Salamat sa pagbisita sa Nature.com.Ang bersyon ng browser na iyong ginagamit ay may limitadong suporta sa CSS.Para sa pinakamahusay na mga resulta, inirerekomenda namin ang paggamit ng mas bagong bersyon ng iyong browser (o i-off ang compatibility mode sa Internet Explorer).Pansamantala, upang matiyak ang patuloy na suporta, ipinapakita namin ang site nang walang styling o JavaScript.
Ang pulang ginseng ay ginamit sa tradisyunal na gamot sa Asya sa daan-daang taon.Sa pag-aaral na ito, sinuri namin ang kakayahan ng apat na uri ng red ginseng (Chinese red ginseng, Korean red ginseng A, Korean red ginseng B, at Korean red ginseng C) na lumago sa iba't ibang rehiyon upang pigilan ang pagbuo at paglaki ng carcinogen-induced lung mga bukol.Ang isang benzo(a)pyrene (B(a)P) na pagsubok ay isinagawa sa A/J mice, at ang Korean red ginseng B ay napag-alamang pinaka-epektibo sa pagbabawas ng tumor burden sa apat na red ginseng varieties.Bilang karagdagan, sinuri namin ang mga nilalaman ng iba't ibang ginsenosides (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 at Rg5) sa apat na red ginseng extracts at natagpuan na ang Korean red ginseng B ay may ang pinakamatataas na antas ng ginsenoside Rg3 (G-Rg3), na nagmumungkahi na ang G-Rg3 ay maaaring may mahalagang papel sa therapeutic efficacy nito.Ipinapakita ng gawaing ito na ang G-Rg3 ay medyo mababa ang bioavailability.Gayunpaman, kapag ang G-Rg3 ay pinagsama sa P-gp inhibitor verapamil, ang efflux ng G-Rg3 sa Caco-2 cells ay nabawasan, ang rate ng bituka na pagsipsip ng G-Rg3 ay nadagdagan sa isang modelo ng daga, at G-Rg3 ay nadagdagan.Sa mga cell ng Caco-2, bumababa ang pag-agos ng Rg3, at bumababa ang antas ng konsentrasyon ng Rg3.Ang G-Rg3 ay nadagdagan sa bituka at plasma, at ang kakayahan nitong maiwasan ang mga tumor ay pinahusay din sa isang modelo ng daga ng B(a)P-induced tumorigenesis.Nalaman din namin na binawasan ng G-Rg3 ang B(a) P-induced cytotoxicity at DNA adduct formation sa mga selula ng baga ng tao, at naibalik ang expression at aktibidad ng phase II enzymes sa pamamagitan ng Nrf2 pathway, na maaaring nauugnay sa potensyal na mekanismo ng pagkilos. ng G pagsugpo -Rg3..Tungkol sa paglitaw ng mga tumor sa baga.Ang aming pag-aaral ay nagpapakita ng isang potensyal na mahalagang papel para sa G-Rg3 sa pag-target ng mga tumor sa baga sa mga modelo ng mouse.Ang oral bioavailability ng ginsenoside na ito ay pinahusay sa pamamagitan ng pag-target sa P-glycoprotein, na nagpapahintulot sa molekula na magkaroon ng mga epektong anticancer.
Ang pinakakaraniwang uri ng kanser sa baga ay ang non-small cell lung cancer (NSCLC), na isa sa mga nangungunang sanhi ng pagkamatay ng cancer sa China at North America1,2.Ang pangunahing salik na nagpapataas ng panganib na magkaroon ng di-maliit na selula ng kanser sa baga ay ang paninigarilyo.Ang usok ng sigarilyo ay naglalaman ng higit sa 60 carcinogens, kabilang ang benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrosamines, at radioactive isotopes mula sa pagkabulok ng radon.3 Ang polycyclic aromatic hydrocarbons B(a)P ang pangunahing sanhi ng toxicity sa sigarilyo usok.Sa pagkakalantad sa B(a)P, kino-convert ito ng cytochrome P450 sa B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), na tumutugon sa DNA upang bumuo ng BPDE-DNA adduct 4. Bukod pa rito, ang mga ito Ang mga addduct ay nag-udyok sa lung tumorigenesis sa mga daga na may tumor stage at histopathology na katulad ng mga tumor sa baga ng tao5.Ginagawa ng feature na ito ang B(a)P-induced lung cancer model na isang angkop na sistema para sa pagsusuri ng mga compound na may posibleng mga katangian ng anticancer.
Ang isang posibleng diskarte upang maiwasan ang pag-unlad ng kanser sa baga sa mga grupong may mataas na peligro, lalo na ang mga naninigarilyo, ay ang paggamit ng mga ahente ng chemopreventive upang sugpuin ang pagbuo ng mga intraepithelial neoplastic lesyon at sa gayon ay maiwasan ang kanilang kasunod na pag-unlad sa malignancy.Ang mga pag-aaral sa hayop ay nagpapakita na ang iba't ibang chemopreventive agent ay epektibo6.Itinampok ng aming nakaraang ulat7 ang magandang pang-iwas na epekto ng pulang ginseng sa kanser sa baga.Ang damong ito ay ginamit sa loob ng maraming siglo sa tradisyunal na gamot sa Asya upang pahabain ang buhay at kalusugan, at naitala na may mga epektong antitumor8.
Ang aktibong kadahilanan ng ginseng ay ginsenoside, na ginagamit bilang isang composite marker upang suriin ang kalidad ng ginseng extracts.Ang quantitative analysis ng crude ginseng extracts ay karaniwang nagsasangkot ng paggamit ng ilang ginsenosides, kabilang ang RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, at Rc9,10.Ang mga ginsenoside ay may maliit na klinikal na paggamit dahil sa kanilang napakahirap na oral bioavailability11.Kahit na ang mekanismo para sa mahinang bioavailability na ito ay hindi malinaw, ang efflux ng ginsenosides na dulot ng P-glycoprotein (P-gp)12 ay maaaring ang dahilan.Ang P-gp ay isa sa pinakamahalagang efflux transporter sa ATP-binding cassette transporter superfamily, na gumagamit ng enerhiya ng ATP hydrolysis upang palabasin ang mga intracellular substance sa panlabas na kapaligiran.Ang mga transporter ng P-gp ay karaniwang malawak na ipinamamahagi sa bituka, bato, atay at blood-brain barrier13.Ang P-gp ay gumaganap ng isang kritikal na papel sa pagsipsip ng bituka, at ang pagsugpo sa P-gp ay nagdaragdag ng oral absorption at pagkakaroon ng ilang mga gamot na anticancer12,14.Ang mga halimbawa ng mga inhibitor na dating ginamit sa panitikan ay ang verapamil at cyclosporine A15.Ang gawaing ito ay nagsasangkot ng pagtatatag ng isang mouse system para sa pag-aaral ng B(a)P-induced lung cancer upang suriin ang kakayahan ng iba't ibang red ginseng extracts mula sa China at Korea na makaapekto sa mga malignancies.Ang mga extract ay indibidwal na nasuri upang makilala ang mga tiyak na ginsenosides na maaaring makaapekto sa carcinogenesis.Ginamit noon ang Verapamil upang i-target ang P-gp at pagbutihin ang oral bioavailability at therapeutic efficacy ng cancer-targeting ginsenosides.
