Ташаккур ба шумо барои боздид аз Nature.com.Версияи браузере, ки шумо истифода мебаред, дастгирии маҳдуди CSS дорад.Барои натиҷаҳои беҳтарин, мо тавсия медиҳем, ки версияи навтари браузери худро истифода барем (ё хомӯш кардани ҳолати мувофиқат дар Internet Explorer).Дар ҳамин ҳол, барои таъмини дастгирии доимӣ, мо сайтро бе услуб ё JavaScript намоиш медиҳем.
Женьшеньи сурх дар тибби анъанавии Осиё садҳо сол истифода мешавад.Дар ин таҳқиқот, мо қобилияти чаҳор намуди женьшени сурхро (женьшени сурхи чинӣ, женьшени сурхи кореягӣ А, женьшенги сурхи кореягӣ В ва женьшени сурхи Кореяи C), ки дар минтақаҳои гуногун парвариш карда мешаванд, барои ҷилавгирӣ аз ташаккул ва афзоиши шуши аз канцероген ба вуҷуд омадаро арзёбӣ кардем. варамҳо.Санҷиши бензо(а)пирен (B(a)P) дар мушҳои A/J гузаронида шуд ва дар байни чаҳор навъи женьшеньи сурхи кореягӣ B дар коҳиш додани сарбории варам самараноктарин будааст.Илова бар ин, мо мундариҷаи гинсенозидҳои гуногунро (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ва Rg5) дар чор иқтибосҳои женьшени сурх таҳлил кардем ва дарёфтем, ки дар женьшени сурхи Корея B мавҷуд аст. сатҳи баланди гинсенозид Rg3 (G-Rg3), ки нишон медиҳад, ки G-Rg3 метавонад дар самаранокии табобатии он нақши муҳим бозад.Ин кор нишон медиҳад, ки G-Rg3 дастрасии нисбатан паст дорад.Аммо, вақте ки G-Rg3 бо ингибитори P-gp верапамил таъин карда шуд, ҷараёни G-Rg3 ба ҳуҷайраҳои Caco-2 коҳиш ёфт, суръати азхудкунии G-Rg3 дар рӯда дар модели каламуш зиёд шуд ва G-Rg3 зиёд карда шуд.Дар ҳуҷайраҳои Caco-2, ҷараёни Rg3 коҳиш ёфта, сатҳи консентратсияи Rg3 кам мешавад.G-Rg3 дар рӯдаҳо ва плазма зиёд мешавад ва қобилияти он барои пешгирии варамҳо инчунин дар модели каламушҳои варами варами B(a)P афзоиш ёфтааст.Мо инчунин дарёфтем, ки G-Rg3 цитотоксикӣ аз B(a)P ва ташаккули иловаи ДНК-ро дар ҳуҷайраҳои шуши инсон коҳиш дод ва экспрессия ва фаъолияти ферментҳои марҳилаи II-ро тавассути роҳи Nrf2 барқарор кард, ки он метавонад ба механизми эҳтимолии амал алоқаманд бошад. ҷилавгирӣ аз G -Rg3..Дар бораи пайдо шудани варамхои шуш.Таҳқиқоти мо нақши эҳтимолан муҳимро барои G-Rg3 дар ҳадафи варамҳои шуш дар моделҳои муш нишон медиҳад.Био дастрасии шифоҳӣ аз ин гинсенозид тавассути ҳадафи P-гликопротеин беҳтар карда мешавад, ки ба молекула имкон медиҳад, ки таъсири зидди саратонро нишон диҳад.
Навъи маъмултарини саратони шуш саратони шуши ғайриҳуҷайравӣ (NSCLC) мебошад, ки яке аз сабабҳои асосии марги саратон дар Чин ва Амрикои Шимолӣ мебошад1,2.Омили асосие, ки хатари пайдоиши саратони шуши ғайриҳуҷайраро зиёд мекунад, тамокукашӣ мебошад.Дар дуди сигор зиёда аз 60 моддаи канцероген, аз ҷумла бензо(а)пирен (В(а)Р), нитрозаминҳо ва изотопҳои радиоактивӣ аз пӯсидаи радон мавҷуд аст.3 Карбогидридҳои хушбӯй полициклӣ B(a)P сабаби асосии заҳролудшавӣ дар сигор мебошанд. дуд.Ҳангоми дучор шудан ба B(a)P, ситохром P450 онро ба B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE) табдил медиҳад, ки бо ДНК реаксия карда, иловаи BPDE-DNA 4-ро ташкил медиҳад. adducts варами шушро дар мушҳо бо марҳилаи варам ва гистопатологияи шабеҳи варамҳои шуши инсон ба вуҷуд меоранд5.Ин хусусият модели саратони шуши аз B(a)P-ро ба системаи мувофиқ барои арзёбии пайвастагиҳо бо хосиятҳои эҳтимолии зидди саратон табдил медиҳад.
Як стратегияи имконпазири пешгирии рушди саратони шуш дар гурӯҳҳои дорои хатари баланд, бахусус тамокукашон, истифодаи агентҳои кимиёпревентивӣ барои ҷилавгирӣ аз рушди осеби неопластикии интраэпителиалӣ ва ба ин васила пешгирии пешрафти минбаъдаи онҳо ба бадсифат мебошад.Таҳқиқоти ҳайвонот нишон медиҳанд, ки агентҳои гуногуни кимиёвӣ самаранок мебошанд6.Гузориши қаблии мо7 таъсири хуби пешгирикунандаи женьшени сурхро ба саратони шуш таъкид кардааст.Ин гиёҳ дар тӯли асрҳо дар тибби анъанавии Осиё барои дароз кардани ҳаёт ва саломатӣ истифода мешуд ва дорои таъсири зидди туморӣ ҳуҷҷатгузорӣ шудааст8.
Омили фаъоли женьшень гинсенозид мебошад, ки ҳамчун аломати таркибӣ барои арзёбии сифати экстрактҳои женьшень истифода мешавад.Таҳлили миқдории иқтибосҳои хоми женьшень маъмулан истифодаи якчанд гинсенозидҳоро дар бар мегирад, аз ҷумла RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 ва Rc9,10.Гинсенозидҳо аз сабаби хеле пасти биологии шифоҳӣ 11 истифодаи клиникӣ кам доранд.Гарчанде ки механизми ин биокирашавии суст равшан нест, метавонад боиси хуруҷи гинсенозидҳо бошад, ки аз ҷониби P-гликопротеин (P-gp)12 ба вуҷуд омадааст.P-gp яке аз муҳимтарин интиқолдиҳандагони ҷараён дар супероилаи интиқолдиҳандаи кассетаи ATP мебошад, ки энергияи гидролизи ATP-ро барои баровардани моддаҳои дохили ҳуҷайра ба муҳити беруна истифода мебарад.Интиқолдиҳандагони P-gp маъмулан дар монеаи рӯда, гурда, ҷигар ва хун-мағзи сар паҳн шудаанд13.P-gp дар ҷабби рӯда нақши муҳим мебозад ва ҷилавгирӣ аз P-gp ҷабби даҳон ва дастрасии баъзе доруҳои зидди саратонро зиёд мекунад12,14.Намунаҳои ингибиторҳое, ки қаблан дар адабиёт истифода мешуданд, верапамил ва циклоспорин А15 мебошанд.Ин кор таъсиси системаи мушро барои омӯзиши саратони шуш, ки аз B(a)P ба вуҷуд омадааст, барои арзёбии қобилияти иқтибосҳои гуногуни женьшеньи сурх аз Чин ва Корея барои таъсир расонидан ба бемориҳои ашаддӣ дар бар мегирад.Экстрактҳо барои муайян кардани гинсенозидҳои мушаххасе, ки метавонанд ба канцерогенез таъсир расонанд, ба таври инфиродӣ таҳлил карда шуданд.Пас аз он Верапамил барои ҳадафи P-gp ва беҳтар кардани биосарафаи шифоҳӣ ва самаранокии терапевтии гинсенозидҳои зидди саратон истифода шуд.
