Cảm ơn bạn đã ghé thăm Nature.com.Phiên bản trình duyệt bạn đang sử dụng có hỗ trợ CSS hạn chế.Để có kết quả tốt nhất, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng phiên bản trình duyệt mới hơn (hoặc tắt chế độ tương thích trong Internet Explorer).Trong thời gian chờ đợi, để đảm bảo được hỗ trợ liên tục, chúng tôi đang hiển thị trang web mà không có kiểu dáng hoặc JavaScript.
Nhân sâm đỏ đã được sử dụng trong y học cổ truyền châu Á hàng trăm năm.Trong nghiên cứu này, chúng tôi đánh giá khả năng của 4 loại hồng sâm (hồng sâm Trung Quốc, hồng sâm Hàn Quốc A, hồng sâm Hàn Quốc B và hồng sâm Hàn Quốc C) được trồng ở các vùng khác nhau trong việc ức chế sự hình thành và phát triển của bệnh phổi do ung thư gây ra. khối u.Một thử nghiệm về benzo(a)pyrene (B(a)P) đã được tiến hành trên chuột A/J và hồng sâm Hàn Quốc B được phát hiện là có hiệu quả nhất trong việc giảm gánh nặng khối u trong số bốn giống hồng sâm.Ngoài ra, chúng tôi đã phân tích hàm lượng các loại ginsenoside khác nhau (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 và Rg5) trong bốn chiết xuất nhân sâm đỏ và phát hiện ra rằng nhân sâm đỏ Hàn Quốc B có nồng độ ginsenoside Rg3 (G-Rg3) cao nhất, cho thấy G-Rg3 có thể đóng một vai trò quan trọng trong hiệu quả điều trị của nó.Công trình này cho thấy G-Rg3 có sinh khả dụng tương đối thấp.Tuy nhiên, khi G-Rg3 được dùng đồng thời với chất ức chế P-gp verapamil, dòng G-Rg3 vào tế bào Caco-2 giảm đi, tốc độ hấp thu G-Rg3 ở ruột tăng lên ở mô hình chuột và G-Rg3 tăng lên. tăng.Trong tế bào Caco-2, dòng Rg3 thoát ra giảm và nồng độ Rg3 giảm.G-Rg3 được tăng lên trong ruột và huyết tương, đồng thời khả năng ngăn ngừa khối u của nó cũng được tăng cường trên mô hình chuột phát sinh khối u do B(a)P gây ra.Chúng tôi cũng phát hiện ra rằng G-Rg3 làm giảm độc tính tế bào do B(a)P gây ra và sự hình thành chất gây nghiện DNA trong tế bào phổi người, đồng thời khôi phục sự biểu hiện và hoạt động của các enzyme pha II thông qua con đường Nrf2, có thể liên quan đến cơ chế hoạt động tiềm năng của sự ức chế G -Rg3..Về sự xuất hiện của khối u phổi.Nghiên cứu của chúng tôi chứng minh vai trò quan trọng tiềm tàng của G-Rg3 trong việc nhắm mục tiêu vào các khối u phổi trên mô hình chuột.Sinh khả dụng đường uống của ginsenoside này được tăng cường bằng cách nhắm mục tiêu P-glycoprotein, cho phép phân tử này phát huy tác dụng chống ung thư.
Loại ung thư phổi phổ biến nhất là ung thư phổi không phải tế bào nhỏ (NSCLC), đây là một trong những nguyên nhân hàng đầu gây tử vong do ung thư ở Trung Quốc và Bắc Mỹ1,2.Yếu tố chính làm tăng nguy cơ phát triển ung thư phổi không phải tế bào nhỏ là hút thuốc.Khói thuốc lá chứa hơn 60 chất gây ung thư, bao gồm benzo(a)pyrene (B(a)P), nitrosamine và các đồng vị phóng xạ từ sự phân rã của radon.3 Hydrocacbon thơm đa vòng B(a)P là nguyên nhân chính gây độc trong thuốc lá Khói.Khi tiếp xúc với B(a)P, cytochrome P450 sẽ chuyển đổi nó thành B(a)P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), phản ứng với DNA để tạo thành sản phẩm cộng BPDE-DNA 4. Ngoài ra, những chất này adducts gây ra khối u phổi ở chuột có giai đoạn khối u và mô bệnh học tương tự như khối u phổi ở người5.Đặc điểm này làm cho mô hình ung thư phổi do B(a)P gây ra trở thành một hệ thống phù hợp để đánh giá các hợp chất có đặc tính chống ung thư.
Một chiến lược khả thi để ngăn chặn sự phát triển của ung thư phổi ở các nhóm có nguy cơ cao, đặc biệt là những người hút thuốc, là sử dụng các tác nhân ngăn ngừa ung thư để ngăn chặn sự phát triển của các tổn thương tân sinh nội mô và do đó ngăn chặn sự tiến triển thành ác tính sau đó của chúng.Các nghiên cứu trên động vật cho thấy các tác nhân phòng ngừa hóa học khác nhau đều có hiệu quả6.Báo cáo trước đây của chúng tôi7 đã nhấn mạnh tác dụng phòng ngừa tốt của nhân sâm đỏ đối với bệnh ung thư phổi.Loại thảo dược này đã được sử dụng hàng thế kỷ trong y học cổ truyền châu Á để kéo dài tuổi thọ và sức khỏe, đồng thời đã được ghi nhận là có tác dụng chống ung thư8.
