O ṣeun fun lilo si Nature.com.Ẹya ẹrọ aṣawakiri ti o nlo ni atilẹyin CSS lopin.Fun awọn abajade to dara julọ, a ṣeduro lilo ẹya tuntun ti aṣawakiri rẹ (tabi pipa ipo ibaramu ni Internet Explorer).Lakoko, lati rii daju atilẹyin ti nlọ lọwọ, a n ṣafihan aaye naa laisi aṣa tabi JavaScript.
A ti lo ginseng pupa ni oogun Asia ibile fun awọn ọgọọgọrun ọdun.Ninu iwadi yii, a ṣe ayẹwo agbara awọn oriṣi mẹrin ti ginseng pupa (ginseng pupa Kannada, ginseng pupa Korean, ginseng pupa Korean, ati ginseng pupa Korean) ti o dagba ni awọn agbegbe oriṣiriṣi lati ṣe idiwọ dida ati idagbasoke ti ẹdọfóró carcinogen. èèmọ.Idanwo benzo (a) pyrene (B (a) P) ni a ṣe lori awọn eku A/J, ati pe ginseng pupa ti Korea ni a rii pe o munadoko julọ ni idinku iwuwo tumo laarin awọn oriṣiriṣi ginseng pupa mẹrin.Ni afikun, a ṣe atupale awọn akoonu ti awọn oriṣiriṣi ginsenosides (Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ati Rg5) ni awọn ayokuro ginseng pupa mẹrin ati rii pe ginseng pupa Korean ti ni. awọn ipele ti o ga julọ ti ginsenoside Rg3 (G-Rg3), ni iyanju pe G-Rg3 le ṣe ipa pataki ninu ipa itọju ailera rẹ.Iṣẹ yii fihan pe G-Rg3 ni bioavailability kekere jo.Bibẹẹkọ, nigbati G-Rg3 ti ni idapo pẹlu P-gp inhibitor verapamil, itujade ti G-Rg3 sinu awọn sẹẹli Caco-2 ti dinku, oṣuwọn gbigba ifun ti G-Rg3 ti pọ si ni awoṣe eku, ati G-Rg3. ti pọ si.Ninu awọn sẹẹli Caco-2, iṣan jade ti Rg3 dinku, ati ipele ti ifọkansi Rg3 dinku.G-Rg3 ti pọ si ninu ifun ati pilasima, ati pe agbara rẹ lati ṣe idiwọ awọn èèmọ tun jẹ imudara ni awoṣe eku ti B (a) tumorigenesis ti o fa P.A tun rii pe G-Rg3 dinku B (a) cytotoxicity P-induced ati DNA adduct formation ni awọn sẹẹli ẹdọfóró eniyan, o si tun mu ikosile ati iṣẹ ṣiṣe ti awọn enzymu alakoso II pada nipasẹ ọna Nrf2, eyiti o le ni ibatan si ọna ṣiṣe ti o pọju ti iṣe. ti G idinamọ -Rg3..Nipa iṣẹlẹ ti ẹdọfóró èèmọ.Iwadii wa ṣe afihan ipa pataki ti o lagbara fun G-Rg3 ni idojukọ awọn èèmọ ẹdọfóró ni awọn awoṣe asin.Bioavailability oral ti ginsenoside yii jẹ imudara nipasẹ ìfọkànsí P-glycoprotein, gbigba moleku lati mu awọn ipa anticancer ṣiṣẹ.
Iru akàn ẹdọfóró ti o wọpọ julọ jẹ akàn ẹdọfóró ti kii-kekere kekere (NSCLC), eyiti o jẹ ọkan ninu awọn okunfa akọkọ ti iku alakan ni China ati North America1,2.Ohun akọkọ ti o mu ki eewu ti dagbasoke akàn ẹdọfóró ti kii ṣe kekere jẹ mimu siga.Ẹfin siga ni diẹ ẹ sii ju 60 carcinogens, pẹlu benzo(a) pyrene (B(a)P), nitrosamines, ati ipanilara isotopes lati ibajẹ ti radon.3 Polycyclic aromatic hydrocarbons B(a)P ni akọkọ idi ti majele ninu siga ẹfin.Lori ifihan si B (a) P, cytochrome P450 yipada si B (a) P-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), eyiti o ṣe atunṣe pẹlu DNA lati ṣe BPDE-DNA adduct 4. Pẹlupẹlu, awọn wọnyi adducts jeki tumorigenesis ẹdọfóró ni eku pẹlu tumo ipele ati histopathology iru si eda eniyan èèmọ ẹdọfóró5.Ẹya yii jẹ ki awoṣe akàn ẹdọfóró ti B (a) P jẹ eto ti o yẹ fun iṣiroye awọn agbo ogun pẹlu awọn ohun-ini anticancer ti o ṣeeṣe.
Ilana kan ti o ṣee ṣe lati ṣe idiwọ idagbasoke ti akàn ẹdọfóró ni awọn ẹgbẹ ti o ni eewu giga, paapaa awọn ti nmu taba, ni lilo awọn aṣoju chemopreventive lati dinku idagbasoke awọn ọgbẹ neoplastic intraepithelial ati nitorinaa ṣe idiwọ lilọsiwaju wọn atẹle si aiṣedeede.Awọn ijinlẹ ẹranko fihan pe ọpọlọpọ awọn aṣoju chemopreventive jẹ doko6.Ijabọ wa ti tẹlẹ7 ṣe afihan awọn ipa idena to dara ti ginseng pupa lori akàn ẹdọfóró.A ti lo ewebe yii fun awọn ọgọrun ọdun ni oogun Asia ibile lati pẹ igbesi aye ati ilera, ati pe o ti ni akọsilẹ lati ni awọn ipa antitumor8.
Ipinnu ti nṣiṣe lọwọ ti ginseng jẹ ginsenoside, eyiti a lo bi ami ami akojọpọ lati ṣe iṣiro didara awọn ayokuro ginseng.Iṣiro pipo ti awọn ayokuro ginseng robi ni igbagbogbo pẹlu lilo awọn ginsenosides pupọ, pẹlu RK1, Rg1, F1, Re, Rb1, Rb2, Rb3, Rd, Rh1, Rh2, Rg3, Rg5, ati Rc9,10.Ginsenosides ni lilo ile-iwosan kekere nitori aibikita ẹnu wọn ti ko dara pupọ11.Botilẹjẹpe ilana fun aini bioavailability yii ko han gbangba, itujade ti ginsenosides ti o ṣẹlẹ nipasẹ P-glycoprotein (P-gp) 12 le jẹ idi.P-gp jẹ ọkan ninu awọn olutọpa efflux ti o ṣe pataki julọ ni superfamily gbigbe kasẹti abuda ATP, eyiti o nlo agbara ti ATP hydrolysis lati tu awọn nkan inu sẹẹli sinu agbegbe ita.Awọn gbigbe P-gp ni igbagbogbo pin kaakiri ni ifun, kidinrin, ẹdọ ati idena ọpọlọ-ẹjẹ13.P-gp ṣe ipa to ṣe pataki ni gbigba ifun inu, ati idinamọ P-gp mu gbigba ẹnu ati wiwa diẹ ninu awọn oogun anticancer12,14.Awọn apẹẹrẹ ti awọn inhibitors ti a lo tẹlẹ ninu awọn iwe-iwe jẹ verapamil ati cyclosporine A15.Iṣẹ yii jẹ pẹlu idasile eto asin fun kikọ ẹkọ B (a) P-induced akàn ẹdọfóró lati ṣe iṣiro agbara ti awọn oriṣiriṣi ginseng pupa lati China ati Koria lati ni ipa awọn aarun buburu.Awọn ayokuro ni a ṣe atupale ni ọkọọkan lati ṣe idanimọ awọn ginsenosides kan pato ti o le ni ipa lori carcinogenesis.Verapamil lẹhinna ni a lo lati fojusi P-gp ati ilọsiwaju bioavailability ti ẹnu ati imunadoko itọju ti awọn ginsenosides ìfọkànsí akàn.