Механизме, ки сапонинҳои женьшень ба канцерогенез таъсири табобатӣ мерасонанд, номаълум боқӣ мондааст.Тадқиқотҳо нишон доданд, ки гинсенозидҳои гуногун метавонанд зарари ДНК-ро, ки аз канцерогенҳо ба вуҷуд омадаанд, тавассути коҳиш додани фишори оксидитивӣ ва фаъол кардани ферментҳои детоксикатсияи марҳилаи II кам карда, ба ин васила пешгирии осеби ҳуҷайраҳоро пешгирӣ кунанд.Glutathione S-transferase (GST) як ферментҳои маъмулии марҳилаи II мебошад, ки барои коҳиш додани осеби ДНК аз канцерогенҳо зарур аст17.Омили эритроидҳои ядроии 2, ки бо омили 2 алоқаманд аст (Nrf2) як омили муҳими транскриптсиониест, ки гомеостази редоксро танзим мекунад ва ифодаи ферментҳои марҳилаи II ва аксуламалҳои антиоксиданти ситопротекториро фаъол мекунад18.Таҳқиқоти мо инчунин таъсири гинсенозидҳои муайяншударо оид ба коҳиш додани цитотоксикӣ аз B(a)P ва ташаккули иловагии BPDE-DNA ва инчунин ба вуҷуд овардани ферментҳои марҳилаи II тавассути модул кардани роҳи Nrf2 дар ҳуҷайраҳои муқаррарии шуш омӯхтааст.
Таъсиси модели муши саратони В(а)Р бо кори пештара мувофиқат мекунад5.Дар расми 1А тарҳи таҷрибавии табобати 20-ҳафтаинаи модели саратони муш, ки аз ҷониби B(a)P, об (назорат), экстракти женьшени сурхи чинӣ (CRG), экстракт женьшени сурхи кореягӣ A (KRGA) ва сурхи кореягӣ оварда шудааст, нишон медиҳад. женьшень.Иқтибос B (KRGB) ва Extract C (KRGC) дар Кореяи Red Ginseng.Пас аз 20 ҳафтаи муолиҷаи женьшени сурх, мушҳо бо асфиксияи CO2 қурбонӣ карда шуданд.Дар расми 1В варамҳои макроскопии шуш дар ҳайвонҳое, ки бо навъҳои гуногуни женьшени сурх табобат карда шудаанд, нишон медиҳад ва дар расми 1С микрографи равшании намунаи варамро нишон медиҳад.Сарбории варами ҳайвоноти бо KRGB табобатшаванда (1,5 ± 0,35) нисбат ба ҳайвоноти назоратӣ (0,82 ± 0,2, P <0,05), тавре ки дар расми 1D нишон дода шудааст, камтар буд.Дараҷаи миёнаи монеъшавии сарбории варамҳо 45% буд.Дигар иқтибосҳои женьшении сурх, ки санҷида шудаанд, чунин тағйироти назаррасро дар бори варам нишон надоданд (P> 0,05).Дар модели муш дар давоми 20 ҳафтаи муолиҷаи женьшеньи сурх ҳеҷ гуна таъсири тараф ба мушоҳида нарасид, аз ҷумла тағирот дар вазни бадан (маълумот нишон дода нашудааст) ва заҳролудшавии ҷигар ё гурда (Тасвири 1E, F).
Иқтибоси сурхи женьшень рушди варами шушро дар мушҳои A/J табобат мекунад.$A) Тарҳрезии таҷрибавӣ.(B) Омосҳои калони шуш дар модели муш.Омосҳо бо тирчаҳо нишон дода мешаванд.а: Гурӯҳи женьшеньи сурхи чинӣ.б: гурӯҳи А аз женьшени сурхи Корея.в: Гурӯҳи женьшени сурхи Корея B. d: Гурӯҳи женьшени сурхи Корея C. d: Гурӯҳи назоратӣ.$C) Микрографи сабук, ки варами шушро нишон медиҳад.Бузургкунӣ: 100. b: 400. (D) Сарбории варамҳо дар гурӯҳи иқтибосҳои сурхи женьшень.$E) Сатҳи плазмаи ферменти ҷигар АЛТ.(Е) Сатњи плазмаи ферменти гурда Cr.Маълумот ҳамчун миёна ± инҳирофи стандартӣ ифода карда мешаванд.*Р <0,05.
Иқтибосҳои женьшеньи сурх, ки дар ин таҳқиқот муайян карда шудаанд, тавассути хроматографияи ултра иҷрокунандаи моеъи масс-спектрометрия (UPLC-MS/MS) барои муайян кардани миқдори гинсенозидҳои зерин таҳлил карда шуданд: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ва Rg5.Шартҳои UPLC ва MS, ки барои чен кардани таҳлилҳо истифода мешаванд, дар гузориши қаблӣ тавсиф карда шудаанд19.UPLC-MS/MS хроматограммаҳои чор иқтибосҳои женьшеньи сурх дар расми 2А нишон дода шудаанд.Дар таркиби умумии гинсенозидҳо фарқиятҳои назаррас вуҷуд доштанд, ки баландтарин миқдори умумии гинсенозидҳо дар CRG (590,27 ± 41,28 мкмоль / л) буд (Расми 2B).Ҳангоми арзёбии гинсенозидҳои инфиродӣ (Расми 2C), KRGB сатҳи баландтарини G-Rg3-ро дар муқоиса бо дигар гинсенозидҳо нишон дод (58,33 ± 3,81 мкмоль/л барои G-Rg3s ва 41,56 ± 2,88 мкмоль/л барои G -Rg3r).навъи женьшень сурх (P <0,001).G-Rg3 ҳамчун як ҷуфт стереоизомерҳои G-Rg3r ва G-Rg3s ба вуҷуд меояд, ки дар мавқеи гурӯҳи гидроксил дар карбон 20 фарқ мекунанд (расми 2D).Натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки G-Rg3r ё G-Rg3 метавонад дар модели муши саратони B(a)P потенсиали муҳими зидди саратон дошта бошад.
Мазмуни ginsenosides дар иқтибосҳои гуногуни женьшень сурх.(A) UPLC-MS/MS хроматограммаҳои чор иқтибос аз женьшень сурх.(B) Баҳодиҳии миқдори умумии гинсенозидҳо дар иқтибосҳои зикршуда.(C) Муайян кардани гинсенозидҳои инфиродӣ дар иқтибосҳои тамғагузорӣ.(D) Сохтори стереоизомерҳои гинсенозид G-Rg3r ва G-Rg3s.Маълумот ҳамчун миқёси ± инҳирофи стандартии муайянкунии секарата ифода карда мешаванд.*** Р <0,001.
