulua se ishte më efektive në reduktimin e ngarkesës së tumorit midis katër varieteteve të xhensenit të kuq.Përveç kësaj, ne analizuam përmbajtjen e xhensenozideve të ndryshme (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 dhe Rg5) në katër ekstrakte të xhensenit të kuq dhe zbuluam se xhensen B-ja e kuqe koreane kishte nivelet më të larta të ginsenoside Rg3 (G-Rg3), duke sugjeruar që G-Rg3 mund të luajë një rol të rëndësishëm në efikasitetin e tij terapeutik.Kjo punë tregon se G-Rg3 ka biodisponibilitet relativisht të ulët.Megjithatë, kur G-Rg3 u administrua bashkë me verapamilin frenues P-gp, rrjedhja e G-Rg3 në qelizat Caco-2 u ul, shkalla e përthithjes intestinale të G-Rg3 u rrit në një model miu dhe G-Rg3 ishte rritur.Në qelizat Caco-2, dalja e Rg3 zvogëlohet dhe niveli i përqendrimit të Rg3 zvogëlohet.G-Rg3 rritet në zorrë dhe plazmë, dhe aftësia e tij për të parandaluar tumoret është rritur gjithashtu në një model miu të tumorigjenezës së induktuar nga B(a)P.Ne zbuluam gjithashtu se G-Rg3 zvogëloi citotoksicitetin e induktuar nga B(a)P dhe formimin e aduktit të ADN-së në qelizat e mushkërive të njeriut dhe rivendosi shprehjen dhe aktivitetin e enzimave të fazës II përmes rrugës Nrf2, e cila mund të lidhet me mekanizmin e mundshëm të veprimit. e inhibimit G -Rg3..Në lidhje me shfaqjen e tumoreve të mushkërive.Studimi ynë tregon një rol potencialisht të rëndësishëm për G-Rg3 në shënjestrimin e tumoreve të mushkërive në modelet e miut.Biodisponibiliteti oral i këtij ginsenoside rritet duke synuar P-glikoproteinën, duke lejuar që molekula të ushtrojë efekte antikancerogjene.
Lloji më i zakonshëm i kancerit të mushkërive është kanceri i mushkërive me qeliza jo të vogla (NSCLC), i cili është një nga shkaqet kryesore të vdekjeve nga kanceri në Kinë dhe Amerikën e Veriut1,2.Faktori kryesor që rrit rrezikun e zhvillimit të kancerit të mushkërive me qeliza jo të vogla është pirja e duhanit.Tymi i cigares përmban më shumë se 60 lëndë kancerogjene, duke përfshirë benzo(a)piren (B(a)P), nitrozaminat dhe izotopet radioaktive nga kalbja e radonit.3 Hidrokarburet aromatike policiklike B(a)P janë shkaku kryesor i toksicitetit në cigare. tymi.Pas ekspozimit ndaj B(a)P, citokromi P450 e konverton atë në B(a)P-7,8-dihidrodiol-9,10-epoksid (BPDE), i cili reagon me ADN-në për të formuar adduktin BPDE-ADN 4. Përveç kësaj, këto adduktet nxisin tumorigjenezën e mushkërive te minjtë me stad tumori dhe histopatologji të ngjashme me tumoret e mushkërive të njeriut5.Kjo veçori e bën modelin e kancerit të mushkërive të induktuar nga B(a)P një sistem të përshtatshëm për vlerësimin e komponimeve me veti të mundshme antikancerogjene.
Një strategji e mundshme për të parandaluar zhvillimin e kancerit të mushkërive në grupet me rrezik të lartë, veçanërisht duhanpirësit, është përdorimi i agjentëve kimiopreventivë për të shtypur zhvillimin e lezioneve neoplazike intraepiteliale dhe në këtë mënyrë për të parandaluar përparimin e tyre të mëvonshëm drejt malinjitetit.Studimet e kafshëve tregojnë se agjentë të ndryshëm kimiopreventivë janë efektivë6.Raporti ynë i mëparshëm7 theksoi efektet e mira parandaluese të xhensenit të kuq në kancerin e mushkërive.Kjo barishte është përdorur për shekuj në mjekësinë tradicionale aziatike për të zgjatur jetën dhe shëndetin, dhe është dokumentuar se ka efekte antitumorale8.
Faktori aktiv i xhensenit është ginsenoside, i cili përdoret si një shënues i përbërë për të vlerësuar cilësinë e ekstrakteve të xhensenit.Analiza sasiore e ekstrakteve të papërpunuara të xhensenit zakonisht përfshin përdorimin e disa xhensenozideve, duke përfshirë RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 dhe Rc9,10.Xhensenozidet kanë pak përdorim klinik për shkak të biodisponibilitetit të tyre shumë të dobët oral11.Megjithëse mekanizmi për këtë biodisponibilitet të dobët nuk është i qartë, rrjedhja e ginsenosideve të shkaktuar nga P-glikoproteina (P-gp)12 mund të jetë shkaku.P-gp është një nga transportuesit më të rëndësishëm të rrjedhës në superfamiljen e transportuesit të kasetave lidhëse ATP, i cili përdor energjinë e hidrolizës së ATP për të çliruar substanca ndërqelizore në mjedisin e jashtëm.Transportuesit P-gp zakonisht shpërndahen gjerësisht në zorrët, veshkat, mëlçinë dhe pengesën gjaku-tru13.P-gp luan një rol kritik në përthithjen intestinale dhe frenimi i P-gp rrit përthithjen nga goja dhe disponueshmërinë e disa barnave antikancerogjene12,14.Shembuj të frenuesve të përdorur më parë në literaturë janë verapamili dhe ciklosporina A15.Kjo punë përfshin krijimin e një sistemi të miut për studimin e kancerit të mushkërive të induktuar nga B(a)P për të vlerësuar aftësinë e ekstrakteve të ndryshme të xhensenit të kuq nga Kina dhe Korea për të prekur sëmundjet malinje.Ekstraktet u analizuan individualisht për të identifikuar ginsenoside specifike që mund të ndikojnë në kancerogjenezën.Verapamil u përdor më pas për të synuar P-gp dhe për të përmirësuar biodisponibilitetin oral dhe efikasitetin terapeutik të xhensenozideve që synojnë kancerin.
