Nature.com saytiga tashrif buyurganingiz uchun tashakkur.Siz foydalanayotgan brauzer versiyasi cheklangan CSS-ni qo'llab-quvvatlaydi.Eng yaxshi natijalarga erishish uchun brauzeringizning yangiroq versiyasidan foydalanishni tavsiya qilamiz (yoki Internet Explorer-da moslik rejimini o'chirib qo'ying).Ayni paytda, doimiy qo'llab-quvvatlashni ta'minlash uchun biz saytni uslubsiz yoki JavaScriptsiz ko'rsatmoqdamiz.
Qizil ginseng an'anaviy Osiyo tibbiyotida yuzlab yillar davomida ishlatilgan.Ushbu tadqiqotda biz turli hududlarda etishtirilgan to'rt turdagi qizil ginsengning (Xitoy qizil ginseng, Koreya qizil ginseng A, koreys qizil ginseng B va koreys qizil ginseng C) kanserogen sabab bo'lgan o'pkaning shakllanishi va o'sishini inhibe qilish qobiliyatini baholadik. shishlar.A/J sichqonlarida benzo(a)piren (B(a)P) testi o‘tkazildi va koreys qizil ginseng B to‘rtta qizil ginseng navlari orasida o‘sma yukini kamaytirishda eng samarali ekanligi aniqlandi.Bundan tashqari, biz to'rtta qizil ginseng ekstraktida turli xil ginsenozidlarning (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 va Rg5) tarkibini tahlil qildik va koreys qizil ginseng B ga ega ekanligini aniqladik. ginsenosid Rg3 (G-Rg3) ning eng yuqori darajalari, bu G-Rg3 ning terapevtik samaradorligida muhim rol o'ynashi mumkinligini ko'rsatadi.Ushbu ish G-Rg3 ning bioavailability nisbatan past ekanligini ko'rsatadi.Biroq, G-Rg3 P-gp inhibitori verapamil bilan birgalikda qo'llanilganda, G-Rg3 ning Caco-2 hujayralariga oqib chiqishi kamaydi, kalamush modelida G-Rg3 ning ichakdan so'rilish tezligi oshdi va G-Rg3 oshirildi.Caco-2 hujayralarida Rg3 ning chiqishi kamayadi va Rg3 kontsentratsiyasi darajasi kamayadi.G-Rg3 ichakda va plazmada ko'payadi va uning o'smalarning oldini olish qobiliyati B (a) P bilan qo'zg'atilgan shish paydo bo'lishining kalamush modelida ham yaxshilanadi.Shuningdek, biz G-Rg3 inson o'pka hujayralarida B (a) P bilan bog'liq bo'lgan sitotoksiklikni va DNK qo'shimchasining shakllanishini kamaytirganini va Nrf2 yo'li orqali II faza fermentlarining ifodasi va faolligini tiklaganini aniqladik, bu potentsial ta'sir mexanizmi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. G inhibisyonu -Rg3..O'pka shishi paydo bo'lishi haqida.Bizning tadqiqotimiz G-Rg3 uchun sichqoncha modellarida o'pka o'smalarini yo'naltirishda potentsial muhim rolni ko'rsatadi.Ushbu ginsenosidning og'iz orqali bio-mavjudligi P-glikoproteinga qaratilgan bo'lib, molekulaga saratonga qarshi ta'sir ko'rsatishga imkon beradi.
O'pka saratonining eng keng tarqalgan turi kichik hujayrali bo'lmagan o'pka saratoni (NSCLC) bo'lib, bu Xitoy va Shimoliy Amerikada saraton o'limining asosiy sabablaridan biridir1,2.Kichik hujayrali bo'lmagan o'pka saratoni rivojlanish xavfini oshiradigan asosiy omil chekishdir.Sigaret tutunida 60 dan ortiq kanserogen moddalar, jumladan benzo(a)piren (B(a)P), nitrozaminlar va radon parchalanishidan kelib chiqadigan radioaktiv izotoplar mavjud.3 Politsiklik aromatik uglevodorodlar B(a)P sigaretaning zaharlanishining asosiy sababidir. tutun.B(a)P ta'sirida P450 sitoxromi uni B(a)P-7,8-dihidrodiol-9,10-epoksid (BPDE) ga aylantiradi, u DNK bilan reaksiyaga kirishib, BPDE-DNK qo'shimchasini 4 hosil qiladi. Bundan tashqari, bular qo'shimchalar o'simta bosqichi va gistopatologiyasi inson o'pka o'smalariga o'xshash sichqonlarda o'pka shishi paydo bo'lishiga olib keladi5.Bu xususiyat B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan o'pka saratoni modelini mumkin bo'lgan antikanser xususiyatlarga ega birikmalarni baholash uchun mos tizim qiladi.
Yuqori xavfli guruhlarda, ayniqsa chekuvchilarda o'pka saratoni rivojlanishining oldini olishning mumkin bo'lgan strategiyalaridan biri bu intraepitelial neoplastik lezyonlarning rivojlanishini bostirish va shu bilan ularning keyinchalik yomon xulqli o'sishini oldini olish uchun kimyoviy profilaktika vositalaridan foydalanishdir.Hayvonlarda o'tkazilgan tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, turli xil kimyoviy profilaktika vositalari samarali6.Oldingi hisobotimiz7 qizil jenshenning o'pka saratoniga yaxshi profilaktik ta'sirini ta'kidladi.Bu o't asrlar davomida an'anaviy Osiyo tabobatida umr va salomatlikni uzaytirish uchun ishlatilgan va o'smaga qarshi ta'sirga ega ekanligi hujjatlashtirilgan8.
Ginsengning faol omili ginsenozid bo'lib, u ginseng ekstrakti sifatini baholash uchun kompozit marker sifatida ishlatiladi.Xom ginseng ekstraktining miqdoriy tahlili odatda RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 va Rc9,10 kabi bir nechta ginsenosidlardan foydalanishni o'z ichiga oladi.Ginsenosidlar og'iz orqali qabul qilinganda biologik mavjudligi juda past bo'lganligi sababli klinik jihatdan kam qo'llaniladi11.Ushbu zaif bioavailability mexanizmi aniq bo'lmasa-da, P-glikoprotein (P-gp)12 sabab bo'lgan ginsenosidlarning chiqishi sabab bo'lishi mumkin.P-gp hujayra ichidagi moddalarni tashqi muhitga chiqarish uchun ATP gidrolizining energiyasidan foydalanadigan ATP-bog'lovchi kasseta tashuvchisi superoilasidagi eng muhim oqim tashuvchilardan biridir.P-gp tashuvchilar odatda ichak, buyrak, jigar va qon-miya to'sig'ida keng tarqalgan13.P-gp ichakda so'rilishida muhim rol o'ynaydi va P-gp ning inhibisyonu og'iz orqali so'rilishini va ba'zi antikanser dorilarning mavjudligini oshiradi12,14.Ilgari adabiyotda ishlatilgan inhibitorlarga misollar verapamil va siklosporin A15.Bu ish Xitoy va Koreyadan kelgan turli xil qizil jenshen ekstraktlarining malign o'smalarga ta'sir qilish qobiliyatini baholash uchun B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan o'pka saratonini o'rganish uchun sichqoncha tizimini yaratishni o'z ichiga oladi.Ekstraktlar kanserogenezga ta'sir qilishi mumkin bo'lgan o'ziga xos ginsenosidlarni aniqlash uchun alohida tahlil qilindi.Keyinchalik Verapamil P-gp ni maqsad qilib qo'yish va saratonga qarshi kurashuvchi ginsenozidlarning og'iz orqali bioavailability va terapevtik samaradorligini oshirish uchun ishlatilgan.