Таҳқиқоти UPLC-MS/MS миқдори гинсенозидҳоро дар намунаҳои рӯда ва хун пас аз 20 ҳафтаи табобат талаб мекард.Табобат бо KRGB мавҷудияти танҳо 0,0063 ± 0,0005 мкг / мл Rg5 дар хун нишон дод.Ягон гинсенозидҳои боқимонда ошкор карда нашуданд, ки ин нишон медиҳад, ки биокираолияти нокифояи даҳон ва аз ин рӯ коҳиши таъсири ин гинсенозидҳо.
Хатти ҳуҷайраҳои adenocarcinoma colon Caco-2 аз ҷиҳати морфологӣ ва биохимиявӣ ба ҳуҷайраҳои эпителиалии рӯдаи инсон шабоҳат дорад ва фоиданокии онро дар арзёбии интиқоли энтероситҳо тавассути монеаи эпителиалии рӯда нишон медиҳад.Ин таҳлил ба омӯзиши қаблӣ асос ёфтааст 20.Рақамҳои 3A,B,C,D,E,F тасвирҳои намояндагии интиқоли трансселлюлярии G-Rg3r ва G-Rg3-ро бо истифода аз модели якқабати Caco-2 нишон медиҳанд.Интиқоли трансҳуҷайравии G-Rg3r ё G-Rg3 дар як қабатҳои Caco-2 аз базопалӣ ба тарафи апикалӣ (Pb-a) нисбат ба апикалӣ ба паҳлӯи базопалӣ (Pa-b) хеле баландтар буд.Барои G-Rg3r, арзиши миёнаи Pa-b 0,38 ± 0,06 буд, ки пас аз табобат бо 50 мкмоль/л верапамил ба 0,73 ± 0,06 ва пас аз табобат бо 100 мкмоль/л верапамил то 1,14 ± 0,09 зиёд шуд (p <0,001 ва мутаносибан;3А).Мушоҳидаҳо барои G-Rg3 як шакли шабеҳро пайгирӣ карданд (расми 3B) ва натиҷаҳо нишон доданд, ки табобати верапамил интиқоли G-Rg3r ва G-Rg3-ро беҳтар кардааст.Табобати верапамил инчунин ба коҳиши назарраси коэффитсиентҳои миёнаи хуруҷи Pb-a ва G-Rg3r ва G-Rg3s оварда расонд (Расми 3C,D,E,F), ки нишон медиҳад, ки табобати верапамил миқдори гинсенозидҳоро дар ҳуҷайраҳои эффлюкси Како-2 коҳиш медиҳад..
Интиқоли трансселлюлярии G-Rg3 дар як қабатҳои Caco-2 ва азхудкунии рӯда дар таҳлили перфузияи каламуш.(A) Арзиши Pa-b гурӯҳи G-Rg3r дар як қабати Caco-2.(B) Арзиши Pa-b гурӯҳҳои G-Rg3s дар як қабати Caco-2.(C) Арзиши Pb гурӯҳи G-Rg3r дар як қабати Caco-2.(D) Арзиши Pb гурӯҳҳои G-Rg3s дар як қабати Caco-2.(E) Таносуби ҳосили гурӯҳҳои G-Rg3r дар як қабати Caco-2.(F) Таносуби ҳосили гурӯҳҳои G-Rg3 дар як қабати Caco-2.(G) Фоизи азхудкунии рӯда G-Rg3r дар таҳлили перфузия дар каламушҳо.(H) Фоизи азхудкунии рӯда G-Rg3 дар таҳлили перфузия дар каламушҳо.Гузариш ва ҷаббида бидуни илова кардани верапамил муқоиса карда шуд.Маълумот ҳамчун инҳирофи миёна ± стандартии панҷ таҷрибаҳои мустақил ифода карда мешаванд.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Мувофиқи кори пештара20, перфузияи ортотопии рӯдаи каламушҳо гузаронида шуд, то муайян кунад, ки оё азхудкунии G-Rg3 дар рӯда пас аз табобати верапамил зиёд мешавад.Рақамҳои 3G, H таҳлилҳои намояндагии перфузияро барои арзёбии фоизи азхудкунии рӯдаҳои G-Rg3r ва G-Rg3 дар каламушҳои модели саратон дар давраҳои дар боло зикршуда нишон медиҳанд.Фоизи ибтидоии азхудкунии заиф G-Rg3r тақрибан 10% пас аз табобат бо 50 мкм верапамил ба зиёда аз 20% ва пас аз табобат бо 100 мкм верапамил ба зиёда аз 25% афзоиш ёфт.Ба ҳамин монанд, G-Rg3, ки азхудкунии ибтидоӣ 10% буд, инчунин пас аз табобат бо 50 мкм верапамил ва тақрибан 30% пас аз табобат бо 100 мкм верапамил авҷи баландро нишон дод, ки ҷилавгирӣ аз P-gp аз ҷониби верапамилро афзоиш медиҳад. G-азхудкунии рӯда Rg3 дар модели муши саратони шуш.
Мувофиқи усули дар боло зикршуда, мушҳои модели саратони B (a) P ба таври тасодуфӣ ба шаш гурӯҳ тақсим карда шуданд, тавре ки дар расми 4А нишон дода шудааст.Дар гурӯҳи табобати G-Rg3 дар муқоиса бо гурӯҳи назоратӣ ҳеҷ гуна талафоти назарраси вазн ё нишонаҳои клиникии заҳролудшавӣ мушоҳида нашудааст (маълумот нишон дода нашудааст).Пас аз 20 ҳафтаи табобат шуши ҳар як муш ҷамъ карда шуд.Тасвири 4B варамҳои шушҳои макроскопиро дар мушҳо дар гурӯҳҳои табобати дар боло зикршуда нишон медиҳад ва дар расми 4С микрографи нури намояндагии варами намояндагӣ нишон дода шудааст.Дар мавриди сарбории варамҳо дар ҳар як гурӯҳ (расми 4D), арзишҳо барои мушҳое, ки бо G-Rg3r ва G-Rg3s коркард шудаанд, мутаносибан 0,75 ± 0,29 мм3 ва 0,81 ± 0,30 мм3 буданд, дар ҳоле ки арзишҳо барои мушҳои G табобатшуда бо -Rg3s мутаносибан 1,63 ± 0,40 мм3 буд.мушҳои назорат (p <0.001), ки нишон медиҳад, ки табобати G-Rg3 бори варамро дар мушҳо коҳиш додааст.Истеъмоли верапамил ин коҳишро боз ҳам беҳтар кард: арзишҳо дар мушҳои verapamil+ G-Rg3r аз 0,75 ± 0,29 мм3 то 0,33 ± 0,25 мм3 (p <0,01) ва арзишҳо барои верапамил+ аз 0,81 ± 0,30 0,29,29 то 0,75 ± 0,29 мм3 коҳиш ёфтанд. mm3 дар мушҳои бо G. -Rg3s табобатшуда (p <0.05), ки нишон медиҳад, ки верапамил метавонад таъсири ингибитории G-Rg3-ро дар варамҳо зиёд кунад.Сарбории варамҳо байни гурӯҳи назоратӣ ва гурӯҳи верапамил, гурӯҳи G-Rg3r ва гурӯҳи G-Rg3s ва гурӯҳи верапамил+G-Rg3r ва гурӯҳи верапамил+G-Rg3s фарқияти назаррасро нишон надоданд.Ғайр аз он, заҳролудшавии назарраси ҷигар ё гурда, ки бо табобатҳои арзёбӣшуда алоқаманд буданд, вуҷуд надоштанд (Тасвири 4E, F).