Mekanizmi me të cilin saponinat e xhensenit ushtrojnë efekte terapeutike në kancerogjenezën mbetet i paqartë.Hulumtimet kanë treguar se ginsenoside të ndryshme mund të zvogëlojnë dëmtimin e ADN-së të shkaktuar nga kancerogjenët duke reduktuar stresin oksidativ dhe duke aktivizuar enzimat e detoksifikimit të fazës II, duke parandaluar kështu dëmtimin e qelizave.Glutathione S-transferaza (GST) është një enzimë tipike e fazës II që kërkohet për të reduktuar dëmtimin e ADN-së të shkaktuar nga kancerogjenët17.Faktori 2 i lidhur me eritroidin 2 bërthamor (Nrf2) është një faktor i rëndësishëm transkriptimi që rregullon homeostazën redoks dhe aktivizon shprehjen e enzimave të fazës II dhe përgjigjeve antioksidante citoprotektive18.Studimi ynë shqyrtoi gjithashtu efektet e ginsenosideve të identifikuara në reduktimin e citotoksicitetit të induktuar nga B(a)P dhe formimin e aduktit BPDE-DNA, si dhe nxitjen e enzimave të fazës II duke moduluar rrugën Nrf2 në qelizat normale të mushkërive.
Krijimi i një modeli të miut të kancerit të induktuar nga B(a)P është në përputhje me punën e mëparshme5.Figura 1A tregon modelin eksperimental të një trajtimi 20-javor të një modeli të kancerit të miut të induktuar nga B(a)P, uji (kontrolli), ekstrakti i xhensenit të kuq kinez (CRG), ekstrakti korean i xhensenit të kuq A (KRGA) dhe i kuqja koreane xhensen.Ekstrakt B (KRGB) dhe Ekstrakt i Xhensenit të Kuq Korean C (KRGC).Pas 20 javësh trajtimi me xhensen të kuq, minjtë u sakrifikuan nga asfiksimi i CO2.Figura 1B tregon tumoret makroskopike të mushkërive në kafshët e trajtuara me lloje të ndryshme të xhensenit të kuq dhe Figura 1C tregon një mikrografë përfaqësuese të dritës të një kampioni tumori.Barra tumorale e kafshëve të trajtuara me KRGB (1.5 ± 0.35) ishte më e ulët se ajo e kafshëve të kontrollit (0.82 ± 0.2, P <0.05), siç tregohet në Figurën 1D.Shkalla mesatare e frenimit të ngarkesës së tumorit ishte 45%.Ekstraktet e tjera të xhensenit të kuq të testuar nuk treguan ndryshime kaq të rëndësishme në ngarkesën e tumorit (P > 0.05).Asnjë efekt anësor i dukshëm nuk u vërejt në modelin e miut gjatë 20 javëve të trajtimit me xhensen të kuq, duke përfshirë asnjë ndryshim në peshën trupore (të dhënat nuk tregohen) dhe asnjë toksicitet ndaj mëlçisë ose veshkave (Figura 1E,F).
Ekstrakti i xhensenit të kuq trajton zhvillimin e tumorit të mushkërive tek minjtë A/J.(A) Dizajn eksperimental.(B) Tumoret e mëdha të mushkërive në një model të miut.Tumoret tregohen me shigjeta.a: Grupi kinez i xhensenit të kuq.b: grupi A i xhensenit të kuq korean.c: Grupi i xhensenit të kuq korean B. d: Grupi i xhensenit të kuq korean C. d: Grupi i kontrollit.(C) Mikrografia e lehtë që tregon një tumor të mushkërive.Zmadhimi: 100. b: 400. (D) Ngarkesa tumorale në grupin e ekstraktit të xhensenit të kuq.(E) Nivelet plazmatike të enzimës së mëlçisë ALT.(F) Nivelet plazmatike të enzimës renale Cr.Të dhënat shprehen si mesatare ± devijim standard.*P <0,05.
Ekstraktet e xhensenit të kuq të identifikuar në këtë studim u analizuan me anë të spektrometrisë së masës së bashku me kromatografinë e lëngshme ultra-performance (UPLC-MS/MS) për të përcaktuar sasinë e xhensenozideve të mëposhtme: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 dhe Rg5.Kushtet UPLC dhe MS të përdorura për të matur analitet u përshkruan në një raport të mëparshëm19.Kromatogramet UPLC-MS/MS të katër ekstrakteve të xhensenit të kuq janë paraqitur në figurën 2A.Kishte dallime domethënëse në përmbajtjen totale të xhensenozidit, me përmbajtjen më të lartë totale të xhensenozidit në CRG (590,27 ± 41,28 μmol/L) (Figura 2B).Gjatë vlerësimit të xhensenozideve individuale (Figura 2C), KRGB tregoi nivelin më të lartë të G-Rg3 krahasuar me xhinsenozidet e tjera (58,33 ± 3,81 μmol/L për G-Rg3s dhe 41,56 ± 2,88 μmol/L për G-Rg3r).L).lloji i xhensenit të kuq (P <0,001).G-Rg3 shfaqet si një çift stereoizomerësh G-Rg3r dhe G-Rg3s, të cilët ndryshojnë në pozicionin e grupit hidroksil në karbonin 20 (Fig. 2D).Rezultatet tregojnë se G-Rg3r ose G-Rg3 mund të kenë potencial të rëndësishëm antikancerogjen në një model miu me kancer të induktuar nga B(a)P.
Përmbajtja e xhensenozideve në ekstrakte të ndryshme të xhensenit të kuq.(A) Kromatogramet UPLC-MS/MS të katër ekstrakteve të xhensenit të kuq.(B) Vlerësimi i përmbajtjes totale të xhensenozidit në ekstraktet e treguara.(C) Zbulimi i xhensenozideve individuale në ekstraktet e etiketuara.(D) Strukturat e stereoizomereve ginsenoside G-Rg3r dhe G-Rg3s.Të dhënat shprehen si mesatare ± devijimi standard i përcaktimeve të trefishta.***P <0,001.