Ginseng saponinlarining kanserogenezga terapevtik ta'sir ko'rsatish mexanizmi noma'lumligicha qolmoqda.Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, turli ginsenosidlar oksidlovchi stressni kamaytirish va II fazani detoksifikatsiya qilish fermentlarini faollashtirish orqali kanserogenlar keltirib chiqaradigan DNK zararini kamaytirishi va shu bilan hujayra shikastlanishining oldini olishi mumkin.Glutation S-transferaza (GST) kantserogenlar keltirib chiqaradigan DNK shikastlanishini kamaytirish uchun zarur bo'lgan II fazaning odatiy fermentidir17.Yadro eritroid 2 bilan bog'liq omil 2 (Nrf2) redoks gomeostazini tartibga soluvchi va II faza fermentlari va sitoprotektiv antioksidant javoblarning ifodasini faollashtiradigan muhim transkripsiya omilidir18.Bizning tadqiqotimiz, shuningdek, aniqlangan ginsenosidlarning B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan sitotoksiklikni va BPDE-DNK qo'shimchalarini shakllantirishni kamaytirishga ta'sirini, shuningdek, normal o'pka hujayralarida Nrf2 yo'lini modulyatsiya qilish orqali II faza fermentlarini induktsiyasini o'rganib chiqdi.
B (a) P-induktsiyali saraton kasalligining sichqoncha modelini yaratish oldingi ishlarga mos keladi5.1A-rasmda B(a)P, suv (nazorat), xitoy qizil jenshen ekstrakti (CRG), koreys qizil jenshen ekstrakti A (KRGA) va koreys qizil tomonidan qo'zg'atilgan sichqon saratoni modelini 20 haftalik davolashning eksperimental dizayni ko'rsatilgan. jenshen.B ekstrakti (KRGB) va Koreya qizil jenshen ekstrakti C (KRGC).20 haftalik qizil ginseng bilan davolashdan so'ng, sichqonlar CO2 asfiksiyasi bilan qurbon qilindi.1B-rasmda har xil turdagi qizil ginseng bilan davolangan hayvonlarda o'pkaning makroskopik o'smalari ko'rsatilgan va 1C-rasmda o'simta namunasining yorqin mikrografi ko'rsatilgan.KRGB bilan davolangan hayvonlarning o'simta yuki (1,5 ± 0,35) 1D-rasmda ko'rsatilganidek, nazorat hayvonlaridan (0,82 ± 0,2, P <0,05) past edi.O'simta yukini inhibe qilishning o'rtacha darajasi 45% ni tashkil etdi.Sinov qilingan boshqa qizil ginseng ekstraktlari o'simta yukida bunday sezilarli o'zgarishlarni ko'rsatmadi (P > 0,05).Sichqoncha modelida qizil ginseng bilan davolashning 20 haftasi davomida aniq nojo'ya ta'sirlar kuzatilmadi, shu jumladan tana vaznining o'zgarishi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan) va jigar yoki buyrak toksikligi (1E, F-rasm).
Qizil ginseng ekstrakti A/J sichqonlarida o'pka shishi rivojlanishini davolaydi.(A) Eksperimental loyihalash.(B) Sichqoncha modelida katta o'pka shishi.Shishlar o'qlar bilan ko'rsatilgan.a: Xitoy qizil ginseng guruhi.b: koreys qizil jenshenining A guruhi.c: Koreya qizil ginseng guruhi B. d: Koreya qizil jenshen guruhi C. d: nazorat guruhi.(C) O'pka shishini ko'rsatadigan yorug'lik mikrografi.Kattalashtirish: 100. b: 400. (D) Qizil ginseng ekstrakti guruhidagi o'simta yuki.(E) Jigar fermenti ALT ning plazma darajasi.(F) Buyrak fermenti Cr ning plazma darajasi.Ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish sifatida ifodalanadi.*P <0,05.
Ushbu tadqiqotda aniqlangan qizil ginseng ekstraktlari quyidagi ginsenozidlarni aniqlash uchun ultra samarali suyuq xromatografiya tandem massa spektrometriyasi (UPLC-MS/MS) yordamida tahlil qilindi: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 va Rg5.Analitlarni o'lchash uchun ishlatiladigan UPLC va MS shartlari oldingi hisobotda tasvirlangan19.To'rtta qizil ginseng ekstraktining UPLC-MS/MS xromatogrammalari 2A-rasmda ko'rsatilgan.CRG (590,27 ± 41,28 mkmol / L) (2B-rasm) eng yuqori umumiy ginsenosid tarkibiga ega bo'lgan umumiy ginsenosid tarkibida sezilarli farqlar mavjud edi.Shaxsiy ginsenosidlarni baholashda (2C-rasm), KRGB boshqa ginsenosidlarga nisbatan eng yuqori G-Rg3 darajasini ko'rsatdi (G-Rg3s uchun 58,33 ± 3,81 mkmol/L va G -Rg3r uchun 41,56 ± 2,88 mkmol/L).qizil ginseng turi (P <0,001).G-Rg3 uglerod 20 da gidroksil guruhining holatida farq qiluvchi G-Rg3r va G-Rg3s juft stereoizomerlari shaklida uchraydi (2D-rasm).Natijalar shuni ko'rsatadiki, G-Rg3r yoki G-Rg3 B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan saraton sichqonchasi modelida muhim saratonga qarshi potentsialga ega bo'lishi mumkin.