Yếu tố hoạt tính của nhân sâm là ginsenoside, được dùng làm chất đánh dấu tổng hợp để đánh giá chất lượng chiết xuất nhân sâm.Phân tích định lượng chiết xuất nhân sâm thô thường liên quan đến việc sử dụng một số ginsenoside, bao gồm RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5 và Rc9,10.Ginsenoside ít được sử dụng trên lâm sàng do sinh khả dụng qua đường uống rất kém11.Mặc dù cơ chế gây ra hiện tượng sinh khả dụng kém này vẫn chưa rõ ràng, nhưng dòng ginsenosides do P-glycoprotein (P-gp)12 gây ra có thể là nguyên nhân.P-gp là một trong những chất vận chuyển dòng ra quan trọng nhất trong siêu họ chất vận chuyển băng cassette gắn ATP, sử dụng năng lượng thủy phân ATP để giải phóng các chất nội bào ra môi trường bên ngoài.Các chất vận chuyển P-gp thường được phân bố rộng rãi ở hàng rào ruột, thận, gan và máu não13.P-gp đóng một vai trò quan trọng trong sự hấp thu ở ruột và việc ức chế P-gp làm tăng sự hấp thu qua đường uống và khả năng sẵn có của một số loại thuốc chống ung thư12,14.Ví dụ về các chất ức chế được sử dụng trước đây trong tài liệu là verapamil và cyclosporine A15.Công việc này liên quan đến việc thiết lập một hệ thống chuột để nghiên cứu bệnh ung thư phổi do B(a)P gây ra nhằm đánh giá khả năng tác động của các chiết xuất nhân sâm đỏ khác nhau từ Trung Quốc và Hàn Quốc đến các khối u ác tính.Các chất chiết xuất được phân tích riêng lẻ để xác định các ginsenoside cụ thể có thể ảnh hưởng đến quá trình gây ung thư.Verapamil sau đó được sử dụng để nhắm mục tiêu P-gp và cải thiện sinh khả dụng đường uống cũng như hiệu quả điều trị của ginsenoside nhắm mục tiêu ung thư.
Cơ chế mà saponin nhân sâm phát huy tác dụng điều trị ung thư vẫn chưa rõ ràng.Nghiên cứu đã chỉ ra rằng nhiều loại ginsenoside khác nhau có thể làm giảm tổn thương DNA do chất gây ung thư gây ra bằng cách giảm căng thẳng oxy hóa và kích hoạt các enzyme giải độc giai đoạn II, từ đó ngăn ngừa tổn thương tế bào.Glutathione S-transferase (GST) là một enzyme pha II điển hình cần thiết để giảm tổn thương DNA do các chất gây ung thư gây ra17.Yếu tố liên quan đến hồng cầu hạt nhân 2 (Nrf2) là yếu tố phiên mã quan trọng điều chỉnh cân bằng nội môi oxy hóa khử và kích hoạt sự biểu hiện của enzyme giai đoạn II và phản ứng chống oxy hóa bảo vệ tế bào18.Nghiên cứu của chúng tôi cũng kiểm tra tác động của các ginsenoside đã được xác định trong việc giảm độc tính tế bào do B(a)P gây ra và sự hình thành chất phụ gia BPDE-DNA, cũng như tạo ra các enzyme pha II bằng cách điều chỉnh con đường Nrf2 trong các tế bào phổi bình thường.
Việc thiết lập mô hình chuột mắc bệnh ung thư do B(a)P gây ra phù hợp với công việc trước đó5.Hình 1A thể hiện thiết kế thử nghiệm của phương pháp điều trị trong 20 tuần đối với mô hình ung thư ở chuột gây ra bởi B(a)P, nước (đối chứng), chiết xuất hồng sâm Trung Quốc (CRG), chiết xuất hồng sâm Hàn Quốc A (KRGA) và hồng sâm Hàn Quốc nhân sâm.Chiết xuất B (KRGB) và Chiết xuất hồng sâm Hàn Quốc C (KRGC).Sau 20 tuần điều trị bằng nhân sâm đỏ, chuột đã chết do ngạt khí CO2.Hình 1B thể hiện các khối u phổi vĩ mô ở động vật được điều trị bằng các loại hồng sâm khác nhau và Hình 1C thể hiện ảnh chụp vi mô ánh sáng đại diện của một mẫu khối u.Gánh nặng khối u của động vật được điều trị bằng KRGB (1,5 ± 0,35) thấp hơn so với động vật đối chứng (0,82 ± 0,2, P <0,05), như trong Hình 1D.Mức độ ức chế tải khối u trung bình là 45%.Các chiết xuất nhân sâm đỏ khác được thử nghiệm không cho thấy những thay đổi đáng kể như vậy về gánh nặng khối u (P > 0,05).Không có tác dụng phụ rõ ràng nào được quan sát thấy trên mô hình chuột trong suốt 20 tuần điều trị bằng nhân sâm đỏ, bao gồm không có thay đổi về trọng lượng cơ thể (dữ liệu không được hiển thị) và không gây độc cho gan hoặc thận (Hình 1E, F).
Chiết xuất nhân sâm đỏ điều trị sự phát triển khối u phổi ở chuột A/J.(A) Thiết kế thí nghiệm.(B) Khối u phổi lớn trên mô hình chuột.Các khối u được chỉ định bởi các mũi tên.a: Nhóm nhân sâm đỏ Trung Quốc.b: Nhóm A của hồng sâm Hàn Quốc.c: Nhóm hồng sâm Hàn Quốc B. d: Nhóm hồng sâm Hàn Quốc C. d: Nhóm đối chứng.(C) Ảnh vi mô ánh sáng cho thấy một khối u phổi.Độ phóng đại: 100. b: 400. (D) Tải lượng khối u trong nhóm chiết xuất hồng sâm.(E) Nồng độ men gan ALT trong huyết tương.(F) Nồng độ huyết tương của enzyme thận Cr.Dữ liệu được biểu thị dưới dạng trung bình ± độ lệch chuẩn.* P <0,05.
Các chiết xuất nhân sâm đỏ được xác định trong nghiên cứu này được phân tích bằng phương pháp sắc ký lỏng siêu hiệu năng song song khối phổ (UPLC-MS/MS) để định lượng các ginsenoside sau: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 và Rg5.Các điều kiện UPLC và MS được sử dụng để đo các chất phân tích đã được mô tả trong báo cáo trước đó19.Sắc ký đồ UPLC-MS/MS của bốn chiết xuất nhân sâm đỏ được thể hiện trong Hình 2A.Có sự khác biệt đáng kể về tổng hàm lượng ginsenoside, với tổng hàm lượng ginsenoside cao nhất trong CRG (590,27 ± 41,28 μmol/L) (Hình 2B).Khi đánh giá các ginsenoside riêng lẻ (Hình 2C), KRGB cho thấy mức G-Rg3 cao nhất so với các ginsenoside khác (58,33 ± 3,81 μmol/L đối với G-Rg3s và 41,56 ± 2,88 μmol/L đối với G -Rg3r).L).loại nhân sâm đỏ (P < 0,001).G-Rg3 xuất hiện dưới dạng một cặp đồng phân lập thể G-Rg3r và G-Rg3, khác nhau về vị trí của nhóm hydroxyl ở carbon 20 (Hình 2D).Kết quả chỉ ra rằng G-Rg3r hoặc G-Rg3 có thể có tiềm năng chống ung thư quan trọng trong mô hình chuột bị ung thư do B(a)P gây ra.