Studimi UPLC-MS/MS kërkoi përcaktimin e sasisë së xhensenozideve në mostrat e zorrëve dhe të gjakut pas 20 javësh trajtim.Trajtimi me KRGB tregoi praninë e vetëm 0,0063 ± 0,0005 μg/ml Rg5 në gjak.Nuk u zbuluan xhensenozide të mbetura, gjë që tregon një biodisponibilitet të dobët oral dhe për rrjedhojë ekspozimin e reduktuar ndaj këtyre xhensenozideve.
Linja qelizore e adenokarcinomës së zorrës së trashë Caco-2 është morfologjikisht dhe biokimikisht e ngjashme me qelizat epiteliale të zorrëve të njeriut, duke demonstruar dobinë e saj në vlerësimin e transportit të enterociteve nëpër barrierën epiteliale të zorrëve.Kjo analizë u bazua në një studim të mëparshëm 20 .Figura 3A,B,C,D,E,F tregojnë imazhe përfaqësuese të transportit ndërqelizor të G-Rg3r dhe G-Rg3 duke përdorur një model me një shtresë Caco-2.Transporti ndërqelizor i G-Rg3r ose G-Rg3 nëpër monoshtresat e Caco-2 nga ana bazolaterale në apikale (Pb-a) ishte dukshëm më e lartë se nga ana apikale në atë bazolaterale (Pa-b).Për G-Rg3r, vlera mesatare e Pa-b ishte 0,38 ± 0,06, e cila u rrit në 0,73 ± 0,06 pas trajtimit me 50 μmol/L verapamil dhe në 1,14 ± 0,09 pas trajtimit me 100 μmol/L verapamil (p <0,01 dhe p <0,01 përkatësisht Figura 2).3A).Vëzhgimet për G-Rg3 ndoqën një model të ngjashëm (Fig. 3B) dhe rezultatet treguan se trajtimi me verapamil rriti transportin e G-Rg3r dhe G-Rg3.Trajtimi me verapamil rezultoi gjithashtu në një rënie të konsiderueshme në raportet mesatare të rrjedhjes së Pb-a dhe G-Rg3r dhe G-Rg3s (Figura 3C,D,E,F), duke treguar se trajtimi me verapamil redukton përmbajtjen e ginsenoside në qelizat e rrjedhjes Caco-2..
Transporti ndërqelizor i G-Rg3 në monoshtresat e Caco-2 dhe thithja intestinale në një analizë të perfuzionit të miut.(A) Vlera Pa-b e grupit G-Rg3r në një shtresë Caco-2.(B) Vlera Pa-b e grupeve G-Rg3s në një shtresë Caco-2.(C) Vlera e Pb e grupit G-Rg3r në një shtresë Caco-2.(D) Vlera e Pb e grupeve G-Rg3s në një shtresë Caco-2.(E) Raporti i rendimentit të grupeve G-Rg3r në një shtresë të vetme Caco-2.(F) Raporti i rendimentit të grupeve G-Rg3 në një shtresë të vetme Caco-2.(G) Përqindja e përthithjes intestinale të G-Rg3r në një analizë perfuzioni te minjtë.(H) Përqindja e përthithjes intestinale të G-Rg3 në një analizë perfuzioni te minjtë.Përshkueshmëria dhe përthithja u krahasuan pa shtimin e verapamilit.Të dhënat shprehen si mesatare ± devijimi standard i pesë eksperimenteve të pavarura.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Në përputhje me punën e mëparshme20, u krye perfuzion ortotopik i zorrëve te minjtë për të përcaktuar nëse thithja e G-Rg3 në zorrë rritet pas trajtimit me verapamil.Figura 3G,H tregojnë analizat përfaqësuese të perfuzionit për të vlerësuar përqindjen e përthithjes intestinale të G-Rg3r dhe G-Rg3 në minjtë model kanceroz gjatë periudhave kohore të mësipërme.Përqindja fillestare e marrjes së dobët të G-Rg3r prej rreth 10% u rrit në më shumë se 20% pas trajtimit me 50 μM verapamil dhe në më shumë se 25% pas trajtimit me 100 μM verapamil.Po kështu, G-Rg3, i cili kishte një përthithje fillestare prej 10%, gjithashtu tregoi një kulm prej mbi 20% pas trajtimit me 50 μM verapamil dhe gati 30% pas trajtimit me 100 μM verapamil, duke sugjeruar që frenimi i P-gp nga verapamil përmirëson thithja e zorrëve G-Rg3 në një model miu të kancerit të mushkërive.
Sipas metodës së mësipërme, minjtë e modelit të kancerit të induktuar nga B(a)P u ndanë rastësisht në gjashtë grupe, siç tregohet në Figurën 4A.Në grupin e trajtimit me G-Rg3 nuk u vu re asnjë humbje domethënëse e peshës ose shenja klinike të toksicitetit në krahasim me grupin e kontrollit (të dhënat nuk tregohen).Pas 20 javësh trajtimi, u mblodhën mushkëritë e secilit mi.Figura 4B tregon tumoret makroskopike të mushkërive te minjtë në grupet e mësipërme të trajtimit dhe Figura 4C tregon një mikrografë përfaqësuese të dritës të një tumori përfaqësues.Për sa i përket ngarkesës së tumorit në secilin grup (Fig. 4D), vlerat për minjtë e trajtuar me G-Rg3r dhe G-Rg3s ishin përkatësisht 0,75 ± 0,29 mm3 dhe 0,81 ± 0,30 mm3, ndërsa vlerat për minjtë G të trajtuar me -Rg3 ishin 1,63 përkatësisht ±0,40 mm3.minjtë e kontrollit (p <0.001), duke treguar se trajtimi me G-Rg3 uli ngarkesën e tumorit tek minjtë.Administrimi i verapamilit e rriti më tej këtë reduktim: vlerat në minjtë verapamil + G-Rg3r u ulën nga 0,75 ± 0,29 mm3 në 0,33 ± 0,25 mm3 (p < 0,01), dhe vlerat për verapamil + nga 0,81 ± 0,30 mm3 u ulën në 0,81 ± 0,30 mm3, mm3 në minjtë e trajtuar me G. -Rg3s (p <0.05), që tregon se verapamil mund të përmirësojë efektin frenues të G-Rg3 në tumorigjenezën.Ngarkesa tumorale nuk tregoi dallime domethënëse midis grupit të kontrollit dhe grupit verapamil, grupit G-Rg3r dhe grupit G-Rg3s, dhe grupit verapamil+G-Rg3r dhe grupit verapamil+G-Rg3s.Për më tepër, nuk kishte toksicitet të rëndësishëm të mëlçisë ose veshkave të lidhura me trajtimet e vlerësuara (Figura 4E,F).