Ilana nipasẹ eyiti ginseng saponins ṣe awọn ipa itọju ailera lori carcinogenesis ko ṣiyemọ.Iwadi ti fihan pe ọpọlọpọ awọn ginsenosides le dinku ibajẹ DNA ti o fa nipasẹ awọn carcinogens nipa idinku aapọn oxidative ati mimuuṣiṣẹpọ awọn enzymu detoxification alakoso II, nitorinaa idilọwọ ibajẹ sẹẹli.Glutathione S-transferase (GST) jẹ enzymu alakoso II aṣoju ti o nilo lati dinku ibajẹ DNA ti o fa nipasẹ carcinogens17.Nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) jẹ ifosiwewe transcription pataki ti o ṣe ilana redox homeostasis ati mu ikosile ti awọn enzymu alakoso II ati awọn idahun antioxidant cytoprotective18 ṣiṣẹ.Iwadii wa tun ṣe ayẹwo awọn ipa ti awọn ginsenosides ti a mọ lori idinku B (a) P-induced cytotoxicity ati BPDE-DNA adduct formation, bakannaa fifun awọn enzymu alakoso II nipasẹ iyipada ọna Nrf2 ni awọn sẹẹli ẹdọfóró deede.
Idasile ti awoṣe Asin ti B(a) akàn ti o fa P ni ibamu pẹlu iṣẹ iṣaaju5.Nọmba 1A ṣe afihan apẹrẹ idanwo ti itọju ọsẹ 20 kan ti awoṣe akàn asin ti a fa nipasẹ B (a) P, omi (Iṣakoso), jade ginseng pupa Kannada (CRG), jade ginseng pupa Korean A (KRGA), ati pupa Korean ginseng.Jade B (KRGB) ati Korean Red Ginseng Extract C (KRGC).Lẹhin awọn ọsẹ 20 ti itọju ginseng pupa, awọn eku ti rubọ nipasẹ CO2 asphyxiation.Olusin 1B fihan macroscopic ẹdọfóró èèmọ ni eranko mu pẹlu yatọ si orisi ti pupa ginseng, ati Figure 1C fihan a aṣoju ina micrograph ti a tumo ayẹwo.Ẹru tumo ti awọn ẹranko ti a ṣe itọju KRGB (1.5 ± 0.35) kere ju ti awọn ẹranko iṣakoso (0.82 ± 0.2, P <0.05), bi a ṣe han ni Figure 1D.Iwọn apapọ ti idinamọ fifuye tumo jẹ 45%.Awọn ayokuro ginseng pupa miiran ti a ṣe idanwo ko ṣe afihan iru awọn ayipada pataki ni ẹru tumo (P> 0.05).Ko si awọn ipa ẹgbẹ ti o han gbangba ti a ṣe akiyesi ni awoṣe Asin lakoko awọn ọsẹ 20 ti itọju ginseng pupa, pẹlu ko si iyipada ninu iwuwo ara (data ko han) ati pe ko si ẹdọ tabi eero kidinrin (Nọmba 1E, F).
Pupa ginseng jade ṣe itọju idagbasoke tumo ẹdọfóró ni awọn eku A/J.(A) Apẹrẹ adanwo.(B) Awọn èèmọ ẹdọfóró nla ni awoṣe Asin.Awọn èèmọ jẹ itọkasi nipasẹ awọn ọfa.a: Chinese pupa ginseng ẹgbẹ.b: ẹgbẹ A ti Korean pupa ginseng.c: Korean pupa ginseng ẹgbẹ B. d: Korean pupa ginseng ẹgbẹ C. d: Iṣakoso ẹgbẹ.(C) Micrograph ina ti o nfihan tumo ẹdọfóró kan.Imugboroosi: 100. b: 400. (D) Ẹru Tumor ni ẹgbẹ ginseng pupa.(E) Awọn ipele pilasima ti enzymu ẹdọ ALT.(F) Awọn ipele pilasima ti henensiamu kidirin Cr.Data ti wa ni kosile bi itumo ± boṣewa iyapa.*P <0.05.
Awọn ayokuro ginseng pupa ti a damọ ninu iwadi yii ni a ṣe atupale nipasẹ iṣẹ-ṣiṣe ultra-performance omi chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) lati ṣe iwọn awọn ginsenosides wọnyi: Rg1, Re, Rc, Rb2, Rb3, Rb1, Rh1, Rd, Rg3, Rh2, F1, Rk1 ati Rg5.Awọn ipo UPLC ati MS ti a lo lati wiwọn awọn itupalẹ ni a ṣe apejuwe ninu ijabọ iṣaaju19.UPLC-MS/MS chromatograms ti awọn ayokuro ginseng pupa mẹrin ti han ni Nọmba 2A.Awọn iyatọ nla wa ni apapọ akoonu ginsenoside, pẹlu akoonu ginsenoside ti o ga julọ ni CRG (590.27 ± 41.28 μmol / L) (Figure 2B).Nigbati o ba ṣe ayẹwo awọn ginsenosides kọọkan (Nọmba 2C), KRGB fihan ipele ti o ga julọ ti G-Rg3 ni akawe si awọn ginsenosides miiran (58.33 ± 3.81 μmol / L fun G-Rg3s ati 41.56 ± 2.88 μmol / L fun G -Rg3r).L.Iru ginseng pupa (P <0.001).G-Rg3 waye bi bata ti stereoisomers G-Rg3r ati G-Rg3s, eyiti o yatọ ni ipo ti ẹgbẹ hydroxyl ni erogba 20 (Fig. 2D).Awọn abajade fihan pe G-Rg3r tabi G-Rg3 le ni agbara anticancer pataki ninu awoṣe Asin akàn ti B (a) P.