Hàm lượng ginsenosides trong các chiết xuất nhân sâm đỏ khác nhau.(A) Sắc ký UPLC-MS/MS của bốn chiết xuất nhân sâm đỏ.(B) Ước tính tổng hàm lượng ginsenoside trong dịch chiết được chỉ định.(C) Phát hiện các ginsenoside riêng lẻ trong dịch chiết được dán nhãn.(D) Cấu trúc của các đồng phân lập thể ginsenoside G-Rg3r và G-Rg3s.Dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn của các phép xác định ba lần.*** P <0,001.
Nghiên cứu UPLC-MS/MS yêu cầu định lượng ginsenoside trong mẫu ruột và máu sau 20 tuần điều trị.Điều trị bằng KRGB cho thấy chỉ có 0,0063 ± 0,0005 μg/ml Rg5 trong máu.Không phát hiện thấy ginsenoside còn lại, cho thấy khả dụng sinh học qua đường uống kém và do đó làm giảm mức độ tiếp xúc với các ginsenoside này.
Dòng tế bào ung thư biểu mô tuyến ruột Caco-2 tương tự về mặt hình thái và sinh hóa với tế bào biểu mô ruột của con người, chứng tỏ tính tiện ích của nó trong việc đánh giá sự vận chuyển tế bào ruột qua hàng rào biểu mô ruột.Phân tích này dựa trên một nghiên cứu trước đó 20 .Hình 3A, B, C, D, E, F hiển thị hình ảnh đại diện về sự vận chuyển xuyên tế bào của G-Rg3r và G-Rg3 bằng mô hình đơn lớp Caco-2.Sự vận chuyển xuyên tế bào của G-Rg3r hoặc G-Rg3 qua các đơn lớp Caco-2 từ phía cơ bản đến phía đỉnh (Pb-a) cao hơn đáng kể so với từ phía đỉnh sang phía cơ bản (Pa-b).Đối với G-Rg3r, giá trị Pa-b trung bình là 0,38 ± 0,06, tăng lên 0,73 ± 0,06 sau khi điều trị bằng verapamil 50 μmol/L và lên 1,14 ± 0,09 sau khi điều trị bằng verapamil 100 μmol/L (p < 0,01 và 0,001, tương ứng; Hình 2).3A).Các quan sát đối với G-Rg3 cũng theo mô hình tương tự (Hình 3B) và kết quả cho thấy việc điều trị bằng verapamil đã tăng cường vận chuyển G-Rg3r và G-Rg3.Điều trị bằng Verapamil cũng làm giảm đáng kể tỷ lệ dòng chảy Pb-a và G-Rg3r và G-Rg3s trung bình (Hình 3C, D, E, F), cho thấy rằng điều trị bằng verapamil làm giảm hàm lượng ginsenoside trong các tế bào dòng chảy Caco-2..
Vận chuyển G-Rg3 qua tế bào trong lớp đơn Caco-2 và sự hấp thu ở ruột trong xét nghiệm truyền dịch ở chuột.(A) Giá trị Pa-b của nhóm G-Rg3r trong lớp đơn Caco-2.(B) Giá trị Pa-b của các nhóm G-Rg3 trong lớp đơn Caco-2.(C) Giá trị Pb của nhóm G-Rg3r trong lớp đơn Caco-2.(D) Giá trị Pb của các nhóm G-Rg3s trong lớp đơn Caco-2.(E) Tỷ lệ năng suất của các nhóm G-Rg3r trong lớp đơn Caco-2.(F) Tỷ lệ năng suất của các nhóm G-Rg3 trong lớp đơn Caco-2.(G) Tỷ lệ hấp thu G-Rg3r qua đường ruột trong xét nghiệm tưới máu ở chuột.(H) Tỷ lệ hấp thu G-Rg3 qua đường ruột trong xét nghiệm tưới máu ở chuột.Khả năng thấm và hấp thu được so sánh khi không bổ sung verapamil.Dữ liệu được biểu thị dưới dạng trung bình ± độ lệch chuẩn của năm thí nghiệm độc lập.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Phù hợp với công việc trước đó20, việc tưới máu qua đường ruột chỉnh hình cho chuột đã được thực hiện để xác định xem liệu sự hấp thụ G-Rg3 trong ruột có tăng lên sau khi điều trị bằng verapamil hay không.Hình 3G, H thể hiện các thử nghiệm tưới máu tiêu biểu để đánh giá phần trăm hấp thu G-Rg3r và G-Rg3 qua đường ruột ở chuột mô hình ung thư trong khoảng thời gian trên.Tỷ lệ phần trăm hấp thu G-Rg3r yếu ban đầu khoảng 10% tăng lên hơn 20% sau khi điều trị bằng verapamil 50 μM và lên hơn 25% sau khi điều trị bằng verapamil 100 μM.Tương tự, G-Rg3, có mức hấp thu ban đầu là 10%, cũng đạt mức cao nhất trên 20% sau khi điều trị bằng verapamil 50 μM và gần 30% sau khi điều trị bằng verapamil 100 μM, cho thấy rằng sự ức chế P-gp của verapamil tăng cường. Rg3 hấp thụ G ở ruột trong mô hình chuột bị ung thư phổi.