Turli xil qizil ginseng ekstraktlarida ginsenosidlarning tarkibi.(A) To'rtta qizil ginseng ekstraktining UPLC-MS/MS xromatogrammalari.(B) Ko'rsatilgan ekstraktlardagi ginsenosidning umumiy miqdorini baholash.(C) Belgilangan ekstraktlarda individual ginsenosidlarni aniqlash.(D) G-Rg3r va G-Rg3s ginsenozid stereoizomerlarining tuzilishi.Ma'lumotlar uch martalik aniqlashlarning o'rtacha ± standart og'ishi sifatida ifodalanadi.***P <0,001.
UPLC-MS/MS tadqiqoti 20 haftalik davolanishdan so'ng ichak va qon namunalarida ginsenosidlarning miqdorini aniqlashni talab qildi.KRGB bilan davolash qonda faqat 0,0063 ± 0,0005 mkg / ml Rg5 mavjudligini ko'rsatdi.Qolgan ginsenosidlar aniqlanmadi, bu og'iz orqali qabul qilinganda bioavailability pastligini va shuning uchun bu ginsenosidlarga ta'sir qilishning kamayganligini ko'rsatadi.
Caco-2 yo'g'on ichak adenokarsinomasi hujayra chizig'i morfologik va biokimyoviy jihatdan inson ichak epitelial hujayralariga o'xshash bo'lib, uning ichak epitelial to'sig'i orqali enterotsitlar tashishni baholashda foydali ekanligini ko'rsatadi.Ushbu tahlil oldingi tadqiqotga asoslangan edi 20 .3A, B, C, D, E, F rasmlari Caco-2 monolayer modelidan foydalangan holda G-Rg3r va G-Rg3 ning hujayralararo tashilishining vakili tasvirlarini ko'rsatadi.G-Rg3r yoki G-Rg3 ning Caco-2 mono qatlamlari bo'ylab bazolateraldan apikal tomonga (Pb-a) hujayralararo tashilishi apikaldan bazolateral tomonga (Pa-b) nisbatan sezilarli darajada yuqori edi.G-Rg3r uchun o'rtacha Pa-b qiymati 0,38 ± 0,06 ni tashkil etdi, bu 50 mkmol / L verapamil bilan davolashdan keyin 0,73 ± 0,06 ga va 100 mkmol / L verapamil bilan davolashdan keyin 1,14 ± 0,09 gacha ko'tarildi (p <0,001 va p <0,001 va). mos ravishda; 2-rasm).3A).G-Rg3 uchun kuzatuvlar shunga o'xshash naqshga amal qildi (3B-rasm) va natijalar verapamil bilan davolash G-Rg3r va G-Rg3 ning tashishini kuchaytirganligini ko'rsatdi.Verapamil bilan davolash, shuningdek, o'rtacha Pb-a va G-Rg3r va G-Rg3s oqib chiqish nisbatlarining sezilarli pasayishiga olib keldi (3C, D, E, F-rasm), bu verapamil bilan davolash Caco-2 oqimi hujayralarida ginsenosid miqdorini kamaytirishini ko'rsatadi..
Kako-2 monoqatlamlarida G-Rg3 ning hujayralararo tashilishi va kalamush perfuzion tahlilida ichak orqali so'rilishi.(A) Caco-2 monoqatlamidagi G-Rg3r guruhining Pa-b qiymati.(B) Caco-2 monolayeridagi G-Rg3s guruhlarining Pa-b qiymati.(C) Caco-2 monolayeridagi G-Rg3r guruhining Pb qiymati.(D) Caco-2 monolayeridagi G-Rg3s guruhlarining Pb qiymati.(E) Caco-2 monoqatlamidagi G-Rg3r guruhlarining hosildorlik nisbati.(F) Caco-2 monoqatlamidagi G-Rg3 guruhlarining hosildorlik nisbati.(G) Sichqonlarda perfuziya tahlilida G-Rg3r ning ichakda so'rilish foizi.(H) Sichqonlarda perfuziya tahlilida G-Rg3 ning ichakdan so'rilish foizi.O'tkazuvchanlik va so'rilish verapamil qo'shilmasdan taqqoslandi.Ma'lumotlar beshta mustaqil tajribaning o'rtacha ± standart og'ishi sifatida ifodalanadi.* P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Oldingi ishlarga muvofiq20, kalamushlarning ortotopik ichak perfuziyasi verapamil bilan davolashdan keyin ichakda G-Rg3 so'rilishini oshirish yoki yo'qligini aniqlash uchun amalga oshirildi.Raqamlar 3G, H yuqoridagi vaqt oralig'ida saraton modeli kalamushlarida G-Rg3r va G-Rg3 ning ichakdan so'rilish foizini baholash uchun vakili perfuziya tahlillarini ko'rsatadi.Taxminan 10% zaif G-Rg3r so'rilishining boshlang'ich foizi 50 mkM verapamil bilan davolashdan keyin 20% dan ko'proqqa va 100 mkM verapamil bilan davolashdan keyin 25% dan ko'proqqa ko'tarildi.Xuddi shunday, dastlabki so'rilishi 10% bo'lgan G-Rg3, shuningdek, 50 mkM verapamil bilan davolashdan keyin 20% dan yuqori va 100 mkM verapamil bilan davolashdan keyin deyarli 30% ni ko'rsatdi, bu verapamil tomonidan P-gp inhibisyonunu kuchaytiradi. o'pka saratoni sichqoncha modelida ichak G-so'rilishi Rg3.
Yuqoridagi usulga ko'ra, B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan saraton modeli sichqonlari 4A-rasmda ko'rsatilganidek, tasodifiy olti guruhga bo'lingan.Nazorat guruhiga nisbatan G-Rg3 davolash guruhida sezilarli vazn yo'qotish yoki toksiklikning klinik belgilari kuzatilmadi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan).20 haftalik davolanishdan so'ng, har bir sichqonchaning o'pkasi yig'ildi.4B-rasmda yuqoridagi davolash guruhlaridagi sichqonlarda makroskopik o'pka shishi ko'rsatilgan va 4C-rasmda vakillik o'simtasining vakili yorug'lik mikrografiyasi ko'rsatilgan.Har bir guruhdagi o'simta yukiga kelsak (4D-rasm), G-Rg3r va G-Rg3s bilan davolash qilingan sichqonlar uchun qiymatlar mos ravishda 0,75 ± 0,29 mm3 va 0,81 ± 0,30 mm3 ni tashkil etdi, G sichqonlari uchun qiymatlar esa mos ravishda. bilan -Rg3s mos ravishda 1,63 ± 0,40 mm3 edi.sichqonlarni nazorat qilish (p <0.001), bu G-Rg3 davolash sichqonlarda o'simta yukini kamaytirganligini ko'rsatadi.Verapamilni qo'llash bu pasayishni yanada kuchaytirdi: verapamil + G-Rg3r sichqonlarida qiymatlar 0,75 ± 0,29 mm3 dan 0,33 ± 0,25 mm3 gacha (p < 0,01) va verapamil + uchun qiymatlar 0,81 ± 0,30 mm 2,2 dan kamaydi. G. -Rg3s bilan davolash qilingan sichqonlarda mm3 (p <0,05), bu verapamilning G-Rg3 ning o'simta hosil bo'lishiga inhibitiv ta'sirini kuchaytirishi mumkinligini ko'rsatadi.O'simta yuki nazorat guruhi va verapamil guruhi, G-Rg3r guruhi va G-Rg3s guruhi va verapamil + G-Rg3r guruhi va verapamil + G-Rg3s guruhi o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatmadi.Bundan tashqari, baholangan muolajalar bilan bog'liq jiddiy jigar yoki buyrak toksikligi yo'q edi (4E, F-rasm).
