Asante kwa kutembelea Nature.com.Toleo la kivinjari unachotumia lina uwezo mdogo wa kutumia CSS.Kwa matokeo bora zaidi, tunapendekeza utumie toleo jipya zaidi la kivinjari chako (au kuzima hali ya uoanifu katika Internet Explorer).Wakati huo huo, ili kuhakikisha usaidizi unaoendelea, tunaonyesha tovuti bila mtindo au JavaScript.
Ginseng nyekundu imetumika katika dawa za jadi za Asia kwa mamia ya miaka.Katika utafiti huu, tulitathmini uwezo wa aina nne za ginseng nyekundu (ginseng nyekundu ya Kichina, ginseng nyekundu ya Kikorea A, ginseng nyekundu ya Kikorea B, na ginseng nyekundu ya Kikorea C) inayokuzwa katika mikoa tofauti ili kuzuia uundaji na ukuaji wa mapafu yanayotokana na kasinojeni. uvimbe.Jaribio la benzo(a)pyrene (B(a)P) lilifanywa kwa panya A/J, na ginseng nyekundu ya Kikorea B ilipatikana kuwa yenye ufanisi zaidi katika kupunguza mzigo wa uvimbe kati ya aina nne za ginseng nyekundu.Aidha, tulichambua yaliyomo katika ginsenosides mbalimbali (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 na Rg5) katika dondoo nne za ginseng nyekundu na kugundua kuwa ginseng nyekundu ya Kikorea ilikuwa na. viwango vya juu zaidi vya ginsenoside Rg3 (G-Rg3), ikipendekeza kuwa G-Rg3 inaweza kuwa na jukumu muhimu katika ufanisi wake wa matibabu.Kazi hii inaonyesha kwamba G-Rg3 ina bioavailability ya chini kiasi.Walakini, G-Rg3 iliposimamiwa pamoja na kizuizi cha P-gp verapamil, mtiririko wa G-Rg3 ndani ya seli za Caco-2 ulipungua, kiwango cha kunyonya kwa matumbo ya G-Rg3 kiliongezwa kwa mfano wa panya, na G-Rg3. iliongezeka.Katika seli za Caco-2, outflow ya Rg3 hupungua, na kiwango cha mkusanyiko wa Rg3 hupungua.G-Rg3 huongezeka kwenye utumbo na plazima, na uwezo wake wa kuzuia uvimbe pia huimarishwa katika mfano wa panya wa B(a)P-induced tumorigenesis.Pia tuligundua kuwa G-Rg3 ilipunguza B(a)P-iliyotokana na cytotoxicity na uundaji wa viongezeo vya DNA katika seli za mapafu ya binadamu, na kurejesha usemi na shughuli za vimeng'enya vya awamu ya pili kupitia njia ya Nrf2, ambayo inaweza kuhusiana na utaratibu unaowezekana wa utendaji. ya kizuizi cha G -Rg3..Kuhusu tukio la uvimbe wa mapafu.Utafiti wetu unaonyesha uwezekano wa jukumu muhimu kwa G-Rg3 katika kulenga uvimbe wa mapafu katika miundo ya panya.Upatikanaji wa kibayolojia wa mdomo wa ginsenoside hii huimarishwa kwa kulenga P-glycoprotein, kuruhusu molekuli kutoa athari za anticancer.
Aina ya kawaida ya saratani ya mapafu ni saratani ya mapafu ya seli isiyo ndogo (NSCLC), ambayo ni moja ya sababu kuu za vifo vya saratani nchini Uchina na Amerika Kaskazini1,2.Sababu kuu inayoongeza hatari ya kupata saratani ya mapafu isiyo ndogo ni uvutaji sigara.Moshi wa sigara una zaidi ya kanojeni 60, ikiwa ni pamoja na benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrosamines, na isotopu zenye mionzi kutokana na kuoza kwa radoni.3 Polycyclic hidrokaboni zenye kunukia B(a)P ndizo chanzo kikuu cha sumu katika sigara. moshi.Inapokaribia B(a)P, saitokromu P450 huigeuza kuwa B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), ambayo humenyuka pamoja na DNA kuunda BPDE-DNA aduct 4. Zaidi ya hayo, hizi viambatanisho hushawishi uvimbe wa mapafu katika panya walio na hatua ya uvimbe na histopatholojia sawa na uvimbe wa mapafu ya binadamu5.Kipengele hiki hufanya modeli ya saratani ya mapafu inayosababishwa na B(a)P kuwa mfumo unaofaa wa kutathmini misombo yenye sifa zinazowezekana za kuzuia saratani.
Mkakati mmoja unaowezekana wa kuzuia ukuaji wa saratani ya mapafu katika vikundi vilivyo hatarini zaidi, haswa wavutaji sigara, ni utumiaji wa mawakala wa kuzuia chemo kuzuia ukuaji wa vidonda vya neoplastiki vya intraepithelial na kwa hivyo kuzuia kuendelea kwao kwa ugonjwa mbaya.Uchunguzi wa wanyama unaonyesha kwamba mawakala mbalimbali wa chemopreventive ni bora6.Ripoti yetu ya awali7 ilionyesha athari nzuri za kinga za ginseng nyekundu kwenye saratani ya mapafu.Mimea hii imekuwa ikitumika kwa karne nyingi katika dawa za jadi za Asia ili kurefusha maisha na afya, na imethibitishwa kuwa na athari za antitumor8.
Kipengele amilifu cha ginseng ni ginsenoside, ambayo hutumiwa kama kiashiria cha mchanganyiko kutathmini ubora wa dondoo za ginseng.Uchambuzi wa kiasi cha dondoo za ginseng ghafi kwa kawaida huhusisha matumizi ya ginsenosides kadhaa, ikiwa ni pamoja na RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, na Rc9,10.Ginsenosides zina matumizi kidogo ya kimatibabu kwa sababu ya uwezo wao duni wa kumeza viumbe11.Ingawa utaratibu wa upatikanaji huu duni wa bioavailability hauko wazi, utiririshaji wa ginsenosides unaosababishwa na P-glycoprotein (P-gp)12 unaweza kuwa sababu.P-gp ni mojawapo ya visafirishaji muhimu zaidi vya efflux katika familia kuu ya kisafirisha kaseti inayofunga ATP, ambayo hutumia nishati ya hidrolisisi ya ATP kutoa dutu ndani ya seli kwenye mazingira ya nje.Visafirishaji vya P-gp kwa kawaida husambazwa sana kwenye utumbo, figo, ini na kizuizi cha ubongo-damu13.P-gp ina jukumu muhimu katika ufyonzaji wa matumbo, na uzuiaji wa P-gp huongeza ufyonzaji wa mdomo na upatikanaji wa baadhi ya dawa za kuzuia saratani12,14.Mifano ya vizuizi vilivyotumika hapo awali katika fasihi ni verapamil na cyclosporine A15.Kazi hii inahusisha kuanzisha mfumo wa panya wa kuchunguza saratani ya mapafu inayosababishwa na B(a)P ili kutathmini uwezo wa dondoo tofauti za ginseng nyekundu kutoka China na Korea kuathiri magonjwa mabaya.Dondoo hizo zilichambuliwa kibinafsi ili kutambua ginsenosides maalum ambazo zinaweza kuathiri saratani.Verapamil kisha kutumika kulenga P-gp na kuboresha bioavailability ya mdomo na ufanisi wa matibabu ya ginsenosides zinazolenga saratani.