Сарбории варамҳо пас аз табобати G-Rg3 ва сатҳи плазма ё рӯда G-Rg3r ва G-Rg3 дар гурӯҳҳои зикршуда.$A) Тарҳрезии таҷрибавӣ.(B) Омосҳои макроскопӣ дар модели муш.Омосҳо бо тирчаҳо нишон дода мешаванд.а: G-Rg3r.б: G-Rg3s.в: G-Rg3r дар якҷоягӣ бо верапамил.г: G-Rg3 дар якҷоягӣ бо верапамил.г: Верапамил.д: назорат.$C) Микрографи оптикии варам њангоми калон кардан.Ҷавоб: 100x.б: 400X.(D) Таъсири табобати G-Rg3 + верапамил ба сарбории варамҳо дар мушҳои A/J.$E) Сатҳи плазмаи ферменти ҷигар АЛТ.(Е) Сатњи плазмаи ферменти гурда Cr.(G) Сатҳи плазмаи G-Rg3r ё G-Rg3 аз гурӯҳҳои зикршуда.(H) Сатҳи G-Rg3r ё G-Rg3s дар рӯдаҳои гурӯҳҳои нишондодашуда.Маълумот ҳамчун миқёси ± инҳирофи стандартии муайянкунии секарата ифода карда мешаванд.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Сатҳи G-Rg3 дар мушҳои модели саратони B(a)P аз ҷониби UPLC-MS/MS пас аз давраи табобат 20-ҳафта мувофиқи усули дар фасли Усулҳо тавсифшуда баҳо дода шуд.Рақамҳои 4G ва H мутаносибан сатҳи плазма ва рӯдаҳои G-Rg3-ро нишон медиҳанд.Сатҳи G-Rg3r дар плазма 0,44 ± 0,32 мкмоль/л буд ва бо истеъмоли ҳамзамони верапамил то 1,17 ± 0,47 мкмоль/л зиёд шуд (p < 0,001), дар ҳоле ки сатҳи G-Rg3r дар рӯда 0,53 ± 0,08 мкг/л буд.Ҳангоми якҷоя бо верапамил, g то 1,35 ± 0,13 мкг/г зиёд шуд (p <0,001).Барои G-Rg3, натиҷаҳо як намунаи шабеҳро пайгирӣ карданд, ки нишон медиҳанд, ки табобати верапамил биокистани G-Rg3-ро дар мушҳои A/J зиёд кардааст.
Барои арзёбии ситотоксикагии B(a)P ва G-Rg3 дар ҳуҷайраҳои hEL санҷиши қобилияти ҳуҷайра истифода шуд.Ситотоксикӣ, ки аз ҷониби B(a)P дар ҳуҷайраҳои hEL ба вуҷуд омадааст, дар расми 5А нишон дода шудааст, дар ҳоле ки хосиятҳои заҳрноки G-Rg3r ва G-Rg3 дар расмҳои 5А ва 5В нишон дода шудаанд.5B, C. Барои арзёбии таъсири ситопротектории G-Rg3, B(a)P бо консентратсияи гуногуни G-Rg3r ё G-Rg3 ба ҳуҷайраҳои hEL якҷоя карда шуд.Тавре ки дар расми 5D нишон дода шудааст, G-Rg3r дар консентратсияи 5 μM, 10 μM ва 20 μM қобилиятнокии ҳуҷайраҳоро мутаносибан ба 58,3%, 79,3% ва 77,3% барқарор кард.Натиҷаҳои шабеҳро дар гурӯҳи G-Rg3s низ дидан мумкин аст.Вақте ки консентратсияи G-Rg3s 5 μM, 10 μM ва 20 μM буданд, қобилияти зиндагии ҳуҷайра мутаносибан ба 58.3%, 72.7% ва 76.7% барқарор карда шуд (Расми 5E).).Мавҷудияти иловаҳои BPDE-DNA бо истифода аз маҷмӯаи ELISA чен карда шуд.Натиҷаҳои мо нишон доданд, ки сатҳи иловагии BPDE-DNA дар гурӯҳи B (a) P дар муқоиса бо гурӯҳи назоратӣ зиёд шудааст, аммо дар муқоиса бо табобати якҷояи G-Rg3, сатҳи BPDE-DNA дар гурӯҳи B (a) P зиёд шудааст. B дар гурӯҳи табобатшуда, сатҳи иловагии ДНК ба таври назаррас коҳиш ёфт.Натиҷаҳои табобат бо B(a)P танҳо дар расми 5F нишон дода шудаанд (1,87 ± 0,33 бар зидди 3,77 ± 0,42 барои G-Rg3r, 1,93 ± 0,48 бар зидди 3,77 ± 0,42 барои G -Rg3s, p <0,001).
Зиндагии ҳуҷайра ва ташаккули иловагии BPDE-DNA дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо G-Rg3 ва B (a) P коркард шудаанд.(A) Зиндагии ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B(a)P коркард шудаанд.(B) Зиндагии ҳуҷайраҳои hEL, ки бо G-Rg3r коркард шудаанд.(C) Зиндагии ҳуҷайраҳои hEL, ки бо G-Rg3 коркард шудаанд.(D) Зиндагии ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B(a)P ва G-Rg3r коркард шудаанд.(E) Зиндагии ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B(a)P ва G-Rg3 коркард шудаанд.(F) Сатҳи иловагии BPDE-DNA дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B (a) P ва G-Rg3 коркард шудаанд.Маълумот ҳамчун миқёси ± инҳирофи стандартии муайянкунии секарата ифода карда мешаванд.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Ифодаи ферментҳои GST пас аз коркарди муштарак бо 10 μM B(a)P ва 10 μM G-Rg3r ё G-Rg3s муайян карда шуд.Натиҷаҳои мо нишон доданд, ки B(a)P ифодаи GST-ро пахш кардааст (59,7 ± 8,2% дар гурӯҳи G-Rg3r ва 39 ± 4,5% дар гурӯҳи G-Rg3s) ва B(a)P бо ҳарду бо G-Rg3r алоқаманд аст. , ё бо G-Rg3r, ё бо G-Rg3r.Муолиҷаи якҷоя бо G-Rg3s ифодаи GST-ро барқарор кард.Ифодаи GST (103,7 ± 15,5% дар гурӯҳи G-Rg3r ва 110 ± 11,1% дар гурӯҳи G-Rg3s, p <0,05 ва p <0,001, расми 6A, B ва C).Фаъолияти GST бо истифода аз маҷмӯаи таҳлили фаъолият арзёбӣ карда шуд.Натиҷаҳои мо нишон доданд, ки гурӯҳи табобати якҷоя дар муқоиса бо гурӯҳи танҳо B (a) P (96.3 ± 6.6% нисбат ба 35.7 ± 7.8% дар гурӯҳи G-Rg3r нисбат ба 92.3 ± 6.5 дар гурӯҳи G-Rg3r) фаъолияти GST баландтар дошт. ).% нисбат ба 35,7 ± 7,8% дар гурӯҳи G-Rg3s, p <0,001, Расми 6D).