Ang mekanismo kung saan ang ginseng saponin ay nagsasagawa ng mga therapeutic effect sa carcinogenesis ay nananatiling hindi maliwanag.Ipinakita ng pananaliksik na ang iba't ibang ginsenosides ay maaaring mabawasan ang pinsala sa DNA na dulot ng mga carcinogens sa pamamagitan ng pagbabawas ng oxidative stress at pag-activate ng phase II detoxification enzymes, sa gayon ay pinipigilan ang pagkasira ng cell.Ang Glutathione S-transferase (GST) ay isang tipikal na phase II enzyme na kinakailangan upang mabawasan ang pinsala sa DNA na dulot ng mga carcinogens17.Ang nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) ay isang mahalagang transcription factor na kinokontrol ang redox homeostasis at pinapagana ang pagpapahayag ng phase II enzymes at cytoprotective antioxidant responses18.Sinuri din ng aming pag-aaral ang mga epekto ng natukoy na ginsenosides sa pagbabawas ng B (a) P-induced cytotoxicity at BPDE-DNA adduct formation, pati na rin ang pag-induce ng phase II enzymes sa pamamagitan ng modulate ng Nrf2 pathway sa normal na mga selula ng baga.
Ang pagtatatag ng isang modelo ng mouse ng B(a) P-induced cancer ay pare-pareho sa nakaraang trabaho5.Ipinapakita ng Figure 1A ang eksperimentong disenyo ng 20-linggong paggamot ng isang modelo ng kanser sa mouse na dulot ng B(a)P, tubig (kontrol), Chinese red ginseng extract (CRG), Korean red ginseng extract A (KRGA), at Korean red ginseng.Extract B (KRGB) at Korean Red Ginseng Extract C (KRGC).Pagkatapos ng 20 linggo ng red ginseng treatment, ang mga daga ay sinakripisyo ng CO2 asphyxiation.Ipinapakita ng Figure 1B ang mga macroscopic lung tumor sa mga hayop na ginagamot ng iba't ibang uri ng red ginseng, at ang Figure 1C ay nagpapakita ng isang kinatawan ng light micrograph ng sample ng tumor.Ang pasanin ng tumor ng mga hayop na ginagamot ng KRGB (1.5 ± 0.35) ay mas mababa kaysa sa mga kontrol na hayop (0.82 ± 0.2, P <0.05), tulad ng ipinapakita sa Figure 1D.Ang average na antas ng pagsugpo sa pag-load ng tumor ay 45%.Ang iba pang mga red ginseng extract na nasubok ay hindi nagpakita ng mga makabuluhang pagbabago sa tumor burden (P > 0.05).Walang malinaw na epekto ang naobserbahan sa modelo ng mouse sa loob ng 20 linggo ng paggamot sa red ginseng, kabilang ang walang pagbabago sa timbang ng katawan (hindi ipinakita ang data) at walang toxicity sa atay o bato (Larawan 1E, F).
Tinatrato ng red ginseng extract ang pag-unlad ng tumor sa baga sa A/J mice.(A) Eksperimental na disenyo.(B) Malaking mga tumor sa baga sa isang modelo ng mouse.Ang mga tumor ay ipinahiwatig ng mga arrow.a: Chinese red ginseng group.b: pangkat A ng Korean red ginseng.c: Korean red ginseng group B. d: Korean red ginseng group C. d: Control group.(C) Light micrograph na nagpapakita ng tumor sa baga.Magnification: 100. b: 400. (D) Tumor load sa red ginseng extract group.(E) Mga antas ng plasma ng atay enzyme ALT.(F) Mga antas ng plasma ng renal enzyme na Cr.Ang data ay ipinahayag bilang mean ± standard deviation.*P <0.05.
Ang mga red ginseng extract na natukoy sa pag-aaral na ito ay sinuri ng ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) upang mabilang ang mga sumusunod na ginsenosides: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 at Rg5.Ang mga kondisyon ng UPLC at MS na ginamit upang sukatin ang mga analytes ay inilarawan sa isang nakaraang ulat19.Ang mga chromatogram ng UPLC-MS/MS ng apat na red ginseng extract ay ipinapakita sa Figure 2A.Mayroong mga makabuluhang pagkakaiba sa kabuuang nilalaman ng ginsenoside, na may pinakamataas na kabuuang nilalaman ng ginsenoside sa CRG (590.27 ± 41.28 μmol / L) (Larawan 2B).Kapag sinusuri ang mga indibidwal na ginsenosides (Larawan 2C), ipinakita ng KRGB ang pinakamataas na antas ng G-Rg3 kumpara sa iba pang ginsenosides (58.33 ± 3.81 μmol/L para sa G-Rg3s at 41.56 ± 2.88 μmol/L para sa G -Rg3r).L).uri ng pulang ginseng (P <0.001).Ang G-Rg3 ay nangyayari bilang isang pares ng mga stereoisomer na G-Rg3r at G-Rg3s, na naiiba sa posisyon ng hydroxyl group sa carbon 20 (Fig. 2D).Ang mga resulta ay nagpapahiwatig na ang G-Rg3r o G-Rg3 ay maaaring magkaroon ng mahalagang potensyal na anticancer sa isang B(a) P-induced cancer mouse model.
Nilalaman ng ginsenosides sa iba't ibang red ginseng extracts.(A) UPLC-MS/MS chromatograms ng apat na red ginseng extracts.(B) Pagtatantya ng kabuuang nilalaman ng ginsenoside sa ipinahiwatig na mga extract.(C) Ang pagtuklas ng mga indibidwal na ginsenoside sa mga may label na extract.(D) Mga istruktura ng ginsenoside stereoisomer G-Rg3r at G-Rg3s.Ang data ay ipinahayag bilang mean ± standard deviation ng triplicate determinations.***P <0.001.