Utaratibu ambao ginseng saponins hutoa athari za matibabu kwenye saratani bado haijulikani wazi.Utafiti umeonyesha kuwa ginsenosides mbalimbali zinaweza kupunguza uharibifu wa DNA unaosababishwa na kansa kwa kupunguza mkazo wa kioksidishaji na kuamsha vimeng'enya vya detoxification ya awamu ya II, na hivyo kuzuia uharibifu wa seli.Glutathione S-transferase (GST) ni kimeng'enya cha kawaida cha awamu ya pili ambacho kinahitajika ili kupunguza uharibifu wa DNA unaosababishwa na kansa17.Nuclear erithroid 2-related factor 2 (Nrf2) ni kipengele muhimu cha unukuzi ambacho hudhibiti redox homeostasis na kuamilisha usemi wa vimeng'enya vya awamu ya pili na majibu ya antioxidant ya cytoprotective18.Utafiti wetu pia ulichunguza athari za ginsenosides zilizotambuliwa katika kupunguza B (a) P-induced cytotoxicity na BPDE-DNA adduct malezi, pamoja na kushawishi vimeng'enya vya awamu ya II kwa kurekebisha njia ya Nrf2 katika seli za kawaida za mapafu.
Kuanzishwa kwa mfano wa panya wa saratani ya B(a)P inalingana na kazi ya awali5.Mchoro wa 1A unaonyesha muundo wa majaribio wa matibabu ya wiki 20 ya modeli ya saratani ya panya inayotokana na B(a)P, maji (udhibiti), dondoo ya ginseng nyekundu ya Kichina (CRG), dondoo ya ginseng nyekundu ya Kikorea A (KRGA), na nyekundu ya Kikorea. ginseng.Dondoo B (KRGB) na Kikorea Red Ginseng Dondoo C (KRGC).Baada ya wiki 20 za matibabu ya ginseng nyekundu, panya walitolewa dhabihu kwa kukosa hewa ya CO2.Mchoro wa 1B unaonyesha uvimbe mkubwa wa mapafu katika wanyama wanaotibiwa kwa aina tofauti za ginseng nyekundu, na Mchoro 1C unaonyesha maikrografu nyepesi ya sampuli ya uvimbe.Mzigo wa uvimbe wa wanyama waliotibiwa na KRGB (1.5 ± 0.35) ulikuwa chini kuliko ule wa wanyama wa kudhibiti (0.82 ± 0.2, P <0.05), kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 1D.Kiwango cha wastani cha kizuizi cha mzigo wa tumor kilikuwa 45%.Dondoo zingine za ginseng nyekundu zilizojaribiwa hazikuonyesha mabadiliko makubwa kama haya katika mzigo wa tumor (P > 0.05).Hakuna madhara dhahiri yaliyozingatiwa katika mfano wa panya wakati wa wiki 20 za matibabu ya ginseng nyekundu, ikiwa ni pamoja na hakuna mabadiliko katika uzito wa mwili (data haijaonyeshwa) na hakuna sumu ya ini au figo (Mchoro 1E, F).
Dondoo la ginseng nyekundu hutibu ukuaji wa uvimbe wa mapafu katika panya wa A/J.(A) Usanifu wa majaribio.(B) Uvimbe mkubwa wa mapafu katika mfano wa panya.Tumors huonyeshwa kwa mishale.a: Kikundi cha ginseng nyekundu ya Kichina.b: kikundi A cha ginseng nyekundu ya Kikorea.c: Kikorea nyekundu ginseng kikundi B. d: Kikorea nyekundu ginseng kundi C. d: Kundi la kudhibiti.(C) Mikrografu nyepesi inayoonyesha uvimbe wa mapafu.Ukuzaji: 100. b: 400. (D) Upakiaji wa tumor katika kikundi cha dondoo la ginseng nyekundu.(E) Viwango vya Plasma ya kimeng'enya cha ini ALT.(F) Viwango vya Plasma vya kimeng'enya cha figo Cr.Data huonyeshwa kama wastani ± mkengeuko wa kawaida.*P <0.05.
Dondoo nyekundu za ginseng zilizoainishwa katika utafiti huu zilichambuliwa na kromatografia ya utendakazi wa hali ya juu ya tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) ili kubainisha ginsenosides zifuatazo: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3 , Rh2, F1, Rk1 na Rg5.Masharti ya UPLC na MS yaliyotumika kupima uchanganuzi yalielezwa katika ripoti ya awali19.Chromatogram za UPLC-MS/MS za dondoo nne nyekundu za ginseng zinaonyeshwa kwenye Mchoro 2A.Kulikuwa na tofauti kubwa katika maudhui ya jumla ya ginsenoside, yenye maudhui ya juu kabisa ya ginsenoside katika CRG (590.27 ± 41.28 μmol/L) (Mchoro 2B).Wakati wa kutathmini ginsenosides ya mtu binafsi (Kielelezo 2C), KRGB ilionyesha kiwango cha juu cha G-Rg3 ikilinganishwa na ginsenosides nyingine (58.33 ± 3.81 μmol/L kwa G-Rg3s na 41.56 ± 2.88 μmol/L kwa G -Rg3r).aina ya ginseng nyekundu (P <0.001).G-Rg3 hutokea kama jozi ya stereoisomers G-Rg3r na G-Rg3s, ambazo hutofautiana katika nafasi ya kikundi cha hidroksili kwenye kaboni 20 (Mchoro 2D).Matokeo yanaonyesha kuwa G-Rg3r au G-Rg3 inaweza kuwa na uwezo muhimu wa kuzuia saratani katika modeli ya panya ya saratani inayosababishwa na B(a)P.