Ko'rsatilgan guruhlarda G-Rg3 davolash va plazma yoki ichak G-Rg3r va G-Rg3 darajalaridan keyin o'simta yuki.(A) Eksperimental loyihalash.(B) Sichqoncha modelidagi makroskopik o'smalar.Shishlar o'qlar bilan ko'rsatilgan.a: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r verapamil bilan birgalikda.d: G-Rg3 verapamil bilan birgalikda.d: Verapamil.e: nazorat qilish.(C) Kattalashtirishda o'simtaning optik mikrografiyasi.Javob: 100x.b: 400X.(D) G-Rg3 + verapamil bilan davolashning A / J sichqonlarida o'simta yukiga ta'siri.(E) Jigar fermenti ALT ning plazma darajasi.(F) Buyrak fermenti Cr ning plazma darajasi.(G) ko'rsatilgan guruhlarning G-Rg3r yoki G-Rg3 plazma darajasi.(H) ko'rsatilgan guruhlarning ichaklarida G-Rg3r yoki G-Rg3s darajalari.Ma'lumotlar uch martalik aniqlashlarning o'rtacha ± standart og'ishi sifatida ifodalanadi.* P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B (a) P-induktsiyali saraton modeli sichqonlarida G-Rg3 darajalari Usullar bo'limida tavsiflangan usulga muvofiq 20 haftalik davolash davridan keyin UPLC-MS/MS tomonidan baholandi.4G va H raqamlari mos ravishda plazma va ichakdagi G-Rg3 darajasini ko'rsatadi.Plazmadagi G-Rg3r kontsentratsiyasi 0,44 ± 0,32 mkmol/L ni tashkil etdi va verapamilni bir vaqtda qo‘llash bilan 1,17 ± 0,47 mkmol/L ga oshdi (p<0,001), ichakdagi G-Rg3r darajasi esa 0,53 ± 0,08 mkg/l ni tashkil etdi.Verapamil bilan birlashganda g 1,35 ± 0,13 mkg / g ga ko'tarildi (p <0,001).G-Rg3 uchun natijalar shunga o'xshash naqshga amal qildi, bu verapamil bilan davolash A / J sichqonlarida G-Rg3 ning og'iz orqali bioavailligini oshirganligini ko'rsatdi.
HEL hujayralarida B (a) P va G-Rg3 ning sitotoksikligini baholash uchun hujayra hayotiyligini tahlil qilish ishlatilgan.HEL hujayralarida B(a)P tomonidan qo'zg'atilgan sitotoksiklik 5A-rasmda, G-Rg3r va G-Rg3 ning toksik bo'lmagan xususiyatlari 5A va 5B-rasmlarda ko'rsatilgan.5B, C. G-Rg3 ning sitoprotektiv ta'sirini baholash uchun B (a) P hEL hujayralariga G-Rg3r yoki G-Rg3 ning turli konsentratsiyasi bilan birgalikda qo'llanildi.5D-rasmda ko'rsatilganidek, 5 mkM, 10 mkM va 20 mkM konsentratsiyalarda G-Rg3r hujayra hayotiyligini mos ravishda 58,3%, 79,3% va 77,3% ga tikladi.Shunga o'xshash natijalarni G-Rg3s guruhida ham ko'rish mumkin.G-Rg3 kontsentratsiyasi 5 mkM, 10 mkM va 20 mkM bo'lganda, hujayra hayotiyligi mos ravishda 58,3%, 72,7% va 76,7% ga tiklandi (5E-rasm).).BPDE-DNK qo'shimchalarining mavjudligi Elishay to'plami yordamida o'lchandi.Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, B (a) P bilan davolash qilingan guruhda BPDE-DNK qo'shimchalari darajasi nazorat guruhiga nisbatan oshdi, lekin G-Rg3 bilan birgalikda davolash bilan solishtirganda, B (a) P guruhidagi BPDE-DNK qo'shimcha darajalari Davolangan guruhda B, DNK qo'shimchalari darajasi sezilarli darajada kamaydi.Faqatgina B (a) P bilan davolash natijalari 5F-rasmda ko'rsatilgan (G-Rg3r uchun 1,87 ± 0,33 va 3,77 ± 0,42, G -Rg3s uchun 1,93 ± 0,48 va 3,77 ± 0,42, p <0,001).
G-Rg3 va B (a) P bilan ishlangan hEL hujayralarida hujayra hayotiyligi va BPDE-DNK qo'shimchasining shakllanishi.(A) B(a)P bilan ishlov berilgan hEL hujayralarining hayotiyligi.(B) G-Rg3r bilan ishlov berilgan hEL hujayralarining hayotiyligi.(C) G-Rg3 bilan ishlov berilgan hEL hujayralarining hayotiyligi.(D) B (a) P va G-Rg3r bilan ishlov berilgan hEL hujayralarining hayotiyligi.(E) B (a) P va G-Rg3 bilan ishlov berilgan hEL hujayralarining hayotiyligi.(F) B (a) P va G-Rg3 bilan ishlov berilgan hEL hujayralarida BPDE-DNK qo'shimchasining darajalari.Ma'lumotlar uch martalik aniqlashlarning o'rtacha ± standart og'ishi sifatida ifodalanadi.* P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
GST fermenti ifodasi 10 mkM B(a)P va 10 mkM G-Rg3r yoki G-Rg3s bilan birgalikda davolashdan keyin aniqlandi.Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, B (a) P GST ifodasini bostirgan (G-Rg3r guruhida 59,7 ± 8,2% va G-Rg3s guruhida 39 ± 4,5%) va B (a) P G-Rg3r bilan bog'liq edi. , yoki G-Rg3r yoki G-Rg3r bilan.G-Rg3s bilan birgalikda davolash GST ifodasini tikladi.GST ifodasi (G-Rg3r guruhida 103,7 ± 15,5% va G-Rg3s guruhida 110 ± 11,1%, mos ravishda p <0,05 va p <0,001, 6A, B va C-rasm).GST faoliyati faoliyat tahlili to'plami yordamida baholandi.Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, kombinatsiyalangan davolash guruhi faqat B (a) P guruhiga nisbatan yuqori GST faolligiga ega (G-Rg3r guruhida 96,3 ± 6,6% va G-Rg3r guruhida 92,3 ± 6,5 ga nisbatan 35,7 ± 7,8%). ).G-Rg3s guruhida % ga nisbatan 35,7 ± 7,8%, p <0,001, 6D-rasm).