Akoonu ti awọn ginsenosides ni ọpọlọpọ awọn ayokuro ginseng pupa.(A) UPLC-MS/MS chromatograms ti awọn ayokuro ginseng pupa mẹrin.(B) Iṣiro ti akoonu ginsenoside lapapọ ninu awọn ayokuro ti a fihan.(C) Wiwa ti awọn ginsenosides kọọkan ni awọn iyọkuro ti o ni aami.(D) Awọn ilana ti ginsenoside stereoisomers G-Rg3r ati G-Rg3s.Data ti wa ni kosile bi aropin ± boṣewa iyapa ti awọn ipinnu mẹta.***P <0.001.
Iwadi UPLC-MS/MS nilo titobi awọn ginsenosides ninu ifun ati awọn ayẹwo ẹjẹ lẹhin ọsẹ 20 ti itọju.Itọju pẹlu KRGB fihan wiwa nikan 0.0063 ± 0.0005 μg/ml Rg5 ninu ẹjẹ.Ko si awọn ginsenosides ti o ku ti a rii, ti o nfihan bioavailability oral ti ko dara ati nitorinaa idinku ifihan si awọn ginsenosides wọnyi.
Laini sẹẹli adenocarcinoma oluṣafihan Caco-2 jẹ morphologically ati biochemically ti o jọra si awọn sẹẹli epithelial ifun eniyan, ti n ṣe afihan iwulo rẹ ni iṣiro gbigbe gbigbe enterocyte kọja idena epithelial ifun.Itupalẹ yii da lori iwadi iṣaaju 20.Awọn eeya 3A, B,C,D,E,F ṣe afihan awọn aworan aṣoju ti gbigbe transcellular ti G-Rg3r ati G-Rg3 ni lilo awoṣe monolayer Caco-2.Gbigbe transcellular ti G-Rg3r tabi G-Rg3 kọja awọn monolayers Caco-2 lati basolateral si ẹgbẹ apical (Pb-a) jẹ pataki ti o ga ju lati apical si ẹgbẹ basolateral (Pa-b).Fun G-Rg3r, iye Pa-b ti o tumọ jẹ 0.38 ± 0.06, eyiti o pọ si 0.73 ± 0.06 lẹhin itọju pẹlu 50 μmol / L verapamil ati si 1.14 ± 0.09 lẹhin itọju pẹlu 100 μmol / L verapamil (p <0.01) lẹsẹsẹ;3A).Awọn akiyesi fun G-Rg3 tẹle ilana ti o jọra (Fig. 3B), ati awọn esi fihan pe itọju verapamil ṣe ilọsiwaju gbigbe ti G-Rg3r ati G-Rg3.Itọju Verapamil tun yorisi idinku ti o pọju ni Pb-a ati G-Rg3r ati G-Rg3s efflux ratios (Nọmba 3C, D, E, F), ti o fihan pe itọju verapamil dinku akoonu ginsenoside ni awọn sẹẹli Caco-2 efflux..
Gbigbe transcellular ti G-Rg3 ni awọn monolayers Caco-2 ati gbigba ifun inu ninu idanwo perfusion eku kan.(A) Pa-b iye ti G-Rg3r ẹgbẹ ni Caco-2 monolayer.(B) Pa-b iye ti G-Rg3s awọn ẹgbẹ ni Caco-2 monolayer.(C) Pb iye ti G-Rg3r ẹgbẹ ni Caco-2 monolayer.(D) Pb iye ti G-Rg3s awọn ẹgbẹ ni Caco-2 monolayer.(E) Iwọn ikore ti awọn ẹgbẹ G-Rg3r ni monolayer Caco-2 kan.(F) Iwọn ikore ti awọn ẹgbẹ G-Rg3 ni monolayer Caco-2 kan.(G) Ogorun gbigba ifun ti G-Rg3r ni idanwo perfusion ninu awọn eku.(H) Ogorun gbigba ifun ti G-Rg3 ni idanwo perfusion ninu awọn eku.Permeability ati gbigba ni a ṣe afiwe laisi afikun ti verapamil.Data ti wa ni kosile bi awọn tumosi ± boṣewa iyapa ti marun ominira adanwo.* P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001.
Ni ibamu pẹlu iṣẹ iṣaaju 20, perfusion intestinal orthotopic ti awọn eku ni a ṣe lati pinnu boya gbigba G-Rg3 ninu ifun pọ si lẹhin itọju verapamil.Awọn eeya 3G,H ṣe afihan awọn idanwo perfusion aṣoju lati ṣe iṣiro ipin ogorun gbigba ifun ti G-Rg3r ati G-Rg3 ninu awọn eku awoṣe alakan lakoko awọn akoko akoko loke.Iwọn akọkọ ti gbigbe G-Rg3r alailagbara ti isunmọ 10% pọ si diẹ sii ju 20% lẹhin itọju pẹlu 50 μM verapamil ati si diẹ sii ju 25% lẹhin itọju pẹlu 100 μM verapamil.Bakanna, G-Rg3, eyiti o ni igbasilẹ akọkọ ti 10%, tun fihan pe o ga ju 20% lẹhin itọju pẹlu 50 μM verapamil ati pe o fẹrẹ to 30% lẹhin itọju pẹlu 100 μM verapamil, ni iyanju pe idinamọ P-gp nipasẹ verapamil. ifun G-gbigba Rg3 ni awoṣe Asin ti akàn ẹdọfóró.
Gẹgẹbi ọna ti o wa loke, awọn eku awoṣe alakan ti B (a) P ti pin laileto si awọn ẹgbẹ mẹfa, bi o ṣe han ni Nọmba 4A.Ko si pipadanu iwuwo pataki tabi awọn ami ile-iwosan ti majele ti a ṣe akiyesi ni ẹgbẹ itọju G-Rg3 ni akawe si ẹgbẹ iṣakoso (data ko han).Lẹhin ọsẹ 20 ti itọju, awọn ẹdọforo ti Asin kọọkan ni a gba.Nọmba 4B fihan awọn èèmọ ẹdọfóró macroscopic ninu awọn eku ninu awọn ẹgbẹ itọju ti o wa loke, ati Nọmba 4C ṣe afihan micrograph ina aṣoju ti tumo aṣoju.Nipa ẹru tumo ni ẹgbẹ kọọkan (Fig. 4D), awọn iye fun awọn eku ti a tọju pẹlu G-Rg3r ati G-Rg3s jẹ 0.75 ± 0.29 mm3 ati 0.81 ± 0.30 mm3, lẹsẹsẹ, lakoko ti awọn iye fun G Eku ṣe itọju. pẹlu -Rg3s wà 1,63 lẹsẹsẹ ± 0,40 mm3.eku iṣakoso (p <0.001), ti o fihan pe itọju G-Rg3 dinku ẹru tumo ninu awọn eku.Isakoso ti verapamil siwaju ni ilọsiwaju idinku yii: awọn iye ninu awọn eku verapamil + G-Rg3r dinku lati 0.75 ± 0.29 mm3 si 0.33 ± 0.25 mm3 (p <0.01), ati awọn iye fun verapamil + lati 0.81 ± 0.30 ± 2.2 dinku si mm3 ninu awọn eku ti a ṣe itọju G. -Rg3s (p <0.05), ti o nfihan pe verapamil le mu ipa idinamọ ti G-Rg3 pọ si lori tumorigenesis.Ẹru Tumor ko ṣe afihan awọn iyatọ pataki laarin ẹgbẹ iṣakoso ati ẹgbẹ verapamil, ẹgbẹ G-Rg3r ati ẹgbẹ G-Rg3s, ati ẹgbẹ verapamil + G-Rg3r ati ẹgbẹ verapamil + G-Rg3s.Pẹlupẹlu, ko si ẹdọ pataki tabi majele ti kidinrin ti o ni nkan ṣe pẹlu awọn itọju ti a ṣe ayẹwo (Aworan 4E,F).