Ang pag-aaral ng UPLC-MS/MS ay nangangailangan ng quantification ng ginsenosides sa bituka at mga sample ng dugo pagkatapos ng 20 linggo ng paggamot.Ang paggamot sa KRGB ay nagpakita ng pagkakaroon lamang ng 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 sa dugo.Walang natitirang ginsenosides ang nakita, na nagpapahiwatig ng mahinang oral bioavailability at samakatuwid ay nabawasan ang pagkakalantad sa mga ginsenoside na ito.
Ang colon adenocarcinoma cell line na Caco-2 ay morphologically at biochemically na katulad ng mga selula ng epithelial ng bituka ng tao, na nagpapakita ng utility nito sa pagtatasa ng enterocyte transport sa buong bituka na epithelial barrier.Ang pagsusuri na ito ay batay sa isang naunang pag-aaral 20 .Ang mga figure 3A, B, C, D, E, F ay nagpapakita ng mga kinatawan na larawan ng transcellular transport ng G-Rg3r at G-Rg3 gamit ang isang Caco-2 monolayer na modelo.Ang transcellular transport ng G-Rg3r o G-Rg3 sa kabuuan ng Caco-2 monolayers mula sa basolateral hanggang apikal na bahagi (Pb-a) ay makabuluhang mas mataas kaysa mula sa apikal hanggang basolateral na bahagi (Pa-b).Para sa G-Rg3r, ang ibig sabihin ng halaga ng Pa-b ay 0.38 ± 0.06, na tumaas sa 0.73 ± 0.06 pagkatapos ng paggamot na may 50 μmol/L verapamil at hanggang 1.14 ± 0.09 pagkatapos ng paggamot na may 100 μmol/L verapamil (p <0.01, at 0.01 ayon sa pagkakabanggit;3A).Ang mga obserbasyon para sa G-Rg3 ay sumunod sa isang katulad na pattern (Fig. 3B), at ang mga resulta ay nagpakita na ang verapamil treatment ay nagpahusay sa transportasyon ng G-Rg3r at G-Rg3.Ang paggamot sa verapamil ay nagresulta din sa isang makabuluhang pagbaba sa mean Pb-a at G-Rg3r at G-Rg3s efflux ratios (Larawan 3C,D,E,F), na nagpapahiwatig na ang paggamot sa verapamil ay binabawasan ang nilalaman ng ginsenoside sa Caco-2 efflux cells..
Transcellular transport ng G-Rg3 sa Caco-2 monolayers at pagsipsip ng bituka sa isang rat perfusion assay.(A) Pa-b value ng G-Rg3r group sa Caco-2 monolayer.(B) Pa-b na halaga ng mga pangkat ng G-Rg3s sa Caco-2 monolayer.(C) Pb value ng G-Rg3r group sa Caco-2 monolayer.(D) Pb value ng mga pangkat ng G-Rg3s sa Caco-2 monolayer.(E) Ang ratio ng ani ng mga pangkat ng G-Rg3r sa isang Caco-2 monolayer.(F) Ang ratio ng ani ng mga pangkat ng G-Rg3 sa isang Caco-2 monolayer.(G) Porsiyento ng pagsipsip ng bituka ng G-Rg3r sa isang perfusion assay sa mga daga.(H) Porsiyento ng pagsipsip ng bituka ng G-Rg3 sa isang perfusion assay sa mga daga.Ang pagkamatagusin at pagsipsip ay inihambing nang walang pagdaragdag ng verapamil.Ang data ay ipinahayag bilang mean ± standard deviation ng limang independiyenteng eksperimento.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Alinsunod sa naunang trabaho20, ang orthotopic intestinal perfusion ng mga daga ay isinagawa upang matukoy kung ang pagsipsip ng G-Rg3 sa bituka ay tumataas pagkatapos ng paggamot sa verapamil.Ang mga figure 3G,H ay nagpapakita ng kinatawan ng perfusion assays upang suriin ang porsyento ng pagsipsip ng bituka ng G-Rg3r at G-Rg3 sa mga daga ng modelo ng kanser sa mga tagal ng panahon sa itaas.Ang paunang porsyento ng mahinang G-Rg3r uptake na humigit-kumulang 10% ay tumaas sa higit sa 20% pagkatapos ng paggamot na may 50 μM verapamil at sa higit sa 25% pagkatapos ng paggamot na may 100 μM verapamil.Gayundin, ang G-Rg3, na may paunang uptake na 10%, ay nagpakita rin ng peak na higit sa 20% pagkatapos ng paggamot na may 50 μM verapamil at halos 30% pagkatapos ng paggamot na may 100 μM verapamil, na nagmumungkahi na ang pagsugpo sa P-gp ng verapamil ay nagpapabuti. bituka G-absorption Rg3 sa isang modelo ng mouse ng kanser sa baga.
Ayon sa pamamaraan sa itaas, ang B (a) P-induced cancer model mice ay sapalarang nahahati sa anim na grupo, tulad ng ipinapakita sa Figure 4A.Walang makabuluhang pagbaba ng timbang o mga klinikal na palatandaan ng toxicity na naobserbahan sa pangkat ng paggamot ng G-Rg3 kumpara sa control group (hindi ipinakita ang data).Pagkatapos ng 20 linggo ng paggamot, ang mga baga ng bawat mouse ay nakolekta.Ipinapakita ng Figure 4B ang mga macroscopic lung tumor sa mga daga sa mga pangkat ng paggamot sa itaas, at ang Figure 4C ay nagpapakita ng isang kinatawan ng light micrograph ng isang kinatawan na tumor.Tungkol sa pasanin ng tumor sa bawat pangkat (Larawan 4D), ang mga halaga para sa mga daga na ginagamot sa G-Rg3r at G-Rg3s ay 0.75 ± 0.29 mm3 at 0.81 ± 0.30 mm3, ayon sa pagkakabanggit, habang ang mga halaga para sa G Mice na ginagamot na may -Rg3s ay 1.63 ayon sa pagkakabanggit ±0.40 mm3.control mice (p <0.001), na nagpapahiwatig na ang paggamot sa G-Rg3 ay nabawasan ang pasanin ng tumor sa mga daga.Ang pangangasiwa ng verapamil ay higit pang pinahusay ang pagbawas na ito: ang mga halaga ng verapamil+ G-Rg3r mice ay bumaba mula 0.75 ± 0.29 mm3 hanggang 0.33 ± 0.25 mm3 (p < 0.01), at ang mga halaga para sa verapamil+ mula 0.81 ± 0.30 mm3 ay bumaba sa 0.81 ± 0.30 mm3 mm3 sa G. -Rg3s-treated mice (p <0.05), na nagpapahiwatig na maaaring mapahusay ng verapamil ang inhibitory effect ng G-Rg3 sa tumorigenesis.Ang bigat ng tumor ay nagpakita ng walang makabuluhang pagkakaiba sa pagitan ng control group at ng verapamil group, ang G-Rg3r group at ang G-Rg3s group, at ang verapamil+G-Rg3r group at ang verapamil+G-Rg3s group.Bukod dito, walang makabuluhang mga lason sa atay o bato na nauugnay sa mga nasuri na paggamot (Larawan 4E, F).