Maudhui ya ginsenosides katika dondoo mbalimbali za ginseng nyekundu.(A) Chromatogram za UPLC-MS/MS za dondoo nne nyekundu za ginseng.(B) Kadirio la jumla ya maudhui ya ginsenoside katika dondoo zilizoonyeshwa.(C) Utambuzi wa ginsenosides binafsi katika dondoo zilizo na lebo.(D) Miundo ya ginsenoside stereoisomers G-Rg3r na G-Rg3s.Data huonyeshwa kama wastani wa ± mkengeuko wa kawaida wa maamuzi yenye utatu.***P <0.001.
Utafiti wa UPLC-MS/MS ulihitaji kuhesabiwa kwa ginsenosides katika sampuli za utumbo na damu baada ya wiki 20 za matibabu.Matibabu na KRGB ilionyesha kuwepo kwa 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 pekee katika damu.Hakuna ginsenosides iliyobaki iliyogunduliwa, ikionyesha uwepo duni wa bioavailability ya mdomo na kwa hivyo kupunguzwa kwa ginsenosides hizi.
Laini ya seli ya koloni ya adenocarcinoma Caco-2 inafanana kimofolojia na kibayolojia na seli za epithelial ya matumbo ya binadamu, inayoonyesha manufaa yake katika kutathmini usafiri wa enterocyte kwenye kizuizi cha epithelial ya utumbo.Uchambuzi huu ulitokana na utafiti wa awali 20 .Takwimu 3A,B,C,D,E,F zinaonyesha picha wakilishi za usafiri wa transcellular wa G-Rg3r na G-Rg3 kwa kutumia muundo wa Caco-2 monolayer.Usafiri wa kuvuka seli wa G-Rg3r au G-Rg3 kwenye safu moja za Caco-2 kutoka upande wa msingi hadi wa apical (Pb-a) ulikuwa wa juu zaidi kuliko kutoka upande wa apical hadi upande wa basolateral (Pa-b).Kwa G-Rg3r, thamani ya Pa-b ilikuwa 0.38 ± 0.06, ambayo iliongezeka hadi 0.73 ± 0.06 baada ya matibabu na 50 μmol/L verapamil na hadi 1.14 ± 0.09 baada ya matibabu na 100 μmol/L verapamil (p <0.001 na 0.001 na kwa mtiririko huo; Kielelezo 2).3A).Uchunguzi wa G-Rg3 ulifuata muundo sawa (Mchoro 3B), na matokeo yalionyesha kuwa matibabu ya verapamil yaliimarisha usafiri wa G-Rg3r na G-Rg3.Matibabu ya Verapamil pia yalisababisha upungufu mkubwa wa uwiano wa Pb-a na G-Rg3r na G-Rg3s efflux (Mchoro 3C,D,E,F), kuonyesha kwamba matibabu ya verapamil hupunguza maudhui ya ginsenoside katika seli za Caco-2 efflux..
Usafirishaji wa G-Rg3 katika seli moja za Caco-2 na ufyonzaji wa matumbo katika kipimo cha upenyezaji wa panya.(A) Thamani ya Pa-b ya kikundi cha G-Rg3r katika safu moja ya Caco-2.(B) Thamani ya Pa-b ya vikundi vya G-Rg3s katika safu moja ya Caco-2.(C) Thamani ya Pb ya kikundi cha G-Rg3r katika safu moja ya Caco-2.(D) Thamani ya Pb ya vikundi vya G-Rg3s katika safu moja ya Caco-2.(E) Uwiano wa mavuno wa vikundi vya G-Rg3r katika safu moja ya Caco-2.(F) Uwiano wa mavuno wa vikundi vya G-Rg3 katika safu moja ya Caco-2.(G) Asilimia ya ufyonzaji wa G-Rg3r kwenye matumbo katika jaribio la upenyezaji katika panya.(H) Asilimia ya kufyonzwa kwa matumbo ya G-Rg3 katika kipimo cha upenyezaji katika panya.Upenyezaji na ngozi ililinganishwa bila kuongezwa kwa verapamil.Data inaonyeshwa kama wastani ± mkengeuko wa kawaida wa majaribio matano huru.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Sambamba na kazi ya awali20, upenyezaji wa matumbo ya panya ulifanywa ili kubaini kama unyonyaji wa G-Rg3 kwenye utumbo huongezeka baada ya matibabu ya verapamil.Takwimu za 3G,H zinaonyesha vipimo wakilishi vya upenyezaji ili kutathmini asilimia ya ufyonzwaji wa matumbo wa G-Rg3r na G-Rg3 katika panya wa mfano wa saratani katika muda uliotajwa hapo juu.Asilimia ya awali ya matumizi dhaifu ya G-Rg3r ya takriban 10% iliongezeka hadi zaidi ya 20% baada ya matibabu na verapamil 50 μM na hadi zaidi ya 25% baada ya matibabu na 100 μM verapamil.Kadhalika, G-Rg3, ambayo ilikuwa na matumizi ya awali ya 10%, pia ilionyesha kilele cha zaidi ya 20% baada ya matibabu na verapamil 50 μM na karibu 30% baada ya matibabu na 100 μM verapamil, na kupendekeza kuwa kuzuiwa kwa P-gp na verapamil kunaboresha. utumbo wa G-absorption Rg3 katika mfano wa panya wa saratani ya mapafu.
Kulingana na mbinu iliyo hapo juu, panya wa mfano wa saratani ya B(a)P waligawanywa nasibu katika vikundi sita, kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 4A.Hakuna upungufu mkubwa wa uzito au dalili za kliniki za sumu zilizozingatiwa katika kikundi cha matibabu cha G-Rg3 ikilinganishwa na kikundi cha udhibiti (data haijaonyeshwa).Baada ya wiki 20 za matibabu, mapafu ya kila panya yalikusanywa.Mchoro wa 4B unaonyesha uvimbe wa mapafu wa jumla katika panya katika vikundi vya matibabu vilivyo hapo juu, na Mchoro wa 4C unaonyesha maikrografu nyepesi ya mwakilishi wa uvimbe.Kuhusu mzigo wa uvimbe katika kila kikundi (Mchoro 4D), thamani za panya zilizotibiwa na G-Rg3r na G-Rg3s zilikuwa 0.75 ± 0.29 mm3 na 0.81 ± 0.30 mm3, mtawaliwa, wakati maadili ya G Panya yalitibiwa. zenye -Rg3 zilikuwa 1.63 kwa mtiririko huo ± 0.40 mm3.kudhibiti panya (p <0.001), ikionyesha kuwa matibabu ya G-Rg3 yalipunguza mzigo wa uvimbe kwenye panya.Usimamizi wa verapamil uliboresha zaidi upunguzaji huu: maadili ya verapamil+ G-Rg3r yalipungua kutoka 0.75 ± 0.29 mm3 hadi 0.33 ± 0.25 mm3 (p <0.01), na maadili ya verapamil+ kutoka 0.81 ± 0.30 mm2 yalipungua hadi ± 0.30 mm2 ± 1. mm3 katika panya waliotibiwa kwa G. -Rg3s (p <0.05), ikionyesha kuwa verapamil inaweza kuongeza athari ya kuzuia ya G-Rg3 kwenye tumorigenesis.Mzigo wa tumor haukuonyesha tofauti kubwa kati ya kikundi cha udhibiti na kikundi cha verapamil, kikundi cha G-Rg3r na kikundi cha G-Rg3s, na kikundi cha verapamil+G-Rg3r na kikundi cha verapamil+G-Rg3s.Zaidi ya hayo, hakukuwa na sumu kali ya ini au figo iliyohusishwa na matibabu yaliyotathminiwa (Mchoro 4E, F).