Theo phương pháp trên, chuột mô hình ung thư do B(a)P gây ra được chia ngẫu nhiên thành sáu nhóm, như trong Hình 4A.Không thấy giảm cân đáng kể hoặc dấu hiệu lâm sàng về độc tính ở nhóm điều trị G-Rg3 so với nhóm đối chứng (dữ liệu không được hiển thị).Sau 20 tuần điều trị, phổi của mỗi con chuột đã được thu thập.Hình 4B thể hiện các khối u phổi vĩ mô ở chuột trong các nhóm điều trị trên và Hình 4C thể hiện ảnh chụp vi mô ánh sáng đại diện của một khối u đại diện.Về gánh nặng khối u ở mỗi nhóm (Hình 4D), các giá trị đối với chuột được điều trị bằng G-Rg3r và G-Rg3 lần lượt là 0,75 ± 0,29 mm3 và 0,81 ± 0,30 mm3, trong khi giá trị đối với Chuột G được điều trị với -Rg3s lần lượt là 1,63 ±0,40 mm3.chuột đối chứng (p < 0,001), cho thấy rằng điều trị bằng G-Rg3 làm giảm gánh nặng khối u ở chuột.Việc sử dụng verapamil càng làm tăng thêm mức giảm này: giá trị ở chuột verapamil+ G-Rg3r giảm từ 0,75 ± 0,29 mm3 xuống 0,33 ± 0,25 mm3 (p < 0,01) và giá trị ở verapamil+ từ 0,81 ± 0,30 mm3 giảm xuống 0,29 ± 0,21 mm3 ở chuột được điều trị bằng G. -Rg3s (p < 0,05), cho thấy verapamil có thể tăng cường tác dụng ức chế của G-Rg3 đối với nguyên nhân khối u.Gánh nặng khối u cho thấy không có sự khác biệt đáng kể giữa nhóm đối chứng và nhóm verapamil, nhóm G-Rg3r và nhóm G-Rg3s, nhóm verapamil+G-Rg3r và nhóm verapamil+G-Rg3s.Hơn nữa, không có độc tính đáng kể nào về gan hoặc thận liên quan đến các phương pháp điều trị được đánh giá (Hình 4E, F).
Gánh nặng khối u sau khi điều trị bằng G-Rg3 và nồng độ G-Rg3r và G-Rg3 trong huyết tương hoặc đường ruột trong các nhóm được chỉ định.(A) Thiết kế thí nghiệm.(B) Các khối u vĩ mô trên mô hình chuột.Các khối u được chỉ định bởi các mũi tên.một: G-Rg3r.b: G-Rg3s.c: G-Rg3r phối hợp verapamil.d: G-Rg3 phối hợp với verapamil.d: Verapamil.đ: kiểm soát.(C) Ảnh vi mô quang học của khối u ở độ phóng đại.Đáp án: 100x.b: 400X.(D) Hiệu quả của việc điều trị bằng G-Rg3 + verapamil đối với gánh nặng khối u ở chuột A/J.(E) Nồng độ men gan ALT trong huyết tương.(F) Nồng độ enzyme thận Cr trong huyết tương.(G) Nồng độ G-Rg3r hoặc G-Rg3 trong huyết tương của các nhóm được chỉ định.(H) Mức G-Rg3r hoặc G-Rg3 trong ruột của các nhóm được chỉ định.Dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn của các phép xác định ba lần.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Nồng độ G-Rg3 ở chuột mô hình ung thư do B(a)P gây ra được UPLC-MS/MS đánh giá sau thời gian điều trị 20 tuần theo phương pháp được mô tả trong phần Phương pháp.Hình 4G và H lần lượt thể hiện nồng độ G-Rg3 trong huyết tương và đường ruột.Nồng độ G-Rg3r trong huyết tương là 0,44 ± 0,32 μmol/L và tăng lên 1,17 ± 0,47 μmol/L khi dùng đồng thời với verapamil (p < 0,001), trong khi nồng độ G-Rg3r trong ruột là 0,53 ± 0,08 µg/l.Khi kết hợp với verapamil, g tăng lên 1,35 ± 0,13 μg/g (p < 0,001).Đối với G-Rg3, kết quả cũng diễn ra theo mô hình tương tự, cho thấy rằng việc điều trị bằng verapamil đã làm tăng khả dụng sinh học đường uống của G-Rg3 ở chuột A/J.
Xét nghiệm khả năng sống của tế bào được sử dụng để đánh giá độc tính tế bào của B(a)P và G-Rg3 trên tế bào hEL.Độc tính tế bào do B(a)P gây ra trong các tế bào hEL được thể hiện trong Hình 5A, trong khi các đặc tính không độc hại của G-Rg3r và G-Rg3 được thể hiện trong Hình 5A và 5B.5B, C. Để đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào của G-Rg3, B(a)P được sử dụng đồng thời với các nồng độ khác nhau của G-Rg3r hoặc G-Rg3 vào tế bào hEL.Như được hiển thị trong Hình 5D, G-Rg3r ở nồng độ 5 μM, 10 μM và 20 μM đã phục hồi khả năng sống sót của tế bào lần lượt là 58,3%, 79,3% và 77,3%.Kết quả tương tự cũng có thể thấy ở nhóm G-Rg3s.Khi nồng độ của G-Rg3 là 5 µM, 10 µM và 20 µM, khả năng sống sót của tế bào được phục hồi lần lượt là 58,3%, 72,7% và 76,7% (Hình 5E) .).Sự hiện diện của các chất cộng BPDE-DNA được đo bằng bộ ELISA.Kết quả của chúng tôi cho thấy mức độ bổ sung BPDE-DNA đã tăng lên trong nhóm được điều trị bằng B(a)P so với nhóm đối chứng, nhưng so với nhóm điều trị đồng thời G-Rg3, mức độ bổ sung BPDE-DNA trong nhóm B(a)P B ở nhóm được điều trị, mức độ cộng DNA đã giảm đáng kể.Kết quả điều trị chỉ với B(a)P được thể hiện trong Hình 5F (1,87 ± 0,33 so với 3,77 ± 0,42 đối với G-Rg3r, 1,93 ± 0,48 so với 3,77 ± 0,42 đối với G -Rg3s, p < 0,001).