B (a) P va G-Rg3 bilan ishlangan hEL hujayralarida GST va Nrf2 ifodasi.(A) Western blotting orqali GST ifodasini aniqlash.(B) B (a) P va G-Rg3r bilan ishlov berilgan hEL hujayralarida GST ning miqdoriy ifodasi.(C) B (a) P va G-Rg3s bilan ishlangan hEL hujayralarida GST ning miqdoriy ifodasi.(D) B (a) P va G-Rg3 bilan ishlangan hEL hujayralarida GST faolligi.(E) Western blotting orqali Nrf2 ifodasini aniqlash.(F) B (a) P va G-Rg3r bilan ishlangan hEL hujayralarida Nrf2 ning miqdoriy ifodasi.(G) B (a) P va G-Rg3s bilan ishlov berilgan hEL hujayralarida Nrf2 ning miqdoriy ifodasi.Ma'lumotlar uch martalik aniqlashlarning o'rtacha ± standart og'ishi sifatida ifodalanadi.* P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan o'simtaning G-Rg3 vositachiligida bostirilishi bilan bog'liq yo'llarni tushuntirish uchun Nrf2 ifodasi Western bloting bilan baholandi.6E, F, G rasmlarida ko'rsatilganidek, nazorat guruhi bilan solishtirganda, faqat B (a) P davolash guruhidagi Nrf2 darajasi kamaydi;ammo, B (a) P davolash guruhi bilan solishtirganda, PG-Rg3 guruhida B (a) Nrf2 darajalari oshdi (G-Rg3r uchun 106 ± 9,5% va 51,3 ± 6,8%, 117 ± 6, 2% uchun. G-Rg3r va G-Rg3s uchun 41 ± 9,8%, p <0,01).
Biz Nrf2 ning profilaktik rolini aniq kichik interferent RNK (siRNA) yordamida Nrf2 ifodasini bostirish orqali tasdiqladik.Nrf2 nokdaunni Western blotting tomonidan tasdiqlandi (7A,B-rasm).7C, D rasmlarida ko'rsatilganidek, hEL hujayralarini B (a) P va G-Rg3 bilan birgalikda davolash B (a) P bilan davolash bilan solishtirganda BPDE-DNK qo'shimchalari sonining (1,47 ± 0,21) kamayishiga olib keldi. nazorat siRNA guruhida yolg'iz.) G-Rg3r 4,13 ± 0,49, G-Rg3s 1,8 ± 0,32 va 4,1 ± 0,57, p <0,01).Biroq, G-Rg3 ning BPDE-DNK shakllanishiga inhibitiv ta'siri Nrf2 nokdaun bilan bekor qilindi.siNrf2 guruhida B (a) P va G-Rg3 bilan birgalikda davolash va faqat B (a) P davolash o'rtasida BPDE-DNK qo'shimchalarini shakllantirishda sezilarli farq yo'q edi (G-Rg3r uchun 3,0 ± 0,21 va 3,56 ± 0,32). ).G-Rg3r uchun 3,6 G-Rg3s uchun ± 0,45 ga nisbatan 4,0 ± 0,37, p > 0,05).
Nrf2 nokdaunining hEL hujayralarida BPDE-DNK qo'shimchalarini shakllantirishga ta'siri.(A) Nrf2 nokdaunni Western blotting tomonidan tasdiqlandi.(B) Nrf2 diapazonining intensivligini aniqlash.(C) B(a)P va G-Rg3r bilan ishlangan hEL hujayralarida BPDE-DNK qo'shimcha darajalariga Nrf2 nokdaunining ta'siri.(D) B (a) P va G-Rg3 bilan ishlov berilgan hEL hujayralarida BPDE-DNK qo'shimchalari darajasiga Nrf2 yiqilishiga ta'siri.Ma'lumotlar uch martalik aniqlashlarning o'rtacha ± standart og'ishi sifatida ifodalanadi.* P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Ushbu tadqiqot turli xil qizil ginseng ekstraktlarining B (a) P bilan qo'zg'atilgan o'pka saratonining sichqoncha modeliga profilaktik ta'sirini baholadi va KRGB davolash o'simta yukini sezilarli darajada kamaytirdi.Ushbu ginseng ekstraktida G-Rg3 eng yuqori tarkibga ega ekanligini hisobga olsak, bu ginsenosidning shish paydo bo'lishini inhibe qilishdagi muhim roli o'rganildi.G-Rg3r va G-Rg3 (G-Rg3 ning ikkita epimeri) B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan saraton sichqonchasi modelida o'simta yukini sezilarli darajada kamaytirdi.G-Rg3r va G-Rg3 o'simta hujayralarining apoptozini qo'zg'atish21, o'simta o'sishini inhibe qilish22, hujayra aylanishini to'xtatish23 va angiogenezga24 ta'sir qilish orqali saratonga qarshi ta'sir ko'rsatadi.G-Rg3 ham hujayra metastazini inhibe qilishi ko'rsatilgan25 va G-Rg3 ning kimyoterapiya va radioterapiya ta'sirini kuchaytirish qobiliyati hujjatlashtirilgan26,27.Poon va boshqalar G-Rg3 bilan davolash B (a) P28 ning genotoksik ta'sirini kamaytirishi mumkinligini ko'rsatdi.Ushbu tadqiqot G-Rg3 ning atrof-muhitdagi kanserogen molekulalarni yo'naltirish va saraton kasalligining oldini olishda terapevtik salohiyatini namoyish etadi.
Yaxshi profilaktika potentsialiga qaramay, ginsenosidlarning og'iz orqali biologik mavjudligi pastligi bu molekulalarni klinik foydalanish uchun qiyinchilik tug'diradi.Ginsenozidlarni kalamushlarda og'iz orqali yuborishning farmakokinetik tahlili shuni ko'rsatdiki, uning bioavailability hali ham 5% dan kam.Ushbu testlar shuni ko'rsatdiki, 20 haftalik davolash davridan so'ng faqat qonda Rg5 darajasi pasaygan.Zaif bioavailabilityning asosiy mexanizmi haligacha o'rganilmagan bo'lsa-da, P-gp ginsenosidlarning chiqishida ishtirok etadi deb taxmin qilinadi.Bu ish birinchi marta P-gp-bloker bo'lgan verapamilni qo'llash G-Rg3r va G-Rg3s ning og'iz orqali bio-mavjudligini oshirishini ko'rsatdi.Shunday qilib, bu topilma G-Rg3r va G-Rg3s uning oqimini tartibga solish uchun P-gp substratlari sifatida harakat qilishini ko'rsatadi.