Ang pasanin ng tumor pagkatapos ng paggamot sa G-Rg3 at mga antas ng plasma o bituka na G-Rg3r at G-Rg3 sa mga ipinahiwatig na grupo.(A) Eksperimental na disenyo.(B) Mga macroscopic na tumor sa isang modelo ng mouse.Ang mga tumor ay ipinahiwatig ng mga arrow.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r kasama ng verapamil.d: G-Rg3 kasama ng verapamil.d: Verapamil.e: kontrol.(C) Optical micrograph ng tumor sa paglaki.Sagot: 100x.b: 400X.(D) Epekto ng paggamot sa G-Rg3 + verapamil sa pasanin ng tumor sa mga daga ng A/J.(E) Mga antas ng plasma ng atay enzyme ALT.(F) Mga antas ng plasma ng renal enzyme na Cr.(G) Mga antas ng plasma ng G-Rg3r o G-Rg3 ng mga ipinahiwatig na grupo.(H) Mga antas ng G-Rg3r o G-Rg3s sa mga bituka ng mga ipinahiwatig na grupo.Ang data ay ipinahayag bilang mean ± standard deviation ng triplicate determinations.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Ang mga antas ng G-Rg3 sa B(a) P-induced cancer model mice ay nasuri ng UPLC-MS/MS pagkatapos ng 20-linggong panahon ng paggamot ayon sa pamamaraang inilarawan sa seksyong Mga Paraan.Ang mga figure 4G at H ay nagpapakita ng mga antas ng plasma at bituka na G-Rg3, ayon sa pagkakabanggit.Ang mga antas ng Plasma G-Rg3r ay 0.44 ± 0.32 μmol/L at tumaas sa 1.17 ± 0.47 μmol/L na may kasabay na pangangasiwa ng verapamil (p <0.001), habang ang mga antas ng G-Rg3r sa bituka ay 0.53 ± 0.08 µg.Kapag pinagsama sa verapamil, tumaas ang g sa 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001).Para sa G-Rg3, ang mga resulta ay sumunod sa isang katulad na pattern, na nagpapahiwatig na ang paggamot ng verapamil ay nadagdagan ang oral bioavailability ng G-Rg3 sa A/J mice.
Ang cell viability assay ay ginamit upang suriin ang cytotoxicity ng B (a) P at G-Rg3 sa mga cell ng hEL.Ang cytotoxicity na sapilitan ng B(a)P sa mga selula ng hEL ay ipinapakita sa Figure 5A, habang ang mga nontoxic na katangian ng G-Rg3r at G-Rg3 ay ipinapakita sa Mga Figure 5A at 5B.5B, C. Upang suriin ang cytoprotective effect ng G-Rg3, ang B(a)P ay pinagsama-samang pinangangasiwaan kasama ang iba't ibang konsentrasyon ng G-Rg3r o G-Rg3 sa mga cell ng hEL.Tulad ng ipinapakita sa Figure 5D, ang G-Rg3r sa mga konsentrasyon ng 5 μM, 10 μM, at 20 μM ay naibalik ang kakayahang kumita ng cell sa 58.3%, 79.3%, at 77.3%, ayon sa pagkakabanggit.Ang mga katulad na resulta ay makikita rin sa pangkat ng G-Rg3s.Kapag ang mga konsentrasyon ng G-Rg3s ay 5 µM, 10 µM at 20 µM, ang cell viability ay naibalik sa 58.3%, 72.7% at 76.7%, ayon sa pagkakabanggit (Larawan 5E).).Ang pagkakaroon ng BPDE-DNA addducts ay sinusukat gamit ang isang ELISA kit.Ang aming mga resulta ay nagpakita na ang mga antas ng adduct ng BPDE-DNA ay nadagdagan sa B(a) P-treated na grupo kumpara sa control group, ngunit kumpara sa G-Rg3 co-treatment, BPDE-DNA adduct level sa B(a)P group B sa ginagamot na grupo, ang mga antas ng pagdadagdag ng DNA ay makabuluhang nabawasan.Ang mga resulta ng paggamot na may B(a)P lamang ay ipinapakita sa Figure 5F (1.87 ± 0.33 vs. 3.77 ± 0.42 para sa G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 para sa G -Rg3s, p <0.001).
Cell viability at BPDE-DNA adduct formation sa hEL cells na ginagamot sa G-Rg3 at B(a)P.(A) Viability ng hEL cells na ginagamot sa B(a)P.(B) Viability ng hEL cells na ginagamot sa G-Rg3r.(C) Viability ng hEL cells na ginagamot sa G-Rg3.(D) Viability ng hEL cells na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3r.(E) Viability ng hEL cells na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3.(F) Mga antas ng BPDE-DNA adduct sa hEL cells na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3.Ang data ay ipinahayag bilang mean ± standard deviation ng triplicate determinations.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Ang expression ng GST enzyme ay nakita pagkatapos ng co-treatment na may 10 μM B (a) P at 10 μM G-Rg3r o G-Rg3s.Ang aming mga resulta ay nagpakita na ang B(a)P ay pinigilan ang GST expression (59.7 ± 8.2% sa G-Rg3r group at 39 ± 4.5% sa G-Rg3s group), at ang B(a)P ay nauugnay sa alinman sa G-Rg3r , o sa G-Rg3r, o sa G-Rg3r.Co-treatment na may G-Rg3s na nagpanumbalik ng GST expression.GST expression (103.7 ± 15.5% sa G-Rg3r group at 110 ± 11.1% sa G-Rg3s group, p <0.05 at p <0.001, ayon sa pagkakabanggit, Fig. 6A, B, at C).Ang aktibidad ng GST ay tinasa gamit ang isang activity assay kit.Ang aming mga resulta ay nagpakita na ang kumbinasyon ng grupo ng paggamot ay may mas mataas na aktibidad ng GST kumpara sa B(a) P lamang na grupo (96.3 ± 6.6% kumpara sa 35.7 ± 7.8% sa G-Rg3r group kumpara sa 92.3 ± 6.5 sa G-Rg3r group ).% vs 35.7 ± 7.8% sa G-Rg3s group, p <0.001, Figure 6D).