Ифодаи GST ва Nrf2 дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B (a) P ва G-Rg3 коркард шудаанд.(A) Муайян кардани ифодаи GST тавассути blotting Western.(B) Ифодаи миқдории GST дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B (a) P ва G-Rg3r коркард шудаанд.(C) Ифодаи миқдории GST дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B (a) P ва G-Rg3s коркард шудаанд.(D) Фаъолияти GST дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B (a) P ва G-Rg3 коркард шудаанд.(E) Муайян кардани ифодаи Nrf2 тавассути blotting Western.(F) Ифодаи миқдории Nrf2 дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B (a) P ва G-Rg3r коркард шудаанд.(G) Ифодаи миқдории Nrf2 дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B (a) P ва G-Rg3s коркард шудаанд.Маълумот ҳамчун миқёси ± инҳирофи стандартии муайянкунии секарата ифода карда мешаванд.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Барои фаҳмонидани роҳҳое, ки дар фурўравии миёнаравии G-Rg3 аз варами барангезандаи B (a) P, ифодаи Nrf2 тавассути blotting ғарбӣ арзёбӣ карда шуд.Тавре ки дар расмҳои 6E, F, G нишон дода шудааст, дар муқоиса бо гурӯҳи назоратӣ, танҳо сатҳи Nrf2 дар гурӯҳи табобати B (a) P коҳиш ёфт;аммо, дар муқоиса бо гурӯҳи табобати B (a) P, сатҳи B (a) Nrf2 дар гурӯҳи PG-Rg3 зиёд шуд (106 ± 9.5% барои G-Rg3r дар муқобили 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% барои G-Rg3r нисбат ба 41 ± 9,8% барои G-Rg3s, p <0,01).
Мо нақши пешгирикунандаи Nrf2-ро тавассути пахш кардани ифодаи Nrf2 бо истифода аз РНК-и махсуси дахолаткунанда (siRNA) тасдиқ кардем.Нокаунти Nrf2 тавассути blotting Western тасдиқ карда шуд (расми 7A,B).Тавре ки дар расмҳои 7C,D нишон дода шудааст, коркарди муштараки ҳуҷайраҳои hEL бо B(a)P ва G-Rg3 боиси кам шудани шумораи иловаҳои BPDE-DNA (1,47 ± 0,21) дар муқоиса бо табобат бо B(a)P гардид. танҳо дар гурӯҳи назорати siRNA.) G-Rg3r 4.13 ± 0.49, G-Rg3s 1.8 ± 0.32 ва 4.1 ± 0.57, p <0.01).Аммо, таъсири ингибитории G-Rg3 ба ташаккули BPDE-DNA бо шикастани Nrf2 бекор карда шуд.Дар гурӯҳи siNrf2, дар ташаккули adduct BPDE-DNA байни B(a)P ва G-Rg3 ва танҳо табобати B(a)P фарқияти назаррас вуҷуд надошт (3,0 ± 0,21 барои G-Rg3r нисбат ба 3,56 ± 0,32). ).барои G-Rg3r нисбат ба 3.6 барои G-Rg3s нисбат ба ± 0.45 нисбат ба 4.0 ± 0.37, p > 0.05).
Таъсири шикастани Nrf2 ба ташаккули иловагии BPDE-DNA дар ҳуҷайраҳои hEL.(A) Нокаунти Nrf2 тавассути blotting Western тасдиқ карда шуд.(B) Миқдори шиддатнокии бандҳои Nrf2.(C) Таъсири шикастани Nrf2 ба сатҳи иловагии BPDE-DNA дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B(a)P ва G-Rg3r коркард шудаанд.(D) Таъсири шикастани Nrf2 ба сатҳи иловагии BPDE-DNA дар ҳуҷайраҳои hEL, ки бо B(a)P ва G-Rg3 коркард шудаанд.Маълумот ҳамчун миқёси ± инҳирофи стандартии муайянкунии секарата ифода карда мешаванд.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Ин тадқиқот таъсири пешгирикунандаи иқтибосҳои гуногуни женьшенги сурхро ба модели муши саратони шуш аз B(a)P баҳо дод ва табобати KRGB бори варамро ба таври назаррас коҳиш дод.Бо назардошти он, ки G-Rg3 дорои мазмуни баландтарин дар ин экстракти женьшень, нақши муҳими ин женьсенозид дар ҷилавгирӣ аз варамҳо омӯхта шудааст.Ҳарду G-Rg3r ва G-Rg3 (ду эпимери G-Rg3) сарбории варамҳоро дар модели муши саратони B(a)P ба таври назаррас коҳиш доданд.G-Rg3r ва G-Rg3 тавассути ба вуҷуд овардани апоптози ҳуҷайраҳои варам21, ҷилавгирӣ аз афзоиши варам22, боздоштани сикли ҳуҷайра23 ва таъсир ба ангиогенез24 таъсири зидди саратон меоранд.G-Rg3 инчунин нишон дода шудааст, ки метастазҳои ҳуҷайраро бозмедорад25 ва қобилияти G-Rg3 барои баланд бардоштани таъсири химиотерапия ва радиотерапия ҳуҷҷатгузорӣ шудааст26,27.Пун ва дигарон нишон доданд, ки табобати G-Rg3 метавонад таъсири генотоксикии B (a) P28 -ро коҳиш диҳад.Ин тадқиқот потенсиали табобатии G-Rg3-ро дар ҳадафи молекулаҳои канцерогении муҳити зист ва пешгирии саратон нишон медиҳад.
Сарфи назар аз потенсиали хуби профилактикии онҳо, мавҷудияти нокифояи биологии гинсенозидҳо барои истифодаи клиникии ин молекулаҳо мушкилот эҷод мекунад.Таҳлили фармакокинетикии истеъмоли даҳони гинсенозидҳо дар каламушҳо нишон дод, ки биокирашавии он ҳанӯз аз 5% камтар аст29.Ин санҷишҳо нишон доданд, ки пас аз давраи 20-ҳафтаи табобат танҳо сатҳи Rg5 дар хун коҳиш ёфтааст.Гарчанде, ки механизми аслии биоавастагии паст то ҳол равшан карда шудааст, P-gp дар хориҷшавии гинсенозидҳо иштирок мекунад.Ин кор бори нахуст нишон дод, ки маъмурияти верапамил, як блокатори P-gp, битавонравии даҳони G-Rg3r ва G-Rg3s-ро зиёд мекунад.Ҳамин тариқ, ин бозёфт нишон медиҳад, ки G-Rg3r ва G-Rg3s ҳамчун субстратҳои P-gp барои танзими ҷараёни он амал мекунанд.