Ẹru tumo lẹhin itọju G-Rg3 ati pilasima tabi ifun G-Rg3r ati awọn ipele G-Rg3 ni awọn ẹgbẹ ti a fihan.(A) Apẹrẹ adanwo.(B) Makiroscopic èèmọ ni a Asin awoṣe.Awọn èèmọ jẹ itọkasi nipasẹ awọn ọfa.a: G-Rg3r.b:G-Rg3s.c: G-Rg3r ni apapo pẹlu verapamil.d: G-Rg3 ni apapo pẹlu verapamil.d: Verapamil.e: idari.(C) Micrograph opitika ti tumo ni titobi.Idahun: 100x.b:400X.(D) Ipa ti G-Rg3 + itọju verapamil lori ẹru tumo ninu awọn eku A/J.(E) Awọn ipele pilasima ti enzymu ẹdọ ALT.(F) Awọn ipele pilasima ti henensiamu kidirin Cr.(G) Awọn ipele pilasima ti G-Rg3r tabi G-Rg3 ti awọn ẹgbẹ itọkasi.(H) Awọn ipele ti G-Rg3r tabi G-Rg3s ninu awọn ifun ti awọn ẹgbẹ itọkasi.Data ti wa ni kosile bi aropin ± boṣewa iyapa ti awọn ipinnu mẹta.* P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001.
Awọn ipele G-Rg3 ninu awọn eku awoṣe akàn ti B (a) P ti a ṣe ayẹwo nipasẹ UPLC-MS / MS lẹhin akoko itọju ọsẹ 20 ni ibamu si ọna ti a ṣe apejuwe ni apakan Awọn ọna.Awọn eeya 4G ati H ṣe afihan pilasima ati awọn ipele G-Rg3 oporoku, lẹsẹsẹ.Awọn ipele Plasma G-Rg3r jẹ 0.44 ± 0.32 μmol/L ati pe o pọ si 1.17 ± 0.47 μmol/L pẹlu iṣakoso concomitant ti verapamil (p <0.001), lakoko ti awọn ipele G-Rg3r oporoku jẹ 0.53 ± 0.08 .µl.Nigbati a ba ni idapo pẹlu verapamil, g pọ si 1.35 ± 0.13 μg/g (p <0.001).Fun G-Rg3, awọn abajade tẹle ilana ti o jọra, ti o fihan pe itọju verapamil pọ si bioavailability oral ti G-Rg3 ni awọn eku A / J.
Ayẹwo ṣiṣeeṣe sẹẹli ni a lo lati ṣe iṣiro cytotoxicity ti B(a) P ati G-Rg3 lori awọn sẹẹli hEL.Awọn cytotoxicity ti o fa nipasẹ B (a) P ninu awọn sẹẹli hEL jẹ afihan ni Nọmba 5A, lakoko ti awọn ohun-ini ti kii ṣe majele ti G-Rg3r ati G-Rg3 ti han ni Awọn nọmba 5A ati 5B.5B, C. Lati ṣe iṣiro ipa cytoprotective ti G-Rg3, B (a) P ni a ṣe pẹlu ọpọlọpọ awọn ifọkansi ti G-Rg3r tabi G-Rg3 sinu awọn sẹẹli hEL.Gẹgẹbi a ṣe han ni Nọmba 5D, G-Rg3r ni awọn ifọkansi ti 5 μM, 10 μM, ati 20 μM mu pada ṣiṣeeṣe sẹẹli pada si 58.3%, 79.3%, ati 77.3%, lẹsẹsẹ.Awọn abajade ti o jọra tun le rii ni ẹgbẹ G-Rg3s.Nigbati awọn ifọkansi ti G-Rg3s jẹ 5 µM, 10 µM ati 20 µM, ṣiṣeeṣe sẹẹli ti tun pada si 58.3%, 72.7% ati 76.7%, lẹsẹsẹ (Figure 5E) .).Iwaju BPDE-DNA adducts ni a wọn nipa lilo ohun elo ELISA kan.Awọn abajade wa fihan pe awọn ipele idawọle BPDE-DNA ti pọ si ni ẹgbẹ B (a) P ti a ṣe afiwe pẹlu ẹgbẹ iṣakoso, ṣugbọn akawe pẹlu G-Rg3 àjọ-itọju, BPDE-DNA adduct awọn ipele ni ẹgbẹ B (a) P. B ninu ẹgbẹ ti a tọju, awọn ipele DNA adduct dinku ni pataki.Awọn abajade ti itọju pẹlu B (a) P nikan ni a fihan ni Nọmba 5F (1.87 ± 0.33 vs. 3.77 ± 0.42 fun G-Rg3r, 1.93 ± 0.48 vs. 3.77 ± 0.42 fun G -Rg3s, p <0.001).
Ṣiṣe ṣiṣeeṣe sẹẹli ati BPDE-DNA adduct didasilẹ ninu awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu G-Rg3 ati B (a) P.(A) Agbara ti awọn sẹẹli HEL ti a tọju pẹlu B(a) P.(B) Agbara ti awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu G-Rg3r.(C) Agbara ti awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu G-Rg3.(D) Agbara ti awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3r.(E) Iṣeṣe ti awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3.(F) Awọn ipele ti BPDE-DNA adduct ni awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3.Data ti wa ni kosile bi aropin ± boṣewa iyapa ti awọn ipinnu mẹta.* P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001.
GST enzymu ikosile ni a rii lẹhin itọju apapọ pẹlu 10 μM B(a) P ati 10 μM G-Rg3r tabi G-Rg3s.Awọn abajade wa fihan pe B (a) P ti tẹnu GST ikosile (59.7 ± 8.2% ninu ẹgbẹ G-Rg3r ati 39 ± 4.5% ninu ẹgbẹ G-Rg3s), ati B (a) P ni nkan ṣe pẹlu boya pẹlu G-Rg3r. , tabi pẹlu G-Rg3r, tabi pẹlu G-Rg3r.Itọju-itọju pẹlu G-Rg3s imupadabọ ikosile GST.GST ikosile (103.7 ± 15.5% ni ẹgbẹ G-Rg3r ati 110 ± 11.1% ninu ẹgbẹ G-Rg3s, p <0.05 ati p <0.001, lẹsẹsẹ, 6A, B, ati C).Iṣẹ ṣiṣe GST ni a ṣe ayẹwo nipa lilo ohun elo idanwo iṣẹ kan.Awọn abajade wa fihan pe ẹgbẹ itọju apapọ ni iṣẹ GST ti o ga julọ ni akawe si ẹgbẹ B (a) P nikan (96.3 ± 6.6% vs. 35.7 ± 7.8% ninu ẹgbẹ G-Rg3r vs. 92.3 ± 6.5 ni ẹgbẹ G-Rg3r ).% vs 35.7 ± 7.8% ninu ẹgbẹ G-Rg3s, p <0.001, Nọmba 6D).