Pagpapahayag ng GST at Nrf2 sa mga cell ng hEL na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3.(A) Detection ng GST expression sa pamamagitan ng Western blotting.(B) Dami ng pagpapahayag ng GST sa mga cell ng hEL na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3r.(C) Dami ng pagpapahayag ng GST sa mga cell ng hEL na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3s.(D) aktibidad ng GST sa mga cell ng hEL na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3.(E) Detection ng Nrf2 expression sa pamamagitan ng Western blotting.(F) Dami ng pagpapahayag ng Nrf2 sa mga cell ng hEL na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3r.(G) Dami ng pagpapahayag ng Nrf2 sa mga cell ng hEL na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3s.Ang data ay ipinahayag bilang mean ± standard deviation ng triplicate determinations.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Upang maipaliwanag ang mga landas na kasangkot sa G-Rg3-mediated suppression ng B (a) P-induced tumorigenesis, ang expression ng Nrf2 ay nasuri ng Western blotting.Tulad ng ipinapakita sa Mga Figure 6E, F, G, kumpara sa control group, ang antas lamang ng Nrf2 sa B(a)P na grupo ng paggamot ay nabawasan;gayunpaman, kumpara sa B(a)P treatment group, ang B(a) Nrf2 level sa PG-Rg3 group ay nadagdagan (106 ± 9.5% para sa G-Rg3r vs. 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% para sa G-Rg3r vs. 41 ± 9.8% para sa G-Rg3s, p <0.01).
Kinumpirma namin ang preventive role ng Nrf2 sa pamamagitan ng pagsugpo sa expression ng Nrf2 gamit ang tiyak na maliit na nakakasagabal na RNA (siRNA).Ang Nrf2 knockdown ay nakumpirma ng Western blotting (Larawan 7A, B).Tulad ng ipinapakita sa Mga Figure 7C, D, ang co-treatment ng hEL cells na may B(a)P at G-Rg3 ay nagresulta sa pagbaba sa bilang ng BPDE-DNA adducts (1.47 ± 0.21) kumpara sa paggamot sa B(a)P nag-iisa sa control siRNA group.) Ang G-Rg3r ay 4.13 ± 0.49, ang G-Rg3s ay 1.8 ± 0.32 at 4.1 ± 0.57, p <0.01).Gayunpaman, ang pagbabawal na epekto ng G-Rg3 sa pagbuo ng BPDE-DNA ay tinanggal ng Nrf2 knockdown.Sa pangkat na siNrf2, walang makabuluhang pagkakaiba sa pagbuo ng adduct ng BPDE-DNA sa pagitan ng B(a)P at G-Rg3 co-treatment at B(a)P na paggamot lamang (3.0 ± 0.21 para sa G-Rg3r kumpara sa 3.56 ± 0.32 ).para sa G-Rg3r versus 3.6 para sa G-Rg3s versus ±0.45 versus 4.0±0.37, p > 0.05).
Epekto ng Nrf2 knockdown sa BPDE-DNA adduct formation sa hEL cells.(A) Ang Nrf2 knockdown ay nakumpirma ng Western blotting.(B) Dami ng Nrf2 band intensity.(C) Epekto ng Nrf2 knockdown sa BPDE-DNA adduct level sa hEL cells na ginagamot sa B(a)P at G-Rg3r.(D) Epekto ng Nrf2 knockdown sa BPDE-DNA adduct level sa hEL cells na ginagamot ng B(a)P at G-Rg3.Ang data ay ipinahayag bilang mean ± standard deviation ng triplicate determinations.*P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001.
Sinuri ng pag-aaral na ito ang mga preventive effect ng iba't ibang red ginseng extracts sa isang mouse model ng B(a)P-induced lung cancer, at ang paggamot sa KRGB ay makabuluhang nabawasan ang bigat ng tumor.Isinasaalang-alang na ang G-Rg3 ay may pinakamataas na nilalaman sa ginseng extract na ito, ang mahalagang papel ng ginsenoside na ito sa pagpigil sa tumorigenesis ay pinag-aralan.Ang parehong G-Rg3r at G-Rg3 (dalawang epimer ng G-Rg3) ay makabuluhang nabawasan ang pasanin ng tumor sa isang modelo ng mouse ng B (a) P-induced cancer.Ang G-Rg3r at G-Rg3 ay nagsasagawa ng mga epekto ng anticancer sa pamamagitan ng pag-uudyok sa apoptosis ng mga selula ng tumor21, pag-iwas sa paglaki ng tumor22, pag-aresto sa siklo ng cell23 at nakakaapekto sa angiogenesis24.Ang G-Rg3 ay ipinakita din upang pagbawalan ang cellular metastasis25, at ang kakayahan ng G-Rg3 na mapahusay ang mga epekto ng chemotherapy at radiotherapy ay naitala 26,27.Ipinakita ng Poon et al na ang paggamot sa G-Rg3 ay maaaring mabawasan ang mga genotoxic effect ng B(a)P28.Ang pag-aaral na ito ay nagpapakita ng therapeutic na potensyal ng G-Rg3 sa pag-target sa mga environmental carcinogenic molecule at pag-iwas sa cancer.