Mzigo wa tumor baada ya matibabu ya G-Rg3 na viwango vya plasma au utumbo G-Rg3r na G-Rg3 katika vikundi vilivyoonyeshwa.(A) Usanifu wa majaribio.(B) Uvimbe wa Macroscopic katika mfano wa panya.Tumors huonyeshwa kwa mishale.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r pamoja na verapamil.d: G-Rg3 pamoja na verapamil.d: Verapamil.e: udhibiti.(C) Mikrografu ya macho ya uvimbe katika ukuzaji.Jibu: 100x.b: 400X.(D) Madhara ya G-Rg3 + matibabu ya verapamil kwenye mzigo wa tumor katika panya A/J.(E) Viwango vya Plasma ya kimeng'enya cha ini ALT.(F) Viwango vya Plasma vya kimeng'enya cha figo Cr.(G) Viwango vya Plasma vya G-Rg3r au G-Rg3 vya vikundi vilivyoonyeshwa.(H) Viwango vya G-Rg3r au G-Rg3 kwenye matumbo ya vikundi vilivyoonyeshwa.Data huonyeshwa kama wastani wa ± mkengeuko wa kawaida wa maamuzi yenye utatu.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Viwango vya G-Rg3 katika panya wa mfano wa saratani ya B(a)P vilitathminiwa na UPLC-MS/MS baada ya muda wa matibabu wa wiki 20 kulingana na mbinu iliyoelezwa katika sehemu ya Mbinu.Takwimu 4G na H zinaonyesha viwango vya plasma na utumbo wa G-Rg3, mtawalia.Viwango vya Plasma G-Rg3r vilikuwa 0.44 ± 0.32 μmol/L na kuongezeka hadi 1.17 ± 0.47 μmol/L kwa matumizi ya wakati huo huo ya verapamil (p <0.001), wakati viwango vya G-Rg3r kwenye matumbo vilikuwa 0.53 ± 0.08 µ.Inapojumuishwa na verapamil, g iliongezeka hadi 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001).Kwa G-Rg3, matokeo yalifuata muundo sawa, kuonyesha kwamba matibabu ya verapamil yaliongeza upatikanaji wa mdomo wa G-Rg3 katika panya A/J.
Uchambuzi wa uwezo wa kisanduku kutathmini uwezo wa seli ulitumiwa kutathmini sumu ya cytotoxic ya B(a)P na G-Rg3 kwenye seli za hEL.Sitotoxicity inayosababishwa na B(a)P katika seli za hEL inaonyeshwa kwenye Mchoro 5A, huku sifa zisizo na sumu za G-Rg3r na G-Rg3 zinaonyeshwa katika Mchoro 5A na 5B.5B, C. Ili kutathmini athari ya cytoprotective ya G-Rg3, B(a)P ilisimamiwa pamoja na viwango mbalimbali vya G-Rg3r au G-Rg3 katika seli za hEL.Kama inavyoonyeshwa kwenye Kielelezo 5D, G-Rg3r katika viwango vya 5 μM, 10 μM, na 20 μM uweza wa seli uliorejeshwa hadi 58.3%, 79.3%, na 77.3%, mtawalia.Matokeo sawa yanaweza pia kuonekana katika kikundi cha G-Rg3s.Wakati viwango vya G-Rg3 vilikuwa 5 µM, 10 µM na 20 µM, uhai wa seli ulirejeshwa hadi 58.3%, 72.7% na 76.7%, mtawalia (Mchoro 5E) .)Uwepo wa nyongeza za BPDE-DNA ulipimwa kwa kutumia ELISA kit.Matokeo yetu yalionyesha kuwa viwango vya nyongeza vya BPDE-DNA viliongezwa katika kikundi cha B(a)P-kutibiwa ikilinganishwa na kikundi cha udhibiti, lakini ikilinganishwa na matibabu ya pamoja ya G-Rg3, viwango vya nyongeza vya BPDE-DNA katika kikundi B(a)P. B katika kundi lililotibiwa, viwango vya nyongeza vya DNA vilipunguzwa sana.Matokeo ya matibabu na B(a)P pekee yanaonyeshwa kwenye Mchoro 5F (1.87 ± 0.33 dhidi ya 3.77 ± 0.42 kwa G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 dhidi ya 3.77 ± 0.42 kwa G -Rg3s, p <0.001).
Uwezo wa seli na uundaji wa viambata vya BPDE-DNA katika seli za hEL zilizotibiwa na G-Rg3 na B(a)P.(A) Uwezo wa kutumia seli za hEL zilizotibiwa na B(a)P.(B) Uwezo wa kutumia seli za hEL zilizotibiwa kwa G-Rg3r.(C) Uwezo wa kutumia seli za hEL zilizotibiwa kwa G-Rg3.(D) Uwezo wa kutumia seli za hEL zilizotibiwa na B(a)P na G-Rg3r.(E) Uwezo wa kutumia seli za hEL zilizotibiwa na B(a)P na G-Rg3.(F) Viwango vya BPDE-DNA adduct katika seli za hEL zilizotibiwa na B(a)P na G-Rg3.Data huonyeshwa kama wastani wa ± mkengeuko wa kawaida wa maamuzi yenye utatu.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Usemi wa kimeng'enya cha GST uligunduliwa baada ya matibabu ya pamoja na 10 μM B(a)P na 10 μM G-Rg3r au G-Rg3s.Matokeo yetu yalionyesha kuwa B(a)P ilikandamiza usemi wa GST (59.7 ± 8.2% katika kikundi cha G-Rg3r na 39 ± 4.5% katika kikundi cha G-Rg3), na B(a)P ilihusishwa na G-Rg3r. , au na G-Rg3r, au na G-Rg3r.Matibabu ya pamoja na G-Rg3s imerejesha usemi wa GST.Usemi wa GST (103.7 ± 15.5% katika kikundi cha G-Rg3r na 110 ± 11.1% katika kikundi cha G-Rg3s, p <0.05 na p <0.001, kwa mtiririko huo, Mchoro 6A, B, na C).Shughuli ya GST ilitathminiwa kwa kutumia kifaa cha kupima shughuli.Matokeo yetu yalionyesha kuwa kikundi cha matibabu ya mchanganyiko kilikuwa na shughuli za juu za GST ikilinganishwa na kikundi cha B (a) P pekee (96.3 ± 6.6% dhidi ya 35.7 ± 7.8% katika kikundi cha G-Rg3r dhidi ya 92.3 ± 6.5 katika kikundi cha G-Rg3r )% dhidi ya 35.7 ± 7.8% katika kikundi cha G-Rg3s, p <0.001, Kielelezo 6D).