Ifihan ti GST ati Nrf2 ninu awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3.(A) Wiwa ti GST ikosile nipa Western blotting.(B) Ifitonileti pipo ti GST ninu awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3r.(C) Ikosile pipo ti GST ninu awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3s.(D) Iṣẹ ṣiṣe GST ninu awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3.(E) Iwari ti Nrf2 ikosile nipasẹ Western blotting.(F) Ifitonileti pipo ti Nrf2 ninu awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3r.(G) Ifitonileti pipo ti Nrf2 ninu awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3s.Data ti wa ni kosile bi aropin ± boṣewa iyapa ti awọn ipinnu mẹta.* P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001.
Lati ṣe alaye awọn ipa ọna ti o wa ninu G-Rg3-mediated suppression of B (a) P-induced tumorigenesis, Nrf2 ikosile ni a ṣe ayẹwo nipasẹ Western blotting.Gẹgẹbi a ṣe han ni Awọn nọmba 6E, F, G, ni akawe pẹlu ẹgbẹ iṣakoso, ipele Nrf2 nikan ni ẹgbẹ itọju B (a) P ti dinku;sibẹsibẹ, ni akawe pẹlu ẹgbẹ itọju B (a) P, B (a) awọn ipele Nrf2 ninu ẹgbẹ PG-Rg3 ti pọ si (106 ± 9.5% fun G-Rg3r vs. 51.3 ± 6.8%, 117 ± 6. 2% fun G-Rg3r la 41 ± 9.8% fun G-Rg3s, p <0.01).
A jẹrisi ipa idena ti Nrf2 nipa didasilẹ ikosile Nrf2 nipa lilo RNA kikọlu kekere kan pato (siRNA).Nrf2 knockdown ti fi idi rẹ mulẹ nipasẹ didi Oorun (Fig. 7A, B).Gẹgẹbi a ṣe han ni Awọn nọmba 7C, D, itọju-itọju ti awọn sẹẹli hEL pẹlu B (a) P ati G-Rg3 yorisi idinku ninu nọmba BPDE-DNA adducts (1.47 ± 0.21) ni akawe si itọju pẹlu B (a) P nikan ni ẹgbẹ siRNA iṣakoso.) G-Rg3r jẹ 4.13 ± 0.49, G-Rg3s jẹ 1.8 ± 0.32 ati 4.1 ± 0.57, p <0.01).Sibẹsibẹ, ipa idinamọ ti G-Rg3 lori didasilẹ BPDE-DNA ti parẹ nipasẹ Nrf2 knockdown.Ninu ẹgbẹ siNrf2, ko si iyatọ pataki ni BPDE-DNA adduct formation laarin B (a) P ati G-Rg3 àjọ-itọju ati B (a) P itọju nikan (3.0 ± 0.21 fun G-Rg3r vs. 3.56 ± 0.32). ).fun G-Rg3r dipo 3.6 fun G-Rg3s dipo ± 0.45 dipo 4.0 ± 0.37, p> 0.05).
Ipa ti Nrf2 knockdown lori BPDE-DNA adduct didasilẹ ni awọn sẹẹli hEL.(A) Nrf2 knockdown jẹ timo nipasẹ Western blotting.(B) Iṣiro ti kikankikan ẹgbẹ Nrf2.(C) Ipa ti Nrf2 knockdown lori BPDE-DNA adduct awọn ipele ni awọn sẹẹli hel ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3r.(D) Ipa ti Nrf2 knockdown lori BPDE-DNA adduct awọn ipele ni awọn sẹẹli hEL ti a tọju pẹlu B (a) P ati G-Rg3.Data ti wa ni kosile bi aropin ± boṣewa iyapa ti awọn ipinnu mẹta.* P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001.
Iwadi yii ṣe iṣiro awọn ipa idena ti ọpọlọpọ awọn ayokuro ginseng pupa lori awoṣe Asin ti B (a) akàn ẹdọfóró ti o fa, ati itọju KRGB dinku iwuwo tumo.Ti o ṣe akiyesi pe G-Rg3 ni akoonu ti o ga julọ ninu ginseng jade, ipa pataki ti ginsenoside yii ni idinamọ tumorigenesis ti ṣe iwadi.Mejeeji G-Rg3r ati G-Rg3 (awọn epimers meji ti G-Rg3) dinku iwuwo tumo ni pataki ni awoṣe Asin ti B (a) akàn ti o fa P.G-Rg3r ati G-Rg3 n ṣe awọn ipa anticancer nipasẹ didimu apoptosis ti awọn sẹẹli tumo21, idinamọ idagbasoke tumo22, mimu sẹẹli cycle23 ati ni ipa lori angiogenesis24.G-Rg3 tun ti han lati ṣe idiwọ metastasis cellular25, ati agbara ti G-Rg3 lati mu awọn ipa ti chemotherapy ati radiotherapy ti ni akọsilẹ26,27.Poon et al ṣe afihan pe itọju G-Rg3 le dinku awọn ipa genotoxic ti B (a) P28.Iwadi yii ṣe afihan agbara itọju ailera ti G-Rg3 ni idojukọ awọn ohun elo carcinogenic ayika ati idilọwọ akàn.
Pelu agbara prophylactic ti o dara wọn, ailagbara ẹnu bioavailability ti ginsenosides jẹ ipenija fun lilo ile-iwosan ti awọn ohun elo wọnyi.Iwadii elegbogi ti iṣakoso ẹnu ti awọn ginsenosides ninu awọn eku fihan pe bioavailability rẹ tun kere ju 5%29.Awọn idanwo wọnyi fihan pe lẹhin akoko itọju ọsẹ 20, awọn ipele ẹjẹ nikan ti Rg5 dinku.Botilẹjẹpe ẹrọ ti o wa ni ipilẹ ti ko dara bioavailability wa lati ṣe alaye, P-gp ni a ro pe o ni ipa ninu itujade ti awọn ginsenosides.Iṣẹ yii ṣe afihan fun igba akọkọ ti iṣakoso ti verapamil, P-gp blocker, mu alekun bioavailability oral ti G-Rg3r ati G-Rg3s.Nitorinaa, wiwa yii ni imọran pe G-Rg3r ati G-Rg3s ṣiṣẹ bi awọn sobusitireti ti P-gp lati ṣe ilana imujade rẹ.