Sa kabila ng kanilang mahusay na potensyal na prophylactic, ang mahinang oral bioavailability ng ginsenosides ay nagdudulot ng hamon para sa klinikal na paggamit ng mga molekulang ito.Ang pharmacokinetic analysis ng oral administration ng ginsenosides sa mga daga ay nagpakita na ang bioavailability nito ay mas mababa pa sa 5%29.Ang mga pagsusuring ito ay nagpakita na pagkatapos ng 20-linggong panahon ng paggamot, ang mga antas lamang ng dugo ng Rg5 ay bumaba.Bagaman ang pinagbabatayan na mekanismo ng mahinang bioavailability ay nananatiling ipaliwanag, ang P-gp ay naisip na kasangkot sa efflux ng ginsenosides.Ang gawaing ito ay nagpakita sa unang pagkakataon na ang pangangasiwa ng verapamil, isang P-gp blocker, ay nagpapataas ng oral bioavailability ng G-Rg3r at G-Rg3s.Kaya, ang paghahanap na ito ay nagmumungkahi na ang G-Rg3r at G-Rg3s ay kumikilos bilang mga substrate ng P-gp upang makontrol ang efflux nito.
Ang gawaing ito ay nagpapakita na ang kumbinasyon ng paggamot na may verapamil ay nagdaragdag ng oral bioavailability ng G-Rg3 sa isang modelo ng mouse ng kanser sa baga.Ang paghahanap na ito ay suportado ng pagtaas ng bituka transcellular transport ng G-Rg3 sa P-gp blockade, at sa gayon ay pinapataas ang pagsipsip nito.Ang mga pagsusuri sa mga selula ng Caco2 ay nagpakita na ang paggamot sa verapamil ay nagbawas ng efflux ng G-Rg3r at G-Rg3s habang pinapabuti ang pagkamatagusin ng lamad.Isang pag-aaral ni Yang et al.Ipinakita ng mga pag-aaral na ang paggamot sa cyclosporine A (isa pang P-gp blocker) ay nagpapataas ng bioavailability ng ginsenoside Rh2 mula sa baseline na halaga na 1%20 hanggang higit sa 30%.Ang mga compound ng Ginsenosides K at Rg1 ay nagpakita rin ng mga katulad na resulta30,31.Kapag ang verapamil at cyclosporin A ay co-administered, ang efflux ng compound K sa Caco-2 cells ay makabuluhang nabawasan mula 26.6 hanggang mas mababa sa 3, habang ang intracellular level nito ay tumaas ng 40-fold30.Sa pagkakaroon ng verapamil, ang mga antas ng Rg1 ay tumaas sa mga selula ng epithelial ng baga ng daga, na nagmumungkahi ng isang papel para sa P-gp sa ginsenoside efflux, tulad ng ipinakita ni Meng et al.31.Gayunpaman, ang verapamil ay walang parehong epekto sa efflux ng ilang ginsenosides (tulad ng Rg1, F1, Rh1 at Re), na nagpapahiwatig na hindi sila apektado ng P-gp substrates, tulad ng ipinakita ni Liang et al.32 .Ang pagmamasid na ito ay maaaring nauugnay sa paglahok ng iba pang mga transporter at alternatibong istruktura ng ginsenoside.
Ang mekanismo ng preventive effect ng G-Rg3 sa cancer ay hindi malinaw.Ipinakita ng mga nakaraang pag-aaral na pinipigilan ng G-Rg3 ang pagkasira ng DNA at apoptosis sa pamamagitan ng pagbabawas ng oxidative stress at pamamaga16,33, na maaaring ang pinagbabatayan na mekanismo para maiwasan ang B(a) P-induced tumorigenesis.Ang ilang mga ulat ay nagpapahiwatig na ang genotoxicity na sapilitan ng B(a)P ay maaaring mabawasan sa pamamagitan ng modulating phase II enzymes upang mabuo ang BPDE-DNA34.Ang GST ay isang tipikal na phase II enzyme na pumipigil sa pagbuo ng adduct ng BPDE-DNA sa pamamagitan ng pagtataguyod ng pagbubuklod ng GSH sa BPDE, at sa gayon ay binabawasan ang pinsala sa DNA na dulot ng B(a)P35.Ipinapakita ng aming mga resulta na ang paggamot sa G-Rg3 ay binabawasan ang B(a) P-induced cytotoxicity at BPDE-DNA adduct formation sa hEL cells at ibinabalik ang GST expression at aktibidad sa vitro.Gayunpaman, ang mga epektong ito ay wala sa kawalan ng Nrf2, na nagmumungkahi na ang G-Rg3 ay nagpapahiwatig ng mga cytoprotective effect sa pamamagitan ng Nrf2 pathway.Ang Nrf2 ay isang pangunahing transcription factor para sa phase II detoxification enzymes na nagtataguyod ng clearance ng xenobiotics36.Ang pag-activate ng Nrf2 pathway ay nag-uudyok ng cytoprotection at binabawasan ang pinsala sa tissue37.Bukod dito, maraming mga ulat ang sumuporta sa papel ng Nrf2 bilang isang suppressor ng tumor sa carcinogenesis38.Ipinapakita ng aming pag-aaral na ang induction ng Nrf2 pathway ng G-Rg3 ay gumaganap ng isang mahalagang papel sa regulasyon sa B (a) P-induced genotoxicity sa pamamagitan ng pagdudulot ng B (a) P detoxification sa pamamagitan ng pag-activate ng phase II enzymes, at sa gayon ay pinipigilan ang proseso ng tumorigenesis.
Ang aming trabaho ay nagpapakita ng potensyal ng pulang ginseng sa pagpigil sa B(a) P-induced lung cancer sa mga daga sa pamamagitan ng mahalagang paglahok ng ginsenoside G-Rg3.Ang mahinang oral bioavailability ng molekulang ito ay humahadlang sa klinikal na aplikasyon nito.Gayunpaman, ang pag-aaral na ito ay nagpapakita sa unang pagkakataon na ang G-Rg3 ay isang substrate ng P-gp, at ang pangangasiwa ng isang P-gp inhibitor ay nagdaragdag ng bioavailability ng G-Rg3 sa vitro at sa vivo.Binabawasan ng G-Rg3 ang B(a)P-induced cytotoxicity sa pamamagitan ng pag-regulate sa Nrf2 pathway, na maaaring potensyal na mekanismo para sa preventive function nito.Kinukumpirma ng aming pag-aaral ang potensyal ng ginsenoside G-Rg3 para sa pag-iwas at paggamot ng kanser sa baga.
