Nature.com پر جانے کا شکریہ۔براؤزر کا جو ورژن آپ استعمال کر رہے ہیں وہ محدود CSS سپورٹ رکھتا ہے۔بہترین نتائج کے لیے، ہم آپ کے براؤزر کا نیا ورژن استعمال کرنے کی تجویز کرتے ہیں (یا انٹرنیٹ ایکسپلورر میں مطابقت موڈ کو بند کر دیں)۔اس دوران، جاری تعاون کو یقینی بنانے کے لیے، ہم سائٹ کو اسٹائل یا جاوا اسکرپٹ کے بغیر ڈسپلے کر رہے ہیں۔
ریڈ ginseng سینکڑوں سالوں کے لئے روایتی ایشیائی ادویات میں استعمال کیا گیا ہے.اس مطالعے میں، ہم نے مختلف خطوں میں اگائے جانے والے چار قسم کے سرخ ginseng (چینی ریڈ ginseng، Korean red ginseng A، Korean red ginseng B، اور Korean red ginseng C) کی صلاحیت کا جائزہ لیا تاکہ سرطان پیدا کرنے والے پھیپھڑوں کی تشکیل اور نشوونما کو روکا جا سکے۔ ٹیومرA/J چوہوں پر بینزو(a)pyrene (B(a)P) کا ٹیسٹ کیا گیا، اور کورین ریڈ ginseng B کو چار سرخ ginseng اقسام میں ٹیومر کے بوجھ کو کم کرنے میں سب سے زیادہ مؤثر پایا گیا۔اس کے علاوہ، ہم نے مختلف ginsenosides کے مشمولات (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 اور Rg5) کا چار سرخ ginseng کے عرقوں میں تجزیہ کیا اور پایا کہ کورین ریڈ ginseng B میں ginsenoside Rg3 (G-Rg3) کی اعلی ترین سطح، یہ تجویز کرتی ہے کہ G-Rg3 اس کے علاج کی افادیت میں اہم کردار ادا کر سکتا ہے۔یہ کام ظاہر کرتا ہے کہ G-Rg3 نسبتاً کم جیو دستیاب ہے۔تاہم، جب G-Rg3 کو P-gp inhibitor verapamil کے ساتھ ملایا گیا، تو Caco-2 خلیوں میں G-Rg3 کا بہاؤ کم ہو گیا، چوہے کے ماڈل میں G-Rg3 کے آنتوں میں جذب کی شرح میں اضافہ ہوا، اور G-Rg3۔ اضافہ کیا گیا تھا.Caco-2 خلیوں میں، Rg3 کا اخراج کم ہو جاتا ہے، اور Rg3 کی حراستی کی سطح کم ہو جاتی ہے۔G-Rg3 کو آنت اور پلازما میں بڑھایا جاتا ہے، اور ٹیومر کو روکنے کی اس کی صلاحیت کو B(a) P-حوصلہ افزائی ٹیومرجینیسیس کے چوہے کے ماڈل میں بھی بڑھایا جاتا ہے۔ہم نے یہ بھی پایا کہ G-Rg3 نے انسانی پھیپھڑوں کے خلیوں میں B(a) P-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسائٹی اور DNA ایڈکٹ کی تشکیل کو کم کیا، اور Nrf2 راستے کے ذریعے مرحلے II کے خامروں کے اظہار اور سرگرمی کو بحال کیا، جس کا تعلق ممکنہ طریقہ کار سے ہوسکتا ہے۔ جی روکنا -Rg3۔.پھیپھڑوں کے ٹیومر کی موجودگی کے بارے میں۔ہمارا مطالعہ ماؤس ماڈلز میں پھیپھڑوں کے ٹیومر کو نشانہ بنانے میں G-Rg3 کے لئے ممکنہ طور پر اہم کردار کو ظاہر کرتا ہے۔اس ginsenoside کی زبانی جیو دستیابی کو P-glycoprotein کو نشانہ بنا کر بڑھایا جاتا ہے، جس سے انو کینسر مخالف اثرات مرتب کرتا ہے۔
پھیپھڑوں کے کینسر کی سب سے عام قسم نان سمال سیل پھیپھڑوں کا کینسر (این ایس سی ایل سی) ہے، جو چین اور شمالی امریکہ میں کینسر سے ہونے والی اموات کی سب سے بڑی وجوہات میں سے ایک ہے۔اہم عنصر جو غیر چھوٹے خلیوں کے پھیپھڑوں کے کینسر کے خطرے کو بڑھاتا ہے وہ ہے سگریٹ نوشی۔سگریٹ کے دھوئیں میں 60 سے زیادہ کارسنوجینز ہوتے ہیں، جن میں بینزو(a)پائرین (B(a)P)، نائٹروسامینز، اور ریڈون کے زوال سے تابکار آاسوٹوپس شامل ہیں۔ دھواںB(a)P کے سامنے آنے پر، cytochrome P450 اسے B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE) میں تبدیل کر دیتا ہے، جو DNA کے ساتھ رد عمل ظاہر کر کے BPDE-DNA ایڈکٹ 4 بناتا ہے۔ مزید برآں، یہ ایڈیکٹس ٹیومر کے مرحلے اور انسانی پھیپھڑوں کے ٹیومر کی طرح ہسٹوپیتھولوجی والے چوہوں میں پھیپھڑوں کے ٹیومرجینیسیس کو دلاتے ہیں۔یہ خصوصیت B(a) P-حوصلہ افزائی پھیپھڑوں کے کینسر کے ماڈل کو ممکنہ اینٹی کینسر خصوصیات کے ساتھ مرکبات کا جائزہ لینے کے لیے ایک موزوں نظام بناتی ہے۔
زیادہ خطرہ والے گروہوں، خاص طور پر تمباکو نوشی کرنے والوں میں پھیپھڑوں کے کینسر کی نشوونما کو روکنے کے لیے ایک ممکنہ حکمت عملی intraepithelial neoplastic گھاووں کی نشوونما کو دبانے کے لیے chemopreventive agents کا استعمال ہے اور اس طرح ان کے بعد میں مہلکیت کی طرف بڑھنے کو روکنا ہے۔جانوروں کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ مختلف کیموپریوینٹیو ایجنٹ مؤثر ہیں6۔ہماری پچھلی رپورٹ 7 میں پھیپھڑوں کے کینسر پر ریڈ ginseng کے اچھے حفاظتی اثرات پر روشنی ڈالی گئی تھی۔یہ جڑی بوٹی صدیوں سے روایتی ایشیائی ادویات میں زندگی اور صحت کو طول دینے کے لیے استعمال ہوتی رہی ہے، اور اسے اینٹیٹیمر اثرات کے لیے دستاویز کیا گیا ہے۔
ginseng کا فعال عنصر ginsenoside ہے، جو ginseng کے نچوڑ کے معیار کو جانچنے کے لیے ایک جامع مارکر کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔خام ginseng کے عرقوں کے مقداری تجزیہ میں عام طور پر کئی ginsenosides کا استعمال شامل ہوتا ہے، بشمول RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, اور Rc9,10۔Ginsenosides بہت کم زبانی حیاتیاتی دستیابی کی وجہ سے بہت کم طبی استعمال کرتے ہیں۔اگرچہ اس ناقص جیو دستیابی کا طریقہ کار واضح نہیں ہے، لیکن P-glycoprotein (P-gp) 12 کی وجہ سے ginsenosides کا بہاؤ اس کی وجہ ہو سکتا ہے۔P-gp اے ٹی پی بائنڈنگ کیسٹ ٹرانسپورٹر میں سپر فیملی میں سب سے اہم ایفلوکس ٹرانسپورٹرز میں سے ایک ہے، جو بیرونی ماحول میں انٹرا سیلولر مادوں کو چھوڑنے کے لیے اے ٹی پی ہائیڈولیسس کی توانائی کا استعمال کرتا ہے۔P-gp ٹرانسپورٹرز عام طور پر بڑے پیمانے پر آنت، گردے، جگر اور خون دماغی رکاوٹ میں تقسیم ہوتے ہیں۔P-gp آنتوں کے جذب میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے، اور P-gp کی روک تھام کچھ کینسر مخالف ادویات کی زبانی جذب اور دستیابی کو بڑھاتی ہے 12,14۔پہلے ادب میں استعمال ہونے والے روکنے والوں کی مثالیں verapamil اور cyclosporine A15 ہیں۔اس کام میں B(a)P-حوصلہ افزائی پھیپھڑوں کے کینسر کا مطالعہ کرنے کے لیے ایک ماؤس سسٹم قائم کرنا شامل ہے تاکہ چین اور کوریا کے مختلف ریڈ ginseng کے عرق کی خرابی کو متاثر کرنے کی صلاحیت کا جائزہ لیا جا سکے۔عرقوں کا انفرادی طور پر تجزیہ کیا گیا تاکہ مخصوص ginsenosides کی شناخت کی جا سکے جو سرطان پیدا کرنے کے عمل کو متاثر کر سکتے ہیں۔ویراپامل کو پھر P-gp کو نشانہ بنانے اور کینسر کو نشانہ بنانے والے ginsenosides کی زبانی جیو دستیابی اور علاج کی افادیت کو بہتر بنانے کے لیے استعمال کیا گیا۔