Iṣẹ yii ṣe afihan pe itọju apapọ pẹlu verapamil ṣe alekun bioavailability oral ti G-Rg3 ni awoṣe Asin ti akàn ẹdọfóró.Wiwa yii jẹ atilẹyin nipasẹ gbigbe gbigbe transcellular oporoku ti G-Rg3 lori idena P-gp, nitorinaa jijẹ gbigba rẹ.Awọn ayẹwo ni awọn sẹẹli Caco2 fihan pe itọju verapamil dinku itujade ti G-Rg3r ati G-Rg3s lakoko ti o mu ilọsiwaju ti membran.Iwadi nipasẹ Yang et al.Awọn ẹkọ-ẹkọ ti fihan pe itọju pẹlu cyclosporine A (pipade P-gp miiran) ṣe alekun bioavailability ti ginsenoside Rh2 lati iye ipilẹ ti 1% 20 si diẹ sii ju 30%.Awọn agbo ogun Ginsenosides K ati Rg1 tun fihan iru awọn abajade30,31.Nigbati verapamil ati cyclosporin A ni a ṣe ni apapọ, ifasilẹ ti yellow K ninu awọn sẹẹli Caco-2 ti dinku ni pataki lati 26.6 si kere ju 3, lakoko ti awọn ipele intracellular rẹ pọ si 40-fold30.Ni iwaju verapamil, awọn ipele Rg1 pọ si ni awọn sẹẹli epithelial ẹdọfóró eku, ni imọran ipa kan fun P-gp ni efflux ginsenoside, bi a ti fihan nipasẹ Meng et al.31.Sibẹsibẹ, verapamil ko ni ipa kanna lori itujade ti diẹ ninu awọn ginsenosides (gẹgẹbi Rg1, F1, Rh1 ati Re), ti o fihan pe wọn ko ni ipa nipasẹ awọn sobusitireti P-gp, bi a ti fihan nipasẹ Liang et al.32 .Akiyesi yi le jẹ ibatan si ilowosi ti awọn olutọpa miiran ati awọn ẹya ginsenoside miiran.
Ilana ti ipa idena ti G-Rg3 lori alakan jẹ koyewa.Awọn ẹkọ iṣaaju ti fihan pe G-Rg3 ṣe idilọwọ ibajẹ DNA ati apoptosis nipasẹ idinku aapọn oxidative ati igbona16,33, eyiti o le jẹ ilana ti o wa ni ipilẹ fun idilọwọ awọn tumorigenesis ti B (a) P-induced.Diẹ ninu awọn ijabọ fihan pe genotoxicity ti o fa nipasẹ B(a) P le dinku nipasẹ iyipada awọn enzymu alakoso II lati ṣe agbekalẹ BPDE-DNA34.GST jẹ enzymu alakoso II aṣoju ti o ṣe idiwọ idasile BPDE-DNA adduct nipa igbega sisopọ GSH si BPDE, nitorina o dinku ibajẹ DNA ti o fa nipasẹ B (a) P35.Awọn abajade wa fihan pe itọju G-Rg3 dinku cytotoxicity ti B (a) P-induced ati BPDE-DNA adduct formation ni awọn sẹẹli hEL ati mimu-pada sipo ikosile GST ati iṣẹ ni vitro.Sibẹsibẹ, awọn ipa wọnyi ko si ni isansa ti Nrf2, ni iyanju pe G-Rg3 nfa awọn ipa cytoprotective nipasẹ ọna Nrf2.Nrf2 jẹ ifosiwewe transcription pataki fun awọn enzymu detoxification alakoso II ti o ṣe agbega imukuro ti xenobiotics36.Imuṣiṣẹ ti ọna Nrf2 nfa cytoprotection ati ki o dinku ibajẹ ara37.Pẹlupẹlu, awọn iroyin pupọ ti ṣe atilẹyin ipa ti Nrf2 gẹgẹbi olutọpa tumo ni carcinogenesis38.Iwadii wa fihan pe ifilọlẹ ti ọna Nrf2 nipasẹ G-Rg3 ṣe ipa ilana pataki ni B (a) P-induced genotoxicity nipa nfa B (a) P detoxification nipasẹ ṣiṣe awọn enzymu alakoso II, nitorina ni idinamọ ilana ilana tumorigenesis.
Iṣẹ wa ṣafihan agbara ti ginseng pupa ni idilọwọ B (a) P-induced akàn ẹdọfóró ninu awọn eku nipasẹ ilowosi pataki ti ginsenoside G-Rg3.Aisi bioavailability ẹnu ti moleku yii ṣe idiwọ ohun elo ile-iwosan rẹ.Sibẹsibẹ, iwadi yii fihan fun igba akọkọ pe G-Rg3 jẹ sobusitireti ti P-gp, ati iṣakoso ti P-gp inhibitor mu bioavailability ti G-Rg3 in vitro ati ni vivo.G-Rg3 dinku B (a) cytotoxicity ti P-induced nipasẹ ṣiṣe ilana ọna Nrf2, eyiti o le jẹ ilana ti o pọju fun iṣẹ idena rẹ.Iwadii wa jẹrisi agbara ti ginsenoside G-Rg3 fun idena ati itọju ti akàn ẹdọfóró.
Awọn eku abo A/J ti o jẹ ọsẹ mẹfa (20 ± 1 g) ati awọn eku Wistar ọkunrin ọsẹ 7 (250 ± 20 g) ni a gba lati Ile-iṣẹ Jackson Laboratory (Bar Harbor, USA) ati Wuhan Institute of Zoology.Ile-ẹkọ giga (Wuhan, China).Ile-iṣẹ Gbigba Aṣa Iru Kannada (Wuhan, China) pese wa pẹlu awọn sẹẹli Caco-2 ati hEL.Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) jẹ orisun ti B (a) P ati tricaprine.Awọn ginsenosides ti a sọ di mimọ G-Rg3r ati G-Rg3s, dimethyl sulfoxide (DMSO), CellTiter-96 proliferation assay kit (MTS), verapamil, minimal ibaraẹnisọrọ alabọde (MEM), ati oyun bovine serum (FBS) ni a ra lati ọdọ Chengdu Must Bio-Technology .Co., Ltd.(Chengdu, China).QIAamp DNA mini kit ati BPDE-DNA adduct ELISA kit ni a ra lati Qiagen (Stanford, CA, USA) ati Cell Biolabs (San Diego, CA, USA).Ohun elo igbeyẹwo iṣẹ ṣiṣe GST ati ohun elo idanwo amuaradagba lapapọ (ọna BCA boṣewa) ni a ra lati Solarbio (Beijing, China).Gbogbo awọn ayokuro ginseng pupa ti wa ni ipamọ ni Mingyu Laboratory 7. Ile-ẹkọ giga Baptisti Hong Kong (Hong Kong, China) ati Ile-iṣẹ Akàn Koria (Seoul, Koria) jẹ awọn orisun iṣowo ti CRG jade ati awọn oriṣiriṣi ginseng pupa ti ọpọlọpọ awọn orisun Korean (pẹlu KRGA, KRGB). ati KRGC).Ginseng pupa ni a ṣe lati awọn gbongbo ti ginseng tuntun ti ọmọ ọdun 6.Pupa ginseng jade ni a gba nipasẹ fifọ ginseng pẹlu omi ni igba mẹta, lẹhinna fifokansi jade olomi, ati nikẹhin gbigbe ni iwọn otutu kekere lati gba ginseng jade lulú.Awọn egboogi (egboogi-Nrf2, anti-GST, ati β-actin), horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit immunoglobulin G (IgG), reagent gbigbe, iṣakoso siRNA, ati Nrf2 siRNA ni a ra lati Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). .), USA).