Ngarkesa e tumorit pas trajtimit me G-Rg3 dhe nivelet plazmatike ose intestinale G-Rg3r dhe G-Rg3 në grupet e treguara.(A) Dizajn eksperimental.(B) Tumoret makroskopike në një model miu.Tumoret tregohen me shigjeta.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r në kombinim me verapamil.d: G-Rg3 në kombinim me verapamil.d: Verapamil.e: kontrolli.(C) Mikrografi optik i tumorit në zmadhim.Përgjigje: 100x.b: 400X.(D) Efekti i trajtimit me G-Rg3 + verapamil në ngarkesën e tumorit në minjtë A/J.(E) Nivelet plazmatike të enzimës së mëlçisë ALT.(F) Nivelet plazmatike të enzimës renale Cr.(G) Nivelet plazmatike të G-Rg3r ose G-Rg3 të grupeve të treguara.(H) Nivelet e G-Rg3r ose G-Rg3s në zorrët e grupeve të treguara.Të dhënat shprehen si mesatare ± devijimi standard i përcaktimeve të trefishta.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Nivelet e G-Rg3 në minjtë e modelit të kancerit të induktuar nga B(a)P u vlerësuan me UPLC-MS/MS pas një periudhe trajtimi 20-javor, sipas metodës së përshkruar në seksionin "Metoda".Figura 4G dhe H tregojnë respektivisht nivelet e G-Rg3 në plazmë dhe në zorrë.Nivelet e G-Rg3r në plazmë ishin 0,44 ± 0,32 μmol/L dhe u rritën në 1,17 ± 0,47 μmol/L me administrimin e njëkohshëm të verapamilit (p < 0,001), ndërsa nivelet e G-Rg3r në zorrë ishin 0,53 ± 0,08 μg/l.Kur kombinohet me verapamil, g u rrit në 1,35 ± 0,13 μg/g (p < 0,001).Për G-Rg3, rezultatet ndoqën një model të ngjashëm, duke treguar se trajtimi me verapamil rriti biodisponibilitetin oral të G-Rg3 në minjtë A/J.
Analiza e qëndrueshmërisë së qelizave u përdor për të vlerësuar citotoksicitetin e B(a)P dhe G-Rg3 në qelizat hEL.Citotoksiciteti i shkaktuar nga B(a)P në qelizat hEL tregohet në figurën 5A, ndërsa vetitë jotoksike të G-Rg3r dhe G-Rg3 tregohen në figurat 5A dhe 5B.5B, C. Për të vlerësuar efektin citoprotektiv të G-Rg3, B(a)P u bashkëadministrua me përqendrime të ndryshme të G-Rg3r ose G-Rg3 në qelizat hEL.Siç tregohet në figurën 5D, G-Rg3r në përqendrime prej 5 μM, 10 μM dhe 20 μM rivendosi qëndrueshmërinë e qelizave në përkatësisht 58.3%, 79.3% dhe 77.3%.Rezultate të ngjashme mund të shihen edhe në grupin G-Rg3s.Kur përqendrimet e G-Rg3 ishin 5 μM, 10 μM dhe 20 μM, qëndrueshmëria e qelizave u rivendos në përkatësisht 58,3%, 72,7% dhe 76,7% (Figura 5E).).Prania e adukteve BPDE-ADN u mat duke përdorur një kit ELISA.Rezultatet tona treguan se nivelet e aduktit BPDE-ADN u rritën në grupin e trajtuar me B(a)P krahasuar me grupin e kontrollit, por krahasuar me bashkëtrajtimin me G-Rg3, nivelet e aduktit BPDE-ADN në grupin B(a)P B në grupin e trajtuar, nivelet e adduktit të ADN-së u reduktuan ndjeshëm.Rezultatet e trajtimit vetëm me B(a)P tregohen në Figurën 5F (1,87 ± 0,33 kundrejt 3,77 ± 0,42 për G-Rg3r, 1,93 ± 0,48 kundrejt 3,77 ± 0,42 për G-Rg3s, p <0,01).
Qëndrueshmëria e qelizave dhe formimi i aduktit BPDE-ADN në qelizat hEL të trajtuara me G-Rg3 dhe B(a)P.(A) Qëndrueshmëria e qelizave hEL të trajtuara me B(a)P.(B) Qëndrueshmëria e qelizave hEL të trajtuara me G-Rg3r.(C) Qëndrueshmëria e qelizave hEL të trajtuara me G-Rg3.(D) Qëndrueshmëria e qelizave hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3r.(E) Qëndrueshmëria e qelizave hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3.(F) Nivelet e aduktit BPDE-ADN në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3.Të dhënat shprehen si mesatare ± devijimi standard i përcaktimeve të trefishta.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Shprehja e enzimës GST u zbulua pas bashkëtrajtimit me 10 μM B(a)P dhe 10 μM G-Rg3r ose G-Rg3s.Rezultatet tona treguan se B(a)P shtypi shprehjen e GST (59,7 ± 8,2% në grupin G-Rg3r dhe 39 ± 4,5% në grupin G-Rg3s), dhe B(a)P u shoqërua me ose me G-Rg3r , ose me G-Rg3r, ose me G-Rg3r.Bashkëtrajtimi me G-Rg3s rivendosi shprehjen e GST.Shprehja e GST (103,7 ± 15,5% në grupin G-Rg3r dhe 110 ± 11,1% në grupin G-Rg3s, p < 0,05 dhe p < 0,001, përkatësisht, Fig. 6A, B dhe C).Aktiviteti i GST u vlerësua duke përdorur një komplet të analizës së aktivitetit.Rezultatet tona treguan se grupi i trajtimit të kombinuar kishte aktivitet më të lartë GST krahasuar me grupin vetëm B(a)P (96,3 ± 6,6% kundrejt 35,7 ± 7,8% në grupin G-Rg3r kundrejt 92,3 ± 6,5 në grupin G-Rg3r ).% kundrejt 35,7 ± 7,8% në grupin G-Rg3s, p < 0,001, Figura 6D).