وہ طریقہ کار جس کے ذریعے ginseng saponins سرطان پیدا کرنے پر علاج کے اثرات مرتب کرتے ہیں ابھی تک واضح نہیں ہے۔تحقیق سے ثابت ہوا ہے کہ مختلف ginsenosides آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرکے اور فیز II detoxification کے انزائمز کو چالو کرکے کارسنوجنز کی وجہ سے ہونے والے ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان کو کم کرسکتے ہیں، اس طرح سیل کو پہنچنے والے نقصان کو روکتے ہیں۔Glutathione S-transferase (GST) ایک عام فیز II انزائم ہے جو کارسنوجنز کی وجہ سے ہونے والے DNA کو پہنچنے والے نقصان کو کم کرنے کے لیے ضروری ہے۔نیوکلیئر اریتھرایڈ 2 سے متعلق عنصر 2 (Nrf2) ایک اہم ٹرانسکرپشن عنصر ہے جو ریڈوکس ہومیوسٹاسس کو منظم کرتا ہے اور فیز II کے انزائمز اور سائٹو پروٹیکٹو اینٹی آکسیڈینٹ ردعمل کو متحرک کرتا ہے۔ہمارے مطالعے نے B(a) P-حوصلہ افزائی cytotoxicity اور BPDE-DNA ایڈکٹ کی تشکیل کو کم کرنے کے ساتھ ساتھ پھیپھڑوں کے عام خلیوں میں Nrf2 پاتھ وے کو ماڈیول کرکے فیز II کے انزائمز کو شامل کرنے پر شناخت شدہ ginsenosides کے اثرات کا بھی جائزہ لیا۔
B(a) P-حوصلہ افزائی کینسر کے ماؤس ماڈل کا قیام پچھلے کام سے مطابقت رکھتا ہے۔شکل 1A ماؤس کینسر ماڈل کے 20 ہفتوں کے علاج کے تجرباتی ڈیزائن کو دکھاتا ہے جو B(a)P، پانی (کنٹرول)، چینی ریڈ ginseng ایکسٹریکٹ (CRG)، کورین ریڈ ginseng extract A (KRGA)، اور کوریائی سرخ ginsengایکسٹریکٹ B (KRGB) اور کورین ریڈ Ginseng Extract C (KRGC)۔ریڈ ginseng علاج کے 20 ہفتوں کے بعد، چوہوں کو CO2 دم گھٹنے سے قربان کیا گیا۔شکل 1B مختلف قسم کے ریڈ ginseng کے ساتھ علاج کیے جانے والے جانوروں میں میکروسکوپک پھیپھڑوں کے ٹیومر دکھاتا ہے، اور شکل 1C ٹیومر کے نمونے کا نمائندہ لائٹ مائکروگراف دکھاتا ہے۔KRGB سے علاج شدہ جانوروں (1.5 ± 0.35) کے ٹیومر کا بوجھ کنٹرول جانوروں (0.82 ± 0.2، P <0.05) سے کم تھا، جیسا کہ شکل 1D میں دکھایا گیا ہے۔ٹیومر بوجھ کی روک تھام کی اوسط ڈگری 45٪ تھی۔دوسرے سرخ ginseng کے عرقوں کا تجربہ کیا گیا جس نے ٹیومر کے بوجھ میں ایسی اہم تبدیلیاں نہیں دکھائیں (P > 0.05)۔ریڈ ginseng علاج کے 20 ہفتوں کے دوران ماؤس ماڈل میں کوئی واضح ضمنی اثرات نہیں دیکھے گئے، بشمول جسمانی وزن میں کوئی تبدیلی (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) اور جگر یا گردے کی زہریلا نہیں (شکل 1E،F)۔
ریڈ ginseng ایکسٹریکٹ A/J چوہوں میں پھیپھڑوں کے ٹیومر کی نشوونما کا علاج کرتا ہے۔(A) تجرباتی ڈیزائن۔(B) ماؤس ماڈل میں پھیپھڑوں کے بڑے ٹیومر۔ٹیومر تیروں سے ظاہر ہوتے ہیں۔ایک: چینی سرخ ginseng گروپ.b: کورین ریڈ ginseng کا گروپ A۔c: کورین ریڈ ginseng گروپ B. d: کورین ریڈ ginseng گروپ C. d: کنٹرول گروپ۔(سی) ہلکا مائکروگراف پھیپھڑوں کے ٹیومر کو دکھا رہا ہے۔میگنیفیکیشن: 100. b: 400. (D) سرخ ginseng نچوڑ گروپ میں ٹیومر کا بوجھ۔(E) جگر کے انزائم ALT کے پلازما کی سطح۔(F) گردوں کے انزائم Cr کے پلازما کی سطح۔ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔*P <0.05۔
اس مطالعے میں جن ریڈ ginseng کی نشاندہی کی گئی ہے ان کا تجزیہ الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی ٹینڈم ماس اسپیکٹومیٹری (UPLC-MS/MS) کے ذریعے کیا گیا تاکہ درج ذیل ginsenosides کی مقدار درست کی جا سکے: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3 Rh2، F1، Rk1 اور Rg5۔تجزیہ کاروں کی پیمائش کے لیے استعمال ہونے والی UPLC اور MS کی شرائط کو پچھلی رپورٹ19 میں بیان کیا گیا تھا۔UPLC-MS/MS چار سرخ ginseng کے نچوڑ کے کرومیٹوگرامس کو شکل 2A میں دکھایا گیا ہے۔CRG (590.27 ± 41.28 μmol/L) میں سب سے زیادہ کل ginsenoside مواد کے ساتھ کل ginsenoside مواد میں نمایاں فرق تھے (شکل 2B)۔انفرادی ginsenosides (شکل 2C) کا جائزہ لیتے وقت، KRGB نے دیگر ginsenosides کے مقابلے G-Rg3 کی بلند ترین سطح دکھائی (58.33 ± 3.81 μmol/L G-Rg3s کے لیے اور 41.56 ± 2.88 μmol/L G -Rg3r کے لیے)۔ریڈ ginseng قسم (P <0.001)G-Rg3 stereoisomers G-Rg3r اور G-Rg3s کے جوڑے کے طور پر ہوتا ہے، جو کاربن 20 (تصویر 2D) پر ہائیڈروکسیل گروپ کی پوزیشن میں مختلف ہوتے ہیں۔نتائج بتاتے ہیں کہ G-Rg3r یا G-Rg3 B(a) P-حوصلہ افزائی والے کینسر ماؤس ماڈل میں کینسر کے خلاف اہم صلاحیت رکھتے ہیں۔
مختلف سرخ ginseng کے عرقوں میں ginsenosides کا مواد۔(A) UPLC-MS/MS چار سرخ ginseng کے عرقوں کے کرومیٹوگرام۔(B) اشارہ کردہ عرقوں میں کل ginsenoside مواد کا تخمینہ۔(C) لیبل لگے ہوئے عرقوں میں انفرادی ginsenosides کا پتہ لگانا۔(D) ginsenoside stereoisomers G-Rg3r اور G-Rg3s کے ڈھانچے۔اعداد و شمار کو سہ رخی تعین کے اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔*** پی <0.001۔