Khả năng tồn tại của tế bào và sự hình thành chất bổ sung BPDE-DNA trong các tế bào hEL được xử lý bằng G-Rg3 và B(a)P.(A) Khả năng tồn tại của tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P.(B) Khả năng tồn tại của tế bào hEL được xử lý bằng G-Rg3r.(C) Khả năng tồn tại của tế bào hEL được xử lý bằng G-Rg3.(D) Khả năng tồn tại của tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3r.(E) Khả năng tồn tại của các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3.( F ) Mức độ bổ sung BPDE-DNA trong các tế bào hEL được xử lý bằng B (a) P và G-Rg3.Dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn của các phép xác định ba lần.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Biểu hiện enzyme GST được phát hiện sau khi điều trị đồng thời với 10 μM B(a)P và 10 μM G-Rg3r hoặc G-Rg3s.Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng B(a)P đã ức chế biểu hiện GST (59,7 ± 8,2% trong nhóm G-Rg3r và 39 ± 4,5% trong nhóm G-Rg3s) và B(a)P được liên kết với G-Rg3r , hoặc với G-Rg3r, hoặc với G-Rg3r.Điều trị phối hợp với G-Rg3 đã khôi phục biểu hiện GST.Biểu thức GST (103,7 ± 15,5% trong nhóm G-Rg3r và 110 ± 11,1% trong nhóm G-Rg3s, p < 0,05 và p < 0,001, tương ứng, Hình 6A, B và C).Hoạt động GST được đánh giá bằng cách sử dụng bộ xét nghiệm hoạt động.Kết quả của chúng tôi cho thấy nhóm điều trị kết hợp có hoạt tính GST cao hơn so với nhóm chỉ B(a)P (96,3 ± 6,6% so với 35,7 ± 7,8% ở nhóm G-Rg3r so với 92,3 ± 6,5 ở nhóm G-Rg3r ).% so với 35,7 ± 7,8% ở nhóm G-Rg3s, p < 0,001, Hình 6D).
Biểu hiện GST và Nrf2 trong các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3.(A) Phát hiện biểu hiện GST bằng phương pháp Western blot.(B) Biểu hiện định lượng GST trong các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3r.(C) Biểu hiện định lượng GST trong các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3s.(D) Hoạt động GST trong các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3.(E) Phát hiện biểu hiện Nrf2 bằng phương pháp Western blot.(F) Biểu hiện định lượng Nrf2 trong các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3r.(G) Biểu hiện định lượng Nrf2 trong các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3s.Dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn của các phép xác định ba lần.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Để làm sáng tỏ các con đường liên quan đến việc ức chế khối u do B(a)P gây ra qua trung gian G-Rg3, biểu hiện Nrf2 được đánh giá bằng phương pháp làm mờ phương Tây.Như được hiển thị trong Hình 6E, F, G, so với nhóm đối chứng, chỉ có mức Nrf2 trong nhóm điều trị B(a)P là giảm;tuy nhiên, so với nhóm điều trị B(a)P, nồng độ B(a) Nrf2 trong nhóm PG-Rg3 đã tăng lên (106 ± 9,5% đối với G-Rg3r so với 51,3 ± 6,8%, 117 ± 6,2% đối với G-Rg3r so với 41 ± 9,8% đối với G-Rg3s, p < 0,01).
Chúng tôi đã xác nhận vai trò phòng ngừa của Nrf2 bằng cách ngăn chặn biểu hiện Nrf2 bằng cách sử dụng RNA can thiệp nhỏ cụ thể (siRNA).Việc hạ gục Nrf2 đã được xác nhận bằng phương pháp Western blot (Hình 7, B).Như được hiển thị trong Hình 7C, D, việc điều trị đồng thời các tế bào hEL với B(a)P và G-Rg3 đã dẫn đến giảm số lượng chất gây nghiện BPDE-DNA (1,47 ± 0,21) so với điều trị bằng B(a)P riêng trong nhóm siRNA đối chứng.) G-Rg3r là 4,13 ± 0,49, G-Rg3s là 1,8 ± 0,32 và 4,1 ± 0,57, p < 0,01).Tuy nhiên, tác dụng ức chế của G-Rg3 đối với sự hình thành BPDE-DNA đã bị loại bỏ khi phân hủy Nrf2.Trong nhóm siNrf2, không có sự khác biệt đáng kể về sự hình thành chất cộng BPDE-DNA giữa điều trị đồng thời B(a)P và G-Rg3 và chỉ điều trị B(a)P (3,0 ± 0,21 đối với G-Rg3r so với 3,56 ± 0,32 ).đối với G-Rg3r so với 3,6 đối với G-Rg3 so với ±0,45 so với 4,0±0,37, p > 0,05).
Ảnh hưởng của việc phân hủy Nrf2 đến sự hình thành chất phụ gia BPDE-DNA trong các tế bào hEL.(A) Việc hạ gục Nrf2 đã được xác nhận bằng phương pháp làm mờ phương Tây.(B) Định lượng cường độ băng tần Nrf2.(C) Ảnh hưởng của việc hạ gục Nrf2 đối với mức độ bổ sung BPDE-DNA trong các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3r.(D) Ảnh hưởng của việc hạ gục Nrf2 đối với mức độ bổ sung BPDE-DNA trong các tế bào hEL được xử lý bằng B(a)P và G-Rg3.Dữ liệu được biểu thị dưới dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn của các phép xác định ba lần.*P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.
Nghiên cứu này đánh giá tác dụng phòng ngừa của các chiết xuất nhân sâm đỏ khác nhau trên mô hình chuột mắc bệnh ung thư phổi do B(a)P gây ra và việc điều trị KRGB làm giảm đáng kể gánh nặng khối u.Cho rằng G-Rg3 có hàm lượng cao nhất trong chiết xuất nhân sâm này, vai trò quan trọng của ginsenoside này trong việc ức chế sự hình thành khối u đã được nghiên cứu.Cả G-Rg3r và G-Rg3 (hai epimer của G-Rg3) đều làm giảm đáng kể gánh nặng khối u trên mô hình chuột mắc bệnh ung thư do B(a)P gây ra.G-Rg3r và G-Rg3 phát huy tác dụng chống ung thư bằng cách gây ra quá trình tự hủy của tế bào khối u21, ức chế sự phát triển của khối u22, ngăn chặn chu kỳ tế bào23 và ảnh hưởng đến sự hình thành mạch24.G-Rg3 cũng đã được chứng minh là có tác dụng ức chế sự di căn của tế bào25 và khả năng của G-Rg3 trong việc tăng cường tác dụng của hóa trị và xạ trị đã được ghi nhận26,27.Poon và cộng sự đã chứng minh rằng việc xử lý bằng G-Rg3 có thể làm giảm tác dụng gây độc gen của B(a)P28.Nghiên cứu này chứng minh tiềm năng điều trị của G-Rg3 trong việc nhắm mục tiêu các phân tử gây ung thư trong môi trường và ngăn ngừa ung thư.