Shprehja e GST dhe Nrf2 në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3.(A) Zbulimi i shprehjes GST me Western blotting.(B) Shprehja sasiore e GST në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3r.(C) Shprehja sasiore e GST në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3s.(D) Aktiviteti GST në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3.(E) Zbulimi i shprehjes Nrf2 me Western blotting.(F) Shprehja sasiore e Nrf2 në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3r.(G) Shprehja sasiore e Nrf2 në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3s.Të dhënat shprehen si mesatare ± devijimi standard i përcaktimeve të trefishta.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Për të sqaruar rrugët e përfshira në shtypjen e ndërmjetësuar nga G-Rg3 të tumorigjenezës së induktuar nga B(a)P, shprehja e Nrf2 u vlerësua nga Western blotting.Siç tregohet në figurat 6E,F,G, krahasuar me grupin e kontrollit, vetëm niveli i Nrf2 në grupin e trajtimit B(a)P u ul;megjithatë, krahasuar me grupin e trajtimit B(a)P, nivelet e B(a) Nrf2 në grupin PG-Rg3 u rritën (106 ± 9,5% për G-Rg3r kundrejt 51,3 ± 6,8%, 117 ± 6, 2% për G-Rg3r kundrejt 41 ± 9,8% për G-Rg3s, p < 0,01).
Ne konfirmuam rolin parandalues të Nrf2 duke shtypur shprehjen Nrf2 duke përdorur ARN specifike të vogla ndërhyrëse (siRNA).Knockdown Nrf2 u konfirmua nga Western blotting (Fig. 7A,B).Siç tregohet në figurat 7C,D, bashkëtrajtimi i qelizave hEL me B(a)P dhe G-Rg3 rezultoi në një ulje të numrit të addukteve BPDE-ADN (1.47 ± 0.21) krahasuar me trajtimin me B(a)P vetëm në grupin e kontrollit siRNA.) G-Rg3r ishte 4,13 ± 0,49, G-Rg3s ishte 1,8 ± 0,32 dhe 4,1 ± 0,57, p < 0,01).Sidoqoftë, efekti frenues i G-Rg3 në formimin e BPDE-ADN-së u shfuqizua nga rrëzimi i Nrf2.Në grupin siNrf2, nuk kishte asnjë ndryshim domethënës në formimin e aduktit BPDE-ADN midis bashkë-trajtimit B(a)P dhe G-Rg3 dhe trajtimit vetëm me B(a)P (3,0 ± 0,21 për G-Rg3r kundrejt 3,56 ± 0,32 ).për G-Rg3r kundrejt 3,6 për G-Rg3s kundrejt ±0,45 kundrejt 4,0±0,37, p > 0,05).
Efekti i knockdown Nrf2 në formimin e aduktit BPDE-ADN në qelizat hEL.(A) Knockdown Nrf2 u konfirmua nga Western blotting.(B) Kuantifikimi i intensitetit të brezit Nrf2.(C) Efekti i bllokimit të Nrf2 në nivelet e aduktit BPDE-ADN në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3r.(D) Efekti i rënies së Nrf2 në nivelet e aduktit BPDE-ADN në qelizat hEL të trajtuara me B(a)P dhe G-Rg3.Të dhënat shprehen si mesatare ± devijimi standard i përcaktimeve të trefishta.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Ky studim vlerësoi efektet parandaluese të ekstrakteve të ndryshme të xhensenit të kuq në një model miu të kancerit të mushkërive të induktuar nga B(a)P dhe trajtimi KRGB uli ndjeshëm ngarkesën e tumorit.Duke marrë parasysh që G-Rg3 ka përmbajtjen më të lartë në këtë ekstrakt xhensen, është studiuar roli i rëndësishëm i këtij xhensenozidi në frenimin e tumorigjenezës.Të dy G-Rg3r dhe G-Rg3 (dy epimerë të G-Rg3) reduktuan ndjeshëm ngarkesën e tumorit në një model të miut të kancerit të induktuar nga B(a)P.G-Rg3r dhe G-Rg3 ushtrojnë efekte antikancerogjene duke nxitur apoptozën e qelizave tumorale21, duke penguar rritjen e tumorit22, duke ndalur ciklin qelizor23 dhe duke ndikuar në angiogjenezën24.G-Rg3 është treguar gjithashtu se frenon metastazën qelizore25, dhe aftësia e G-Rg3 për të rritur efektet e kimioterapisë dhe radioterapisë është dokumentuar26,27.Poon et al demonstruan se trajtimi G-Rg3 mund të zvogëlojë efektet gjenotoksike të B(a)P28.Ky studim demonstron potencialin terapeutik të G-Rg3 në shënjestrimin e molekulave kancerogjene mjedisore dhe parandalimin e kancerit.
Pavarësisht nga potenciali i tyre i mirë profilaktik, biodisponibiliteti i dobët oral i ginsenosideve përbën një sfidë për përdorimin klinik të këtyre molekulave.Analiza farmakokinetike e administrimit oral të xhensenozideve te minjtë tregoi se biodisponibiliteti i tij është ende më pak se 5%29.Këto teste treguan se pas periudhës 20-javore të trajtimit, vetëm nivelet e Rg5 në gjak u ulën.Megjithëse mekanizmi themelor i disponueshmërisë së dobët biologjike mbetet për t'u sqaruar, P-gp mendohet të jetë i përfshirë në rrjedhjen e ginsenosideve.Kjo punë tregoi për herë të parë se administrimi i verapamilit, një bllokues P-gp, rrit biodisponibilitetin oral të G-Rg3r dhe G-Rg3s.Kështu, ky zbulim sugjeron që G-Rg3r dhe G-Rg3s veprojnë si substrate të P-gp për të rregulluar rrjedhjen e tij.