UPLC-MS/MS مطالعہ کے لیے 20 ہفتوں کے علاج کے بعد آنتوں اور خون کے نمونوں میں ginsenosides کی مقدار درست کرنے کی ضرورت تھی۔KRGB کے ساتھ علاج سے خون میں صرف 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 کی موجودگی ظاہر ہوئی۔کسی بھی باقی ماندہ ginsenosides کا پتہ نہیں چلا، جو زبانی جیو دستیابی کی خرابی کی نشاندہی کرتا ہے اور اس وجہ سے ان ginsenosides کی نمائش میں کمی آئی۔
بڑی آنت کے اڈینو کارسینوما سیل لائن Caco-2 مورفولوجیکل اور بائیو کیمیکل طور پر انسانی آنتوں کے اپکلا خلیوں سے ملتی جلتی ہے، جو آنتوں کے اپکلا رکاوٹ کے پار انٹروسائٹ ٹرانسپورٹ کا اندازہ لگانے میں اپنی افادیت کا مظاہرہ کرتی ہے۔یہ تجزیہ پہلے کے مطالعے پر مبنی تھا 20۔اعداد و شمار 3A,B,C,D,E,F ایک Caco-2 monolayer ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے G-Rg3r اور G-Rg3 کی ٹرانس سیلولر ٹرانسپورٹ کی نمائندہ تصاویر دکھاتے ہیں۔باسولیٹرل سے اپیکل سائیڈ (Pb-a) تک Caco-2 monolayers میں G-Rg3r یا G-Rg3 کی ٹرانس سیلولر ٹرانسپورٹ apical سے basolateral طرف (Pa-b) کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی۔G-Rg3r کے لیے، Pa-b کی اوسط قدر 0.38 ± 0.06 تھی، جو 50 μmol/L verapamil کے ساتھ علاج کے بعد بڑھ کر 0.73 ± 0.06 اور 100 μmol/L verapamil (p <0.01، اور 0.01) کے ساتھ علاج کے بعد 1.14 ± 0.09 ہو گئی۔ بالترتیب شکل 2)۔3A)۔G-Rg3 کے مشاہدات نے اسی طرز کی پیروی کی (تصویر 3B)، اور نتائج سے ظاہر ہوا کہ ویراپامیل علاج نے G-Rg3r اور G-Rg3 کی نقل و حمل کو بڑھایا۔ویراپامل کے علاج کے نتیجے میں Pb-a اور G-Rg3r اور G-Rg3s بہاؤ کے تناسب (شکل 3C,D,E,F) میں بھی نمایاں کمی واقع ہوئی، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ویراپامل کا علاج Caco-2 کے بہاؤ کے خلیوں میں ginsenoside مواد کو کم کرتا ہے۔.
Caco-2 monolayers میں G-Rg3 کی ٹرانس سیلولر ٹرانسپورٹ اور چوہے پرفیوژن پرکھ میں آنتوں کا جذب۔(A) Caco-2 monolayer میں G-Rg3r گروپ کی Pa-b قدر۔(B) Caco-2 monolayer میں G-Rg3s گروپس کی Pa-b قدر۔(C) Caco-2 monolayer میں G-Rg3r گروپ کی Pb قدر۔(D) Caco-2 monolayer میں G-Rg3s گروپس کی Pb قدر۔(E) ایک Caco-2 monolayer میں G-Rg3r گروپوں کی پیداوار کا تناسب۔(F) ایک Caco-2 monolayer میں G-Rg3 گروپوں کی پیداوار کا تناسب۔(G) چوہوں میں پرفیوژن پرکھ میں G-Rg3r کے آنتوں میں جذب ہونے کا فیصد۔(H) چوہوں میں پرفیوژن پرکھ میں G-Rg3 کے آنتوں کے جذب کا فیصد۔پارگمیتا اور جذب کا موازنہ ویراپامیل کے اضافے کے بغیر کیا گیا۔ڈیٹا کو پانچ آزاد تجربوں کے اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001۔
پہلے کام 20 کے مطابق، چوہوں کے آرتھوٹوپک آنتوں پرفیوژن کو انجام دیا گیا تاکہ یہ معلوم کیا جا سکے کہ آیا ویراپامیل کے علاج کے بعد آنتوں میں G-Rg3 جذب بڑھ جاتا ہے۔اعداد و شمار 3G,H مندرجہ بالا مدت کے دوران کینسر کے ماڈل چوہوں میں G-Rg3r اور G-Rg3 کے آنتوں کے جذب کی فیصد کا اندازہ کرنے کے لیے نمائندہ پرفیوژن اسسز دکھاتے ہیں۔50 μM verapamil کے ساتھ علاج کے بعد تقریباً 10% کے کمزور G-Rg3r لینے کا ابتدائی فیصد بڑھ کر 20% سے زیادہ اور 100 μM verapamil کے ساتھ علاج کے بعد 25% سے زیادہ ہو گیا۔اسی طرح، G-Rg3، جس کی ابتدائی مقدار 10% تھی، نے بھی 50 μM verapamil کے ساتھ علاج کے بعد 20% سے زیادہ اور 100 μM verapamil کے ساتھ علاج کے بعد تقریباً 30% کی چوٹی کو ظاہر کیا، یہ تجویز کرتا ہے کہ verapamil کے ذریعے P-gp کی روک تھام میں اضافہ ہوتا ہے۔ پھیپھڑوں کے کینسر کے ماؤس ماڈل میں آنتوں کا جی جذب Rg3۔
مندرجہ بالا طریقہ کے مطابق، B(a) P- حوصلہ افزائی کینسر ماڈل چوہوں کو تصادفی طور پر چھ گروپوں میں تقسیم کیا گیا، جیسا کہ شکل 4A میں دکھایا گیا ہے۔کنٹرول گروپ (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) کے مقابلے G-Rg3 ٹریٹمنٹ گروپ میں وزن میں کوئی خاص کمی یا زہریلے پن کی طبی علامات نہیں دیکھی گئیں۔20 ہفتوں کے علاج کے بعد، ہر چوہے کے پھیپھڑے اکٹھے کیے گئے۔شکل 4B اوپر والے علاج گروپوں میں چوہوں میں میکروسکوپک پھیپھڑوں کے ٹیومر دکھاتا ہے، اور شکل 4C نمائندہ ٹیومر کا نمائندہ لائٹ مائکروگراف دکھاتا ہے۔ہر گروپ میں ٹیومر کے بوجھ کے بارے میں (تصویر 4D)، G-Rg3r اور G-Rg3s کے ساتھ علاج کیے جانے والے چوہوں کی قدریں بالترتیب 0.75 ± 0.29 mm3 اور 0.81 ± 0.30 mm3 تھیں، جبکہ G چوہوں کی قدریں علاج کی گئیں۔ -Rg3s کے ساتھ بالترتیب ±0.40 mm3 1.63 تھے۔کنٹرول چوہوں (p <0.001)، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ G-Rg3 علاج نے چوہوں میں ٹیومر کا بوجھ کم کیا۔ویراپیمیل کی انتظامیہ نے اس کمی کو مزید بڑھایا: ویراپیمیل+ جی-آر جی 3 آر چوہوں میں اقدار 0.75 ± 0.29 ملی میٹر 3 سے کم ہوکر 0.33 ± 0.25 ملی میٹر 3 (پی <0.01) ، اور 0.81 ± 0.30 ملی میٹر 3 سے ویراپیمیل+ کی قدر 0.29 ± 0.21 تک کم ہوگئیں۔ mm3 G. -Rg3s سے علاج شدہ چوہوں (p <0.05) میں، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ verapamil tumorigenesis پر G-Rg3 کے روکنے والے اثر کو بڑھا سکتا ہے۔ٹیومر کے بوجھ نے کنٹرول گروپ اور ویراپامیل گروپ، G-Rg3r گروپ اور G-Rg3s گروپ، اور verapamil+G-Rg3r گروپ اور verapamil+G-Rg3s گروپ کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں دکھایا۔مزید یہ کہ، تشخیص شدہ علاج (شکل 4E، F) سے وابستہ جگر یا گردے کی کوئی اہم زہریلا نہیں تھی۔