Ang anim na linggong babaeng A/J na daga (20 ± 1 g) at 7-linggong lalaking Wistar na daga (250 ± 20 g) ay nakuha mula sa The Jackson Laboratory (Bar Harbor, USA) at sa Wuhan Institute of Zoology.Unibersidad (Wuhan, China).Ang Chinese Type Culture Collection Center (Wuhan, China) ay nagbigay sa amin ng Caco-2 at hEL cells.Ang Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) ay pinagmumulan ng B(a)P at tricaprine.Ang purified ginsenosides G-Rg3r at G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 proliferation assay kit (MTS), verapamil, minimal essential medium (MEM), at fetal bovine serum (FBS) ay binili mula sa Chengdu Must Bio-Technology .Co.,Ltd.(Chengdu, China).Ang QIAamp DNA mini kit at BPDE-DNA addduct ELISA kit ay binili mula sa Qiagen (Stanford, CA, USA) at Cell Biolabs (San Diego, CA, USA).Ang GST activity assay kit at kabuuang protina assay kit (karaniwang pamamaraan ng BCA) ay binili mula sa Solarbio (Beijing, China).Lahat ng red ginseng extracts ay naka-store sa Mingyu Laboratory 7. Ang Hong Kong Baptist University (Hong Kong, China) at Korea Cancer Center (Seoul, Korea) ay komersyal na pinagmumulan ng CRG extract at iba't ibang red ginseng extracts ng iba't ibang Korean origins (kabilang ang KRGA, KRGB). at KRGC).Ang pulang ginseng ay ginawa mula sa mga ugat ng 6 na taong gulang na sariwang ginseng.Ang red ginseng extract ay nakukuha sa pamamagitan ng paghuhugas ng ginseng gamit ang tubig ng tatlong beses, pagkatapos ay i-concentrate ang aqueous extract, at sa wakas ay pagpapatuyo sa mababang temperatura upang makakuha ng ginseng extract powder.Ang mga antibodies (anti-Nrf2, anti-GST, at β-actin), horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit immunoglobulin G (IgG), transfection reagent, control siRNA, at Nrf2 siRNA ay binili mula sa Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). .), USA).
Ang mga Caco2 at hEL na mga cell ay na-culture sa 100 mm2 cell culture dishes na may MEM na naglalaman ng 10% FBS sa 37 ° C sa isang humidified na kapaligiran ng 5% CO2.Upang matukoy ang epekto ng mga kondisyon ng paggamot, ang mga cell ng hEL ay natupok na may iba't ibang mga konsentrasyon ng B (a) P at G-Rg3 sa MEM sa loob ng 48 h.Ang mga cell ay maaaring higit pang pag-aralan o kolektahin upang maghanda ng mga cell-free extract.
Ang lahat ng mga eksperimento ay inaprubahan ng Experimental Animal Ethics Committee ng Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology (Approval No. 2019; Registration No. 4587TH).Ang lahat ng mga eksperimento ay isinagawa alinsunod sa mga nauugnay na alituntunin at regulasyon, at ang pag-aaral ay isinagawa alinsunod sa Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE) na mga alituntunin.Ang walong linggong gulang na A/J na daga ay unang na-intraperitoneally na na-injected ng B(a)P sa tricaprine solution (100 mg/kg, 0.2 ml).Pagkatapos ng isang linggo, ang mga daga ay sapalarang nahahati sa mga control group at iba't ibang mga grupo ng paggamot, 15 na mga daga sa bawat grupo, at na-gavaged isang beses sa isang araw.Pagkatapos ng 20 linggo ng paggamot, ang mga hayop ay isinakripisyo ng CO2 asphyxia.Ang mga baga ay nakolekta at naayos sa loob ng 24 na oras.Ang bilang ng mga mababaw na tumor at indibidwal na laki ng tumor ay na-quantified para sa bawat baga sa ilalim ng isang dissecting mikroskopyo.Ang mga pagtatantya ng dami ng tumor (V) ay kinakalkula gamit ang sumusunod na expression: V (mm3) = 4/3πr3, kung saan ang r ay ang diameter ng tumor.Ang netong kabuuan ng lahat ng dami ng tumor sa baga ng mga daga ay kumakatawan sa kabuuang dami ng tumor, at ang average na kabuuang dami ng tumor sa bawat pangkat ay kumakatawan sa pag-load ng tumor.Ang mga sample ng buong dugo at bituka ay kinolekta at inimbak sa −80°C para sa pagpapasiya ng UPLC-MS/MS.Nakolekta ang serum at ginamit ang isang awtomatikong chemistry analyzer upang pag-aralan ang mga antas ng alanine aminotransferase (ALT) at serum creatinine (Cr) upang masuri ang pag-andar ng atay at bato.
Ang mga nakolektang sample ay inalis mula sa malamig na imbakan, lasaw, tinimbang, at inilagay sa mga tubo tulad ng inilarawan sa itaas.Dito ay idinagdag ang 0.5 μM phlorizin (panloob na pamantayan) sa 0.8 ml na solusyon ng methanol.Ang tissue ay pagkatapos ay homogenized gamit ang Tissue-Tearor at ang homogenate ay kasunod na inilipat sa isang 1.5 ml microcentrifuge tube.Ang timpla ay na-centrifuge sa 15500 rpm sa loob ng 15 minuto.Pagkatapos alisin ang 1.0 ml ng supernatant, tuyo na may nitrogen.Dalawang daang microliter ng methanol ang ginamit para sa pagbawi.Ang dugo ay kinokolekta at pinoproseso sa isang linya at ginagamit bilang isang sanggunian para sa lahat ng mga sukat.
Ang 24-well Transwell plate ay na-seeded na may 1.0 × 105 Caco-2 na mga cell bawat balon upang suriin ang potensyal na pagpapahusay ng transportasyon ng G-Rg3 sa pamamagitan ng pagdaragdag ng verapamil.Pagkatapos ng 3 linggo ng kultura, ang mga cell ay hugasan ng HBSS at preincubated sa 37 ° C.400 μL ng 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, o isang halo na may 50 o 100 μM verapamil) ay na-injected sa basolateral o apikal na bahagi ng monolayer, at 600 μL ng HBSS solution ay idinagdag sa isa pa gilid.Mangolekta ng 100 µl ng culture medium sa mga itinalagang oras (0, 15, 30, 45, 60, 90 at 120 minuto) at magdagdag ng 100 µl ng HBSS upang mabuo ang volume na ito.Ang mga sample ay nakaimbak sa −4 ° C hanggang sa pagtuklas ng UPLC-MS/MS.Ang expression na Papp = dQ/(dT × A × C0) ay ginagamit upang mabilang ang maliwanag na unidirectional apical at basolateral permeability at vice versa (Pa-b at Pb-a, ayon sa pagkakabanggit);Ang dQ/dT ay ang pagbabago sa konsentrasyon, ang A (0.6 cm2) ay ang surface area ng monolayer, at ang C0 ay ang paunang konsentrasyon ng donor.Ang ratio ng efflux ay kinakalkula bilang Pb-a/Pa-b, na kumakatawan sa rate ng efflux ng gamot sa pag-aaral.