Ushbu ish verapamil bilan kombinatsiyalangan davolash o'pka saratoni sichqonchasi modelida G-Rg3 ning og'iz orqali bioavailability oshirishini ko'rsatadi.Ushbu topilma P-gp blokadasida G-Rg3 ning ichak orqali transcellular tashishining ko'payishi va shu bilan uning so'rilishini oshiradi.Caco2 hujayralarida tahlillar shuni ko'rsatdiki, verapamil bilan davolash membrana o'tkazuvchanligini yaxshilash bilan birga G-Rg3r va G-Rg3 larning chiqishini kamaytiradi.Yang va boshqalar tomonidan o'tkazilgan tadqiqot.Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, siklosporin A (boshqa P-gp-bloker) bilan davolash ginsenosid Rh2 ning bio-mavjudligini 1% 20 dan 30% dan ortiqgacha oshiradi.Ginsenosidlarning K va Rg1 birikmalari ham xuddi shunday natijalarni ko'rsatdi30,31.Verapamil va siklosporin A birgalikda qo'llanilganda, Caco-2 hujayralarida K birikmasining chiqishi 26,6 dan 3 ga kamaygan, uning hujayra ichidagi darajasi esa 40 baravarga oshgan30.Verapamil mavjudligida, Rg1 darajalari kalamush o'pka epiteliya hujayralarida ortdi, bu Meng va boshq.31 tomonidan ko'rsatilganidek, ginsenosid oqimida P-gp rolini ko'rsatadi.Biroq, verapamil ba'zi ginsenozidlarning (masalan, Rg1, F1, Rh1 va Re kabi) oqib chiqishiga bir xil ta'sir ko'rsatmadi, bu Liang va boshqalar tomonidan ko'rsatilganidek, ular P-gp substratlariga ta'sir qilmasligini ko'rsatadi.32 .Ushbu kuzatuv boshqa tashuvchilar va muqobil ginsenosid tuzilmalarini jalb qilish bilan bog'liq bo'lishi mumkin.
G-Rg3 ning saraton kasalligiga profilaktik ta'siri mexanizmi aniq emas.Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, G-Rg3 oksidlovchi stressni va yallig'lanishni16,33 kamaytirish orqali DNKning shikastlanishi va apoptozning oldini oladi, bu B (a) P bilan induktsiyalangan o'smaning oldini olishning asosiy mexanizmi bo'lishi mumkin.Ba'zi ma'lumotlarga ko'ra, B(a)P tomonidan qo'zg'atilgan genotoksiklik BPDE-DNA34 hosil qilish uchun II faza fermentlarini modulyatsiya qilish orqali kamayishi mumkin.GST tipik II faza fermenti bo'lib, u GSH ning BPDE bilan bog'lanishini rag'batlantirish orqali BPDE-DNK qo'shimchasining shakllanishini inhibe qiladi va shu bilan B (a) P35 tomonidan qo'zg'atilgan DNK shikastlanishini kamaytiradi.Natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, G-Rg3 bilan davolash B (a) P bilan bog'liq bo'lgan sitotoksiklikni va hEL hujayralarida BPDE-DNK qo'shimchalari shakllanishini kamaytiradi va in vitro GST ifodasi va faolligini tiklaydi.Biroq, bu ta'sirlar Nrf2 yo'qligida yo'q edi, bu G-Rg3 Nrf2 yo'li orqali sitoprotektiv ta'sirlarni keltirib chiqarishini ko'rsatadi.Nrf2 ksenobiotiklarni tozalashga yordam beruvchi II faza detoksifikatsiya fermentlari uchun asosiy transkripsiya omilidir36.Nrf2 yo'lining faollashishi sitoproteksiyani keltirib chiqaradi va to'qimalarning shikastlanishini kamaytiradi37.Bundan tashqari, bir nechta hisobotlar Nrf2 ning kanserogenezda o'simtani bostiruvchi rolini qo'llab-quvvatladi38.Bizning tadqiqotimiz shuni ko'rsatadiki, G-Rg3 tomonidan Nrf2 yo'lini induktsiya qilish, II faza fermentlarini faollashtirish orqali B (a) P detoksifikatsiyasini keltirib chiqarish orqali B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan genotoksisiteda muhim tartibga soluvchi rol o'ynaydi va shu bilan o'simta hosil bo'lish jarayonini inhibe qiladi.
Bizning ishimiz ginsenosid G-Rg3 ning muhim ishtiroki orqali sichqonlarda B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan o'pka saratonining oldini olishda qizil ginsengning potentsialini ochib beradi.Ushbu molekulaning og'iz orqali biologik mavjudligi pastligi uning klinik qo'llanilishiga to'sqinlik qiladi.Biroq, ushbu tadqiqot birinchi marta G-Rg3 P-gp ning substrati ekanligini ko'rsatadi va P-gp inhibitori qo'llanilishi in vitro va in vivo G-Rg3 ning bio-mavjudligini oshiradi.G-Rg3 Nrf2 yo'lini tartibga solish orqali B (a) P tomonidan qo'zg'atilgan sitotoksiklikni kamaytiradi, bu uning oldini olish funktsiyasi uchun potentsial mexanizm bo'lishi mumkin.Bizning tadqiqotimiz o'pka saratonining oldini olish va davolash uchun ginsenosid G-Rg3 potentsialini tasdiqlaydi.