Mặc dù có tiềm năng phòng bệnh tốt nhưng khả dụng sinh học qua đường uống kém của ginsenoside đặt ra thách thức cho việc sử dụng lâm sàng các phân tử này.Phân tích dược động học khi dùng ginsenosides qua đường uống ở chuột cho thấy sinh khả dụng của nó vẫn dưới 5%29.Các xét nghiệm này cho thấy sau thời gian điều trị 20 tuần, chỉ có nồng độ Rg5 trong máu giảm đi.Mặc dù cơ chế cơ bản của tình trạng sinh khả dụng kém vẫn chưa được làm rõ, nhưng P-gp được cho là có liên quan đến dòng ginsenosides.Công trình này lần đầu tiên chứng minh rằng việc sử dụng verapamil, một thuốc chẹn P-gp, làm tăng sinh khả dụng đường uống của G-Rg3r và G-Rg3s.Do đó, phát hiện này cho thấy G-Rg3r và G-Rg3 đóng vai trò là chất nền của P-gp để điều chỉnh dòng chảy của nó.
Công trình này chứng minh rằng điều trị kết hợp với verapamil làm tăng khả dụng sinh học đường uống của G-Rg3 trong mô hình chuột mắc bệnh ung thư phổi.Phát hiện này được hỗ trợ bằng cách tăng cường vận chuyển G-Rg3 qua đường ruột khi bị phong tỏa P-gp, do đó làm tăng sự hấp thu của nó.Các thử nghiệm trong tế bào Caco2 cho thấy việc điều trị bằng verapamil làm giảm dòng G-Rg3r và G-Rg3s chảy ra ngoài đồng thời cải thiện tính thấm của màng.Một nghiên cứu của Yang et al.Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng điều trị bằng cyclosporine A (một thuốc chẹn P-gp khác) làm tăng khả dụng sinh học của ginsenoside Rh2 từ giá trị cơ bản là 1%20 lên hơn 30%.Hợp chất Ginsenosides K và Rg1 cũng cho kết quả tương tự30,31.Khi dùng đồng thời verapamil và cyclosporin A, dòng hợp chất K trong tế bào Caco-2 giảm đáng kể từ 26,6 xuống dưới 3, trong khi nồng độ nội bào của nó tăng gấp 40 lần30.Với sự hiện diện của verapamil, nồng độ Rg1 tăng lên trong các tế bào biểu mô phổi chuột, cho thấy vai trò của P-gp trong dòng chảy ginsenoside, như được chỉ ra bởi Meng et al.31.Tuy nhiên, verapamil không có tác dụng tương tự đối với dòng chảy của một số ginsenoside (như Rg1, F1, Rh1 và Re), cho thấy rằng chúng không bị ảnh hưởng bởi cơ chất P-gp, như Liang et al.32 .Quan sát này có thể liên quan đến sự tham gia của các chất vận chuyển khác và các cấu trúc ginsenoside thay thế.
Cơ chế tác dụng phòng ngừa của G-Rg3 đối với bệnh ung thư vẫn chưa rõ ràng.Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng G-Rg3 ngăn ngừa tổn thương DNA và quá trình tự hủy bằng cách giảm căng thẳng oxy hóa và viêm16,33, đây có thể là cơ chế cơ bản để ngăn ngừa sự hình thành khối u do B(a)P gây ra.Một số báo cáo chỉ ra rằng độc tính gen do B(a)P gây ra có thể được giảm bớt bằng cách điều chỉnh các enzyme pha II để tạo thành BPDE-DNA34.GST là enzyme pha II điển hình có tác dụng ức chế sự hình thành chất phụ gia BPDE-DNA bằng cách thúc đẩy sự liên kết của GSH với BPDE, do đó làm giảm tổn thương DNA do B(a)P35 gây ra.Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng việc điều trị bằng G-Rg3 làm giảm độc tính tế bào do B(a)P gây ra và sự hình thành chất gây nghiện BPDE-DNA trong các tế bào hEL và khôi phục hoạt động và biểu hiện GST trong ống nghiệm.Tuy nhiên, những tác dụng này không có khi không có Nrf2, cho thấy G-Rg3 gây ra tác dụng bảo vệ tế bào thông qua con đường Nrf2.Nrf2 là yếu tố phiên mã chính của các enzyme giải độc giai đoạn II giúp thúc đẩy quá trình thanh thải xenobamel36.Kích hoạt con đường Nrf2 gây ra sự bảo vệ tế bào và giảm tổn thương mô37.Hơn nữa, một số báo cáo đã ủng hộ vai trò của Nrf2 như một chất ức chế khối u trong quá trình gây ung thư38.Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy rằng việc G-Rg3 tạo ra con đường Nrf2 đóng vai trò điều tiết quan trọng đối với độc tính gen do B(a)P gây ra bằng cách gây ra giải độc B(a)P bằng cách kích hoạt các enzyme pha II, do đó ức chế quá trình hình thành khối u.
Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy tiềm năng của hồng sâm trong việc ngăn ngừa ung thư phổi do B(a)P gây ra ở chuột thông qua sự tham gia quan trọng của ginsenoside G-Rg3.Sinh khả dụng đường uống kém của phân tử này cản trở ứng dụng lâm sàng của nó.Tuy nhiên, nghiên cứu này lần đầu tiên cho thấy G-Rg3 là cơ chất của P-gp và việc sử dụng chất ức chế P-gp làm tăng khả dụng sinh học của G-Rg3 in vitro và in vivo.G-Rg3 làm giảm độc tính tế bào do B(a)P gây ra bằng cách điều chỉnh con đường Nrf2, đây có thể là một cơ chế tiềm năng cho chức năng phòng ngừa của nó.Nghiên cứu của chúng tôi xác nhận tiềm năng của ginsenoside G-Rg3 trong việc ngăn ngừa và điều trị ung thư phổi.