Udhihirisho wa GST na Nrf2 katika seli za hEL zilizotibiwa na B(a)P na G-Rg3.(A) Ugunduzi wa usemi wa GST na ukaushaji wa Magharibi.(B) Kielelezo cha kiasi cha GST katika seli za hEL zinazotibiwa na B(a)P na G-Rg3r.(C) Kielelezo cha kiasi cha GST katika seli za hEL zinazotibiwa na B(a)P na G-Rg3s.(D) Shughuli ya GST katika seli za hEL zinazotibiwa na B(a)P na G-Rg3.(E) Ugunduzi wa usemi wa Nrf2 na ufutaji wa Magharibi.(F) Kielelezo cha kiasi cha Nrf2 katika seli za hEL zinazotibiwa na B(a)P na G-Rg3r.(G) Kielelezo cha kiasi cha Nrf2 katika seli za hEL zinazotibiwa na B(a)P na G-Rg3s.Data huonyeshwa kama wastani wa ± mkengeuko wa kawaida wa maamuzi yenye utatu.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Ili kufafanua njia zinazohusika katika ukandamizaji wa upatanishi wa G-Rg3 wa uvimbe unaotokana na B(a)P, usemi wa Nrf2 ulitathminiwa na ufutaji wa Magharibi.Kama inavyoonyeshwa katika Mchoro 6E, F, G, ikilinganishwa na kikundi cha udhibiti, kiwango cha Nrf2 tu katika kikundi cha matibabu cha B (a) P kilipunguzwa;hata hivyo, ikilinganishwa na kundi la matibabu la B (a) P, B (a) viwango vya Nrf2 katika kundi la PG-Rg3 viliongezwa (106 ± 9.5% kwa G-Rg3r dhidi ya 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% kwa G-Rg3r dhidi ya 41 ± 9.8% kwa G-Rg3s, p <0.01).
Tulithibitisha jukumu la kuzuia la Nrf2 kwa kukandamiza usemi wa Nrf2 kwa kutumia RNA ndogo inayoingilia (siRNA).Nrf2 knockdown ilithibitishwa na Western blotting (Mchoro 7A, B).Kama inavyoonyeshwa katika Mchoro 7C,D, matibabu ya pamoja ya seli za hEL na B(a)P na G-Rg3 ilisababisha kupungua kwa idadi ya viambata vya BPDE-DNA (1.47 ± 0.21) ikilinganishwa na matibabu ya B(a)P. peke yake katika kikundi cha kudhibiti siRNA.) G-Rg3r ilikuwa 4.13 ± 0.49, G-Rg3s ilikuwa 1.8 ± 0.32 na 4.1 ± 0.57, p <0.01).Hata hivyo, athari ya kuzuia ya G-Rg3 kwenye uundaji wa BPDE-DNA ilikomeshwa na Nrf2.Katika kundi la siNrf2, hapakuwa na tofauti kubwa katika uundaji wa adduct ya BPDE-DNA kati ya matibabu ya pamoja ya B(a)P na G-Rg3 na matibabu ya B(a)P pekee (3.0 ± 0.21 kwa G-Rg3r dhidi ya 3.56 ± 0.32 )kwa G-Rg3r dhidi ya 3.6 kwa G-Rg3 dhidi ya ±0.45 dhidi ya 4.0±0.37, p > 0.05).
Madhara ya Nrf2 kuporomoka kwa uundaji wa BPDE-DNA katika seli za hEL.(A) Mgongano wa Nrf2 ulithibitishwa na ufutaji wa Magharibi.(B) Ukadiriaji wa ukubwa wa bendi ya Nrf2.(C) Athari ya Nrf2 kuporomoka kwa viwango vya BPDE-DNA katika seli za hEL zinazotibiwa na B(a)P na G-Rg3r.(D) Athari ya Nrf2 kuporomoka kwa viwango vya BPDE-DNA katika seli za hEL zinazotibiwa na B(a)P na G-Rg3.Data huonyeshwa kama wastani wa ± mkengeuko wa kawaida wa maamuzi yenye utatu.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Utafiti huu ulitathmini athari za kinga za dondoo mbalimbali za ginseng nyekundu kwenye modeli ya panya ya B(a)P-ikiwa saratani ya mapafu, na matibabu ya KRGB yalipunguza kwa kiasi kikubwa mzigo wa uvimbe.Kwa kuzingatia kwamba G-Rg3 ina maudhui ya juu zaidi katika dondoo hii ya ginseng, jukumu muhimu la ginsenoside hii katika kuzuia tumorigenesis limechunguzwa.G-Rg3r na G-Rg3 (epima mbili za G-Rg3) zilipunguza kwa kiasi kikubwa mzigo wa uvimbe katika muundo wa panya wa saratani inayosababishwa na B(a)P.G-Rg3r na G-Rg3 hutoa athari za kupambana na saratani kwa kushawishi apoptosis ya seli za uvimbe21, kuzuia ukuaji wa uvimbe22, kuzuia mzunguko wa seli23 na kuathiri angiogenesis24.G-Rg3 pia imeonyeshwa kuzuia metastasis25 za seli, na uwezo wa G-Rg3 kuongeza athari za chemotherapy na radiotherapy umerekodiwa26,27.Poon et al alionyesha kuwa matibabu ya G-Rg3 yanaweza kupunguza athari za jeni za B(a)P28.Utafiti huu unaonyesha uwezo wa kimatibabu wa G-Rg3 katika kulenga molekuli za kansa za kimazingira na kuzuia saratani.