Ин кор нишон медиҳад, ки муолиҷаи якҷоя бо верапамил биокивазшавии даҳони G-Rg3-ро дар модели муши саратони шуш зиёд мекунад.Ин бозёфт бо афзоиши интиқоли трансселлюлярии рӯда G-Rg3 ҳангоми муҳосираи P-gp дастгирӣ карда мешавад ва ба ин васила азхудкунии онро зиёд мекунад.Таҳлилҳо дар ҳуҷайраҳои Caco2 нишон доданд, ки табобати верапамил ҷараёни G-Rg3r ва G-Rg3s-ро коҳиш дода, гузариши мембранаро беҳтар мекунад.Таҳқиқоти Янг ва дигарон.Тадқиқотҳо нишон доданд, ки табобат бо циклоспорин А (дигар блокатори P-gp) биокирашавии гинсенозид Rh2-ро аз арзиши ибтидоии 1%20 то зиёда аз 30% зиёд мекунад.Пайвастагиҳои гинсенозидҳои K ва Rg1 низ натиҷаҳои шабеҳ нишон доданд30,31.Вақте ки верапамил ва циклоспорин А якҷоя истифода мешуданд, ҷараёнҳои пайвастаи К дар ҳуҷайраҳои Caco-2 ба таври назаррас аз 26,6 то камтар аз 3 коҳиш ёфт, дар ҳоле ки сатҳи дохили ҳуҷайравии он 40 маротиба зиёд шуд30.Дар ҳузури верапамил, сатҳҳои Rg1 дар ҳуҷайраҳои эпителиалии шуши каламушҳо афзоиш ёфтанд, ки нақши P-gp-ро дар хуруҷи гинсенозид нишон медиҳад, тавре ки Мэн ва дигарон 31 нишон додааст.Аммо, верапамил ба хуруҷи баъзе гинсенозидҳо (ба монанди Rg1, F1, Rh1 ва Re) таъсири якхела надошт, ки нишон медиҳад, ки онҳо аз субстратҳои P-gp, тавре ки Лианг ва дигарон нишон доданд, таъсир намерасонад.32 .Ин мушоҳида метавонад бо ҷалби дигар интиқолдиҳандагон ва сохторҳои алтернативии гинсенозид алоқаманд бошад.
Механизми таъсири пешгирикунандаи G-Rg3 ба саратон маълум нест.Тадқиқотҳои қаблӣ нишон доданд, ки G-Rg3 осеби ДНК ва апоптозро тавассути коҳиш додани фишори оксидитивӣ ва илтиҳоб пешгирӣ мекунад16,33, ки метавонад механизми асосии пешгирии варами B(a)P ба вуҷуд омада бошад.Баъзе гузоришҳо нишон медиҳанд, ки генотоксидие, ки аз ҷониби B(a)P ба вуҷуд омадааст, тавассути модул кардани ферментҳои марҳилаи II барои ташаккули BPDE-DNA34 кам карда мешавад.GST як ферментҳои маъмулии марҳилаи II мебошад, ки ташаккули иловагии BPDE-DNA-ро тавассути мусоидат ба пайвастшавии GSH ба BPDE бозмедорад ва ба ин васила осеби ДНК-ро, ки аз ҷониби B(a)P35 ба вуҷуд омадааст, коҳиш медиҳад.Натиҷаҳои мо нишон медиҳанд, ки табобати G-Rg3 ситотоксикӣ аз B(a)P ва ташаккули иловагии BPDE-DNA-ро дар ҳуҷайраҳои hEL коҳиш медиҳад ва ифодаи GST ва фаъолиятро дар vitro барқарор мекунад.Аммо, ин таъсирот дар сурати набудани Nrf2 вуҷуд надоштанд, ки G-Rg3 тавассути роҳи Nrf2 таъсири ситопротекториро ба вуҷуд меорад.Nrf2 як омили асосии транскрипт барои ферментҳои детоксикатсияи марҳилаи II мебошад, ки ба тозакунии ксенобиотикҳо мусоидат мекунад36.Фаъолсозии роҳи Nrf2 ситопротекцияро ба вуҷуд меорад ва осеби бофтаро коҳиш медиҳад37.Гузашта аз ин, якчанд гузоришҳо нақши Nrf2-ро ҳамчун супрессори варамҳо дар канцерогенез дастгирӣ кардаанд38.Таҳқиқоти мо нишон медиҳад, ки индуксияи роҳи Nrf2 аз ҷониби G-Rg3 дар генотоксикӣ аз B (a) P тавассути боиси детоксикатсияи B (a) P тавассути фаъол кардани ферментҳои марҳилаи II нақши муҳими танзимкунанда мебозад ва ба ин васила раванди варамро бозмедорад.
Кори мо потенсиали женьшеньи сурхро дар пешгирии саратони шуш аз B(a)P дар мушҳо тавассути ҷалби муҳими гинсенозид G-Rg3 ошкор мекунад.Биоаврастагии бади даҳони ин молекула ба татбиқи клиникии он халал мерасонад.Бо вуҷуди ин, ин тадқиқот бори аввал нишон медиҳад, ки G-Rg3 як субстрати P-gp аст ва маъмурияти ингибитори P-gp дастрасии G-Rg3-ро in vitro ва in vivo зиёд мекунад.G-Rg3 тавассути танзими роҳи Nrf2, ки метавонад як механизми потенсиалии функсияи пешгирикунандаи он бошад, ситотоксикии B(a)P-ро коҳиш медиҳад.Таҳқиқоти мо потенсиали ginsenoside G-Rg3-ро барои пешгирӣ ва табобати саратони шуш тасдиқ мекунад.
Аз Лабораторияи Ҷексон (Бар Харбор, ИМА) ва Институти зоологияи Вуҳан мушҳои шашҳафтаинаи зани A/J (20 ± 1 г) ва каламушҳои 7 ҳафтааи писари Вистар (250 ± 20 г) гирифта шудаанд.Донишгоҳ (Вуҳан, Чин).Маркази ҷамъоварии фарҳанги навъи чинӣ (Вуҳан, Чин) ба мо ҳуҷайраҳои Caco-2 ва hEL пешниҳод кард.Сигма-Олдрих (Сент-Луис, ИМА) манбаи B(a)P ва трикаприн мебошад.Ҷинсенозидҳои тозашудаи G-Rg3r ва G-Rg3s, диметилсулфоксиди (DMSO), маҷмӯаи таҳлили паҳншавии CellTiter-96 (MTS), верапамил, муҳити минималии муҳим (MEM) ва хунобаи гови ҳомила (FBS) аз Chengdu Must Bio-Technology харидорӣ карда шуданд. .Co., Ltd.(Чэнду, Хитой).Маҷмӯаи мини QIAamp DNA ва маҷмӯаи BPDE-DNA adduct ELISA аз Qiagen (Стэнфорд, Калифорния, ИМА) ва Cell Biolabs (Сан Диего, CA, ИМА) харида шудаанд.Маҷмӯи таҳлили фаъолияти GST ва маҷмӯи умумии таҳлили протеин (усули стандартии BCA) аз Solarbio (Пекин, Чин) харида шудааст.Ҳама иқтибосҳои женьшени сурх дар лабораторияи Мингюи 7 нигоҳ дошта мешаванд. Донишгоҳи баптистии Ҳонконг (Ҳонконг, Чин) ва Маркази саратони Корея (Сеул, Корея) манбаи тиҷоратии иқтибосҳои CRG ва иқтибосҳои гуногуни женьшенги сурхи пайдоиши гуногуни Корея (аз ҷумла KRGA, KRGB) мебошанд. ва KRGC).Женьшеньи сурх аз решаи женьшеньи тару тозаи 6-сола тайёр карда мешавад.Иқтибоси женьшеньи сурхро бо се маротиба шустани женьшень бо об, сипас консентратсияи экстракти обӣ ва дар ниҳоят дар ҳарорати паст хушк кардан барои ба даст овардани хокаи экстракти женьшень ба даст меояд.Антиденоҳо (анти-Nrf2, anti-GST ва β-актин), пероксидаза-конъюгатшудаи анти-иммуноглобулини харгӯш G (IgG), реагенти трансфексия, siRNA-и назоратӣ ва Nrf2 siRNA аз Санта Круз Биотехнология (Санта Круз, Калифорния) харида шудаанд. .), ИМА).