Olti haftalik urg'ochi A/J sichqonlari (20 ± 1 g) va 7 haftalik erkak Wistar kalamushlari (250 ± 20 g) Jekson laboratoriyasidan (Bar Harbor, AQSh) va Uxan zoologiya institutidan olingan.Universitet (Uxan, Xitoy).Xitoy tipidagi madaniyat yig'ish markazi (Wuhan, Xitoy) bizga Caco-2 va hEL hujayralarini taqdim etdi.Sigma-Aldrich (Sent-Luis, AQSh) B(a)P va trikaprin manbai hisoblanadi.Tozalangan ginsenosidlar G-Rg3r va G-Rg3s, dimetil sulfoksid (DMSO), CellTiter-96 proliferatsiyasini tahlil qilish to'plami (MTS), verapamil, minimal muhim vosita (MEM) va homila sigir zardobi (FBS) Chengdu Must Bio-Technology kompaniyasidan sotib olindi. .Co., Ltd.(Chengdu, Xitoy).QIAamp DNK mini to'plami va BPDE-DNK qo'shimcha ELISA to'plami Qiagen (Stanford, CA, AQSH) va Cell Biolabs (San-Diego, CA, AQSh) dan sotib olingan.GST faolligini tahlil qilish to'plami va umumiy protein tahlili to'plami (standart BCA usuli) Solarbio (Pekin, Xitoy) dan sotib olingan.Barcha qizil jenshen ekstrakti Mingyu laboratoriyasida saqlanadi 7. Gonkong Baptist universiteti (Gonkong, Xitoy) va Koreya saraton markazi (Seul, Koreya) CRG ekstrakti va turli xil koreys kelib chiqishi (jumladan, KRGA, KRGB) qizil jenshen ekstraktining tijorat manbalari hisoblanadi. va KRGC).Qizil ginseng 6 yoshli yangi jenshenning ildizlaridan tayyorlanadi.Qizil ginseng ekstrakti ginsengni uch marta suv bilan yuvish, so'ngra suvli ekstraktni konsentratsiyalash va nihoyat past haroratda quritish orqali ginseng ekstrakti kukunini olish orqali olinadi.Antikorlar (anti-Nrf2, anti-GST va b-aktin), horseradish peroksidaza bilan konjugatsiyalangan anti-quyon immunoglobulini G (IgG), transfeksiya reagenti, nazorat siRNK va Nrf2 siRNK Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) dan sotib olindi. .), AQSH).
Caco2 va hEL hujayralari 5% CO2 namlangan atmosferada 37 ° C da 10% FBS o'z ichiga olgan MEM bilan 100 mm2 hujayra madaniyati idishlarida o'stirildi.Davolash sharoitlarining ta'sirini aniqlash uchun hEL hujayralari 48 soat davomida MEMda B (a) P va G-Rg3 ning turli konsentratsiyasi bilan inkubatsiya qilindi.Hujayralarni qo'shimcha tahlil qilish yoki hujayrasiz ekstraktlarni tayyorlash uchun to'plash mumkin.
Barcha eksperimentlar Huazhong fan va texnologiya universiteti, Tongji tibbiyot kollejining Eksperimental hayvonlar etikasi qo‘mitasi tomonidan tasdiqlangan (Tasdiqlash № 2019; ro‘yxatga olish № 4587TH).Barcha tajribalar tegishli ko'rsatmalar va qoidalarga muvofiq amalga oshirildi va tadqiqot Hayvonlar bo'yicha tadqiqot: In Vivo Tajribalarni Hisobotlash (ARRIVE) ko'rsatmalariga muvofiq o'tkazildi.Sakkiz haftalik A / J sichqonlariga birinchi marta trikaprin eritmasida (100 mg / kg, 0,2 ml) B (a) P intraperitoneal AOK qilingan.Bir hafta o'tgach, sichqonlar tasodifiy ravishda nazorat guruhlari va turli davolash guruhlariga, har bir guruhda 15 ta sichqonchaga bo'lingan va kuniga bir marta gavalangan.20 haftalik davolanishdan so'ng, hayvonlar CO2 asfiksiyasi bilan qurbon qilindi.O'pka to'plangan va 24 soat davomida fiksatsiya qilingan.Har bir o'pka uchun yuzaki o'smalar soni va individual o'simta o'lchamlari diseksiyon mikroskop ostida aniqlandi.O'simta hajmini baholash (V) quyidagi ifoda yordamida hisoblab chiqilgan: V (mm3) = 4/3pr3, bu erda r - o'simta diametri.Sichqonlarning o'pkasidagi barcha o'sma hajmlarining aniq yig'indisi o'simtaning umumiy hajmini va har bir guruhdagi o'rtacha umumiy o'simta hajmi o'simta yukini ifodalaydi.To'liq qon va ichak namunalari to'plangan va UPLC-MS / MSni aniqlash uchun -80 ° C da saqlangan.Jigar va buyraklar faoliyatini baholash uchun sarum yig'ildi va alanin aminotransferaza (ALT) va sarum kreatinin (Cr) darajasini tahlil qilish uchun avtomatlashtirilgan kimyo analizatoridan foydalanildi.
Yig'ilgan namunalar sovuq ombordan olib tashlandi, eritildi, tortildi va yuqorida aytib o'tilganidek, naychalarga joylashtirildi.Bunga 0,8 ml metanol eritmasida 0,5 mkM phlorizin (ichki standart) qo'shildi.Keyin to'qimalar Tissue-Tearor yordamida bir hil holga keltirildi va homogenat keyinchalik 1,5 ml mikrotsentrifuga naychasiga o'tkazildi.Aralash 15 daqiqa davomida 15500 rpm tezlikda santrifüj qilindi.1,0 ml supernatantni olib tashlangandan so'ng, azot bilan quriting.Qayta tiklash uchun ikki yuz mikrolitr metanol ishlatilgan.Qon bir chiziqda yig'iladi va qayta ishlanadi va barcha o'lchovlar uchun mos yozuvlar sifatida ishlatiladi.
24-quduqli Transwell plitalari verapamil qo'shilishi bilan G-Rg3 tashishning potentsial kuchayishini baholash uchun har bir quduqqa 1,0 × 105 Caco-2 hujayrasi ekilgan.3 haftalik madaniyatdan so'ng hujayralar HBSS bilan yuvildi va 37 ° C da oldindan inkubatsiya qilindi.400 mkl 10 mkM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s yoki 50 yoki 100 mkM verapamil aralashmasi) mono qatlamning bazolateral yoki apikal tomoniga yuborildi va boshqasiga 600 mkL HBSS eritmasi qo'shildi. tomoni.Belgilangan vaqtlarda (0, 15, 30, 45, 60, 90 va 120 daqiqa) 100 µl madaniy muhitni to‘plang va bu hajmni to‘ldirish uchun 100 µl HBSS qo‘shing.Namunalar UPLC-MS/MS tomonidan aniqlanmaguncha -4 °C da saqlangan.Papp = dQ/(dT × A × C0) ifodasi aniq bir tomonlama apikal va bazolateral o'tkazuvchanlikni va aksincha (mos ravishda Pa-b va Pb-a) miqdorini aniqlash uchun ishlatiladi;dQ/dT - konsentratsiyaning o'zgarishi, A (0,6 sm2) - monoqatlamning sirt maydoni va C0 - donorning dastlabki kontsentratsiyasi.Efflux nisbati Pb-a/Pa-b sifatida hisoblanadi, bu o'rganilayotgan preparatning oqim tezligini ifodalaydi.