Licha ya uwezo wao mzuri wa kukinga, upungufu duni wa bioavailability ya ginsenosides huleta changamoto kwa matumizi ya kimatibabu ya molekuli hizi.Uchunguzi wa Pharmacokinetic wa utawala wa mdomo wa ginsenosides katika panya ulionyesha kuwa bioavailability yake bado ni chini ya 5% 29.Vipimo hivi vilionyesha kuwa baada ya muda wa matibabu ya wiki 20, viwango vya damu vya Rg5 pekee vilipungua.Ingawa utaratibu wa kimsingi wa upatikanaji duni wa viumbe hai bado haujafafanuliwa, P-gp inadhaniwa kuhusika katika kutoweka kwa ginsenosides.Kazi hii ilionyesha kwa mara ya kwanza kwamba matumizi ya verapamil, kizuizi cha P-gp, huongeza upatikanaji wa mdomo wa G-Rg3r na G-Rg3s.Kwa hivyo, matokeo haya yanapendekeza kwamba G-Rg3r na G-Rg3s hufanya kama sehemu ndogo za P-gp ili kudhibiti utokaji wake.
Kazi hii inaonyesha kuwa matibabu ya mchanganyiko na verapamil huongeza upatikanaji wa mdomo wa G-Rg3 katika mfano wa panya wa saratani ya mapafu.Utambuzi huu unaungwa mkono na kuongezeka kwa usafirishaji wa seli za matumbo za G-Rg3 kwenye kizuizi cha P-gp, na hivyo kuongeza unyonyaji wake.Uchambuzi katika seli za Caco2 ulionyesha kuwa matibabu ya verapamil yalipunguza utokaji wa G-Rg3r na G-Rg3 huku ikiboresha upenyezaji wa utando.Utafiti wa Yang et al.Uchunguzi umeonyesha kuwa matibabu na cyclosporine A (kizuizi kingine cha P-gp) huongeza bioavailability ya ginsenoside Rh2 kutoka thamani ya msingi ya 1% 20 hadi zaidi ya 30%.Michanganyiko ya Ginsenosides K na Rg1 pia ilionyesha matokeo sawa30,31.Wakati verapamil na cyclosporin A zilitumiwa pamoja, mtiririko wa kiwanja K katika seli za Caco-2 ulipungua kwa kiasi kikubwa kutoka 26.6 hadi chini ya 3, wakati viwango vyake vya ndani ya seli viliongezeka mara 40-30.Katika uwepo wa verapamil, viwango vya Rg1 viliongezeka katika seli za epithelial ya mapafu ya panya, na hivyo kupendekeza jukumu la P-gp katika ginsenoside efflux, kama inavyoonyeshwa na Meng et al.31.Hata hivyo, verapamil haikuwa na athari sawa kwenye utokaji wa baadhi ya ginsenosides (kama vile Rg1, F1, Rh1 na Re), ikionyesha kwamba haziathiriwi na substrates za P-gp, kama inavyoonyeshwa na Liang et al.32 .Uchunguzi huu unaweza kuhusishwa na ushiriki wa wasafirishaji wengine na miundo mbadala ya ginsenoside.
Utaratibu wa athari ya kuzuia ya G-Rg3 kwenye saratani hauko wazi.Uchunguzi wa awali umeonyesha kuwa G-Rg3 huzuia uharibifu wa DNA na apoptosis kwa kupunguza mkazo wa kioksidishaji na kuvimba16,33, ambayo inaweza kuwa utaratibu wa msingi wa kuzuia uvimbe wa B(a) P-induced.Baadhi ya ripoti zinaonyesha kuwa sumu ya jeni inayosababishwa na B(a)P inaweza kupunguzwa kwa kurekebisha vimeng'enya vya awamu ya pili kuunda BPDE-DNA34.GST ni kimeng'enya cha awamu ya pili ambacho huzuia uundaji wa viambajengo vya BPDE-DNA kwa kukuza ufungaji wa GSH kwa BPDE, na hivyo kupunguza uharibifu wa DNA unaosababishwa na B(a)P35.Matokeo yetu yanaonyesha kuwa matibabu ya G-Rg3 hupunguza B(a)P-induced cytotoxicity na BPDE-DNA adduct uundaji katika seli za hEL na kurejesha kujieleza na shughuli za GST in vitro.Hata hivyo, madhara haya hayakuwepo kwa kutokuwepo kwa Nrf2, na kupendekeza kuwa G-Rg3 inaleta athari za cytoprotective kupitia njia ya Nrf2.Nrf2 ni kipengele kikuu cha unukuzi kwa vimeng'enya vya awamu ya pili vya kuondoa sumu mwilini ambavyo vinakuza uondoaji wa xenobiotics36.Uamilisho wa njia ya Nrf2 huleta ulinzi wa cytoprotection na hupunguza uharibifu wa tishu37.Zaidi ya hayo, ripoti kadhaa zimeunga mkono jukumu la Nrf2 kama kikandamizaji cha tumor katika carcinogenesis38.Utafiti wetu unaonyesha kuwa uingizaji wa njia ya Nrf2 na G-Rg3 ina jukumu muhimu la udhibiti katika sumu ya jeni inayosababishwa na B(a)P kwa kusababisha uondoaji wa sumu ya B(a)P kwa kuwezesha vimeng'enya vya awamu ya pili, na hivyo kuzuia mchakato wa tumorigenesis.
Kazi yetu inaonyesha uwezo wa ginseng nyekundu katika kuzuia saratani ya mapafu inayosababishwa na B(a)P kwenye panya kupitia uhusikaji muhimu wa ginsenoside G-Rg3.Upatikanaji duni wa mdomo wa molekuli hii huzuia matumizi yake ya kimatibabu.Hata hivyo, utafiti huu unaonyesha kwa mara ya kwanza kwamba G-Rg3 ni sehemu ndogo ya P-gp, na utawala wa kizuizi cha P-gp huongeza upatikanaji wa kibiolojia wa G-Rg3 katika vitro na katika vivo.G-Rg3 hupunguza B(a)P-iliyosababishwa na cytotoxicity kwa kudhibiti njia ya Nrf2, ambayo inaweza kuwa njia inayowezekana ya utendakazi wake wa kuzuia.Utafiti wetu unathibitisha uwezo wa ginsenoside G-Rg3 kwa kuzuia na matibabu ya saratani ya mapafu.