G-Rg3 علاج کے بعد ٹیومر کا بوجھ اور اشارہ شدہ گروپوں میں پلازما یا آنتوں کے G-Rg3r اور G-Rg3 کی سطح۔(A) تجرباتی ڈیزائن۔(B) ماؤس ماڈل میں میکروسکوپک ٹیومر۔ٹیومر تیروں سے ظاہر ہوتے ہیں۔a: G-Rg3r۔b: G-Rg3s۔c: G-Rg3r verapamil کے ساتھ مل کر۔d: G-Rg3 verapamil کے ساتھ مل کر۔d: Verapamil.e: کنٹرول۔(C) میگنیفیکیشن پر ٹیومر کا آپٹیکل مائکروگراف۔جواب: 100xb: 400X(D) A/J چوہوں میں ٹیومر کے بوجھ پر G-Rg3 + verapamil علاج کا اثر۔(E) جگر کے انزائم ALT کے پلازما کی سطح۔(F) گردوں کے انزائم Cr کے پلازما کی سطح۔(G) اشارہ کردہ گروپوں کے G-Rg3r یا G-Rg3 کے پلازما کی سطح۔(H) اشارہ شدہ گروپوں کی آنتوں میں G-Rg3r یا G-Rg3s کی سطح۔اعداد و شمار کو سہ رخی تعین کے اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001۔
B(a) P-حوصلہ افزائی کینسر ماڈل چوہوں میں G-Rg3 کی سطح کا اندازہ UPLC-MS/MS کے ذریعے 20 ہفتوں کے علاج کی مدت کے بعد طریقوں کے سیکشن میں بیان کردہ طریقہ کے مطابق کیا گیا۔اعداد و شمار 4G اور H بالترتیب پلازما اور آنتوں کے G-Rg3 کی سطح کو ظاہر کرتے ہیں۔پلازما G-Rg3r کی سطحیں 0.44 ± 0.32 μmol/L تھیں اور 1.17 ± 0.47 μmol/L تک verapamil (p <0.001) کی ہم آہنگی کے ساتھ بڑھ گئیں، جبکہ آنتوں کے G-Rg3r کی سطح 0.53 ± 0.08 ± 0.08 تھی۔جب verapamil کے ساتھ ملایا جائے تو g 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001) تک بڑھ جاتا ہے۔G-Rg3 کے لیے، نتائج نے اسی طرز کی پیروی کی، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ verapamil علاج نے A/J چوہوں میں G-Rg3 کی زبانی حیاتیاتی دستیابی میں اضافہ کیا۔
HEL خلیوں پر B (a) P اور G-Rg3 کی سائٹوٹوکسیٹی کا اندازہ کرنے کے لئے سیل وائبلٹی پرکھ کا استعمال کیا گیا تھا۔HEL خلیوں میں B (a) P کے ذریعہ پیدا کردہ سائٹوٹوکسائٹی کو شکل 5A میں دکھایا گیا ہے، جبکہ G-Rg3r اور G-Rg3 کی غیر زہریلی خصوصیات کو اعداد و شمار 5A اور 5B میں دکھایا گیا ہے۔5B, C. G-Rg3 کے cytoprotective اثر کا جائزہ لینے کے لیے B(a)P کو HEL خلیوں میں G-Rg3r یا G-Rg3 کی مختلف ارتکاز کے ساتھ مل کر انتظام کیا گیا تھا۔جیسا کہ شکل 5D میں دکھایا گیا ہے، 5 μM، 10 μM، اور 20 μM کے ارتکاز میں G-Rg3r نے بالترتیب 58.3%، 79.3%، اور 77.3% تک سیل کی عملداری کو بحال کیا۔اسی طرح کے نتائج G-Rg3s گروپ میں بھی دیکھے جا سکتے ہیں۔جب G-Rg3s کی ارتکاز 5 µM، 10 µM اور 20 µM تھی، سیل کی عملداری کو بالترتیب 58.3%، 72.7% اور 76.7% پر بحال کیا گیا تھا (شکل 5E)۔)۔BPDE-DNA ایڈیکٹس کی موجودگی کی پیمائش ELISA کٹ کے ذریعے کی گئی۔ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ کنٹرول گروپ کے مقابلے B(a) P- علاج شدہ گروپ میں BPDE-DNA ایڈکٹ کی سطح میں اضافہ کیا گیا تھا، لیکن G-Rg3 شریک علاج کے ساتھ مقابلے میں، B(a) P گروپ میں BPDE-DNA ایڈکٹ لیولز۔ علاج شدہ گروپ میں بی، ڈی این اے کی نشہ کی سطح کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا۔صرف B(a)P کے ساتھ علاج کے نتائج شکل 5F میں دکھائے گئے ہیں (1.87 ± 0.33 بمقابلہ 3.77 ± 0.42 G-Rg3r کے لیے، 1.93 ± 0.48 بمقابلہ 3.77 ± 0.42 G-Rg3s کے لیے، p <0.001)۔
G-Rg3 اور B(a) P کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں سیل کی عملداری اور BPDE-DNA ایڈکٹ کی تشکیل۔(A) B(a) P کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں کی عملداری۔(B) G-Rg3r کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں کی عملداری۔(C) G-Rg3 کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں کی عملداری۔(D) B(a) P اور G-Rg3r کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں کی عملداری۔(E) B(a) P اور G-Rg3 کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں کی عملداری۔(F) B(a) P اور G-Rg3 کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں BPDE-DNA ایڈکٹ کی سطح۔اعداد و شمار کو سہ رخی تعین کے اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001۔
10 μM B(a) P اور 10 μM G-Rg3r یا G-Rg3s کے ساتھ مشترکہ علاج کے بعد GST انزائم اظہار کا پتہ چلا۔ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ B(a) P نے GST اظہار کو دبایا (G-Rg3r گروپ میں 59.7 ± 8.2% اور G-Rg3s گروپ میں 39 ± 4.5%)، اور B(a) P یا تو G-Rg3r کے ساتھ وابستہ تھا۔ ، یا G-Rg3r کے ساتھ، یا G-Rg3r کے ساتھ۔G-Rg3s کے ساتھ مشترکہ علاج نے GST اظہار کو بحال کیا۔GST اظہار (G-Rg3r گروپ میں 103.7 ± 15.5% اور G-Rg3s گروپ میں 110 ± 11.1%، p <0.05 اور p <0.001، بالترتیب، تصویر 6A، B، اور C)۔ایکٹیویٹی پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے جی ایس ٹی کی سرگرمی کا اندازہ لگایا گیا۔ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ B(a)P صرف گروپ (96.3 ± 6.6% بمقابلہ 35.7 ± 7.8% G-Rg3r گروپ میں بمقابلہ 92.3 ± 6.5 G-Rg3r گروپ کے مقابلے میں امتزاج علاج گروپ میں GST سرگرمی زیادہ تھی۔ )۔G-Rg3s گروپ میں % بمقابلہ 35.7 ± 7.8%، p <0.001، شکل 6D)۔