Caco2 ati awọn sẹẹli hEL ni a gbin ni awọn awopọ aṣa sẹẹli 100 mm2 pẹlu MEM ti o ni 10% FBS ni 37 °C ni oju-aye tutu ti 5% CO2.Lati pinnu ipa ti awọn ipo itọju, awọn sẹẹli hEL ti wa ni idawọle pẹlu awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti B (a) P ati G-Rg3 ni MEM fun 48 h.Awọn sẹẹli le ṣe itupalẹ siwaju tabi kojọ lati mura awọn iyọkuro ti ko ni sẹẹli.
Gbogbo awọn adanwo ni a fọwọsi nipasẹ Igbimọ Iṣeduro Eranko Iṣeduro ti Ile-ẹkọ Iṣoogun Tongji, Ile-ẹkọ giga Huazhong ti Imọ ati Imọ-ẹrọ (Ifọwọsi No. 2019; Iforukọsilẹ No.. 4587TH).Gbogbo awọn idanwo ni a ṣe ni ibamu pẹlu awọn ilana ati awọn ilana ti o yẹ, ati pe a ṣe iwadi naa ni ibamu pẹlu Iwadi Animal: Ijabọ ti In Vivo Experiments (ARRIVE).Awọn eku A/J ti o jẹ ọsẹ mẹjọ ni akọkọ itasi intraperitoneally pẹlu B(a) P ni ojutu tricaprine (100 mg/kg, 0.2 milimita).Lẹhin ọsẹ kan, awọn eku ti pin laileto si awọn ẹgbẹ iṣakoso ati awọn ẹgbẹ itọju ti o yatọ, awọn eku 15 ni ẹgbẹ kọọkan, ati ki o gavaged lẹẹkan ni ọjọ kan.Lẹhin awọn ọsẹ 20 ti itọju, awọn ẹranko ni a fi rubọ nipasẹ CO2 asphyxia.Awọn ẹdọforo ti gba ati ṣeto fun wakati 24.Nọmba awọn èèmọ ti ara ati awọn iwọn èèmọ kọọkan ni a ṣe iwọn fun ẹdọfóró kọọkan labẹ microscope dissecting.Awọn iṣiro iwọn didun tumo (V) ni a ṣe iṣiro nipa lilo ikosile wọnyi: V (mm3) = 4/3πr3, nibiti r jẹ iwọn ila opin tumo.Apapọ apapọ ti gbogbo awọn ipele tumo ninu ẹdọforo ti awọn eku ṣe aṣoju iwọn didun tumo lapapọ, ati apapọ iwọn didun tumo ni ẹgbẹ kọọkan jẹ aṣoju fifuye tumo.Gbogbo ẹjẹ ati awọn ayẹwo ifun ni a gba ati fipamọ ni -80 ° C fun ipinnu UPLC-MS/MS.A gba omi ara ati pe a lo olutupa kemistri adaṣe adaṣe lati ṣe itupalẹ alanine aminotransferase (ALT) ati awọn ipele omi ara creatinine (Cr) lati ṣe ayẹwo iṣẹ ẹdọ ati kidinrin.
Awọn ayẹwo ti a gba ni a yọ kuro lati ibi ipamọ tutu, thawed, wọn, ati gbe sinu awọn tubes gẹgẹbi a ti salaye loke.Si eyi ni a ṣafikun 0.5 μM phlorizin (boṣewa ti inu) ni ojutu methanol 0.8 milimita.Tissue-Tearor ti wa ni isokan ti ara naa lẹhinna a gbe homogenate lọ si tube microcentrifuge 1.5 milimita kan.Adalu naa jẹ centrifuged ni 15500 rpm fun awọn iṣẹju 15.Lẹhin yiyọ 1.0 milimita ti supernatant, gbẹ pẹlu nitrogen.Igba microliters ti kẹmika ti a lo fun imularada.A gba ẹjẹ ati ṣiṣẹ lori laini kan ati pe a lo bi itọkasi fun gbogbo awọn wiwọn.
Awọn apẹrẹ 24-daradara Transwell ti wa ni irugbin pẹlu awọn sẹẹli 1.0 × 105 Caco-2 fun daradara lati ṣe iṣiro imudara agbara ti gbigbe G-Rg3 nipasẹ afikun ti verapamil.Lẹhin ọsẹ mẹta ti aṣa, awọn sẹẹli ti fo pẹlu HBSS ati pe a ti ṣaju ni 37°C.400 μL ti 10 μM G-Rg3 (G-Rg3r, G-Rg3s, tabi adalu pẹlu 50 tabi 100 μM verapamil) ni itasi si ẹgbẹ basolateral tabi apical ti monolayer, ati 600 μL ti ojutu HBSS ti wa ni afikun si ekeji. ẹgbẹ.Gba 100 µl ti alabọde aṣa ni awọn akoko ti a yan (0, 15, 30, 45, 60, 90 ati 120 iṣẹju) ati ṣafikun 100 µl ti HBSS lati ṣe iwọn didun yii.Awọn ayẹwo ti wa ni ipamọ ni -4 °C titi wiwa nipasẹ UPLC-MS/MS.Ọrọ naa Papp = dQ/ (dT × A × C0) ni a lo lati ṣe iwọn apical unidirectional ti o han gbangba ati permeability basolateral ati idakeji (Pa-b ati Pb-a, lẹsẹsẹ);dQ / dT ni iyipada ninu ifọkansi, A (0.6 cm2) jẹ agbegbe dada ti monolayer, ati C0 jẹ ifọkansi oluranlọwọ akọkọ.Iwọn efflux jẹ iṣiro bi Pb-a/Pa-b, eyiti o duro fun oṣuwọn itunjade ti oogun iwadi naa.