Ҳуҷайраҳои Caco2 ва hEL дар зарфҳои фарҳанги ҳуҷайраҳои 100 мм2 бо MEM дорои 10% FBS дар 37 °C дар атмосфераи намнокшудаи 5% CO2 парвариш карда шуданд.Барои муайян кардани таъсири шароити табобат, ҳуҷайраҳои hEL бо консентратсияи гуногуни B (a) P ва G-Rg3 дар MEM барои 48 соат инкубатсия карда шуданд.Ҳуҷайраҳоро метавон минбаъд таҳлил ё ҷамъоварӣ кард, то иқтибосҳои бидуни ҳуҷайра омода карда шаванд.
Ҳама таҷрибаҳо аз ҷониби Кумитаи таҷрибавии этикаи ҳайвоноти Коллеҷи тиббии Тонгҷӣ, Донишгоҳи илм ва технологияи Ҳуажун тасдиқ карда шуданд (Тасдиқ № 2019; Бақайдгирии № 4587TH).Ҳама таҷрибаҳо мувофиқи дастурҳо ва қоидаҳои дахлдор анҷом дода шуданд ва тадқиқот мувофиқи дастурҳои Тадқиқоти Ҳайвонот: Ҳисобот дар бораи Таҷрибаҳои Дар Виво (ARRIVE) гузаронида шуд.Ба мушҳои ҳаштҳафтаинаи A/J бори аввал B(a)P дар маҳлули трикаприн (100 мг/кг, 0,2 мл) ворид карда шуданд.Пас аз як ҳафта, мушҳо ба таври тасодуфӣ ба гурӯҳҳои назоратӣ ва гурӯҳҳои гуногуни табобат, 15 муш дар ҳар гурӯҳ тақсим карда шуданд ва дар як рӯз як маротиба гаваж карда шуданд.Пас аз 20 ҳафтаи табобат, ҳайвонот бо асфиксияи CO2 қурбонӣ карда шуданд.Шушҳо дар давоми 24 соат ҷамъ карда шуданд.Миқдори варамҳои рӯизаминӣ ва андозаи инфиродии варамҳо барои ҳар як шуш дар зери микроскопи ҷудошаванда муайян карда шуданд.Ҳисобкунии ҳаҷми варамҳо (V) бо истифода аз ифодаи зерин ҳисоб карда шуд: V (mm3) = 4/3πr3, ки дар он r диаметри варам аст.Маблағи холиси тамоми ҳаҷми варамҳо дар шуши мушҳо ҳаҷми умумии варамро ва ҳаҷми миёнаи умумии варамҳо дар ҳар як гурӯҳ бори варамро ифода мекард.Намунаҳои пурраи хун ва рӯдаҳо дар -80 ° C барои муайян кардани UPLC-MS/MS ҷамъоварӣ ва нигоҳ дошта шуданд.Зардоб ҷамъоварӣ карда шуд ва як анализатори автоматии химиявӣ барои таҳлили сатҳи аланинаминотрансфераза (ALT) ва креатинин (Cr) барои арзёбии фаъолияти ҷигар ва гурда истифода шуд.
Намунаҳои ҷамъовардашуда аз анбори хунук хориҷ карда шуданд, об карда шуданд, баркашанд ва ба қубурҳо мувофиқи дар боло тавсифшуда ҷойгир карда шуданд.Ба ин 0,5 мкМ флоризин (стандарти дохилӣ) дар маҳлули 0,8 мл метанол илова карда шуд.Пас аз он матоъ бо истифода аз Tissue-Tearor гомогенизатсия карда шуд ва гомогенат баъдан ба найчаи микроцентрифугаи 1,5 мл интиқол дода шуд.Омехта дар 15500 rpm барои 15 дақиқа центрифуга карда шуд.Пас аз тоза кардани 1,0 мл супернатант, бо нитроген хушк кунед.Дусад микролитр метанол барои барқарор кардан сарф шуд.Хун дар як хат ҷамъоварӣ ва коркард карда мешавад ва ҳамчун маълумот барои ҳама андозагирӣ истифода мешавад.
Пластинҳои 24-чоҳи Transwell бо 1,0 × 105 ҳуҷайраҳои Caco-2 дар як чоҳ барои арзёбии тақвияти эҳтимолии интиқоли G-Rg3 тавассути илова кардани верапамил тухмипошак карда шуданд.Пас аз 3 ҳафтаи фарҳанг, ҳуҷайраҳо бо HBSS шуста шуданд ва дар 37 ° C пешакӣ инкубатсия карда шуданд.400 мкл 10 мкМ G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s ё омехта бо 50 ё 100 мкм верапамил) ба тарафи базотерали ё апикалии моноқабат ворид карда шуд ва ба тарафи дигар 600 мкл маҳлули HBSS илова карда шуд. тараф.Дар вақтҳои муқарраршуда (0, 15, 30, 45, 60, 90 ва 120 дақиқа) 100 мкл муҳити парваришро ҷамъ кунед ва 100 мкл HBSS илова кунед, то ин ҳаҷмро пур кунед.Намунаҳо дар -4 °C то муайян кардани UPLC-MS/MS нигоҳ дошта шуданд.Ифодаи Papp = dQ/(dT × A × C0) барои муайян кардани миқдори гузариши якҷонибаи апикалӣ ва базопонӣ ва баръакс истифода мешавад (мутаносибан Pa-b ва Pb-a);dQ/dT тағирёбии консентратсия, A (0,6 см2) майдони сатҳи якқабат ва C0 консентратсияи ибтидоии донорҳо мебошад.Таносуби хуруҷ ҳамчун Pb-a/Pa-b ҳисоб карда мешавад, ки суръати хуруҷи доруи омӯзиширо ифода мекунад.