Chuột A / J cái 6 tuần tuổi (20 ± 1 g) và chuột Wistar đực 7 tuần tuổi (250 ± 20 g) được lấy từ Phòng thí nghiệm Jackson (Bar Harbor, Hoa Kỳ) và Viện Động vật học Vũ Hán.Đại học (Vũ Hán, Trung Quốc).Trung tâm sưu tập văn hóa kiểu Trung Quốc (Vũ Hán, Trung Quốc) đã cung cấp cho chúng tôi tế bào Caco-2 và hEL.Sigma-Aldrich (St. Louis, Mỹ) là nguồn cung cấp B(a)P và tricaprine.Ginsenosides tinh khiết G-Rg3r và G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), bộ xét nghiệm tăng sinh CellTiter-96 (MTS), verapamil, môi trường thiết yếu tối thiểu (MEM) và huyết thanh bào thai bò (FBS) đã được mua từ Thành Đô Must Bio-Technology .Công ty Trách Nhiệm Hữu Hạn.(Thành Đô, Trung Quốc).Bộ mini QIAamp DNA và bộ ELISA bổ sung BPDE-DNA được mua từ Qiagen (Stanford, CA, USA) và Cell Biolabs (San Diego, CA, USA).Bộ xét nghiệm hoạt động GST và bộ xét nghiệm protein tổng số (phương pháp BCA tiêu chuẩn) đã được mua từ Solarbio (Bắc Kinh, Trung Quốc).Tất cả các chiết xuất nhân sâm đỏ được lưu trữ trong Phòng thí nghiệm Mingyu 7. Đại học Baptist Hồng Kông (Hồng Kông, Trung Quốc) và Trung tâm Ung thư Hàn Quốc (Seoul, Hàn Quốc) là nguồn thương mại chiết xuất CRG và các chiết xuất nhân sâm đỏ khác nhau có nguồn gốc khác nhau từ Hàn Quốc (bao gồm KRGA, KRGB). và KRGC).Hồng sâm được làm từ củ nhân sâm tươi 6 năm tuổi.Chiết xuất nhân sâm đỏ thu được bằng cách rửa nhân sâm với nước ba lần, sau đó cô đặc dịch chiết nước và cuối cùng sấy khô ở nhiệt độ thấp để thu được bột chiết xuất nhân sâm.Các kháng thể (anti-Nrf2, anti-GST và-actin), globulin miễn dịch kháng thỏ G (IgG) kết hợp với peroxidase peroxidase, thuốc thử chuyển hóa, siRNA kiểm soát và siRNA Nrf2 đã được mua từ Công nghệ sinh học Santa Cruz (Santa Cruz, CA) .), HOA KỲ).
Tế bào Caco2 và hEL được nuôi cấy trong đĩa nuôi cấy tế bào 100 mm2 với MEM chứa 10% FBS ở 37°C trong môi trường ẩm 5% CO2.Để xác định ảnh hưởng của các điều kiện điều trị, các tế bào hEL được ủ với các nồng độ B(a)P và G-Rg3 khác nhau trong MEM trong 48 giờ.Các tế bào có thể được phân tích hoặc thu thập thêm để chuẩn bị các chất chiết xuất không chứa tế bào.
Tất cả các thí nghiệm đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức Động vật Thực nghiệm của Trường Cao đẳng Y tế Tongji, Đại học Khoa học và Công nghệ Huazhong (Số phê duyệt năm 2019; Số đăng ký 4587TH).Tất cả các thí nghiệm được thực hiện theo các hướng dẫn và quy định có liên quan, đồng thời nghiên cứu được thực hiện theo hướng dẫn Nghiên cứu Động vật: Báo cáo Thí nghiệm In Vivo (ARRIVE).Chuột A/J 8 tuần tuổi lần đầu tiên được tiêm B(a)P trong dung dịch tricaprine (100 mg/kg, 0,2 ml) vào màng bụng.Sau một tuần, những con chuột này được chia ngẫu nhiên thành các nhóm đối chứng và các nhóm điều trị khác nhau, mỗi nhóm 15 con chuột và được cho uống mỗi ngày một lần.Sau 20 tuần điều trị, động vật đã chết vì ngạt CO2.Phổi được thu thập và cố định trong 24 giờ.Số lượng khối u bề mặt và kích thước khối u riêng lẻ được định lượng cho từng phổi dưới kính hiển vi mổ xẻ.Ước tính thể tích khối u (V) được tính bằng biểu thức sau: V (mm3) = 4/3πr3, trong đó r là đường kính khối u.Tổng khối lượng thực của tất cả khối u trong phổi của chuột đại diện cho tổng khối lượng khối u và tổng khối lượng khối u trung bình trong mỗi nhóm đại diện cho tải trọng khối u.Các mẫu máu toàn phần và ruột được thu thập và bảo quản ở -80°C để xác định UPLC-MS/MS.Huyết thanh được thu thập và máy phân tích hóa học tự động được sử dụng để phân tích nồng độ alanine aminotransferase (ALT) và creatinine huyết thanh (Cr) để đánh giá chức năng gan và thận.
Các mẫu thu thập được lấy ra khỏi kho lạnh, rã đông, cân và cho vào các ống như mô tả ở trên.Thêm vào đó 0,5 μM phlorizin (chất chuẩn nội) trong 0,8 ml dung dịch metanol.Sau đó, mô được đồng nhất hóa bằng Tissue-Tearor và chất đồng nhất sau đó được chuyển sang ống vi ly tâm 1,5 ml.Hỗn hợp được ly tâm ở tốc độ 15500 vòng/phút trong 15 phút.Sau khi loại bỏ 1,0 ml phần nổi phía trên, làm khô bằng nitơ.Hai trăm microlit metanol đã được sử dụng để thu hồi.Máu được thu thập và xử lý trên một dây chuyền và được sử dụng làm tài liệu tham khảo cho tất cả các phép đo.
Các đĩa Transwell 24 giếng được gieo hạt tế bào Caco-2 1,0 × 105 mỗi giếng để đánh giá khả năng tăng cường vận chuyển G-Rg3 bằng cách bổ sung verapamil.Sau 3 tuần nuôi cấy, tế bào được rửa bằng HBSS và ủ trước ở 37°C.400 μL 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s hoặc hỗn hợp với 50 hoặc 100 μM verapamil) được tiêm vào mặt cơ bản hoặc mặt đỉnh của lớp đơn lớp và 600 μL dung dịch HBSS được thêm vào mặt kia bên.Thu thập 100 µl môi trường nuôi cấy tại các thời điểm được chỉ định (0, 15, 30, 45, 60, 90 và 120 phút) và thêm 100 µl HBSS để tạo thành thể tích này.Các mẫu được bảo quản ở −4 ° C cho đến khi được UPLC-MS/MS phát hiện.Biểu thức Papp = dQ/(dT × A × C0) được sử dụng để định lượng độ thấm đỉnh và đáy bên một hướng rõ ràng và ngược lại (Pa-b và Pb-a, tương ứng);dQ/dT là sự thay đổi nồng độ, A (0,6 cm2) là diện tích bề mặt của lớp đơn lớp và C0 là nồng độ chất cho ban đầu.Tỷ lệ dòng ra được tính bằng Pb-a/Pa-b, đại diện cho tỷ lệ dòng ra của thuốc nghiên cứu.