B(a)P اور G-Rg3 کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں GST اور Nrf2 کا اظہار۔(A) مغربی بلاٹنگ کے ذریعے جی ایس ٹی اظہار کا پتہ لگانا۔(B) B(a) P اور G-Rg3r کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں GST کا مقداری اظہار۔(C) B(a) P اور G-Rg3s کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں GST کا مقداری اظہار۔(D) B(a) P اور G-Rg3 کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں GST سرگرمی۔(E) مغربی بلاٹنگ کے ذریعہ Nrf2 اظہار کا پتہ لگانا۔(F) B(a) P اور G-Rg3r کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں Nrf2 کا مقداری اظہار۔(G) B(a) P اور G-Rg3s کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں Nrf2 کا مقداری اظہار۔اعداد و شمار کو سہ رخی تعین کے اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001۔
B(a) P-حوصلہ افزائی ٹیومرجینیسیس کے G-Rg3 ثالثی دبانے میں شامل راستوں کو واضح کرنے کے لیے، Nrf2 اظہار کا اندازہ مغربی بلاٹنگ کے ذریعے کیا گیا۔جیسا کہ اعداد و شمار 6E,F,G میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، B(a)P علاج گروپ میں صرف Nrf2 کی سطح کم ہوئی تھی۔تاہم، B(a)P ٹریٹمنٹ گروپ کے مقابلے میں، PG-Rg3 گروپ میں B(a) Nrf2 کی سطحوں میں اضافہ ہوا (106 ± 9.5% G-Rg3r بمقابلہ 51.3 ± 6.8%، 117 ± 6. 2% G-Rg3r بمقابلہ 41 ± 9.8% برائے G-Rg3s، p <0.01)۔
ہم نے مخصوص چھوٹے مداخلت کرنے والے RNA (siRNA) کا استعمال کرتے ہوئے Nrf2 اظہار کو دبا کر Nrf2 کے بچاؤ کے کردار کی تصدیق کی۔Nrf2 ناک آؤٹ کی تصدیق مغربی بلوٹنگ (تصویر 7A,B) سے ہوئی۔جیسا کہ اعداد و شمار 7C,D میں دکھایا گیا ہے، B(a)P اور G-Rg3 کے ساتھ ایچ ای ایل کے خلیات کے مشترکہ علاج کے نتیجے میں B(a)P کے ساتھ علاج کے مقابلے BPDE-DNA ایڈیکٹس (1.47 ± 0.21) کی تعداد میں کمی واقع ہوئی۔ کنٹرول siRNA گروپ میں اکیلے۔) G-Rg3r 4.13 ± 0.49 تھا، G-Rg3s تھا 1.8 ± 0.32 اور 4.1 ± 0.57، p <0.01)۔تاہم، BPDE-DNA کی تشکیل پر G-Rg3 کے روکنے والے اثر کو Nrf2 دستک ڈاؤن کے ذریعے ختم کر دیا گیا۔siNrf2 گروپ میں، B(a)P اور G-Rg3 شریک علاج اور B(a)P علاج کے درمیان BPDE-DNA ایڈکٹ کی تشکیل میں کوئی خاص فرق نہیں تھا (3.0 ± 0.21 G-Rg3r بمقابلہ 3.56 ± 0.32 )۔G-Rg3r بمقابلہ 3.6 کے لیے G-Rg3s بمقابلہ ±0.45 بمقابلہ 4.0±0.37، p > 0.05)۔
HEL خلیوں میں BPDE-DNA ایڈکٹ کی تشکیل پر Nrf2 دستک ڈاؤن کا اثر۔(A) Nrf2 دستک ڈاؤن کی تصدیق مغربی بلاٹنگ سے ہوئی۔(B) Nrf2 بینڈ کی شدت کی مقدار۔(C) B(a) P اور G-Rg3r کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں BPDE-DNA ایڈکٹ لیول پر Nrf2 دستک ڈاؤن کا اثر۔(D) B(a) P اور G-Rg3 کے ساتھ علاج کیے جانے والے HEL خلیوں میں BPDE-DNA ایڈکٹ لیول پر Nrf2 دستک ڈاؤن کا اثر۔اعداد و شمار کو سہ رخی تعین کے اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔*P <0.05، **P <0.01، ***P <0.001۔
اس مطالعہ نے B(a)P-حوصلہ افزائی پھیپھڑوں کے کینسر کے ماؤس ماڈل پر مختلف ریڈ ginseng کے عرقوں کے حفاظتی اثرات کا جائزہ لیا، اور KRGB علاج نے ٹیومر کے بوجھ کو نمایاں طور پر کم کیا۔اس بات پر غور کرتے ہوئے کہ G-Rg3 میں اس ginseng ایکسٹریکٹ میں سب سے زیادہ مواد موجود ہے، tumorigenesis کو روکنے میں اس ginsenoside کے اہم کردار کا مطالعہ کیا گیا ہے۔G-Rg3r اور G-Rg3 (G-Rg3 کے دو ایپیمر) دونوں نے B(a) P-حوصلہ افزائی کینسر کے ماؤس ماڈل میں ٹیومر کے بوجھ کو نمایاں طور پر کم کیا۔G-Rg3r اور G-Rg3 ٹیومر سیلز کے اپوپٹوس کو اکسانے، ٹیومر کی افزائش کو روک کر، سیل سائیکل23 کو روک کر اور انجیوجینیسیس24 کو متاثر کر کے کینسر مخالف اثرات مرتب کرتے ہیں۔G-Rg3 کو سیلولر میٹاسٹیسیس 25 کو روکتا بھی دکھایا گیا ہے، اور G-Rg3 کی کیموتھراپی اور ریڈیو تھراپی کے اثرات کو بڑھانے کی صلاحیت کو 26,27 دستاویز کیا گیا ہے۔پون ایٹ ال نے یہ ظاہر کیا کہ G-Rg3 علاج B(a) P28 کے جینٹوکسک اثرات کو کم کر سکتا ہے۔یہ مطالعہ ماحولیاتی سرطان پیدا کرنے والے مالیکیولز کو نشانہ بنانے اور کینسر کو روکنے میں G-Rg3 کی علاج کی صلاحیت کو ظاہر کرتا ہے۔
ان کی اچھی پروفیلیکٹک صلاحیت کے باوجود، ginsenosides کی ناقص زبانی جیو دستیابی ان مالیکیولز کے طبی استعمال کے لیے ایک چیلنج ہے۔چوہوں میں ginsenosides کی زبانی انتظامیہ کے فارماکوکینیٹک تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ اس کی جیو دستیابی اب بھی 5%29 سے کم ہے۔ان ٹیسٹوں سے پتہ چلتا ہے کہ 20 ہفتوں کے علاج کی مدت کے بعد، صرف Rg5 کی خون کی سطح میں کمی آئی ہے۔اگرچہ ناقص جیو دستیابی کا بنیادی طریقہ کار واضح ہونا باقی ہے، لیکن خیال کیا جاتا ہے کہ P-gp ginsenosides کے بہاؤ میں ملوث ہے۔اس کام نے پہلی بار یہ ظاہر کیا کہ verapamil کی انتظامیہ، ایک P-gp بلاکر، G-Rg3r اور G-Rg3s کی زبانی حیاتیاتی دستیابی کو بڑھاتی ہے۔اس طرح، اس تلاش سے پتہ چلتا ہے کہ G-Rg3r اور G-Rg3s اس کے بہاؤ کو منظم کرنے کے لیے P-gp کے ذیلی ذخیرے کے طور پر کام کرتے ہیں۔