Каламушҳои нари Вистар 24 соат рӯза гирифта, танҳо об менӯшиданд ва бо сӯзандоруи маҳлули пентобарбитали 3,5% наркоз карда шуданд.Дар найчаи силиконии интубатсионӣ нӯги рӯдаи дувоздаҳадаҳ ҳамчун даромадгоҳ ва охири рӯдаи борон ҳамчун баромадгоҳ ҷойгир аст.Истифодаи насоси перисталтикӣ барои насоси воридшавӣ бо 10 μM G-Rg3r ё G-Rg3s дар HBSS изотоникӣ бо суръати ҷараёни 0,1 мл/дақ.Таъсири верапамил тавассути илова кардани 50 мкм ё 100 мкм пайвастагӣ ба 10 мкм G-Rg3r ё G-Rg3s арзёбӣ карда шуд.UPLC-MS/MS дар иқтибосҳои перфузия дар лаҳзаҳои 60, 90, 120 ва 150 дақиқа пас аз оғози перфузия ҷамъоварӣ карда шуд.Фоизи ҷаббида бо формулаи миқдорӣ муайян карда мешавад % азхудкунӣ = (1 – Cout/Cin) × 100%;консентратсияи G-Rg3 дар баромад ва даромад мутаносибан бо Cout ва Cin ифода карда мешавад.
Ҳуҷайраҳои hEL дар лавҳаҳои 96-чоҳ бо зичии 1 × 104 ҳуҷайра дар як чоҳ кишт карда шуданд ва бо B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) ё G-Rg3 дар DMSO гудохта коркард карда шуданд. .Сипас доруҳо бо муҳити фарҳангӣ то консентратсияи гуногун (0, 1, 2, 5, 10, 20 мкм) дар тӯли 48 соат омехта карда шуданд.Бо истифода аз маҷмӯаи санҷиши MTS, ки дар тиҷорат дастрас аст, ҳуҷайраҳо ба протоколи стандартӣ дучор шуданд ва сипас бо истифода аз микропластик хонанда дар 490 нм чен карда шуданд.Дараҷаи қобилияти ҳуҷайраҳои гурӯҳҳое, ки бо B(a)P (10 μM) ва G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) дар якҷоягӣ табобат карда шудаанд, мувофиқи усули дар боло зикршуда арзёбӣ карда шуд ва бо гурӯҳи коркарднашуда муқоиса карда шуд.
Ҳуҷайраҳои hEL дар лавҳаҳои 6-чоҳ бо зичии 1 × 105 ҳуҷайра / чоҳ тухм карда шуданд ва бо 10 μMB (a) P дар ҳузур ё набудани 10 μM G-Rg3 коркард карда шуданд.Пас аз 48 соати табобат, ДНК аз ҳуҷайраҳои hEL бо истифода аз QIAamp DNA Mini Kit мувофиқи протоколи истеҳсолкунанда истихроҷ карда шуд.Ташаккули иловаҳои BPDE-DNA бо истифода аз маҷмӯаи иловагии BPDE-DNA ELISA муайян карда шуд.Сатҳи нисбии иловагии BPDE-DNA бо истифода аз хонандаи микроплата тавассути чен кардани абсорбенс дар 450 нм чен карда шуд.
Ҳуҷайраҳои hEL дар лавҳаҳои 96-чоҳ бо зичии 1 × 104 ҳуҷайра дар як чоҳ кишт карда шуданд ва бо 10 μMB (a) P дар сурати мавҷуд набудани 10 μM G-Rg3 барои 48 соат коркард карда шуданд.Фаъолияти GST бо истифода аз маҷмӯаи санҷиши фаъолияти GST тибқи протоколи истеҳсолкунанда чен карда шуд.Фаъолсозии нисбии GST тавассути абсорбенс дар 450 нм бо истифода аз хонандаи микроплата чен карда шуд.
Ҳуҷайраҳои hEL бо яхбандии PBS шуста шуданд ва сипас бо истифода аз буфери таҳлили радиоиммунопреципиатсия, ки дорои ингибиторҳои протеаза ва ингибиторҳои фосфатаза мебошанд, лизис карда шуданд.Пас аз муайян кардани миқдори протеин бо истифода аз маҷмӯаи таҳлили умумии сафеда, 30 мкг сафеда дар ҳар як намуна бо 12% SDS-PAGE ҷудо карда шуд ва тавассути электрофорез ба мембранаи PVDF интиқол дода шуд.Мембранаҳо бо шири 5% лоғар маҳкам карда шуданд ва бо антителоҳои аввалия дар як шабонарӯз дар ҳарорати 4°С инкубатсия карда шуданд.Пас аз инкубатсия бо антителоҳои дуюмдараҷаи бо пероксидаза пайвастшуда, реагентҳои мукаммали хемилюминесцентӣ барои визуалии сигнали ҳатмӣ илова карда шуданд.Шиддати ҳар як гурӯҳи сафеда бо истифода аз нармафзори ImageJ муайян карда шуд.
Нармафзори GraphPad Prism 7.0 барои таҳлили ҳама маълумотҳо истифода шуд, ки ҳамчун инҳирофи миёна ± стандартӣ ифода шудааст.Тағйироти байни гурӯҳҳои табобатӣ бо истифода аз санҷиши t Student ё таҳлили яктарафаи дисперсия, бо арзиши P <0,05, ки аҳамияти оморӣ нишон медиҳад, арзёбӣ карда шуд.
Ҳама маълумоте, ки дар давоми ин тадқиқот гирифта ё таҳлил карда шудаанд, ба ин мақолаи нашршуда ва файлҳои иттилоотии иловагӣ дохил карда шудаанд.
Торре, LA, Siegel, RL ва Jemal, A. Омори саратони шуш.сифат.Муддат гузаштааст.дорувори.биология.893, 1–19 (2016).
Хехт, С. Канцерогенҳои тамоку, биомаркерҳои онҳо ва саратони тамоку.Нат.Капелони саратон.3, 733–744 (2003).
Филлипс, DH ва Венитт, С. ДНК ва протеин дар бофтаҳои инсон, ки аз таъсири дуди тамоку ба вуҷуд меоянд.интернационалй.J. Саратон.131, 2733–2753 (2012).
Янг Ю., Ванг Ю., Танг К., Лубет РА ва Ю М. Таъсири кордата Ҳоуттуйния ва силибинин ба варами шушҳои бензо (а) пирен дар мушҳои A / J.Саратон 7, 1053-1057 (2005).
Танг, В.Маҳсулоти табиии зидди саратон, ки аз маводи дорувории чинӣ ҷудо карда шудааст.даҳон.дорувори.6, 27 (2011).
Янг, Ю ва дигарон.Самаранокии полифенони E, женьшени сурх ва рапамицин дар варами шушҳои бензо (а) пирен дар мушҳои A / J.Саратон 8, 52-58 (2006).
Ванг, CZ, Андерсон, С., Ду, В., Ҳе, TS ва Юан, КС Сурх, иштирок дар табобати саратон.даҳон.Ҷ. Натт.дорувори.14, 7–16 (2016).
Ли, TS, Mazza, G., Cottrell, AS ва Gao, L. Ginsenosides дар решаҳо ва баргҳои ginseng амрикоӣ.Ҷ. Агрик.Химияи озуқаворӣ.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA ва Yuan KS. Фармакологияи женьшень: ҷузъҳои зиёд ва эффектҳои зиёд.биохимия.фармакология.58, 1685–1693 (1999).
Вақти фиристодан: сентябр-17-2023