Awọn eku Wistar ọkunrin ni wọn gbawẹ fun wakati 24, wọn mu omi nikan, wọn si jẹ anesthetized pẹlu abẹrẹ inu iṣan ti 3.5% ojutu pentobarbital.tube silikoni ti a fi sinu rẹ ni opin duodenum bi ẹnu-ọna ati opin ileum bi ijade.Lo fifa soke peristaltic lati fa agbawọle pẹlu 10 µM G-Rg3r tabi G-Rg3s ni HBSS isotonic ni iwọn sisan ti 0.1 milimita/min.Ipa ti verapamil ni a ṣe ayẹwo nipasẹ fifi 50 μM tabi 100 μM ti yellow si 10 μM G-Rg3r tabi G-Rg3s.UPLC-MS/MS ni a ṣe lori awọn iyọkuro perfusion ti a gba ni awọn aaye akoko 60, 90, 120, ati awọn iṣẹju 150 lẹhin ibẹrẹ perfusion.Oṣuwọn gbigba jẹ iṣiro nipasẹ agbekalẹ% gbigba = (1 – Cout/Cin) × 100%;ifọkansi ti G-Rg3 ni iṣan ati ẹnu-ọna jẹ afihan nipasẹ Cout ati Cin, lẹsẹsẹ.
Awọn sẹẹli hEL ti wa ni irugbin ni awọn apẹrẹ 96-daradara ni iwuwo ti awọn sẹẹli 1 × 104 fun kanga kan ati mu pẹlu B (a) P (0, 1, 5, 10, 20, 30, 40 μM) tabi G-Rg3 tituka ni DMSO .Awọn oogun naa lẹhinna ti fomi pẹlu alabọde aṣa si ọpọlọpọ awọn ifọkansi (0, 1, 2, 5, 10, 20 μM) ju awọn wakati 48 lọ.Lilo ohun elo idanwo MTS ti o wa ni iṣowo, awọn sẹẹli ti tẹriba si ilana boṣewa ati lẹhinna wọn ni lilo oluka microplate ni 490 nm.Ipele ṣiṣeeṣe sẹẹli ti awọn ẹgbẹ ti a ṣe pẹlu B (a) P (10 μM) ati G-Rg3 (0, 1, 5, 10, 20 μM) ni a ṣe ayẹwo ni ibamu si ọna ti o wa loke ati ni akawe pẹlu ẹgbẹ ti ko ni itọju.
Awọn sẹẹli hEL ti wa ni irugbin ni awọn apẹrẹ 6-daradara ni iwuwo ti awọn sẹẹli 1 × 105 / daradara ati pe a ṣe itọju pẹlu 10 μMB (a) P ni wiwa tabi isansa ti 10 μM G-Rg3.Lẹhin awọn wakati 48 ti itọju, DNA ti jade lati awọn sẹẹli hEL ni lilo QIAamp DNA Mini Kit ni ibamu si ilana ti olupese.Ibiyi ti BPDE-DNA adducts ni a rii nipa lilo ohun elo BPDE-DNA adduct ELISA.Awọn ipele ibatan ti BPDE-DNA adduct ni a wọn nipa lilo oluka microplate nipasẹ wiwọn gbigba ni 450 nm.
Awọn sẹẹli hEL ni a ti gbin ni awọn apẹrẹ 96-daradara ni iwuwo ti awọn sẹẹli 1 × 104 fun daradara ati pe a ṣe itọju pẹlu 10 μMB (a) P ni isansa tabi niwaju 10 μM G-Rg3 fun 48 h.Iṣẹ ṣiṣe GST jẹ iwọn lilo ohun elo idanwo iṣẹ GST ti iṣowo ni ibamu si ilana ti olupese.Imuṣiṣẹpọ GST ibatan jẹ iwọn nipasẹ gbigba ni 450 nm nipa lilo oluka microplate.
Awọn sẹẹli hEL ni a fọ pẹlu PBS tutu-yinyin ati lẹhinna lysed ni lilo ifipamọ assay radioimmunoprecipitation ti o ni awọn inhibitors protease ati awọn inhibitors phosphatase ninu.Lẹhin titobi amuaradagba nipa lilo ohun elo igbelewọn amuaradagba lapapọ, 30 μg ti amuaradagba ninu ayẹwo kọọkan ni a yapa nipasẹ 12% SDS-PAGE ati gbe lọ si awọ PVDF nipasẹ electrophoresis.A ti dina awọn ọmọ inu pẹlu 5% wara skim ati pe a fi sii pẹlu awọn ọlọjẹ akọkọ ni alẹ ni 4°C.Lẹhin abeabo pẹlu horseradish peroxidase-conjugated Atẹle aporo, ti mu dara si chemiluminescence reagents ni won fikun lati visualize ifihan agbara abuda.Kikankikan ti ẹgbẹ amuaradagba kọọkan jẹ iwọn nipa lilo sọfitiwia ImageJ.
Sọfitiwia GraphPad Prism 7.0 ni a lo lati ṣe itupalẹ gbogbo data, ti a ṣalaye bi itumọ ± iyapa boṣewa.Iyatọ laarin awọn ẹgbẹ itọju ni a ṣe ayẹwo nipa lilo idanwo ọmọ ile-iwe tabi itupalẹ ọna kan ti iyatọ, pẹlu iye P <0.05 ti n tọka si pataki iṣiro.
Gbogbo data ti o gba tabi itupalẹ lakoko iwadi yii wa ninu nkan ti a tẹjade ati awọn faili alaye afikun.
Torre, LA, Siegel, RL ati Jemal, A. Awọn iṣiro akàn ẹdọfóró.ọrọ-ọrọ.Ti pari.òògùn.isedale.893, 1–19 (2016).
Hecht, S. Taba carcinogens, wọn biomarkers ati taba-induced akàn.Nat.Akàn chaplain.3, 733–744 (2003).
Phillips, DH ati Venitt, S. DNA ati amuaradagba adducts ni eda eniyan tissues Abajade lati ifihan lati taba ẹfin.okeere.J. Akàn.131, 2733-2753 (2012).
Yang Y., Wang Y., Tang K., Lubet RA ati Yu M. Ipa ti Houttuynia cordata ati silibinin lori benzo (a) pyrene-induced ẹdọfóró tumorigenesis ni A / J eku.Akàn 7, 1053-1057 (2005).
Tang, W. et al.Ọja adayeba Anticancer ya sọtọ lati awọn ohun elo oogun Kannada.bakan.òògùn.6, 27 (2011).
Yang, Y. et al.Agbara ti polyphenon E, ginseng pupa, ati rapamycin lori benzo (a) tumorigenesis ẹdọfóró ti o fa pyrene ninu awọn eku A/J.Akàn 8, 52-58 (2006).
Wang, CZ, Anderson, S., Du, W., He, TS ati Yuan, KS Red, ilowosi ninu akàn ailera.bakan.J. Nutt.òògùn.14, 7–16 (2016).
Lee, TS, Mazza, G., Cottrell, AS ati Gao, L. Ginsenosides ninu awọn gbongbo ati awọn leaves ti ginseng Amẹrika.J. Agric.Kemistri ounjẹ.44, 717-720 (1996).
Attele AS, Wu JA ati Yuan KS Pharmacology of ginseng: ọpọlọpọ awọn paati ati ọpọlọpọ awọn ipa.biochemistry.elegbogi.Ọdun 58, 1685–1693 (1999).
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹsan-17-2023