Panya jike A/J mwenye umri wa wiki sita (20 ± 1 g) na panya dume wa Wistar wa wiki 7 (250 ± 20 g) walipatikana kutoka Maabara ya Jackson (Bar Harbor, Marekani) na Taasisi ya Wuhan ya Zoolojia.Chuo Kikuu (Wuhan, China).Kituo cha Kukusanya Utamaduni wa Aina ya Kichina (Wuhan, Uchina) kilitupatia seli za Caco-2 na hEL.Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) ni chanzo cha B(a)P na tricaprine.Ginsenosides zilizosafishwa G-Rg3r na G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 proliferation assay kit (MTS), verapamil, minimal essential medium (MEM), na fetal bovine serum (FBS) zilinunuliwa kutoka Chengdu Must Bio-Technology. .Co., Ltd.(Chengdu, Uchina).Seti ndogo ya QIAamp DNA na BPDE-DNA adduct ELISA kit zilinunuliwa kutoka Qiagen (Stanford, CA, USA) na Cell Biolabs (San Diego, CA, USA).Seti ya majaribio ya shughuli ya GST na vifaa vya upimaji wa protini jumla (mbinu ya kawaida ya BCA) vilinunuliwa kutoka Solarbio (Beijing, Uchina).Dondoo zote za ginseng nyekundu zimehifadhiwa katika Maabara ya Mingyu 7. Chuo Kikuu cha Baptist cha Hong Kong (Hong Kong, Uchina) na Kituo cha Saratani cha Korea (Seoul, Korea) ni vyanzo vya kibiashara vya dondoo ya CRG na dondoo mbalimbali za ginseng nyekundu za asili mbalimbali za Kikorea (pamoja na KRGA, KRGB). na KRGC).Ginseng nyekundu imetengenezwa kutoka kwa mizizi ya ginseng safi ya umri wa miaka 6.Dondoo nyekundu ya ginseng hupatikana kwa kuosha ginseng kwa maji mara tatu, kisha kuzingatia dondoo la maji, na hatimaye kukausha kwa joto la chini ili kupata poda ya dondoo ya ginseng.Kingamwili (kinga-Nrf2, kizuia-GST, na β-actin), immunoglobulin G ya sungura iliyounganishwa na peroxidase ya farasi (IgG), kitendanishi cha maambukizi, siRNA ya kudhibiti, na Nrf2 siRNA zilinunuliwa kutoka kwa Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) .), MAREKANI).
Seli za Caco2 na hEL zilikuzwa katika sahani za utamaduni wa seli 100 mm2 na MEM ikiwa na 10% FBS saa 37 °C katika angahewa ya 5% CO2.Ili kubaini athari za hali ya matibabu, seli za hEL ziliwekwa ndani kwa viwango tofauti vya B(a)P na G-Rg3 katika MEM kwa saa 48.Seli zinaweza kuchanganuliwa zaidi au kukusanywa ili kuandaa dondoo zisizo na seli.
Majaribio yote yaliidhinishwa na Kamati ya Majaribio ya Maadili ya Wanyama ya Chuo cha Matibabu cha Tongji, Chuo Kikuu cha Sayansi na Teknolojia cha Huazhong (Idhini ya 2019; Usajili Nambari 4587TH).Majaribio yote yalifanywa kwa mujibu wa miongozo na kanuni husika, na utafiti ulifanyika kwa mujibu wa miongozo ya Utafiti wa Wanyama: Kuripoti kwa Majaribio ya Vivo (ARRIVE).Panya wa A/J wenye umri wa wiki nane walidungwa kwa mara ya kwanza ndani ya mshipa wa B(a)P katika myeyusho wa tricaprine (100 mg/kg, 0.2 ml).Baada ya wiki, panya waligawanywa kwa nasibu katika vikundi vya udhibiti na vikundi tofauti vya matibabu, panya 15 katika kila kikundi, na kupigwa mara moja kwa siku.Baada ya wiki 20 za matibabu, wanyama walitolewa dhabihu na CO2 asphyxia.Mapafu yalikusanywa na kuwekwa kwa masaa 24.Idadi ya vivimbe vya juu juu na saizi ya uvimbe mmoja mmoja ilikadiriwa kwa kila pafu chini ya darubini ya kuchambua.Makadirio ya kiasi cha uvimbe (V) yalikokotolewa kwa kutumia usemi ufuatao: V (mm3) = 4/3πr3, ambapo r ni kipenyo cha uvimbe.Jumla ya jumla ya wingi wa uvimbe kwenye mapafu ya panya iliwakilisha jumla ya ujazo wa uvimbe, na wastani wa ujazo wa uvimbe katika kila kundi uliwakilisha mzigo wa uvimbe.Sampuli za damu nzima na utumbo zilikusanywa na kuhifadhiwa kwa -80°C kwa ajili ya kubaini UPLC-MS/MS.Seramu ilikusanywa na kichanganuzi cha kemia kiotomatiki kilitumiwa kuchanganua viwango vya alanine aminotransferase (ALT) na viwango vya serum creatinine (Cr) ili kutathmini utendaji kazi wa ini na figo.
Sampuli zilizokusanywa ziliondolewa kwenye hifadhi ya baridi, zikayeyushwa, kupimwa, na kuwekwa kwenye mirija kama ilivyoelezwa hapo juu.Kwa hili iliongezwa 0.5 μM phlorizin (kiwango cha ndani) katika ufumbuzi wa methanoli 0.8 ml.Kisha tishu ziliwekwa homogenized kwa kutumia Tissue-Tearor na homojenati ilihamishiwa kwenye tube ya microcentrifuge ya 1.5 ml.Mchanganyiko huo uliwekwa katikati kwa 15500 rpm kwa dakika 15.Baada ya kuondoa 1.0 ml ya supernatant, kavu na nitrojeni.Mililita mia mbili ya methanoli ilitumiwa kurejesha.Damu hukusanywa na kusindika kwenye mstari mmoja na hutumika kama marejeleo ya vipimo vyote.
Sahani za Transwell zenye visima 24 zilipandwa seli za Caco-2 1.0 × 105 kwa kila kisima ili kutathmini uwezekano wa uboreshaji wa usafiri wa G-Rg3 kwa kuongeza verapamil.Baada ya wiki 3 za utamaduni, seli zilioshwa na HBSS na kuingizwa kabla ya 37 ° C.400 μL ya 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, au mchanganyiko na 50 au 100 μM verapamil) ilidungwa kwenye upande wa msingi au wa apical wa safu ya monolayer, na 600 μL ya suluji ya HBSS iliongezwa kwa nyingine. upande.Kusanya 100 µl za kitamaduni kwa nyakati zilizowekwa (0, 15, 30, 45, 60, 90 na 120 dakika) na uongeze 100 µl za HBSS ili kuunda kiasi hiki.Sampuli zilihifadhiwa kwa −4 °C hadi kugunduliwa na UPLC-MS/MS.Usemi Papp = dQ/(dT × A × C0) hutumika kukadiria upenyezaji unaoonekana wa unidirectional wa apical na basolateral na kinyume chake (Pa-b na Pb-a, mtawalia);dQ/dT ni mabadiliko ya mkusanyiko, A (0.6 cm2) ni eneo la uso wa safu moja, na C0 ni mkusanyiko wa wafadhili wa awali.Uwiano wa efflux huhesabiwa kama Pb-a/Pa-b, ambayo inawakilisha kiwango cha efflux ya dawa ya utafiti.