Erkak Wistar kalamushlari 24 soat davomida och qolgan, faqat suv ichishgan va 3,5% pentobarbital eritmasini tomir ichiga yuborish bilan behushlik qilishgan.Intubatsiya qilingan silikon trubkada kirish joyi sifatida o'n ikki barmoqli ichakning oxiri va chiqish joyi sifatida yonbosh ichakning oxiri mavjud.0,1 ml/min oqim tezligida izotonik HBSSda 10 mkM G-Rg3r yoki G-Rg3s bilan kirishni pompalash uchun peristaltik nasosdan foydalaning.Verapamilning ta'siri 10 mkM G-Rg3r yoki G-Rg3s ga 50 mkM yoki 100 mkM birikma qo'shish orqali baholandi.UPLC-MS/MS perfuziya boshlanganidan keyin 60, 90, 120 va 150 daqiqa vaqt nuqtalarida to'plangan perfuzion ekstraktlarda amalga oshirildi.So'rilish foizi % yutilish = (1 - Cout/Cin) × 100% formulasi bilan aniqlanadi;chiqish va kirishda G-Rg3 kontsentratsiyasi mos ravishda Cout va Cin bilan ifodalanadi.
hEL hujayralari har bir quduqqa 1 × 104 hujayra zichligida 96-quduqli plitalarga ekilgan va B (a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 mkM) yoki DMSOda eritilgan G-Rg3 bilan ishlov berilgan. .Keyin preparatlar madaniyat muhiti bilan 48 soat davomida turli konsentratsiyalarda (0, 1, 2, 5, 10, 20 mkM) suyultirildi.Savdoda mavjud bo'lgan MTS tahlil to'plamidan foydalangan holda, hujayralar standart protokolga o'tkazildi va keyin 490 nm da mikroplata o'quvchi yordamida o'lchandi.B(a)P (10 mkM) va G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 mM) bilan birgalikda davolangan guruhlarning hujayra hayotiylik darajasi yuqoridagi usul bo'yicha baholandi va davolanmagan guruh bilan taqqoslandi.
hEL xujayralari 1 × 105 hujayra / quduq zichligida 6 quduqli plitalarga ekilgan va 10 mkM G-Rg3 mavjudligi yoki yo'qligida 10 mkMB (a) P bilan ishlov berilgan.48 soatlik davolashdan so'ng ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq QIAamp DNA Mini Kit yordamida hEL hujayralaridan DNK olindi.BPDE-DNK qo'shimchalarining shakllanishi BPDE-DNK qo'shimchalari ELISA to'plami yordamida aniqlandi.BPDE-DNK qo'shimchasining nisbiy darajalari 450 nm da absorbansni o'lchash orqali mikroplastinka o'quvchi yordamida o'lchandi.
hEL hujayralari har bir quduqqa 1 × 104 hujayra zichligida 96-quduqli plitalarga ekilgan va 48 soat davomida 10 mkM G-Rg3 yo'qligi yoki mavjudligida 10 mkMB (a) P bilan ishlov berilgan.GST faolligi ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq tijorat GST faolligini tahlil qilish to'plami yordamida o'lchandi.Nisbiy GST faollashuvi mikroplata o'quvchi yordamida 450 nm da absorbans bilan o'lchandi.
hEL xujayralari muzli sovuq PBS bilan yuvilgan va keyin proteaz inhibitörleri va fosfataza inhibitörlerini o'z ichiga olgan radioimmunopresipitatsiya assay buferi yordamida lizing qilingan.Umumiy protein tahlili to'plamidan foydalangan holda oqsil miqdori aniqlangandan so'ng, har bir namunadagi 30 mkg protein 12% SDS-PAGE bilan ajratildi va elektroforez orqali PVDF membranasiga o'tkazildi.Membranalar 5% yog'siz sut bilan bloklangan va bir kechada 4 ° C da asosiy antikorlar bilan inkubatsiya qilingan.Horseradish peroksidaza bilan konjugatsiyalangan ikkilamchi antikorlar bilan inkubatsiya qilingandan so'ng, bog'lanish signalini ko'rish uchun kuchaytirilgan xemiluminesans reagentlari qo'shildi.Har bir oqsil bandining intensivligi ImageJ dasturi yordamida aniqlangan.
GraphPad Prism 7.0 dasturi o'rtacha ± standart og'ish sifatida ifodalangan barcha ma'lumotlarni tahlil qilish uchun ishlatilgan.Davolash guruhlari o'rtasidagi o'zgarish Student's t testi yoki dispersiyaning bir tomonlama tahlili yordamida baholandi, P qiymati <0,05 statistik ahamiyatga ega.
Ushbu tadqiqot davomida olingan yoki tahlil qilingan barcha ma'lumotlar ushbu nashr etilgan maqolaga va qo'shimcha ma'lumotlar fayllariga kiritilgan.
Torre, LA, Siegel, RL va Jemal, A. O'pka saratoni statistikasi.olmosh.Muddati tugagan.dori.biologiya.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Tamaki kanserogenlari, ularning biomarkerlari va tamaki saratoni.Nat.Saraton ruhoniysi.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH va Venitt, S. DNK va tamaki tutuni ta'siridan kelib chiqadigan inson to'qimalarida oqsil qo'shimchalari.baynalmilallik.J. Saraton.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Vang Y., Tang K., Lubet RA va Yu M. Houttuynia cordata va silibininning A / J sichqonlarida benzo (a) piren bilan qo'zg'atilgan o'pka shishi paydo bo'lishiga ta'siri.Saraton 7, 1053-1057 (2005).
Tang, W. va boshqalar.Xitoy dorivor materiallaridan ajratilgan saratonga qarshi tabiiy mahsulot.jag'.dori.6, 27 (2011).
Yang, Y. va boshqalar.Polifenon E, qizil ginseng va rapamisinning A / J sichqonlarida benzo (a) piren bilan bog'liq o'pka shishi paydo bo'lishida samaradorligi.Saraton 8, 52-58 (2006).
Vang, CZ, Anderson, S., Du, W., U, TS va Yuan, KS Red, saraton kasalligini davolashda ishtirok etish.jag'.J. Nutt.dori.14, 7–16 (2016).
Li, TS, Mazza, G., Cottrell, AS va Gao, Amerika ginsengining ildizlari va barglarida L. Ginsenosidlar.J. Agrik.Oziq-ovqat kimyosi.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA va Yuan KS Ginsengning farmakologiyasi: ko'plab komponentlar va ko'plab ta'sirlar.biokimyo.farmakologiya.58, 1685–1693 (1999).
Yuborilgan vaqt: 2023 yil 17-sentabr