Kjo punë tregon se trajtimi i kombinuar me verapamil rrit biodisponibilitetin oral të G-Rg3 në një model miu të kancerit të mushkërive.Ky zbulim mbështetet nga rritja e transportit transqelizor intestinal të G-Rg3 pas bllokimit të P-gp, duke rritur kështu përthithjen e tij.Analizat në qelizat Caco2 treguan se trajtimi me verapamil reduktoi rrjedhjen e G-Rg3r dhe G-Rg3s duke përmirësuar përshkueshmërinë e membranës.Një studim nga Yang et al.Studimet kanë treguar se trajtimi me ciklosporinë A (një tjetër bllokues P-gp) rrit biodisponueshmërinë e ginsenoside Rh2 nga një vlerë bazë prej 1%20 në më shumë se 30%.Përbërjet e xhensenozideve K dhe Rg1 gjithashtu treguan rezultate të ngjashme30,31.Kur verapamili dhe ciklosporina A u administruan së bashku, rrjedhja e përbërjes K në qelizat Caco-2 u reduktua ndjeshëm nga 26.6 në më pak se 3, ndërsa nivelet e tij ndërqelizore u rritën 40-fish30.Në prani të verapamilit, nivelet e Rg1 u rritën në qelizat epiteliale të mushkërive të miut, duke sugjeruar një rol të P-gp në rrjedhjen e ginsenoside, siç tregohet nga Meng et al.31.Megjithatë, verapamil nuk pati të njëjtin efekt në rrjedhjen e disa ginsenosideve (si Rg1, F1, Rh1 dhe Re), duke treguar se ato nuk ndikohen nga substratet P-gp, siç tregohet nga Liang et al.32 .Ky vëzhgim mund të lidhet me përfshirjen e transportuesve të tjerë dhe strukturave alternative të ginsenoside.
Mekanizmi i efektit parandalues të G-Rg3 në kancer është i paqartë.Studimet e mëparshme kanë treguar se G-Rg3 parandalon dëmtimin e ADN-së dhe apoptozën duke reduktuar stresin oksidativ dhe inflamacionin16,33, i cili mund të jetë mekanizmi themelor për parandalimin e tumorigjenezës së induktuar nga B(a)P.Disa raporte tregojnë se gjenotoksiciteti i shkaktuar nga B(a)P mund të reduktohet duke moduluar enzimat e fazës II për të formuar BPDE-DNA34.GST është një enzimë tipike e fazës II që pengon formimin e aduktit BPDE-ADN duke nxitur lidhjen e GSH me BPDE, duke reduktuar kështu dëmtimin e ADN-së të shkaktuar nga B(a)P35.Rezultatet tona tregojnë se trajtimi me G-Rg3 redukton citotoksicitetin e induktuar nga B(a)P dhe formimin e aduktit BPDE-ADN në qelizat hEL dhe rikthen shprehjen dhe aktivitetin e GST in vitro.Sidoqoftë, këto efekte mungonin në mungesë të Nrf2, duke sugjeruar që G-Rg3 shkakton efekte citoprotektive përmes rrugës Nrf2.Nrf2 është një faktor kryesor transkriptimi për enzimat e detoksifikimit të fazës II që promovon pastrimin e ksenobiotikëve36.Aktivizimi i rrugës Nrf2 shkakton citoproteksion dhe redukton dëmtimin e indeve37.Për më tepër, disa raporte kanë mbështetur rolin e Nrf2 si një shtypës i tumorit në kancerogjenezën38.Studimi ynë tregon se induksioni i rrugës Nrf2 nga G-Rg3 luan një rol të rëndësishëm rregullator në gjenotoksicitetin e induktuar nga B(a)P duke shkaktuar detoksifikimin B(a)P duke aktivizuar enzimat e fazës II, duke frenuar kështu procesin e tumorigjenezës.
Puna jonë zbulon potencialin e xhensenit të kuq në parandalimin e kancerit të mushkërive të shkaktuar nga B(a)P te minjtë përmes përfshirjes së rëndësishme të ginsenoside G-Rg3.Biodisponibiliteti i dobët oral i kësaj molekule pengon aplikimin e saj klinik.Megjithatë, ky studim tregon për herë të parë se G-Rg3 është një substrat i P-gp dhe administrimi i një frenuesi P-gp rrit biodisponibilitetin e G-Rg3 in vitro dhe in vivo.G-Rg3 redukton citotoksicitetin e induktuar nga B(a)P duke rregulluar rrugën Nrf2, e cila mund të jetë një mekanizëm i mundshëm për funksionin e tij parandalues.Studimi ynë konfirmon potencialin e ginsenoside G-Rg3 për parandalimin dhe trajtimin e kancerit të mushkërive.