یہ کام ظاہر کرتا ہے کہ verapamil کے ساتھ مرکب علاج پھیپھڑوں کے کینسر کے ماؤس ماڈل میں G-Rg3 کی زبانی حیاتیاتی دستیابی کو بڑھاتا ہے۔اس تلاش کی حمایت P-gp ناکہ بندی پر G-Rg3 کی آنتوں کے ٹرانس سیلولر ٹرانسپورٹ میں اضافہ کرتی ہے، اس طرح اس کے جذب میں اضافہ ہوتا ہے۔Caco2 خلیات میں اسسز سے پتہ چلتا ہے کہ ویراپامیل کے علاج نے G-Rg3r اور G-Rg3s کے بہاؤ کو کم کیا جبکہ جھلی کی پارگمیتا کو بہتر بنایا۔یانگ ایٹ ال کی طرف سے ایک مطالعہ.مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ cyclosporine A (ایک اور P-gp blocker) کے ساتھ علاج ginsenoside Rh2 کی حیاتیاتی دستیابی کو 1%20 کی بنیادی قیمت سے بڑھا کر 30% سے زیادہ کر دیتا ہے۔Ginsenosides مرکبات K اور Rg1 نے بھی اسی طرح کے نتائج 30,31 دکھائے۔جب verapamil اور cyclosporin A کا مشترکہ انتظام کیا گیا تو Caco-2 خلیات میں مرکب K کے اخراج کو نمایاں طور پر 26.6 سے کم کرکے 3 سے کم کردیا گیا، جب کہ اس کی انٹرا سیلولر سطح میں 40 گنا اضافہ ہوا۔verapamil کی موجودگی میں، Rg1 کی سطح چوہوں کے پھیپھڑوں کے اپکلا خلیات میں بڑھ گئی، جو کہ ginsenoside efflux میں P-gp کا کردار تجویز کرتی ہے، جیسا کہ Meng et al.31 نے دکھایا ہے۔تاہم، verapamil کا کچھ ginsenosides (جیسے Rg1، F1، Rh1 اور Re) کے اخراج پر ایک جیسا اثر نہیں ہوا، یہ ظاہر کرتا ہے کہ وہ P-gp ذیلی ذخیرے سے متاثر نہیں ہوتے، جیسا کہ لیانگ ایٹ ال نے دکھایا ہے۔32یہ مشاہدہ دوسرے ٹرانسپورٹرز اور متبادل ginsenoside ڈھانچے کی شمولیت سے متعلق ہو سکتا ہے۔
کینسر پر G-Rg3 کے حفاظتی اثر کا طریقہ کار واضح نہیں ہے۔پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ G-Rg3 آکسیڈیٹیو تناؤ اور سوزش 16,33 کو کم کرکے DNA کو پہنچنے والے نقصان اور apoptosis کو روکتا ہے، جو B(a) P-حوصلہ افزائی ٹیومرجینیسیس کو روکنے کا بنیادی طریقہ کار ہو سکتا ہے۔کچھ رپورٹس بتاتی ہیں کہ B(a)P کے ذریعے پیدا ہونے والی جینٹوکسائٹی کو BPDE-DNA34 بنانے کے لیے فیز II کے خامروں کو ماڈیول کر کے کم کیا جا سکتا ہے۔جی ایس ٹی ایک عام فیز II انزائم ہے جو BPDE-DNA ایڈکٹ کی تشکیل کو روکتا ہے BPDE سے GSH کے بائنڈنگ کو فروغ دے کر، اس طرح B(a) P35 کی وجہ سے DNA نقصان کو کم کرتا ہے۔ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ G-Rg3 علاج HEL خلیوں میں B(a) P-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی اور BPDE-DNA ایڈکٹ کی تشکیل کو کم کرتا ہے اور وٹرو میں GST اظہار اور سرگرمی کو بحال کرتا ہے۔تاہم، یہ اثرات Nrf2 کی غیر موجودگی میں غائب تھے، یہ تجویز کرتے ہیں کہ G-Rg3 Nrf2 راستے کے ذریعے سائٹو پروٹیکٹیو اثرات پیدا کرتا ہے۔Nrf2 فیز II detoxification کے خامروں کے لیے ایک اہم ٹرانسکرپشن عنصر ہے جو xenobiotics36 کی کلیئرنس کو فروغ دیتا ہے۔Nrf2 پاتھ وے کو چالو کرنا سائٹو پروٹیکشن کو اکساتا ہے اور بافتوں کو پہنچنے والے نقصان کو کم کرتا ہے۔مزید یہ کہ متعدد رپورٹس نے سرطان پیدا کرنے میں ٹیومر دبانے والے کے طور پر Nrf2 کے کردار کی تائید کی ہے۔ہمارا مطالعہ ظاہر کرتا ہے کہ G-Rg3 کے ذریعے Nrf2 پاتھ وے کی شمولیت B(a) P-حوصلہ افزائی genotoxicity میں B(a) P detoxification کی وجہ سے مرحلہ II کے انزائمز کو چالو کر کے ایک اہم ریگولیٹری کردار ادا کرتی ہے، اس طرح tumorigenesis کے عمل کو روکتا ہے۔
ہمارا کام ginsenoside G-Rg3 کی اہم شمولیت کے ذریعے چوہوں میں B(a) P-حوصلہ افزائی پھیپھڑوں کے کینسر کو روکنے میں ریڈ ginseng کی صلاحیت کو ظاہر کرتا ہے۔اس مالیکیول کی ناقص زبانی جیو دستیابی اس کے طبی استعمال میں رکاوٹ ہے۔تاہم، یہ مطالعہ پہلی بار ظاہر کرتا ہے کہ G-Rg3 P-gp کا سبسٹریٹ ہے، اور P-gp inhibitor کی انتظامیہ وٹرو اور vivo میں G-Rg3 کی حیاتیاتی دستیابی کو بڑھاتی ہے۔G-Rg3 Nrf2 پاتھ وے کو ریگولیٹ کرکے B(a) P-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسیٹی کو کم کرتا ہے، جو اس کے بچاؤ کے کام کے لیے ایک ممکنہ طریقہ کار ہو سکتا ہے۔ہمارا مطالعہ پھیپھڑوں کے کینسر کی روک تھام اور علاج کے لیے ginsenoside G-Rg3 کی صلاحیت کی تصدیق کرتا ہے۔
جیکسن لیبارٹری (بار ہاربر، یو ایس اے) اور ووہان انسٹی ٹیوٹ آف زولوجی سے چھ ہفتے پرانے مادہ A/J چوہے (20 ± 1 g) اور 7 ہفتے کے نر Wistar چوہے (250 ± 20 g) حاصل کیے گئے تھے۔یونیورسٹی (ووہان، چین)۔چائنیز ٹائپ کلچر کلیکشن سینٹر (ووہان، چین) نے ہمیں Caco-2 اور hEL سیل فراہم کیے ہیں۔سگما-الڈرچ (سینٹ لوئس، USA) B(a)P اور tricaprine کا ایک ذریعہ ہے۔پیوریفائیڈ ginsenosides G-Rg3r اور G-Rg3s، ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO)، CellTiter-96 proliferation Asay Kit (MTS)، verapamil، minimal Essential medium (MEM)، اور fetal bovine serum (FBS) Chengdu Must Bio-Technology سے خریدے گئے تھے۔ .Co., Ltd.(چینگڈو، چین)۔QIAamp DNA منی کٹ اور BPDE-DNA ایڈکٹ ELISA کٹ Qiagen (Stanford, CA, USA) اور Cell Biolabs (San Diego, CA, USA) سے خریدی گئی تھی۔GST سرگرمی پرکھ کٹ اور کل پروٹین پرکھ کٹ (معیاری BCA طریقہ) سولاربیو (بیجنگ، چین) سے خریدی گئی تھی۔تمام ریڈ ginseng کے عرق منگیو لیبارٹری 7 میں محفوظ کیے جاتے ہیں۔ ہانگ کانگ بیپٹسٹ یونیورسٹی (ہانگ کانگ، چین) اور کوریا کینسر سینٹر (سیول، کوریا) سی آر جی ایکسٹریکٹ کے تجارتی ذرائع ہیں اور مختلف کوریائی ماخذ (بشمول KRGA، KRGB) کے مختلف ریڈ ginseng کے عرق۔ اور KRGC)۔ریڈ ginseng 6 سالہ تازہ ginseng کی جڑوں سے بنایا جاتا ہے.ریڈ ginseng اقتباس ginseng کو تین بار پانی سے دھو کر، پھر پانی کے عرق کو مرتکز کر کے، اور آخر میں کم درجہ حرارت پر خشک کر کے ginseng ایکسٹریکٹ پاؤڈر حاصل کر کے حاصل کیا جاتا ہے۔اینٹی باڈیز (اینٹی این آر ایف 2، اینٹی جی ایس ٹی، اور β-ایکٹین)، ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز-کنججٹیڈ اینٹی خرگوش امیونوگلوبلین G (IgG)، ٹرانسفیکشن ریجنٹ، کنٹرول siRNA، اور Nrf2 siRNA سانتا کروز بائیو ٹیکنالوجی (سانتا کروز) سے خریدے گئے تھے۔ .)، امریکا).