Chuột Wistar đực được nhịn ăn trong 24 giờ, chỉ uống nước và gây mê bằng cách tiêm tĩnh mạch dung dịch pentobarbital 3,5%.Ống silicone đặt nội khí quản có đầu tá tràng là lối vào và đầu hồi tràng là lối ra.Sử dụng bơm nhu động để bơm đầu vào với 10 µM G-Rg3r hoặc G-Rg3 trong HBSS đẳng trương ở tốc độ dòng 0,1 ml/phút.Tác dụng của verapamil được đánh giá bằng cách thêm 50 μM hoặc 100 μM hợp chất vào 10 μM G-Rg3r hoặc G-Rg3s.UPLC-MS/MS được thực hiện trên dịch chiết tưới máu được thu thập tại các thời điểm 60, 90, 120 và 150 phút sau khi bắt đầu tưới máu.Tỷ lệ hấp thụ được định lượng bằng công thức % hấp thụ = (1 – Cout/Cin) × 100%;nồng độ G-Rg3 ở đầu ra và đầu vào được biểu thị lần lượt bằng Cout và Cin.
Các tế bào hEL được gieo vào các đĩa 96 giếng với mật độ 1 × 104 tế bào mỗi giếng và được xử lý bằng B(a)P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) hoặc G-Rg3 hòa tan trong DMSO .Sau đó, thuốc được pha loãng với môi trường nuôi cấy đến các nồng độ khác nhau (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) trong 48 giờ.Sử dụng bộ xét nghiệm MTS có bán trên thị trường, các tế bào được tuân theo một giao thức chuẩn và sau đó được đo bằng đầu đọc vi đĩa ở bước sóng 490 nm.Mức độ tồn tại của tế bào của các nhóm được điều trị bằng B(a)P (10 M) và G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 M) được đánh giá theo phương pháp trên và so sánh với nhóm không được điều trị.
Các tế bào hEL được gieo vào các đĩa 6 giếng với mật độ 1 × 105 tế bào/giếng và được xử lý với 10 μMB(a)P khi có hoặc không có 10 μM G-Rg3.Sau 48 giờ xử lý, DNA được tách chiết từ tế bào hEL bằng QIAamp DNA Mini Kit theo quy trình của nhà sản xuất.Sự hình thành các chất cộng BPDE-DNA được phát hiện bằng cách sử dụng bộ ELISA bổ sung BPDE-DNA.Mức độ tương đối của chất phụ gia BPDE-DNA được đo bằng cách sử dụng đầu đọc vi bản bằng cách đo độ hấp thụ ở bước sóng 450nm.
Các tế bào hEL được gieo vào các đĩa 96 giếng với mật độ 1 × 104 tế bào mỗi giếng và được xử lý với 10 μMB(a)P khi không có hoặc có mặt 10 μM G-Rg3 trong 48 giờ.Hoạt tính GST được đo bằng bộ xét nghiệm hoạt động GST thương mại theo quy trình của nhà sản xuất.Kích hoạt GST tương đối được đo bằng độ hấp thụ ở bước sóng 450nm bằng đầu đọc vi bản.
Các tế bào hEL được rửa bằng PBS lạnh như băng và sau đó được ly giải bằng cách sử dụng dung dịch đệm xét nghiệm ức chế miễn dịch phóng xạ có chứa chất ức chế protease và chất ức chế phosphatase.Sau khi định lượng protein bằng bộ xét nghiệm protein tổng số, 30 μg protein trong mỗi mẫu được phân tách bằng 12% SDS-PAGE và chuyển sang màng PVDF bằng phương pháp điện di.Màng được chặn bằng sữa gầy 5% và được ủ với kháng thể chính qua đêm ở 4°C.Sau khi ủ với kháng thể thứ cấp liên hợp peroxidase cải ngựa, thuốc thử phát quang hóa nâng cao được thêm vào để hiển thị tín hiệu liên kết.Cường độ của từng dải protein được định lượng bằng phần mềm ImageJ.
Phần mềm GraphPad Prism 7.0 được sử dụng để phân tích tất cả dữ liệu, được biểu thị bằng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn.Sự khác biệt giữa các nhóm điều trị được đánh giá bằng cách sử dụng bài kiểm tra t của Sinh viên hoặc phân tích phương sai một chiều, với giá trị P <0,05 cho thấy ý nghĩa thống kê.
Tất cả dữ liệu thu được hoặc phân tích trong nghiên cứu này đều được bao gồm trong bài báo được xuất bản này và các tệp thông tin bổ sung.
Thống kê về ung thư phổi của Torre, LA, Siegel, RL và Jemal, A..trạng từ.Hết hạn.thuốc.sinh vật học.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Chất gây ung thư thuốc lá, dấu ấn sinh học của chúng và bệnh ung thư do thuốc lá gây ra.Nat.Tuyên úy ung thư.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH và Venitt, S. DNA và protein bổ sung vào mô người do tiếp xúc với khói thuốc lá.tính quốc tế.J. Ung thư.131, 2733–2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA và Yu M. Tác dụng của Houttuynia cordata và silibinin đối với bệnh u phổi do benzo(a)pyrene gây ra ở chuột A/J.Ung thư 7, 1053–1057 (2005).
Tang, W. và cộng sự.Sản phẩm tự nhiên chống ung thư được phân lập từ dược liệu Trung Quốc.hàm.thuốc.6, 27 (2011).
Yang, Y. và cộng sự.Hiệu quả của polyphenon E, nhân sâm đỏ và rapamycin đối với bệnh u phổi do benzo(a)pyrene gây ra ở chuột A/J.Ung thư 8, 52–58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS và Yuan, KS Red, tham gia vào liệu pháp điều trị ung thư.hàm.J. Nutt.thuốc.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS và Gao, L. Ginsenosides trong rễ và lá của nhân sâm Mỹ.J. Agric.Hóa học thực phẩm.44, 717–720 (1996).
Attele AS, Wu JA và Yuan KS Dược lý nhân sâm: nhiều thành phần, nhiều tác dụng.hóa sinh.dược lý học.58, 1685–1693 (1999).
Thời gian đăng: 17-09-2023