Minjtë femra A/J gjashtë javësh (20 ± 1 g) dhe minjtë meshkuj Wistar 7 javësh (250 ± 20 g) u morën nga Laboratori Jackson (Bar Harbor, SHBA) dhe Instituti i Zoologjisë Wuhan.Universiteti (Wuhan, Kinë).Qendra kineze e mbledhjes së kulturës së tipit (Wuhan, Kinë) na ofroi qelizat Caco-2 dhe hEL.Sigma-Aldrich (St. Louis, SHBA) është një burim i B(a)P dhe tricaprine.Xhensenozidet e pastruar G-Rg3r dhe G-Rg3s, sulfoksidi dimetil (DMSO), kompleti i analizës së proliferimit të CellTiter-96 (MTS), verapamil, medium esencial minimal (MEM) dhe serumi i gjedhit fetal (FBS) u blenë nga Chengdu Must Bio-Technology .Co., Ltd.(Chengdu, Kinë).Paketa e mini QIAamp ADN-ja dhe kompleti BPDE-ADN aduct ELISA u blenë nga Qiagen (Stanford, CA, SHBA) dhe Cell Biolabs (San Diego, CA, USA).Kompleti i analizës së aktivitetit GST dhe kompleti i analizës së proteinës totale (metoda standarde BCA) u blenë nga Solarbio (Pekin, Kinë).Të gjitha ekstraktet e xhensenit të kuq ruhen në Laboratorin Mingyu 7. Universiteti Baptist i Hong Kongut (Hong Kong, Kinë) dhe Qendra e Kancerit në Kore (Seul, Kore) janë burime komerciale të ekstraktit të CRG dhe ekstrakteve të ndryshme të xhensenit të kuq me origjinë të ndryshme koreane (përfshirë KRGA, KRGB dhe KRGC).Xhenseni i kuq është bërë nga rrënjët e xhensenit të freskët 6-vjeçar.Ekstrakti i xhensenit të kuq përftohet duke larë xhensen me ujë tri herë, më pas duke përqendruar ekstraktin ujor dhe në fund thahet në temperaturë të ulët për të përftuar pluhurin e ekstraktit të xhensenit.Antitrupat (anti-Nrf2, anti-GST dhe β-aktinë), imunoglobulina G anti-lepuri e konjuguar me peroksidazë rrikë (IgG), reagenti i transfektimit, siRNA e kontrollit dhe siRNA Nrf2 u blenë nga Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) .), SHBA).
Qelizat Caco2 dhe hEL u kultivuan në enë kulture qelizore 100 mm2 me MEM që përmbante 10% FBS në 37 °C në një atmosferë të lagësht prej 5% CO2.Për të përcaktuar efektin e kushteve të trajtimit, qelizat hEL u inkubuan me përqendrime të ndryshme të B(a)P dhe G-Rg3 në MEM për 48 orë.Qelizat mund të analizohen më tej ose të mblidhen për të përgatitur ekstrakte pa qeliza.
Të gjitha eksperimentet u miratuan nga Komiteti i Etikës së Kafshëve Eksperimentale të Kolegjit Mjekësor Tongji, Universiteti i Shkencës dhe Teknologjisë Huazhong (Nr. Miratimi 2019; Regjistrimi Nr. 4587TH).Të gjitha eksperimentet u kryen në përputhje me udhëzimet dhe rregulloret përkatëse, dhe studimi u krye në përputhje me udhëzimet Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE).Minjve A/J tetë javësh iu injektua fillimisht në mënyrë intraperitoneale me B(a)P në tretësirë tricaprine (100 mg/kg, 0.2 ml).Pas një jave, minjtë u ndanë në mënyrë të rastësishme në grupe kontrolli dhe grupe të ndryshme trajtimi, 15 minj në secilin grup, dhe u ndanë një herë në ditë.Pas 20 javësh trajtimi, kafshët u sakrifikuan nga asfiksia e CO2.Mushkëritë u mblodhën dhe u fiksuan për 24 orë.Numri i tumoreve sipërfaqësore dhe madhësive individuale të tumorit u mat për çdo mushkëri nën një mikroskop disektues.Vlerësimet e vëllimit të tumorit (V) u llogaritën duke përdorur shprehjen e mëposhtme: V (mm3) = 4/3πr3, ku r është diametri i tumorit.Shuma neto e të gjithë vëllimeve të tumorit në mushkëritë e minjve përfaqësonte vëllimin total të tumorit dhe vëllimi mesatar total i tumorit në secilin grup përfaqësonte ngarkesën e tumorit.Mostrat e gjakut të plotë dhe të zorrëve u mblodhën dhe u ruajtën në -80°C për përcaktimin UPLC-MS/MS.Serumi u mblodh dhe një analizues i automatizuar kimik u përdor për të analizuar nivelet e alaninës aminotransferazës (ALT) dhe kreatininës (Cr) në serum për të vlerësuar funksionin e mëlçisë dhe veshkave.
Mostrat e mbledhura u hoqën nga magazinimi i ftohtë, u shkrinë, u peshuan dhe u vendosën në tuba siç përshkruhet më sipër.Kësaj iu shtua 0,5 μM phlorizin (standard i brendshëm) në 0,8 ml tretësirë metanoli.Më pas indi u homogjenizua duke përdorur Tissue-Tearor dhe homogjenati u transferua më pas në një tub mikrocentrifuge 1.5 ml.Përzierja u centrifugua në 15500 rpm për 15 minuta.Pasi të keni hequr 1,0 ml supernatant, thajeni me azot.Dyqind mikrolitra metanol u përdorën për rikuperim.Gjaku mblidhet dhe përpunohet në një linjë dhe përdoret si referencë për të gjitha matjet.
Pllakat Transwell me 24 pusi u mbollën me 1.0 × 105 qeliza Caco-2 për pus për të vlerësuar rritjen e mundshme të transportit të G-Rg3 me shtimin e verapamilit.Pas 3 javësh kulture, qelizat u lanë me HBSS dhe u parainkubuan në 37°C.400 μL 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, ose një përzierje me 50 ose 100 μM verapamil) u injektuan në anën bazolaterale ose apikale të monoshtresës dhe 600 μL tretësirë HBSS iu shtuan shtresës tjetër. anësor.Mblidhni 100 µl të mjedisit të kulturës në kohën e caktuar (0, 15, 30, 45, 60, 90 dhe 120 minuta) dhe shtoni 100 µl HBSS për të plotësuar këtë vëllim.Mostrat u ruajtën në -4 °C deri në zbulimin nga UPLC-MS/MS.Shprehja Papp = dQ/(dT × A × C0) përdoret për të përcaktuar sasinë e përshkueshmërisë së dukshme të njëanshme apikale dhe bazolaterale dhe anasjelltas (Pa-b dhe Pb-a, respektivisht);dQ/dT është ndryshimi i përqendrimit, A (0,6 cm2) është sipërfaqja e një shtrese dhe C0 është përqendrimi fillestar i dhuruesit.Raporti i rrjedhjes llogaritet si Pb-a/Pa-b, që përfaqëson shkallën e rrjedhjes së barit të studimit.