Caco2 اور hEL خلیات کو 100 mm2 سیل کلچر ڈشز میں MEM کے ساتھ 37 °C پر 5% CO2 کے مرطوب ماحول میں 10% FBS پر مشتمل کیا گیا تھا۔علاج کے حالات کے اثر کا تعین کرنے کے لیے، HEL خلیوں کو 48 گھنٹے کے لیے MEM میں B(a) P اور G-Rg3 کی مختلف تعداد کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔خلیات کا مزید تجزیہ کیا جا سکتا ہے یا سیل فری نچوڑ تیار کرنے کے لیے جمع کیا جا سکتا ہے۔
تمام تجربات کو ٹونگجی میڈیکل کالج، ہوازہونگ یونیورسٹی آف سائنس اینڈ ٹیکنالوجی کی تجرباتی جانوروں کی اخلاقیات کمیٹی نے منظور کیا تھا (منظوری نمبر 2019؛ رجسٹریشن نمبر 4587TH)۔تمام تجربات متعلقہ رہنما خطوط اور ضوابط کے مطابق کیے گئے تھے، اور مطالعہ اینیمل ریسرچ: رپورٹنگ آف ان ویوو تجربات (ARRIVE) کے رہنما خطوط کے مطابق کیا گیا تھا۔آٹھ ہفتے پرانے A/J چوہوں کو پہلے انٹراپریٹونلی طور پر B(a)P کے ساتھ ٹرائیپرین محلول (100 ملی گرام/کلوگرام، 0.2 ملی لیٹر) میں انجکشن لگایا گیا تھا۔ایک ہفتے کے بعد، چوہوں کو تصادفی طور پر کنٹرول گروپس اور مختلف ٹریٹمنٹ گروپس میں تقسیم کیا گیا، ہر گروپ میں 15 چوہے، اور دن میں ایک بار گیویج کیا گیا۔20 ہفتوں کے علاج کے بعد، CO2 دم گھٹنے سے جانوروں کی قربانی دی گئی۔پھیپھڑوں کو اکٹھا کیا گیا اور 24 گھنٹوں کے لئے طے کیا گیا۔سطحی ٹیومر کی تعداد اور انفرادی ٹیومر کے سائز کو ہر ایک پھیپھڑے کے لیے ایک منقطع خوردبین کے تحت درست کیا گیا۔ٹیومر کے حجم کا تخمینہ (V) درج ذیل اظہار کا استعمال کرتے ہوئے لگایا گیا تھا: V (mm3) = 4/3πr3، جہاں r ٹیومر کا قطر ہے۔چوہوں کے پھیپھڑوں میں ٹیومر کے تمام حجم کا خالص مجموعہ ٹیومر کے کل حجم کی نمائندگی کرتا ہے، اور ہر گروپ میں ٹیومر کا اوسط حجم ٹیومر کے بوجھ کی نمائندگی کرتا ہے۔UPLC-MS/MS کے تعین کے لیے پورے خون اور آنتوں کے نمونے −80°C پر جمع کیے گئے اور محفوظ کیے گئے۔سیرم اکٹھا کیا گیا اور جگر اور گردے کے کام کا اندازہ لگانے کے لیے الانائن امینوٹرانسفریز (ALT) اور سیرم کریٹینائن (Cr) کی سطحوں کا تجزیہ کرنے کے لیے ایک خودکار کیمسٹری تجزیہ کار استعمال کیا گیا۔
جمع کردہ نمونوں کو کولڈ اسٹوریج سے ہٹا دیا گیا، پگھلا، وزن کیا گیا اور ٹیوبوں میں رکھا گیا جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے۔اس میں 0.8 ملی لیٹر میتھانول محلول میں 0.5 μM phlorizin (اندرونی معیار) شامل کیا گیا۔اس کے بعد ٹشو کو ٹشو ٹیرور کا استعمال کرتے ہوئے ہم آہنگ کیا گیا اور ہوموجنیٹ کو بعد میں 1.5 ملی لیٹر مائکرو سینٹرفیوج ٹیوب میں منتقل کیا گیا۔مرکب کو 15500 rpm پر 15 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔1.0 ملی لیٹر سپرناٹینٹ کو ہٹانے کے بعد، نائٹروجن کے ساتھ خشک کریں۔ریکوری کے لیے دو سو مائیکرولیٹر میتھانول استعمال کیا گیا۔خون کو ایک لائن پر اکٹھا کیا جاتا ہے اور اس پر کارروائی کی جاتی ہے اور اسے تمام پیمائشوں کے لیے بطور حوالہ استعمال کیا جاتا ہے۔
24 کنویں ٹرانس ویل پلیٹوں کو 1.0 × 105 Caco-2 سیل فی کنواں کے ساتھ سیڈ کیا گیا تھا تاکہ ویراپامیل کے اضافے سے G-Rg3 ٹرانسپورٹ کے ممکنہ اضافہ کا اندازہ لگایا جا سکے۔3 ہفتوں کی ثقافت کے بعد، خلیات کو HBSS سے دھویا گیا اور 37 ° C پر پہلے سے انکیوبیٹ کیا گیا۔10 μM G-Rg3 (G-Rg3r، G-Rg3s، یا 50 یا 100 μM verapamil کے ساتھ ایک مرکب) کا 400 μL monolayer کے باسولیٹرل یا اپیکل سائیڈ پر لگایا گیا تھا، اور HBSS محلول کا 600 μL دوسرے میں شامل کیا گیا تھا۔ طرفمقررہ اوقات میں 100 µl کلچر میڈیم جمع کریں (0، 15، 30، 45، 60، 90 اور 120 منٹ) اور اس حجم کو بنانے کے لیے 100 µl HBSS شامل کریں۔UPLC-MS/MS کے ذریعے پتہ لگانے تک نمونے −4 °C پر محفوظ کیے گئے تھے۔اظہار Papp = dQ/(dT × A × C0) ظاہری یک سمتی apical اور basolateral پارگمیتا اور اس کے برعکس (Pa-b اور Pb-a، بالترتیب) کی مقدار درست کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔dQ/dT ارتکاز میں تبدیلی ہے، A (0.6 cm2) monolayer کی سطح کا رقبہ ہے، اور C0 ابتدائی عطیہ کنندہ کا ارتکاز ہے۔بہاؤ کا تناسب Pb-a/Pa-b کے طور پر شمار کیا جاتا ہے، جو مطالعہ کی دوائی کے بہاؤ کی شرح کو ظاہر کرتا ہے۔
نر وِسٹار چوہوں کو 24 گھنٹے تک روزہ رکھا گیا، صرف پانی پیا گیا، اور 3.5 فیصد پینٹو باربیٹل محلول کے انٹراوینس انجیکشن سے بے ہوشی کی گئی۔انٹیوبیٹڈ سلیکون ٹیوب میں گرہنی کا اختتام داخلی راستے کے طور پر ہوتا ہے اور ileum کا اختتام خارجی راستے کے طور پر ہوتا ہے۔10 µM G-Rg3r یا G-Rg3s کے ساتھ آئسوٹونک HBSS میں 0.1 ملی لیٹر فی منٹ کی بہاؤ کی شرح سے انلیٹ کو پمپ کرنے کے لیے ایک پیرسٹالٹک پمپ استعمال کریں۔50 μM یا 100 μM کمپاؤنڈ کو 10 μM G-Rg3r یا G-Rg3s میں شامل کرکے ویراپامل کے اثر کا اندازہ لگایا گیا۔UPLC-MS/MS پرفیوژن کے آغاز کے بعد 60، 90، 120، اور 150 منٹ کے پوائنٹس پر جمع کیے گئے پرفیوژن نچوڑ پر انجام دیا گیا۔جذب کا فیصد فارمولہ % absorption = (1 – Cout/Cin) × 100%;آؤٹ لیٹ اور ان لیٹ پر G-Rg3 کا ارتکاز بالترتیب Cout اور Cin سے ظاہر ہوتا ہے۔