Ang mga lalaking Wistar na daga ay nag-ayuno sa loob ng 24 na oras, uminom lamang ng tubig, at na-anesthetize ng intravenous injection ng 3.5% pentobarbital solution.Ang intubated silicone tube ay may dulo ng duodenum bilang pasukan at dulo ng ileum bilang labasan.Gumamit ng peristaltic pump para i-pump ang inlet na may 10 µM G-Rg3r o G-Rg3s sa isotonic HBSS sa rate ng daloy na 0.1 ml/min.Ang epekto ng verapamil ay nasuri sa pamamagitan ng pagdaragdag ng 50 μM o 100 μM ng tambalan sa 10 μM G-Rg3r o G-Rg3s.Ang UPLC-MS/MS ay isinagawa sa mga perfusion extract na nakolekta sa mga time point na 60, 90, 120, at 150 minuto pagkatapos ng pagsisimula ng perfusion.Ang porsyento ng pagsipsip ay binibilang ng formula % absorption = (1 – Cout/Cin) × 100%;ang konsentrasyon ng G-Rg3 sa labasan at pumapasok ay ipinahayag ng Cout at Cin, ayon sa pagkakabanggit.
Ang mga cell ng hEL ay na-seed sa 96-well plate na may density na 1 × 104 na mga cell bawat balon at ginagamot sa B (a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) o G-Rg3 na natunaw sa DMSO .Ang mga gamot ay pagkatapos ay natunaw ng medium ng kultura sa iba't ibang mga konsentrasyon (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) sa loob ng 48 oras.Gamit ang isang komersyal na magagamit na MTS assay kit, ang mga cell ay sumailalim sa isang karaniwang protocol at pagkatapos ay sinusukat gamit ang isang microplate reader sa 490 nm.Ang antas ng kakayahang kumita ng cell ng mga pangkat na pinagsama-sama sa B (a) P (10 μM) at G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) ay nasuri ayon sa pamamaraan sa itaas at inihambing sa hindi ginagamot na grupo.
Ang mga cell ng hEL ay na-seeded sa 6-well plate na may density na 1 × 105 cells / well at ginagamot ng 10 μMB (a) P sa presensya o kawalan ng 10 μM G-Rg3.Pagkatapos ng 48 oras ng paggamot, ang DNA ay nakuha mula sa mga cell ng hEL gamit ang QIAamp DNA Mini Kit ayon sa protocol ng gumawa.Ang pagbuo ng mga adduct ng BPDE-DNA ay nakita gamit ang isang BPDE-DNA addduct ELISA kit.Ang mga kamag-anak na antas ng BPDE-DNA adduct ay sinusukat gamit ang isang microplate reader sa pamamagitan ng pagsukat ng absorbance sa 450 nm.
Ang mga cell ng hEL ay na-seeded sa 96-well plate na may density na 1 × 104 na mga cell bawat balon at ginagamot ng 10 μMB (a) P sa kawalan o pagkakaroon ng 10 μM G-Rg3 sa loob ng 48 h.Sinusukat ang aktibidad ng GST gamit ang isang komersyal na GST activity assay kit ayon sa protocol ng manufacturer.Ang kamag-anak na pag-activate ng GST ay sinusukat sa pamamagitan ng pagsipsip sa 450 nm gamit ang isang microplate reader.
Ang mga cell ng hEL ay hinugasan ng malamig na PBS at pagkatapos ay na-lysed gamit ang radioimmunoprecipitation assay buffer na naglalaman ng mga protease inhibitor at phosphatase inhibitors.Matapos ang dami ng protina gamit ang isang kabuuang protina assay kit, 30 μg ng protina sa bawat sample ay pinaghiwalay ng 12% SDS-PAGE at inilipat sa isang lamad ng PVDF sa pamamagitan ng electrophoresis.Ang mga lamad ay hinarangan ng 5% na skim milk at natupok ng mga pangunahing antibodies sa magdamag sa 4°C.Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa malunggay peroxidase-conjugated pangalawang antibodies, pinahusay na chemiluminescence reagents ay idinagdag upang mailarawan ang nagbubuklod na signal.Ang intensity ng bawat banda ng protina ay binibilang gamit ang ImageJ software.
Ang GraphPad Prism 7.0 software ay ginamit upang pag-aralan ang lahat ng data, na ipinahayag bilang mean ± standard deviation.Ang pagkakaiba-iba sa pagitan ng mga pangkat ng paggamot ay tinasa gamit ang Student's t test o one-way analysis ng variance, na may P value <0.05 na nagpapahiwatig ng istatistikal na kahalagahan.
Ang lahat ng data na nakuha o nasuri sa panahon ng pag-aaral na ito ay kasama sa na-publish na artikulong ito at mga karagdagang file ng impormasyon.
Torre, LA, Siegel, RL at Jemal, A. Mga istatistika ng kanser sa baga.pang-abay.Nag-expire na.gamot.biology.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Tobacco carcinogens, ang kanilang mga biomarker at tobacco-induced cancer.Nat.Chaplain ng cancer.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH at Venitt, S. DNA at protina addducts sa mga tisyu ng tao na nagreresulta mula sa pagkakalantad sa usok ng tabako.internasyonalidad.J. Kanser.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA at Yu M. Epekto ng Houttuynia cordata at silibinin sa benzo(a)pyrene-induced lung tumorigenesis sa A/J mice.Kanser 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. et al.Likas na produktong anticancer na nakahiwalay sa mga panggamot na materyales ng Tsino.panga.gamot.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Efficacy ng polyphenon E, red ginseng, at rapamycin sa benzo(a)pyrene-induced lung tumorigenesis sa A/J mice.Kanser 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS at Yuan, KS Red, paglahok sa cancer therapy.panga.J. Nutt.gamot.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS at Gao, L. Ginsenosides sa mga ugat at dahon ng American ginseng.J. Agric.Chemistry ng pagkain.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA at Yuan KS Pharmacology ng ginseng: maraming bahagi at maraming epekto.biochemistry.pharmacology.58, 1685–1693 (1999).
Oras ng post: Set-17-2023