Minjtë meshkuj Wistar u agjëruan për 24 orë, pinë vetëm ujë dhe u anestezuan me një injeksion intravenoz të tretësirës pentobarbital 3.5%.Tubi silikoni i intubuar ka si hyrje fundin e duodenit dhe si dalje fundin e ileumit.Përdorni një pompë peristaltike për të pompuar hyrjen me 10 µM G-Rg3r ose G-Rg3s në HBSS izotonike me një shpejtësi rrjedhjeje prej 0,1 ml/min.Efekti i verapamilit u vlerësua duke shtuar 50 μM ose 100 μM të përbërjes në 10 μM G-Rg3r ose G-Rg3s.UPLC-MS/MS u krye në ekstraktet e perfuzionit të mbledhura në pikat kohore 60, 90, 120 dhe 150 minuta pas fillimit të perfuzionit.Përqindja e përthithjes përcaktohet me formulën % përthithje = (1 – Cout/Cin) × 100%;përqendrimi i G-Rg3 në dalje dhe në hyrje shprehet përkatësisht me Cout dhe Cin.
Qelizat hEL u mbollën në pllaka 96 pusesh me një densitet prej 1 × 104 qeliza për pus dhe u trajtuan me B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) ose G-Rg3 të tretur në DMSO .Ilaçet u holluan më pas me mjedis kulture në përqendrime të ndryshme (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) për 48 orë.Duke përdorur një komplet analizash MTS të disponueshëm në treg, qelizat iu nënshtruan një protokolli standard dhe më pas u matën duke përdorur një lexues mikropllake në 490 nm.Niveli i qëndrueshmërisë së qelizave të grupeve të bashkëtrajtuara me B(a)P (10 μM) dhe G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) u vlerësua sipas metodës së mësipërme dhe u krahasua me grupin e patrajtuar.
Qelizat hEL u mbollën në pllaka me 6 pus me një densitet prej 1 × 105 qeliza/pus dhe u trajtuan me 10 μMB (a) P në prani ose mungesë të 10 μM G-Rg3.Pas 48 orësh trajtimi, ADN-ja u nxor nga qelizat hEL duke përdorur paketën QIAamp DNA Mini sipas protokollit të prodhuesit.Formimi i addukteve BPDE-ADN u zbulua duke përdorur një komplet ELISA të addukteve BPDE-ADN.Nivelet relative të aduktit BPDE-ADN u matën duke përdorur një lexues mikropllake duke matur absorbimin në 450 nm.
Qelizat hEL u mbollën në pllaka 96 pusesh me një densitet 1 × 104 qeliza për pus dhe u trajtuan me 10 μMB (a) P në mungesë ose prani të 10 μM G-Rg3 për 48 orë.Aktiviteti GST u mat duke përdorur një komplet tregtar të analizës së aktivitetit GST sipas protokollit të prodhuesit.Aktivizimi relativ i GST u mat me thithjen në 450 nm duke përdorur një lexues mikropllake.
Qelizat hEL u lanë me PBS të ftohtë në akull dhe më pas u lizuan duke përdorur tampon të analizës së radioimunoprecipitimit që përmban inhibitorë proteazë dhe frenues fosfatazë.Pas përcaktimit të sasisë së proteinave duke përdorur një komplet të analizës së proteinës totale, 30 μg proteina në çdo kampion u nda me 12% SDS-PAGE dhe u transferua në një membranë PVDF me elektroforezë.Membranat u bllokuan me qumësht të skremuar 5% dhe u inkubuan me antitrupa primar gjatë natës në 4°C.Pas inkubimit me antitrupa dytësorë të konjuguar me peroksidazë rrikë, u shtuan reagentë të rritur të kimilumineshencës për të vizualizuar sinjalin lidhës.Intensiteti i çdo brezi proteine u mat duke përdorur softuerin ImageJ.
Softueri GraphPad Prism 7.0 u përdor për të analizuar të gjitha të dhënat, të shprehura si mesatare ± devijimi standard.Variacioni ndërmjet grupeve të trajtimit u vlerësua duke përdorur testin Student t ose analizën e njëanshme të variancës, me një vlerë P <0.05 që tregon rëndësinë statistikore.
Të gjitha të dhënat e marra ose të analizuara gjatë këtij studimi janë të përfshira në këtë artikull të botuar dhe skedarë informacioni plotësues.
Torre, LA, Siegel, RL dhe Jemal, A. Statistikat e kancerit të mushkërive.ndajfolje.I skaduar.bar.biologjisë.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Kancerogjenët e duhanit, biomarkerët e tyre dhe kanceri i shkaktuar nga duhani.Nat.Kapelan i kancerit.3, 733-744 (2003).
Phillips, DH dhe Venitt, S. Adduktet e ADN-së dhe proteinave në indet njerëzore që vijnë nga ekspozimi ndaj tymit të duhanit.ndërkombëtariteti.J. Kanceri.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA dhe Yu M. Efekti i Houttuynia cordata dhe silibinin në tumorigjenezën e mushkërive të shkaktuar nga benzo (a) pireni në minjtë A/J.Cancer 7, 1053-1057 (2005).
Tang, W. et al.Produkt natyral antikancerogjen i izoluar nga materiale mjekësore kineze.nofulla.bar.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Efikasiteti i polifenonit E, xhensenit të kuq dhe rapamicinës në tumorigjenezën e mushkërive të shkaktuar nga benzo(a)pireni në minjtë A/J.Cancer 8, 52-58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS dhe Yuan, KS Red, përfshirja në terapinë e kancerit.nofulla.J. Nutt.bar.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS dhe Gao, L. Ginsenosides në rrënjët dhe gjethet e xhensenit amerikan.J. Agric.Kimia e ushqimit.44, 717-720 (1996).
Attele AS, Wu JA dhe Yuan KS Farmakologjia e xhensenit: shumë përbërës dhe shumë efekte.biokimia.farmakologjisë.58, 1685–1693 (1999).
Koha e postimit: Shtator-17-2023