ایچ ای ایل کے خلیوں کو 96 کنویں پلیٹوں میں 1 × 104 خلیات فی کنواں کی کثافت پر سیڈ کیا گیا تھا اور B(a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) یا G-Rg3 کے ساتھ DMSO میں تحلیل کیا گیا تھا۔ .اس کے بعد دوائیوں کو کلچر میڈیم سے مختلف ارتکاز (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) کے ساتھ 48 گھنٹوں کے دوران پتلا کیا گیا۔تجارتی طور پر دستیاب ایم ٹی ایس پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے، خلیوں کو ایک معیاری پروٹوکول کا نشانہ بنایا گیا اور پھر 490 این ایم پر مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔B(a) P (10 μM) اور G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) کے ساتھ مل کر علاج کیے گئے گروپوں کے سیل وابستگی کی سطح کا اندازہ مذکورہ طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا اور علاج نہ کیے گئے گروپ کے ساتھ موازنہ کیا گیا تھا۔
ایچ ای ایل کے خلیوں کو 1 × 105 خلیات / کنویں کی کثافت پر 6 کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا اور 10 μM G-Rg3 کی موجودگی یا غیر موجودگی میں 10 μMB (a) P کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔48 گھنٹے کے علاج کے بعد، مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق QIAamp DNA Mini Kit کا استعمال کرتے ہوئے HEL خلیوں سے DNA نکالا گیا۔BPDE-DNA ایڈکٹ کی تشکیل کا پتہ BPDE-DNA ایڈکٹ ELISA کٹ کا استعمال کرتے ہوئے پایا گیا۔BPDE-DNA ایڈکٹ کی متعلقہ سطحوں کو مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 450 nm پر جاذب کی پیمائش کرکے ماپا گیا۔
ایچ ای ایل کے خلیوں کو 96 کنویں پلیٹوں میں 1 × 104 سیل فی کنواں کی کثافت پر سیڈ کیا گیا تھا اور 48 گھنٹے کے لئے 10 μM G-Rg3 کی عدم موجودگی یا موجودگی میں 10 μMB(a) P کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔صنعت کار کے پروٹوکول کے مطابق تجارتی GST سرگرمی پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے GST سرگرمی کی پیمائش کی گئی۔متعلقہ GST ایکٹیویشن کو مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 450 nm پر جاذبیت سے ماپا گیا۔
ایچ ای ایل کے خلیوں کو برف کے ٹھنڈے پی بی ایس سے دھویا گیا اور پھر پروٹیز انحیبیٹرز اور فاسفیٹیس انحیبیٹرز پر مشتمل ریڈیو امیونوپریسیپیٹیشن پرکھ بفر کا استعمال کرتے ہوئے لیس کیا گیا۔کل پروٹین پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کی مقدار کے بعد، ہر نمونے میں 30 μg پروٹین کو 12٪ SDS-PAGE کے ذریعہ الگ کیا گیا تھا اور الیکٹروفورسس کے ذریعہ PVDF جھلی میں منتقل کیا گیا تھا۔جھلیوں کو 5٪ سکم دودھ کے ساتھ بلاک کیا گیا تھا اور راتوں رات 4 ° C پر بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ہارسریڈش پیرو آکسیڈیس کنججٹیڈ سیکنڈری اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیشن کے بعد، بائنڈنگ سگنل کو دیکھنے کے لیے بہتر کیمیلومینیسینس ریجنٹس شامل کیے گئے۔امیج جے سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ہر پروٹین بینڈ کی شدت کی مقدار درست کی گئی۔
گراف پیڈ پرزم 7.0 سافٹ ویئر تمام ڈیٹا کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا، جس کا اظہار اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر کیا گیا تھا۔علاج کے گروپوں کے درمیان تغیر کا اندازہ طالب علم کے ٹی ٹیسٹ یا تغیر کے یک طرفہ تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، P قدر <0.05 کے ساتھ جو شماریاتی اہمیت کی نشاندہی کرتی ہے۔
اس مطالعہ کے دوران حاصل کردہ یا تجزیہ کردہ تمام ڈیٹا اس شائع شدہ مضمون اور اضافی معلومات کی فائلوں میں شامل ہیں۔
ٹورے، ایل اے، سیگل، آر ایل اور جیمل، اے پھیپھڑوں کے کینسر کے اعداد و شمار۔فعلمیعاد ختمدوائی.حیاتیات.893، 1–19 (2016)۔
Hecht, S. Tobacco carcinogens، ان کے بائیو مارکر اور تمباکو سے پیدا ہونے والا کینسر۔نیٹکینسر پادری۔3، 733–744 (2003)۔
فلپس، ڈی ایچ اور وینیٹ، ایس ڈی این اے اور پروٹین تمباکو کے دھوئیں کے نتیجے میں انسانی بافتوں میں شامل ہوتے ہیں۔بین الاقوامیتجے کینسر۔131، 2733–2753 (2012)۔
Yang Y.، Wang Y.، Tang K.، Lubet RA اور Yu M. A/J چوہوں میں بینزو(a)پائرین سے متاثرہ پھیپھڑوں کے ٹیومرجینیسیس پر Houttuynia cordata اور silibinin کا اثر۔کینسر 7، 1053–1057 (2005)۔
تانگ، ڈبلیو وغیرہ۔اینٹی کینسر قدرتی مصنوعات چینی دواؤں کے مواد سے الگ تھلگ ہے۔جبڑےدوائی.6، 27 (2011)۔
یانگ، وائی وغیرہ۔A/J چوہوں میں بینزو(a)پائرین سے متاثرہ پھیپھڑوں کے ٹیومرجینیسیس پر پولیفینان E، ریڈ ginseng، اور rapamycin کی افادیت۔کینسر 8، 52–58 (2006)۔
وانگ، سی زیڈ، اینڈرسن، ایس، ڈو، ڈبلیو، ہی، ٹی ایس اور یوآن، کے ایس ریڈ، کینسر کے علاج میں شمولیت۔جبڑےجے نٹ۔دوائی.14، 7–16 (2016)۔
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS اور Gao, L. Ginsenosides in the roots and pins of American ginseng.جے ایگرکفوڈ کیمسٹری۔44، 717–720 (1996)۔
Attele AS, Wu JA اور Yuan KS فارماکولوجی آف ginseng: بہت سے اجزاء اور بہت سے اثرات۔بائیو کیمسٹریفارماکولوجی58، 1685–1693 (1999)۔
پوسٹ ٹائم: ستمبر 17-2023