Panya wa kiume wa Wistar walifungwa kwa muda wa saa 24, wakanywa maji tu, na kutiwa ganzi kwa kudungwa kwenye mshipa wa suluhu ya 3.5% ya pentobarbital.Mrija wa silikoni uliotumbukizwa una mwisho wa duodenum kama mlango na mwisho wa ileamu kama njia ya kutokea.Tumia pampu ya peristaltic kusukuma ingizo na 10 µM G-Rg3r au G-Rg3s katika HBSS ya isotonic kwa kasi ya 0.1 ml/min.Athari ya verapamil ilitathminiwa kwa kuongeza 50 μM au 100 μM ya kiwanja hadi 10 μM G-Rg3r au G-Rg3s.UPLC-MS/MS ilitekelezwa kwenye vidondoo vya vinyunyizio vilivyokusanywa kwa wakati wa dakika 60, 90, 120, na 150 baada ya kuanza kwa unyunyizaji.Asilimia ya kunyonya imehesabiwa kwa formula% ngozi = (1 - Cout / Cin) × 100%;ukolezi wa G-Rg3 kwenye plagi na ingizo huonyeshwa na Cout na Cin, mtawalia.
seli za hEL zilipandwa kwenye sahani zenye visima 96 kwa msongamano wa seli 1 × 104 kwa kila kisima na kutibiwa na B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) au G-Rg3 iliyoyeyushwa katika DMSO. .Dawa hizo zilipunguzwa kwa njia ya kitamaduni hadi viwango tofauti (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) kwa masaa 48.Kwa kutumia kifaa cha majaribio cha MTS kinachopatikana kibiashara, seli ziliwekwa chini ya itifaki ya kawaida na kisha kupimwa kwa kutumia kisomaji cha mikroplate cha nm 490.Kiwango cha uhai wa seli za vikundi vilivyoshirikiwa na B(a)P (10 μM) na G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) kilitathminiwa kulingana na mbinu iliyo hapo juu na ikilinganishwa na kikundi kisichotibiwa.
seli za hEL zilipandwa kwenye sahani 6-visima kwa msongamano wa seli 1 × 105 / vizuri na kutibiwa na 10 μMB (a) P mbele au kutokuwepo kwa 10 μM G-Rg3.Baada ya saa 48 za matibabu, DNA ilitolewa kutoka kwa seli za hEL kwa kutumia Kifurushi Kidogo cha DNA cha QIAamp kulingana na itifaki ya mtengenezaji.Uundaji wa viongezi vya BPDE-DNA uligunduliwa kwa kutumia BPDE-DNA adduct ELISA kit.Viwango jamaa vya BPDE-DNA adduct vilipimwa kwa kutumia kisomaji microplate kwa kupima ufyonzaji katika 450 nm.
seli za hEL zilipandwa kwenye sahani za visima 96 kwa msongamano wa seli 1 × 104 kwa kila kisima na kutibiwa na 10 μMB (a) P kwa kukosekana au kuwepo kwa 10 μM G-Rg3 kwa 48 h.Shughuli ya GST ilipimwa kwa kutumia vifaa vya majaribio ya shughuli za GST kulingana na itifaki ya mtengenezaji.Uwezeshaji wa GST wa jamaa ulipimwa kwa kunyonya kwa nm 450 kwa kutumia kisomaji cha mabamba madogo.
seli za hEL zilioshwa na PBS ya barafu na kisha kunyunyishwa kwa kutumia bafa ya kupima radioimmunoprecipitation iliyo na vizuizi vya protease na vizuizi vya phosphatase.Baada ya kupima protini kwa kutumia kit jumla cha kupima protini, 30 μg ya protini katika kila sampuli ilitenganishwa na 12% SDS-PAGE na kuhamishiwa kwenye utando wa PVDF kwa electrophoresis.Utando ulizuiliwa na 5% ya maziwa ya skim na kuwekewa kingamwili za msingi usiku kucha saa 4°C.Baada ya kuamilishwa na kingamwili za sekondari zilizounganishwa na horseradish peroxidase, vitendanishi vilivyoimarishwa vya chemiluminescence viliongezwa ili kuibua ishara ya kumfunga.Uzito wa kila bendi ya protini ulihesabiwa kwa kutumia programu ya ImageJ.
Programu ya GraphPad Prism 7.0 ilitumiwa kuchanganua data yote, iliyoonyeshwa kama wastani wa ± mkengeuko wa kawaida.Tofauti kati ya vikundi vya matibabu ilitathminiwa kwa kutumia mtihani wa t wa Mwanafunzi au uchanganuzi wa njia moja wa tofauti, na thamani ya P <0.05 ikionyesha umuhimu wa takwimu.
Data zote zilizopatikana au kuchambuliwa wakati wa utafiti huu zimejumuishwa katika makala hii iliyochapishwa na faili za taarifa za ziada.
Torre, LA, Siegel, RL na Jemal, A. Takwimu za saratani ya mapafu.kielezi.Muda wake umeisha.dawa.biolojia.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Kansa za tumbaku, alama zao za kibayolojia na saratani inayosababishwa na tumbaku.Nat.Kasisi wa saratani.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH na Venitt, S. DNA na viambajengo vya protini katika tishu za binadamu vinavyotokana na kuathiriwa na moshi wa tumbaku.kimataifa.J. Saratani.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA na Yu M. Athari ya Houttuynia cordata na silibinin kwenye benzo(a)pyrene-induced lung tumorigenesis katika A/J panya.Saratani 7, 1053-1057 (2005).
Tang, W. et al.Bidhaa ya asili ya anticancer iliyotengwa na vifaa vya dawa vya Kichina.taya.dawa.6, 27 (2011).
Yang, Y. na wengine.Ufanisi wa polyphenon E, ginseng nyekundu, na rapamycin kwenye benzo(a) tumorigenesis ya mapafu inayosababishwa na pyrene katika panya A/J.Saratani 8, 52-58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., Yeye, TS na Yuan, KS Red, kuhusika katika tiba ya saratani.taya.J. Nutt.dawa.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS na Gao, L. Ginsenosides katika mizizi na majani ya ginseng ya Marekani.J. Agric.Kemia ya chakula.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA na Yuan KS Pharmacology ya ginseng: vipengele vingi na athari nyingi.biokemia.pharmacology.58, 1685–1693 (1999).
Muda wa kutuma: Sep-17-2023